红芪多糖对S_(180)瘤细胞化疗协同增效作用的蛋白质组学分析

目的:分析红芪多糖(Radix Hedysari polysaccharides,HPS)对S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白质。方法:以环磷酰胺(Cyclophsphamide,Cy)和HPS联合Cy治疗荷瘤小鼠后提取瘤细胞总蛋白,用双向电泳对蛋白质进行分离,使用PDQuest 8.0软件对双向电泳图谱进行差异分析,通过质谱技术鉴定差异明显的蛋白点,并用蛋白免疫印迹方法对其中1个蛋白质进行验证。结果:HPS联合Cy组中有24个蛋白点发生明显改变,经质谱和Mascot软件分析,成功鉴定了5个蛋白质,分别为热休克蛋白84(HSP90β)、载脂蛋白A、白蛋白、热休克蛋白β1(HSP27)、未命名蛋白,其中1个高表达,4个低表达。蛋白印迹验证与蛋白质组结果一致。结论:通过蛋白质组学技术,发现了HPS对S180小鼠瘤细胞化疗增效作用的靶标蛋白,这些蛋白质涉及能量代谢、氧化应激反应和凋亡信号转导。     

芪升合剂对S180荷瘤小鼠化疗的减毒增效研究

目的观察芪升合剂对S180荷瘤小鼠化疗所致骨髓抑制的干预作用。方法将60只小鼠随机分成正常对照组、荷瘤对照组、环磷酰胺（CTX）组及芪升合剂高、中、低剂量。除正常对照组外,其余各组将S180瘤细胞接种于小鼠右前肢腋窝皮下。各给药组于接种后第1日分别灌胃相应药物,连续给药10 d;接种第4日各给药组分别腹腔注射CTX,连续3 d;正常对照组和荷瘤对照组予生理盐水灌胃。观察各组外周血常规、瘤质量、抑瘤率。结果芪升合剂可明显提高S180荷瘤小鼠化疗后白细胞数量,与CTX组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;CTX组、芪升合剂各剂量组血小板计数明显降低,与荷瘤对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。荷瘤对照组肿瘤生长迅速,CTX组、芪升合剂各剂量组瘤质量明显小于荷瘤对照组（P〈0.01）;与CTX组瘤质量相比,中剂量组差异有统计学意义（P〈0.01）。CTX对荷瘤小鼠肿瘤生长有明显抑制作用,其抑瘤率达49.69%,联合芪升合剂后,高、中、低剂量抑瘤率可达60.55%、72.11%、64.48%。结论芪升合剂对S180荷瘤小鼠的化疗具有增效减毒作用。     

臭参对S180荷瘤小鼠化疗增效减毒及免疫功能的影响

目的 研究臭参对S180荷瘤小鼠化疗增效、减毒及免疫功能的影响.方法 通过对S180荷瘤小鼠瘤质量及外周血象的检测,分别观察臭参与阿霉素及环磷酰胺合用对S180荷瘤小鼠的增效减毒作用;通过检测S180荷瘤小鼠血清溶血素及网状内皮系统吞噬功能,观察臭参对荷瘤小鼠免疫功能的影响.结果 臭参能在一定程度上增强阿霉素或环磷酰胺的抑瘤作用以及减轻化疗药物对血液系统的毒副作用.臭参可增强荷瘤小鼠降低的免疫功能,还具有增强网状内皮系统吞噬功能的作用.结论 臭参对荷瘤小鼠具有一定的化疗增效、减毒及免疫增强作用.     

红芪多糖3促进小鼠脾淋巴细胞增殖的差异蛋白质点分析

目的:分析红芪多糖3(HPS-3)作用于小鼠脾淋巴细胞后的差异蛋白质点,探讨红芪多糖3调节免疫的分子生物学机制。方法:提取正常小鼠脾淋巴细胞进行体外培养,用MTT法检测红芪多糖对小鼠脾淋巴细胞的刺激增殖作用,ELISA试剂盒测定培养上清中的IL-2含量,并运用双向电泳技术对脾淋巴细胞总蛋白进行分离,银染显色,PDQuest软件对凝胶图谱进行差异点分析,找出差异明显的蛋白质点。结果:HPS-3能够提高T淋巴细胞增殖能力和IL-2的分泌,实验所得2-DE凝胶图谱经PDQuest软件分析得出以下结果:HPS-3组中共有16个蛋白点发生明显改变,其中11个蛋白质点高表达,4个蛋白质点消失,1个蛋白质点低表达。结论:HPS-3能促进脾淋巴细胞增殖,显著影响小鼠脾淋巴细胞蛋白质表达。     

红芪总多糖体内抗肿瘤的实验研究

目的:研究红芪总多糖(THPS)单用及与环磷酰胺(CTX)合用对荷瘤小鼠的抑瘤作用,并探讨其机制。方法:接种S180的昆明种小鼠腹腔注射低、中、高剂量THPS并联合使用CTX14天后,观察瘤重、抑瘤率、胸腺指数和脾指数,流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD4 细胞和CD8 细胞数量。结果:与荷瘤对照组相比,中剂量THPS明显抑制小鼠S180瘤生长(P<0.01),增加胸腺指数(P<0.01)和脾指数(P<0.01),提高CD4 细胞数量(P<0.05);中剂量THPS与CTX合用后,与环磷酰胺组比较,明显降低瘤重(P<0.05),减轻CTX所致的胸腺指数(P<0.01)、脾指数(P<0.01)、CD4 细胞(P<0.01)和CD8 细胞(P<0.05)数量的下降。结论:中剂量的THPS具有抑制S180瘤生长,减轻CTX的免疫抑制作用,其机制与提高免疫器官的重量和T细胞介导的免疫应答有关。     

芪灵胶囊对荷瘤小鼠化疗减毒增效作用的研究

目的：观察芪灵胶囊对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用。方法：测定各组S180荷瘤小鼠外周血白细胞数量、骨髓有核细胞计数、脾及胸腺指数及瘤重，观察芪灵胶囊的作用。结果：芪灵胶囊对S180荷瘤小鼠经环磷酰胺化疗所引起的白细胞降低及骨髓有核细胞减少有明显的升高作用，对化疗所引起的脾脏及胸腺指数下降有显著的改善作用，与环磷酰胺合用能显著升高其抑瘤率。结论：芪灵胶囊对环磷酰胺抑制小鼠肉瘤S180有明显的减毒增效作用。     

芪胶升白胶囊对S180小鼠抗肿瘤作用及相关机制研究

目的:探讨芪胶升白胶囊对S180瘤株的抑制作用及机制。方法:以S180荷瘤小鼠为动物模型,试验设模型组,环磷酰胺组,芪胶升白胶囊0.5g/kg、芪胶升白胶囊1.0g/kg、芪胶升白胶囊2.0g/kg剂量组共5组,每日测量各组小鼠体重,各组分别连续给药15天后,取荷瘤小鼠血液进行血细胞计数,取瘤体、脾脏和胸腺,计算抑瘤率、脾指数和胸腺指数。选用AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术测定肿瘤细胞的凋亡,用Western-blot法检测肿瘤组织中p53、bcl-2的表达情况,用免疫组化法检测CD34及VEGF的表达情况。结果:芪胶升白胶囊1.0g/kg剂量组能明显抑制小鼠移植性S180肿瘤生长,环磷酰胺、芪胶升白胶囊0.5g/kg、芪胶升白胶囊1.0g/kg、芪胶升白胶囊2.0g/kg剂量组抑瘤率分别为44.32%、17.18%、22.12%和8.74%。芪胶升白胶囊2.0g/kg剂量组肿瘤细胞凋亡率较环磷酰胺组明显提高,各剂量组可下调抗凋亡基因p53、bcl-2的表达及降低调控微血管密度和生长的CD34和VEGF的蛋白水平。结论:芪胶升白胶囊在体内对S180瘤株的生长有抑制作用,其抗肿瘤活性可能与抑瘤基因bcl-2、p53表达及微血管密度调控蛋白CD34、VEGF的水平变化有关。     

复方茯苓多糖口服液抗肿瘤作用和免疫调节功能的初步研究

目的:本实验研究复方茯苓多糖口服液抗肿瘤作用,并对其免疫调节作用进行研究。方法:通过苯酚硫酸法测定复方茯苓多糖口服液中总多糖含量。复方茯苓多糖口服液设50、100、200mg/kg 3个剂量组,用香菇菌多糖片作阳性对照组,剂量为20mg/kg,另设模型组。昆明小鼠右前肢腋下接种肿瘤后给药14天,测量各组瘤重、脾脏和胸腺重量,计算肿瘤抑制率、脾脏指数和胸腺指数。腹水瘤模型以茯苓提取物作为对照,给药16天后停药观察,记录小鼠生存时间。采用Balb/c小鼠接种S180肿瘤细胞分组给药,进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验,小鼠淋巴细胞增殖实验和小鼠NK细胞活性测定实验。结果:复方茯苓多糖口服液中总多糖含量经测定约为17mg/ml,并且复方茯苓多糖口服液50、100、200mg/kg组对S180实体瘤抑制率分别为34%、40%、43%,对H22实体瘤抑制率分别为40%、37%、30%,均有统计学差异。复方茯苓多糖口服液100mg/kg组生命延长率为14.28%,明显优于茯苓提取物200mg/kg组7.14%。在小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验,小鼠淋巴细胞增殖实验和小鼠NK细胞活性测定实验中,复方茯苓多糖口服液50、100、200mg/kg组OD值均显著高于模型组。结论:复方茯苓多糖口服液有抑制小鼠S180和H22肿瘤生长的作用,对实体瘤有显著抑制作用,对S180腹水瘤抑制作用较弱,能增强巨噬细胞吞噬功能,能促进小鼠淋巴细胞增殖和NK细胞活性,能够调节荷瘤小鼠免疫功能。     

裂褶菌液体发酵多糖对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用

目的研究裂褶菌(Schizophyllum commne)胞内多糖(SPG1)、胞外多糖(SPG2)对环磷酰胺(CTX)化疗S180荷瘤小鼠的减毒增效作用。方法建立荷瘤小鼠模型,随机分为8组,即空白对照组,CTX(30 mg/kg)阳性药组,SPG1高、中、低(500,250,125 mg/kg)联合CTX组,SPG2高、中、低(500,250,125 mg/kg)联合CTX组。空白对照组ip生理盐水20 ml/kg,给药组ip不同剂量多糖20 ml/kg,连续给药10 d,停药次日处死小鼠,测定各组荷瘤小鼠体质量、瘤重、脾重及胸腺重。结果中、低剂量SPG1与SPG2联合CTX治疗可抑制肿瘤生长,与CTX组无显著差别,最大抑瘤率为74.48%;与CTX组相比,联合治疗可使荷瘤小鼠体重有不同程度增加,中、低剂量SPG1与SPG2联合CTX给药组与CTX组差异具有极显著意义(P<0.01);与CTX组相比,CTX+SPG2低剂量合用组小鼠的胸腺系数有显著性升高(P<0.05),脾系数有极显著性升高(P<0.01)。结论裂褶菌发酵多糖作为生物反应调节剂可提高机体的免疫力,提高CTX化疗作用的同时减轻其毒性,起到了减毒增效的作用。     

灵芝孢子多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤活性的研究

目的：研究灵芝孢子多糖对荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抗肿瘤活性．方法：通过对EC荷瘤小鼠的血清半数溶血值和网状内皮系统（RES）吞噬功能的检测考察灵芝孢子多糖对荷瘤小鼠的体液免疫及细胞免疫功能的影响：通过WBC、骨髓有核细胞数等指标观察灵芝孢子多糖（160，80，40mg／kg）灌胃（ig）给药对S180荷瘤小鼠放、化疗的减毒作用；通过抑瘤率的检测观察灵芝孢子多糖（160，80，40mg／kg）灌胃（ig）给药对S180，H22，EC等移植性肿瘤的生长抑制作用。结果：与正常对照组相比，灵芝孢子多糖（160、80mg／kg）可显著提高由荷瘤引起的小鼠血清半数溶血值的降低（p〈0．01，p〈0．05），表明其可明显提高荷瘤小鼠的体液免疫功能；且灵芝孢子多糖（160，80mg／kg）可显著提高EC荷瘤小鼠的免疫吞噬系数α、吞噬指数K和脾脏指数，表明其亦可提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能；与S180空白对照组相比，灵芝孢子多糖（160，80mg／kg）ig组可显著抑制由放、化疗引起的S180荷瘤小鼠WBC、骨髓有核细胞数等指标的下降（p〈0．05）：与空白对照组相比，灵芝孢子多糖（160，80mg／kg）ig组可显著抑制小鼠S180 H22，EC移植性肿瘤的生长（p〈0．01）。     

复方斑蝥胶囊血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞蛋白质组差异表达分析

目的：考察复方斑蝥胶囊血清对SMMC-7721细胞蛋白质组的影响,从分子水平探讨复方斑蝥胶囊的抗癌作用机制。方法：用血清药理学方法制备复方斑蝥胶囊血清并处理人肝癌SMMC-7721细胞,用双向电泳、图像分析、质谱鉴定等蛋白质组学技术测定复方斑蝥胶囊对癌细胞中有影响的蛋白质。结果：双向电泳分离到SMMC-7721细胞蛋白质组约450个点,其中47个点在对照组和实验组之间有2倍以上量变,质谱鉴定发现实验组出现膜联蛋白A5、热休克70×10³蛋白表达显著上调,真核翻译起始因子5A和硫氧还蛋白过氧化酶2表达显著下调。结论：研究发现了4种与肿瘤的增殖、免疫、凋亡相关的差异表达蛋白质,为进一步研究复方斑蝥胶囊的作用机制提供了线索。血清药理学与蛋白质组学相结合能够有效地展示与药物作用相关的蛋白质,可以作为研究复方药理的一个初步技术平台。     

痹肿消汤干预类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 观察痹肿消汤干预前后的早期活动性类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMCs）蛋白质的双向凝胶电泳（2-DE）图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白, 探讨痹肿消汤治疗类风湿关节炎可能的作用机制。 方法 18例早期活动性RA患者随机分为两组,治疗组9例口服痹肿消汤（白花蛇舌草25g 肿节风30g 丹参15g 络石藤20g 骨碎补15g 薏苡仁30g等15味中药）,对照组9例口服甲氨蝶呤（methotrexate,MTX）和普威（nimesulide tablets）,疗程均为3个月。9名健康成年人为正常对照组。健康成年人及RA患者治疗前后分别采血10mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,抽提外周血单个核细胞中的蛋白,采用固相pH梯度（IPG）2-DE分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质。凝胶经考染显色后, PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）     

小型猪心肌缺血血瘀证的血浆蛋白质组学研究

目的：寻找血瘀证（心肌缺血）相关的血浆蛋白质组学特征。方法：采用前期建立的方法,以小型猪前降支主干放置Ameroid缩窄环结合动态观察的方法制备小型猪血瘀证模型。在证候时间窗内前腔静脉采血,枸橼酸钠抗凝,离心收集上清备用。血浆总蛋白上样量1.3mg,同组样品等量混合后,采用双向凝胶电泳分析差异蛋白点。等电聚焦用IPG胶条24cm、PH范围3-11NL,SDS-PAGE浓度13%,考马斯亮蓝R350染色,凝胶扫描后,采用Imagemaster 2D Platinum 6.0软件进行凝胶的蛋白点检测、匹配。对匹配蛋白点的体积百分比进行比较,确定差异蛋白点。差异蛋白点胰蛋白酶酶切后,MALDI-TOF检测,数据库搜索,确定其相关信息。结果：模型组有10个明显的上调蛋白点。质谱鉴定结果提示,部分上调的差异蛋白为α1-酸性糖蛋白、α1-抗胰蛋白酶、胎球蛋白A、载脂蛋白A-I、载脂蛋白A-IV。结论：已鉴定的差异蛋白质主要为急性期反应蛋白及载脂蛋白等,炎症/抗炎是其互相联系的核心环节,提示在该心肌缺血血瘀证同时存在着炎症反应这一病理进程,炎症反应可能是血瘀证的病理机制之一,但仍有待进一步研究。     

黄芪对IgA肾病小鼠肾脏功能和肾组织蛋白质表达的作用

目的：研究右旋糖苷所致IgA肾病小鼠的肾组织蛋白表达变化和黄芪提取物（AEAR）对IgA肾病小鼠的作用。方法：给正常小鼠注射右旋糖苷建立IgA肾病小鼠模型。部分模型小鼠给予AEAR10g-kg^-1·d^-1。作为AEAR治疗组。为探究AEAR的作用,运用双向电泳（2-DE）技术分别获得正常对照组、IgA肾病模型组、AEAR组小鼠的肾组织蛋白凝胶,银染后,图像用PDQUEST双维分析软件分析比较,得到相应图谱。结果：连续12周给予AEAR的IgA肾病小鼠血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）和尿蛋白含量明显降低,且它们的肾组织蛋白图谱相应恢复接近正常鼠的图谱形态。与正常组比较,模型组有334个蛋白表达有显著性差异,其中142个蛋白表达增强2倍,61个蛋白表达增强5倍,121个蛋白表达减弱2倍;10个蛋白在模型组特异表达,在正常组不表达。以上334个差异蛋白中的50％个蛋白在给予AEAR治疗后,表达水平趋近于正常对照组水平;上述10个特异表达的蛋白经过AEAR干预后,有5个蛋白恢复至正常的不表达状态,4个蛋白表达明显减弱接近正常水平,只有1个蛋白表达上调甚至高于模型组对应蛋白的表达水平,分析可能与IgA肾病发病或AEAR药物作用密切相关。结论：AEAR不仅具有保护IgA肾病小鼠肾脏功能的作用,而且能调节小鼠肾脏组织蛋白表达,有助于发现AEAR作用于IgA肾病的靶蛋白。     

健胃愈疡颗粒对乙酸性胃溃疡复发大鼠作用的蛋白质组学研究

目的分析健胃愈疡颗粒（JWYY）对乙酸性胃溃疡复发大鼠蛋白质表达谱的影响,寻找JWYY抗胃溃疡复发作用的相关蛋白。方法采用二维凝胶电泳（2-DE）分离JWYY处理组和JWYY未处理组大鼠胃组织的总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质量指纹图,NCBInr及SWISS-PROT数据库搜索鉴定蛋白质。结果所获2-DE图谱分辨率高、重复性好,质谱分析共鉴定了12个差异蛋白质点,其中JWYY处理组有8个蛋白质点表达上调,4个蛋白质点表达下调,大多数蛋白与溃疡复发的形成、生长、凋亡及免疫等环节相关。结论JWYY抗胃溃疡复发作用可能与多种蛋白直接或间接相关,这些蛋白质的鉴定及进一步研究有助于抗溃疡复发药物新型靶标的发现。     

束缚所致肝郁证动物模型肝组织蛋白质组的差异表达研究

目的：通过运用组织蛋白质组学技术和方法,寻找肝郁证动物模型肝组织差异表达蛋白质.方法：以束缚制动法制备肝郁证大鼠模型,采用组织溶解方法分步抽提大鼠肝脏组织蛋白质,对获得的蛋白质进行二维凝胶电泳（2-DE）分离、胶体染色,分析模型组和对照组蛋白质分子的差异表达,并以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）检测肽质量指纹,在数据库中检索出相应的蛋白质.结果：在大鼠肝组织胶体考染的2-DE图谱上,约能辨识出300余个清晰的蛋白质斑点,共找出3个与肝郁证辨证相关的肝组织差异表达蛋白,质谱出峰率达100%,检索结果分别为芳基硫基转移酶、烯酰辅酶A水合酶和转甲状腺素蛋白.结论：肝主疏泄功能的正常可能和实体肝组织中的特异表达蛋白质--芳基硫基转移酶、烯酰辅酶A水合酶和转甲状腺素蛋白的不同表达密切相关.     

脾气虚证大鼠回肠组织蛋白质差异性表达的实验研究

目的采用蛋白质组学技术研究脾气虚证大鼠回肠组织蛋白的差异性表达。方法 37只大鼠随机分成3组,即正常对照组、脾气虚证模型组和利血平组。分别采用劳倦过度结合饮食不节和利血平注射液(1mg/mL)腹腔注射的方法建立脾气虚证动物模型,通过模糊数学方法鉴定后分离回肠组织,后采用双向电泳法分离差异表达的蛋白,凝胶银染后经选点、酶切和质谱分析,用MASCOT软件在蛋白质数据库中搜索肽质量指纹谱数据并确定蛋白质。结果脾气虚证模型组回肠组织蛋白质图谱中有3个蛋白点表达异常(P<0.05),利血平组回肠组织蛋白质图谱中有9个蛋白点表达异常(P<0.05)。结论脾气虚证的发生与白蛋白表达下调、胰蛋白酶和葡萄糖调节蛋白78表达上调有密切关系。     

天麻钩藤饮对高血压肝阳上亢证大鼠肾上腺蛋白质的影响

目的:从蛋白质组角度探讨高血压肝阳上亢证证候相关蛋白及天麻钩藤饮降血压和改善肝阳上亢证症状的机理。方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳分离正常大鼠以及肝阳上亢证大鼠天麻钩藤饮治疗前后肾上腺的总蛋白质,经考马斯亮兰染色,PDQuest 7.0软件分析。结果:与正常组匹配,肝阳上亢证组与治疗组大鼠肾上腺图象匹配率分别为90%、95%,且重复性较好,其蛋白质主要分布在等电点PI 3-8,分子量Mr 14.4-75 kD范围。与正常组比较,肝阳上亢证组中蛋白质点表达上升2倍及以上的点有22个,下降2倍及以上的点有15个。而在治疗组中这些表达上升的点均有下降,有14个点下降达2倍以上,其中有10个下降后接近于正常组;这些表达下降的点均有上升,有9个点上升达2倍以上,其中有5个上升后接近于正常组。结论:这些有显著差异的蛋白质可能是高血压肝阳上亢证证候相关蛋白,天麻钩藤饮的降压和改善症状也可能与上述蛋白质的改变有关。     

桂皮醛对发热大鼠下丘脑蛋白质组双向凝胶电泳分析

目的：观察桂皮醛对酵母致热大鼠的解热作用及其时下丘脑蛋白质组的影响。方法：采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图像分析方法，对蛋白质进行分离，以模型组作为参考胶进行匹配。结果：口服给予桂皮醛后时发热大鼠有解热作用，双向电泳图像分析显示桂皮醛组与模型组匹配率为86％，多个蛋白质点表达量有不同程度的改变。结论：桂皮醛时酵母致热大鼠有解热作用，其差异表达的蛋白质点可能参与了解热过程。