蟒蛇肉酶解肽电喷雾多级质谱法分析

目的采用电喷雾多级质谱法(ESI-MSn)对蟒蛇肉酶解肽进行了分析鉴定,从而研究蟒蛇活性作用的物质基础。方法采用电喷雾质谱法,将蟒蛇肉酶解肽直接进样分析,得到了混合肽的一级质谱图及目标肽类成分的二级质谱图。结果利用质谱工作站所能提供的离子信息,共鉴定了两个具有代表性的酶解肽,分别是三肽(VN)和四肽(AAVN)。结论蟒蛇肉酶解肽以三肽和四肽为主,本研究为蟒蛇进一步合理开发应用奠定了基础。     

尖吻蝮蛇毒活性肽K组分的研究

目的从尖吻蝮蛇毒中分离纯化一种小分子活性肽K组分,测定其理化性质及生物学活性。方法经Sephadex G-75凝胶过滤,超滤,DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析法分离纯化活性肽K,采用高效液相鉴定纯度,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子量,等电聚焦法测定等电点,用比浊法测定其抗血小板聚集活性,通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测K组分对血管生成的影响。结果从尖吻蝮蛇毒中分离相对分子量约为7 862D,等电点为4.29的组分。该组分能抑制由二磷酸腺苷(ADP)、胶原(collagen)、凝血酶(thrombin)诱导的血小板聚集并成剂量依赖性;具有抑制鸡胚尿囊膜血管生成的作用。结论从尖吻蝮蛇毒中纯化出活性肽K,该组分有很强的抗血小板聚集和抗血管生成作用。     

雷公藤内生真菌Rhinocladiella sp. lgt-3的化学成分研究

目的:研究从雷公藤中分离的喙枝孢属真菌Rhinocladiella sp.lgt-3的化学成分及其单胺氧化酶抑制活性。方法:采用各种色谱技术分离化合物,根据波谱数据鉴定化合物结构,采用酶标法测定化合物的单胺氧化酶抑制活性。结果:从Rhinocladiella sp.lgt-3中分离得到10个化合物,分别鉴定为:3,4-二氢-3,4,8-三羟基-1(2H)-四氢萘酮(1)、(3R,4R)-4-羟基蜂蜜曲菌素(2)、蜂蜜曲菌素甲醚(3)、4-(2-羟基丁炔氧基)苯甲酸(4)、2,4-二羟基-6-((R)-4-羟基-2-氧代戊基)-3-甲基苯甲醛(5)、(Z)-N-(4-羟基苯乙烯基)甲酰胺(6)、aspterric acid(7)、蟾毒色胺(8)、5-羟基-N,N-二甲基色胺-N-氧化物(9)、5-甲氧基-N,N-二甲基色胺(10)。化合物1、8~10显示了中等强度的单胺氧化酶抑制活性,其IC_(50)分别为32、36、50、56μmol/L。结论:其中,化合物3~10为首次从该属真菌中分离得到,化合物1的单胺氧化酶抑制活性为首次报道。     

苗药消疤草抗肝纤维化活性成分研究

目的:明确苗药消疤草(地锦苗)抗肝纤维化的物质基础。方法:采用溶剂萃取结合酸碱处理法将消疤草提取物分为石油醚萃取(P)、乙酸乙酯并三氯甲烷萃取(C)、三氯甲烷萃取后乙酸乙酯部位(EE)以及正丁醇萃取(B)四个组分,以人肝星状细胞株HSC-LX2作为模型,用MTT法检测各组分对HSC-LX2细胞增殖的影响,筛选出活性组分;以硅胶、MCI、Sephadex LH-20柱层析和半制备HPLC等色谱技术对活性组分进行分离纯化,根据各种波谱学技术对化合物进行结构鉴定,并通过MTT法评价化合物的抗肝纤维化活性。结果:组分EE和C分别在31和15μg/mL时有显著的抗肝纤维化活性,从这两个组分中分离并鉴定了8个化合物,分别为:原阿片碱(1)、β-卡波林(2)、降氧化北美黄连次碱(3)、对乙氧基乙酰苯胺(4)、3-亚乙基-2-吡咯烷酮(5)、(6S,7E)-6-hydroxy-4,7-megastigmadien-3,9-dione(6)、macleayin E(7)、2-(4-羟基-3-甲氧苯基)-3-[N-2-(4-羟基苯基)乙基]氨基甲酰-5-[N-2-(4-羟基苯基)乙基]氨基甲酰乙烯基-7-甲氧基苯并二氢呋喃(8)。其中,化合物1、2、3、6、7和8具有抗肝纤维化活性,且化合物1、7、8在较低浓度下亦具有明显的活性。结论:组分EE和C是消疤草抗肝纤维化的有效组分;化合物2～8为首次从该植物中分离得到,化合物1、7、8是消疤草抗肝纤维化的主要物质基础。     

蜈蚣胃蛋白酶解物体外抗凝活性肽类的分离与分析

目的:采用凝胶过滤色谱和C18反相色谱对蜈蚣胃蛋白酶解物的抗凝活性部位进行分离纯化,并检测其相对分子质量分布范围。方法:按色带及280 nm紫外光谱法收集凝胶色谱分离各流分;以活化部位凝血活酶时间(APTT)为指标,检测各流分体外抗凝活性;用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测其相对分子质量分布范围。结果:经凝胶过滤色谱和C18反相色谱纯化得到了抗凝活性组分,用MALDI-TOF-MS测得其相对分子质量分布范围为597～1 146。结论:凝胶过滤色谱和C18反相色谱可用于蜈蚣胃蛋白酶解物抗凝活性组分的分离纯化,其抗凝活性组分为小分子肽类。     

五类新药苍术总萜醇的化学成分

目的:对中药5类新药苍术总萜醇的化学组成进行研究.方法:通过气相色谱-质谱联用技术对苍术总萜醇的化学成分进行分析、鉴定.结果:从苍术总萜醇中鉴定出20个组分,其中相对含量＞1％的组分为茅术醇、β-桉叶醇、γ-桉叶醇、榄香醇和2,3-Dihydro-1-oxo-phenalene,且茅术醇和β-桉叶醇两组分的相对含量之和为87％.结论:苍术总萜醇中茅术醇和β-桉叶醇两组分含量最高.苍术总萜醇除含有倍半萜醇类成分外,还含有倍半萜烯类成分.茅术醇是质子泵抑制剂,β-桉叶醇是组胺H2受体阻断剂,两个倍半萜醇类化合物协同作用而抑制胃液分泌,从而发挥抗溃疡的作用.     

中药治疗大鼠去卵巢骨质疏松症的蛋白质组学分析

目的:用蛋白质组学的方法对绝经后骨质疏松症和中药作用机理进行研究,有利于临床防治该疾病。方法:建立去卵巢大鼠骨质疏松症模型,设立中药治疗组及假手术对照组,6周后骨质疏松症模型成功,行骨形态学检查,提取骨组织蛋白质样品,双向电泳分离,得到各组骨组织总蛋白质分子解剖图谱,用图像分析软件,分析各组间差异蛋白质点,MADITOF/MS质谱分析,结合蛋白质生物信息库(Matrix science Ltd database),对各蛋白质初步鉴定。结论:鉴定了3个差异蛋白,分别为P1硫氧还蛋白过氧化酶1(Thioredoxin peroxidase 1),P2为阻凝蛋白轻链肽2(Myosin light polypeptide 2),P3为泛素化酶E2-17KD(ubiquitin-conjugating enzyme E2-17kD)。初步认为这三种蛋白质在绝经后骨质疏松症的发病及中药治疗过程中发挥着重要调控作用。     

基于蛋白质组学、肽组学的中药动物药活性组分的研究

动物药是我国传统中药的重要组成部分,但由于其组成复杂,分离较困难,与植物药相比动物药的研究相对落后.动物药组成中蛋白质占很大比例,目前已从动物药中发现许多蛋白质和多肤类活性组分.蛋白质组学、肤组学技术是快速发展的大规模表征蛋白质、肽的技术,借助蛋白质组学、肽组学快速、高效的特点,将蛋白质组学、肽组学技术应用于动物药中蛋白质和肽类活性组分的研究是动物药新的研究方向.本文综述了近年来应用蛋白质组学和肤组学技术研究动物药中蛋白质和肽类活性组分的进展.     

猪皮胶原肽的抗氧化活性研究

目的:研究不同分子量猪皮胶原肽的抗氧化特性,筛选出抗氧化活性较强的组分。方法:采用仿生酶解技术酶解新鲜猪皮得到酶解原液,酶解原液经超滤得到M1 k Da、1 k DaM3 k Da、M3 k Da 3个不同分子量肽段,猪皮经水提取得到猪皮水提液,上述5组分分别冻干,得到冻干粉。对不同分子量范围的猪皮胶原肽5组分进行肽含量测定和抗氧化性研究,包括对DPPH·自由基、O2-·自由基及·OH自由基的清除实验。结果:各组分的肽含量分别为酶解原液组分64.62%、1~3 k Da组分62.63%、大于3 k Da组分62.13%、水提液组分60.57%、小于1 k Da组分59.75%。各组分清除DPPH·自由基能力顺序为:小于1 k Da组分1~3k Da组分酶解原液组分水提液组分大于3 k Da组分;各组分清除O2-·自由基能力顺序为:小于1 k Da组分酶解原液组分1~3 k Da组分大于3 k Da组分水提液组分;各组分清除·OH自由基能力顺序为:小于1 k Da组分1~3 k Da组分酶解原液组分大于3 k Da组分水提液组分。结论:不同分子量的猪皮胶原肽组分均有一定的抗氧化活性,其中M1 k Da组分具有较强的自由基清除能力。     

人参皂甙Rbl对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响

目的:研究人参皂甙Rbl对人肾小管上皮细胞表达蛋白质组的影响。方法:人肾小管上皮细胞株(HK-2)常规培养,随机分为两组,实验组加入5μg/ml的Rbl,对照组加入等量的培养基,药物作用20min,裂解细胞,提取全细胞蛋白。双向电泳(2-DE)分离,ImageMaster 2D Platinum v5.0软件进行差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质。结果:通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,实验组的2-DE图谱共检出蛋白斑点为429个,其中236个为表达增强的蛋白斑点;经质谱鉴定的与Rbl作用相关的4个差异表达的蛋白斑点包括:普通转录因子ⅡH亚基1变体、双链断裂修复蛋白rad-21同源物、富含亮氨酸重复序列蛋白-45、DNA依赖性蛋白激酶,它们均属于磷酸化蛋白质。结论:Rbl作用于人肾小管上皮细胞的表达蛋白质组与对照组相比较存在明显的差异;Rbl对人肾小管上皮细胞的作用极有可能是通过相应的细胞信号转导网络系统来实现的。     

非创伤性股骨头缺血性坏死差异表达蛋白的鉴定和分析

目的:应用组织蛋白质组学方法寻找与成人非创伤性股骨头缺血性坏死相关的蛋白质方法:分别于非创伤性股骨头缺血性坏死患者和新鲜股骨颈骨折患者的股骨头中采集坏死骨组织样本与正常骨组织样本8份,采用四种不同的溶剂提取骨组织中的总蛋白,应用多维液相色谱与串联质谱联用技术对组织蛋白进行分离鉴定和生物信息学分析.结果:坏死组织样本和正常组织样本中鉴定二肽段以上的高可信度蛋白质数量分别为1233个和999个,假阳性率为0.9%.共鉴定154种3倍以上的差异蛋白质.基因本体论蛋白功能分析和文献检索显示34种蛋白质与股骨头缺血性坏死密切相关.Western免疫印迹证实了ONFH患者骨组织中GPCR26和ChST2表达量下调,与质谱结果一致.结论:非创伤性股骨头缺血性坏死存在复杂的病理生理学过程.研究发现的34个差异表达蛋白可能成为股骨头缺血性坏死早期临床诊断的候选生物学标志物.     

人参中的一种肽化合物对幼仓鼠肾-21细胞增殖的作用

根据离子交换色谱,从人参(Panaxginseng)根的水提取物中分离出一种碱性组分,该组分能刺激幼仓鼠肾21-细胞(BHK-21细胞)的增殖。再根据MCI-硅胶CHP20P柱对碱性组分进行分离,之后渗析得到一种活性物质。采用反相HPLC,将活性物质分成6个组分,从组分2(对BHK-21细胞有增殖作用)中得到一种无色的纯化合物1,该化合物由甘氨酸-精氨酸-谷氨酸-缬氨酸(1∶1∶1∶1)组成。其在3.40μm浓度时,可使BHK-21细胞的增殖提高20％,但化合物1的水解产物对BHK-21细胞未有作用。根据物理和光谱数据,确定化合物1为一种四肽,结构为甘氨酸-精氨酸-γ-谷氨酸-缬氨酸-NH_2.     

健胃愈疡颗粒对乙酸性胃溃疡复发大鼠作用的蛋白质组学研究

目的分析健胃愈疡颗粒（JWYY）对乙酸性胃溃疡复发大鼠蛋白质表达谱的影响,寻找JWYY抗胃溃疡复发作用的相关蛋白。方法采用二维凝胶电泳（2-DE）分离JWYY处理组和JWYY未处理组大鼠胃组织的总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图,NCBInr及SWISS-PROT数据库搜索鉴定蛋白质。结果所获2-DE图谱分辨率高、重复性好,质谱分析共鉴定了12个差异蛋白质点,其中JWYY处理组有8个蛋白质点表达上调,4个蛋白质点表达下调,大多数蛋白与溃疡复发的形成、生长、凋亡及免疫等环节相关。结论JWYY抗胃溃疡复发作用可能与多种蛋白直接或间接相关,这些蛋白质的鉴定及进一步研究有助于抗溃疡复发药物新型靶标的发现。     

当归醇沉组分对肝CYP同工酶的影响

目的 :观察当归醇沉组分对肝 CYP同工酶的影响。方法 :采用 DEAE-纤维素作为分离递质 ,用 3种 p H值不同的洗脱液将当归醇沉物 (ESA)分离为 3种组分 :ESA-1、ESA-2、ESA-3。结果 :发现 ESA和 ESA-3可使小鼠肝脏微粒体中总 CYP量增加 ,ESA-2可抑制 7-乙氧异恶唑 -0 -脱乙基酶 (EROD)的活性 ,ESA-1、 ESA -2、 ESA-3均降低苯胺羟化酶 (AN H)的活性 ,ESA -2则升高红霉素 N-脱甲基酶 (ERD)的活性。结论 :当归可通过影响 CYP同工酶而发挥其在药物相互作用、抗肿瘤、抗氧化等方面的功能。     

土鳖虫多肽的分离纯化及溶栓活性

目的:对土鳖虫多肽进行分离纯化,并对其溶栓活性进行研究.方法:采用仿生酶解工艺制备土鳖虫复合多肽,以溶栓活性为指标,采用Sephadex G-25,SP Sephadex C-25凝胶柱和RP-HPLC C18半制备色谱柱对复合多肽进行分离纯化,并测定目标多肽组分(Peak b)的溶栓活性、肽含量和相对分子质量.结果:目标多肽组分的溶栓活性为814 430 U·mg-1,肽含量为95.7％,相对分子质量分布在3 211～3 547.结论:利用仿生酶解制备的土鳖虫多肽,经分离纯化后,可得到具有较强溶栓活性的多肽组分.     

RAW264.7细胞中姜黄素抗动脉粥样硬化作用 机制的蛋白质组学研究

目的:应用凝胶内差异显示电泳技术和质谱技术研究姜黄素抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:RAW264.7细胞和经过25 μmol.L-1姜黄素处理的RAW264.7细胞蛋白质经荧光染料Cy3,Cy5标记,与等量Cy2标记的内标混合后在同一胶中进行电泳分离,经不同光激发后扫描得到不同样品的蛋白质组图谱.经DeCyder6.5软件进行差异蛋白质组分析,并对差异蛋白质进行质谱鉴定.结果:ATP合成酶,MHC class Ⅱ,肌球蛋白轻链,细胞色素b5表达量增加,而磷酸二酯酶4D,eIF-3,Hnrpf蛋白,波形蛋白,核仁磷蛋白1,Ran结合蛋白1表达量降低.结论:姜黄素抗动脉粥样硬化作用的机制十分复杂,是其增强细胞抗炎、抗氧化能力以及抑制胆固醇转运,降低细胞内胆固醇积累等因素共同作用的结果.另外,姜黄素可能通过调节细胞的分化及凋亡起到抗肿瘤的作用.     

苦远志糖脂类化学成分研究

目的:研究苦远志中糖酯类化学成分及其抗氧化及抗黄嘌呤氧化酶活性。方法:采用D101大孔树脂、硅胶柱层析、Sephaclex LH-20、半制备高效液相色谱等多种方法分离纯化,并结合MS、NMR等波谱分析方法鉴定化合物的结构。利用ABTS方法和尿酸生成法分别测定其抗氧化和抗黄嘌呤氧化酶的活性。结果:从苦远志乙醇提取物中分离得到8个糖脂类化合物,分别鉴定为:蔗糖-6-苯甲酸酯(1)、sibiricose A6(2)、sibiricose A1(3)、glomeratose B(4)、sibiricose A3(5)、glomeratose A(6)、glomeratose D(7)、tenuifoliside C(8)。化合物4、7和8表现出较明显的抗氧化活性和抗黄嘌呤氧化酶抑制活性。结论:所有化学成分均为首次从该植物中分离得到,糖酯类成分在抗氧化与抗黄嘌呤氧化酶趋势上基本一致。     

基于蛋白质组学、肽组学的中药动物药活性组分的研究

动物药是我国传统中药的重要组成部分,但由于其组成复杂,分离较困难,与植物药相比动物药的研究相对落后。动物药组成中蛋白质占很大比例,目前已从动物药中发现许多蛋白质和多肽类活性组分。蛋白质组学、肽组学技术是快速发展的大规模表征蛋白质、肽的技术,借助蛋白质组学、肽组学快速、高效的特点,将蛋白质组学、肽组学技术应用于动物药中蛋白质和肽类活性组分的研究是动物药新的研究方向。本文综述了近年来应用蛋白质组学和肽组学技术研究动物药中蛋白质和肽类活性组分的进展。     

知母中的生物碱

目的:研究知母中的生物碱成分.方法:Sephdex LH-20,Rp-18及硅胶色谱柱分离纯化,根据理化性质和光谱数据鉴定结构.结果:分离鉴定了6个生物碱,分别为aurantiamide acetate(1)、环(酪-亮)二肽(2)、香豆酰基酪胺(3)、N-反式阿魏酰基酪胺(4)、N-顺式阿魏酰基酪胺(5)、烟酸(6).结论:化合物1～5为首次从百合科植物中分离得到,化合物1～6为首次从知母中分离得到.     

不同产地蝮蛇毒的电泳鉴别

蝮蛇(Vipera paletinae)蛇毒因它独特的功能正日益被人们所重视和开发利用。已在临床上广泛应用的蝮蛇抗栓酶注射液就是以蝮蛇毒为原料的制品,是蝮蛇毒中精氨酸酯酶组分,有显著去纤、降脂、降血液粘度作用,毒性小,功效高,是治疗闭塞性血管疾病的可靠药物。 蝮蛇毒为复杂的蛋白质类混合物,有多种生理活性。如用制备抗栓酶的原料外,近年来以蛇毒为主要原料开发的复方口服制剂用于抗