真武汤对大鼠单侧输尿管梗阻模型细胞因子的影响

目的: 通过检测单侧输尿管梗阻模型(UUO模型)大鼠外周血细胞因子,包括白介素1β(IL-1β)、血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)、脂联素(adiponectin)、白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)分子表达的影响,从免疫因子角度探讨真武汤对大鼠UUO治疗作用的分子机制。方法: 将大鼠随机分为5组,除正常对照组外其余大鼠进行单侧输尿管梗阻造模,建模后即开始给药,分别为氯沙坦钾组(20 mg ·kg^-1 ·d^-1)、真武汤低、高剂量组(按生药量计为 2.1,9.8 g ·kg^-1 ·d^-1),模型组及正常对照组分别给予生理盐水。于建模后第4周,收集各组标本外周血,采用多重细胞因子检测法检测各组大鼠血中IL-1β, PAI-1,脂联素,IL-6,MCP-1含量。结果: UUO模型组大鼠在建模后第4周,与空白对照组相比,表现出外周血PAI-1,IL-6,MCP-1含量明显升高,分别为33.3±14.1,9.58±12.01,133.9±80.1荧光强度单位,脂联素,IL-1β未见明显影响。真武汤低、高剂量组可明显降低UUO大鼠升高的外周血PAI-1,IL-6,MCP-1含量。结论: UUO模型中外周血PAI-1,IL-6,MCP-1含量明显升高,真武汤可能是通过降低上述指标含量而达到缓解肾间质纤维化的作用的。     

真武汤对肾纤维化大鼠血清和肾脏组织中SOD活力、MDA含量的影响

目的:单侧结扎左肾输尿管建立肾梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)致肾纤维化模型,探讨真武汤对肾纤维化大鼠血清及肾脏组织中总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活力和丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)含量的影响。方法:将大鼠随机分为5组,除正常对照组外,采用结扎左侧输尿管的方法建立肾纤维化模型。造模大鼠随机分为4组:模型组、氯沙坦钾组(20mg/kg.d)、真武汤低剂量组(2.1 g生药/kg.d)、真武汤高剂量组(9.8g生药/kg.d),给药28天后腹主动脉取血,检测血清及术侧肾脏组织匀浆液中T-SOD活力及MDA含量。结果 :相比于组织样本,血清中T-SOD活力及MDA含量变化幅度较小,但整体趋势一致:造模大鼠血清及肾脏组织中T-SOD活力和MDA含量较正常组均有所降低,经真武汤治疗后,T-SOD活力趋于正常,与空白对照组相比无显著差异;与模型组相比,真武汤治疗组大鼠肾脏组织中MDA含量上升,但与正常组仍存在一定差异。结论:真武汤可上调UUO大鼠血清及结扎肾脏组织中超氧化物歧化酶活力,对结扎导致的组织细胞损伤也有一定的缓解作用。     

抗纤灵冲剂对单侧输尿管梗阻及再通后大鼠尿微量蛋白的影响

目的 研究单侧输尿管梗阻(UUO)及再通后大鼠尿微量蛋白的变化和抗纤灵对尿微量蛋白变化的影响.方法 建立大鼠UUO模型120只和UUO再通模型90只,随机分为正常组、假手术组、模型组、抗纤灵组和科素亚组.于造模后各时间点检测大鼠尿转铁蛋白(TRF)、尿视黄醇结合蛋白(RBP)、尿β2-微球蛋白(β2-M).结果 在UUO模型中,模型组各时间点TRF、RBP、β2-M较正常组和假手术组明显升高(P<0.01),并随梗阻时间的延长逐渐升高.在UUO再通模型中,各时间点TRF、RBP、β2-M较正常组和假手术组明显升高(P<0.01),并随梗阻时间的延长逐渐降低.与模型组比较,抗纤灵能明显降低两模型中TRF、RBP、β2-M.结论 抗纤灵冲剂能减少UUO模型和UUO再通模型中的尿微量蛋白尿,改善两种模型中的肾损伤.     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β_1、smad7蛋白表达的影响

目的:观察温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织TGF-β1、smad7蛋白表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:将雄性SD大鼠(120只)随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组30只。采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型(假手术组只分离但不结扎输尿管),于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦(10 mg·kg-1·d-1),温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方(9.8 g·kg-1·d-1)。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织TGF-β1、smad7蛋白的表达。结果:造模后第14天温肾活血化湿方较模型组明显降低尿蛋白定量(P0.05),第21天温肾活血化湿方与模型组比较有极显著降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.05)。温肾活血化湿方组与模型组相比较smad7蛋白表达明显增加(P0.05)。结论:温肾活血化湿方通过抑制TGF-β1,上调smad7蛋白表达,从而延缓肾间质纤维化的进程。     

温肾活血化湿方对肾间质纤维化大鼠肾组织NF-κB表达的影响

目的:探讨温肾活血化湿方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)法致肾间质纤维化大鼠肾组织核转录因子-κB(NF-κB)表达的影响,初步揭示该方防治肾间质纤维化的作用机制。方法:采用UUO建立大鼠肾间质纤维化模型,将雄性SD大鼠80只随机分为假手术组、UUO组、氯沙坦组和温肾活血化湿方组,每组20只;于造模后第2天开始灌胃,假手术组、UUO组给予等量生理盐水,氯沙坦组灌胃氯沙坦[10 mg/(kg·d)],温肾活血化湿方组灌温肾活血化湿方汤剂[9.8 mg/(kg·d)]。于造模后第7、14、21天留取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色,观察肾组织病理变化,免疫组化法检测肾组织NF-κB的表达。结果:第7、14、21天UUO组中NF-κB表达较假手术组高(P0.05),治疗组在第7天较UUO组低(P0.05)。结论:温肾活血化湿方可能通过抑制NF-κB的过度表达从而延缓肾间质纤维化的进程。     

甲基斑蝥胺片对Beagle犬尿液微量蛋白和尿酶的影响

目的:探讨甲基斑蝥胺片对Beagle犬肾毒性以及对其尿液微量蛋白和尿酶的影响。方法:24只Beagle犬,雌雄各半,随机分4组,每组6只,即阴性对照组(空白片)、甲基斑蝥胺片6.11,12.21,24.42 mg·kg-1剂量组,连续口服给药30 d,每天1次。药物组及对照组Beagle犬在给药后1,2,3,4周,进行新鲜尿液采集,将尿液进行尿常规检测;给药第15,30天检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)以及钠、钾、氯电解质;给药第15,30天检测尿液微量白蛋白(m Alb)、肾脏损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、丛生蛋白(clusterin)、β2-微球蛋白(β2-MG)、α1-微球蛋白(α1-MG)、丙氨酸氨肽酶(AAP)和免疫球蛋白Ig G。结果:与对照组相比,各剂量组尿液中尿蛋白和白细胞增加;连续15 d口服甲基斑蝥胺,各剂量组m Alb均升高,其中高剂量组KIM-1,NGAL,clusterin,NAG和AAP含量均明显升高,中、低剂量组未见统计学差异,同时血SCr和BUN未见明显异常;连续30 d给药后,各剂量组m Alb,KIM-1,clusterin,NAG,AAP均升高,呈量效关系,其中高剂量组NGAL及β2-MG含量明显升高。以上指标的含量均随着剂量的增加及时间的延长而明显升高,与血清中BUN,SCr呈相关性,提示尿液m Alb,KIM-1,clusterin,NAG和AAP指标,能够灵敏反映微量尿蛋白和尿酶的变化。结论:甲基斑蝥胺片具有一定的肾脏毒性,尿液m Alb,KIM-1,clusterin,NAG和AAP指标可做为评价甲基斑蝥胺早期肾毒性的生物标志物。     

和解聚散方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织蛋白激酶C表达的影响

目的 观察和解聚散方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠的肾组织中蛋白激酶C-βⅡ(PKC-βⅡ)表达的影响,初步探讨其抗肾间质纤维化的作用机制.方法 采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型,将雄性SD大鼠40只随机分为假手术组、模型组、洛丁新组、和解聚散方组,每组10只;造模后第2日开始灌胃,洛丁新组按[ 1.0mg/(kg·d)],和解聚散方组按[9.8g/(kg·d)],假手术组、模型组灌胃生理盐水.于造模后7d取梗阻侧肾脏行HE、Masson染色,观察肾组织病理结构变化;采用免疫组化方法检测肾组织PKC-βⅡ的表达.结果 UUO模型组中PKC-βⅡ在术后7d表达明显高于假手术组,两个治疗组的表达水平明显低于UUO模型组.结论 和解聚散方可以降低肾组织中PKC-βⅡ的表达,这可能是和解聚散方抗肾纤维化的作用机制之一.     

痹祺胶囊对实验性骨关节炎大鼠NO、HYP的影响

[目的]观察痹祺胶囊对实验性大鼠膝骨关节炎(OA)一氧化氮(NO)、羟脯氨酸(HYP)的影响。[方法]选Wistar大鼠,木瓜蛋白酶膝关节注射造模,痹祺胶囊灌胃治疗8周,测定血清NO、HYP和尿HYP的含量。[结果]模型组造模后第1天尿HYP明显升高[(17.07±4.10)mg/L],第15天[(9.92±3.09)mg/L]和第64天[(13.77±1.32)mg/L]与正常组无明显差异。模型组大鼠血清NO含量明显升高(22.64μmol/L);痹祺胶囊高、中治疗组能明显降低大鼠血清NO含量(18.24μmol/L和19.14μmol/L)。[结论]痹祺胶囊具有降低OA大鼠血清NO的含量,减轻由NO介导的对关节软骨的损伤作用。     

三七对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织和 尿中细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:观察三七对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织和尿中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,初步探讨其肾脏保护作用的部分分子生物学机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导大鼠肾小管间质纤维化模型。将52只SD大鼠随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=20)、三七0.84 g.kg-1.d-1组(n=20)。术后第7,14天留取标本处死大鼠,处死前24 h留取大鼠尿液用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测ICAM-1的变化;用免疫组化方法检测肾组织内ICAM-1表达和定位。结果:与假手术组相比,模型组大鼠第7,14天肾小管间质损伤评分明显增高(P<0.05),肾组织及尿ICAM-1表达水平明显升高,且2者之间以及肾组织ICAM-1与肾小管间质损伤病理评分(肾损伤指数)呈正相关关系。三七0.84 g.kg-1.d-1组肾脏病理改变及肾组织和尿中ICAM-1的表达明显受到抑制(P﹤0.05);与同期模型组比较有明显统计学意义(P﹤0.05)。结论:UUO模型组大鼠肾组织ICAM-1表达与肾损伤指数和尿ICAM-1水平分别呈正相关,提示尿中ICAM-1可作为检测肾组织ICAM-1的表达水平的指标。三七改善了模型组大鼠肾小管间质的病理组织学改变,对肾小管间质纤维化具有一定的保护作用,其机制可能部分地与下调肾组织和尿中ICAM-1的水平有关。     

和络泄浊方防治单侧输尿管梗阻后大鼠肾间质纤维化的研究

目的:探讨和络泄浊方对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)后大鼠肾间质纤维化过程的防治作用。方法:采用UUO大鼠模型,将48只Waster大鼠随机分为假手术组(Sham)、手术组(UUO)、和络泄浊方治疗组(UUO+REL)。在造模后第1天开始和络泄浊方治疗组给予中药15 ml/kg.d-1,分早晚2次灌胃,假手术组和手术组每天给予等量生理盐水灌胃。在造模后第3 d、10 d、20 d、30 d每组取4只处死,左肾组织HE染色,光镜观察肾间质病理形态学变化;免疫组织化学染色法检测α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)的表达;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肾脏基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)mRNA的变化。结果:手术组呈进行性肾间质纤维化,肾小管上皮细胞及间质-αSMA表达明显增加(P<0.01),TIMP-1mRNA的表达明显高于假手术组(P<0.01),中药灌胃组的-αSMA及TIMP-1mRNA表达均明显低于手术组(P<0.01)。MMP-9在手术组术后明显升高,第10天时达到高峰,继之下降。中药灌胃组在第10天后下降幅度较小,在20 d3、0 d时高于手术组(P<0.01)。结论:和络泄浊方对单侧输尿管梗阻后的肾间质纤维化有抑制作用,通过调节MMP-9/TIMP-1的基因表达,减少-αSMA的形成,从而减轻肾间质纤维化。     

真武汤对慢性肾衰竭大鼠肾功能影响的实验研究

目的:观察真武汤对实验性慢性肾衰竭大鼠肾功能的影响。方法:采用“单肾切除加腺嘌呤灌胃法”建立大鼠慢性肾衰竭模型。予真武汤灌胃治疗。每周测体重2、4h尿量和24h尿蛋白,给药4周后处死取血测SCr、BUN、血钙、血磷、红细胞计数、血红蛋白含量。结果:真武汤在24h尿蛋白量、SCr、BUN、血磷、血钙、血红蛋白方面的作用与模型组对比有改善。结论:真武汤对单侧肾切除后腺嘌呤性慢性衰竭大鼠的肾功能具有一定的改善作用。     

真武汤对渗透泵恒释ADR肾病综合征大鼠的干预作用

目的:通过渗透泵恒释技术建立阿霉素肾病综合征(NS)模型,以真武汤干预治疗,评价真武汤对NS大鼠的治疗效果。方法:阿霉素(14.5 mg.kg-1)按渗透泵灌注要求填充,手术植入大鼠腹腔,通过渗透压恒释阿霉素诱发肾病综合征模型,将大鼠随机分为真武汤高、低剂量组(24,12 g.kg-1.d-1),地塞米松组(0.9 mg.kg-1.d-1),给药4周,观察动物一般情况,尿蛋白、血压、血脂、血清蛋白及肾功能指标变化,肾小球IgG表达,评价阿霉素渗透泵肾病综合征模型以及真武汤的干预作用。结果:阿霉素渗透泵NS大鼠成活率显著提高,实验过程中无动物死亡;模型组大鼠第2周出现典型的肾病综合征症状,与空白组比较,24 h尿蛋白、血压、血脂明显升高,血清蛋白及肾功能明显降低(P<0.01);与模型组比较,真武汤高、低剂量组能显著改善NS大鼠精神、活动、摄食量、毛色等状况,明显减轻NS大鼠24 h尿蛋白(109.85±14.65),(49.75±5.14),(51.43±4.46)mg,恢复大鼠血清总蛋白(TP):(57.64±3.64),(61.26±2.21),(60.85±1.91)g.L-1,白蛋白(ALB):(21.70±2.18),(25.93±2.74),(25.00±2.64)g.L-1水平,降低大鼠血清总胆固醇(2.91±0.50),(2.17±0.26),(2.12±0.31)mmol.L-1、甘油三酯(1.05±0.29),(0.49±0.12),(0.61±0.15)mmol.L-1水平,降低大鼠血压、血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)(P<0.05或P<0.01);减少大鼠肾小球系膜区IgG的沉积。结论:通过渗透泵恒释阿霉素建立肾病综合征模型,可提高造模成功率和模型稳定性,真武汤能减少NS大鼠尿蛋白,提高血浆蛋白水平,减少血液高凝状况,恢复肾功能及肾小球结构,改善NS症状。     

和解聚散方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织α-SMA表达的影响

目的:观察和解聚散方对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾组织中α-平滑肌肌动蛋白表达的影响,初步探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用单侧输尿管结扎致肾间质纤维化大鼠模型,将雄性SD大鼠120只随机分为4组:假手术组,模型组,洛丁新组,和解聚散方组,每组30只,从造模后第2天开始灌胃,洛丁新组为1.0mg/kg/d,和解聚散方组为9.8g/kg/d,假手术组、模型组灌胃生理盐水3ml/只。分别于造模后7,14,21天取梗阻侧肾脏进行HE、Masson染色,观察肾组织病理结构变化;采用免疫组化方法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:模型组、洛丁新组、和解聚散方组中α-SMA在术后7天、14天、21天表达均明显高于假手术组,两个治疗组的表达水平明显低于模型组,和解聚散方组14天与洛丁新组14天组比较有显著性差异。结论:和解聚散方可以降低肾组织中α-SMA的表达,这可能是和解聚散方抗肾纤维化的作用机制之一。     

真武汤对肾阳虚水肿大鼠模型的保护作用及对IL-17表达的影响

目的探讨真武汤对肾阳虚水肿大鼠模型的保护作用及其机制。方法每日腹腔注射3.75 mg/kg氢化可的松溶液,同时于第1、8日通过尾静脉注射阿霉素溶液,注射剂量分别为3.5、3 mg/kg,连续14 d,将造模成功的24只大鼠随机分为模型组、真武汤组(1.9 g/mL)、阳性药组(盐酸贝那普利,1.2 mg/mL),另设正常组。各组分别给予相应药物,正常组给予等体积0.9%氯化钠注射液,连续21 d。于造模第14日和给药第21日,测量大鼠体质量、尿量、尿蛋白含量;末次给药后,检测大鼠血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平;酶联免疫法检测环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、醛固酮(ALD)、白细胞介素-17(IL-17)水平;免疫组化法测定肾脏组织中IL-17的表达。结果造模后,与正常组比较,各组大鼠尿蛋白及尿量均显著升高(P<0.05或P<0.01),体质量增长缓慢(P<0.05或P<0.01),提示造模成功。给药后,与模型组比较,真武汤组和阳性药组体质量显著增长(P<0.05或P<0.01);真武汤组和阳性药组尿蛋白及尿量均显著下降(P<0.05或P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠cAMP、cAMP/cGMP显著降低,cGMP显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,真武汤组cAMP、cAMP/cGMP显著升高,cGMP水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠Scr、BUN、ALD、IL-17含量均显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,真武汤组和阳性药组Scr、BUN、ALD、IL-17含量均显著下降(P<0.05或P<0.01);与正常组比较,模型组肾组织中IL-17在肾小管上表达显著,肾小球有少量表达,呈深棕色;与模型组比较,真武汤组和阳性药组肾组织中IL-17表达明显降低,弱阳性表达。结论真武汤对肾阳虚水肿有治疗功效且能明显改善肾功能,其机制可能与抑制IL-17介导的足细胞凋亡有关。     

水蛭素对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质损伤及MCP-1、ICAM-1的干预效应研究

[目的]观察水蛭素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的干预作用,并探索其作用机制。[方法]健康雄性SD大鼠120只,随机分为假手术组24只和造模组96只。造模组再分为模型组24只、水蛭素高剂量组24只、水蛭素低剂量组24只、贝那普利组24只。各组于术后第3、7、14天分批随机处死。取梗阻侧肾组织行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot)分子技术,检测梗阻侧肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的分子表达变化。[结果]苏木精-伊红(HE)染色显示,与模型组相比:各用药组肾间质损伤及纤维化程度均有不同程度改善。RT-PCR显示,与模型组相比:水蛭素高剂量组各时间点及水蛭素低剂量组第7、14天ICAM-1相对表达量均明显降低(P0.05);水蛭素高剂量组第7、14天MCP-1表达显著降低(P0.01);水蛭素高剂量组第3天及水蛭素低剂量组各时间点MCP-1表达量明显降低(P0.05)。Western Blot显示,与模型组相比:水蛭素高剂量组第7天ICAM-1蛋白表达量显著减少(P0.01);水蛭素高剂量组第3、14天及水蛭素低剂量组第14天各时间点ICAM-1蛋白表达均明显降低(P0.05);水蛭素高剂量组第14天MCP-1蛋白表达显著降低(P0.01);水蛭素高剂量组第3、7天MCP-1蛋白表达明显降低(P0.05)。[结论]水蛭素能不同程度地改善UUO大鼠肾间质损伤程度,延缓间质纤维化进展,其机制可能与水蛭素干预了UUO大鼠肾间质MCP-1、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达有关。     

尿液NGAL,KIM-1,IL-18在商陆所致的大鼠肾损伤中的变化特征及其联合检测的意义

目的:探讨肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤因子-1(KIM-1)、白介素-18(IL-18)在商陆所致的大鼠肾损伤中的变化特征及其联合检测的意义.方法:Wistar大鼠随机分为商陆水煎液高、低剂量(生药40,20g· kg-1 ·d-1)组和对照组,连续灌胃35 d.于第7,14,21,28,35,42 d采集血/尿样,并分批解剖处理.生化分析仪检测血清总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、血肌酐(CR),尿液uTP,uALB含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿液NGAL,KIM-1,IL-18浓度.光镜/电镜下观察肾脏病理组织形态学改变.ROC曲线比较各血清/尿液指标及联合检测的曲线面积.结果:给予大鼠40,20 g·kg-1商陆水煎液35 d可致肾损伤,以肾小管上皮细胞变性、蛋白管型为主要病理表现,恢复期部分损伤可逆.与对照组相比,各剂量组BUN,CR,uTP多呈下降趋势,第21天uALB显著升高且持续至给药末.NGAL,KIM-1,IL-18第7天即开始升高,第14天起各剂量组均有显著性差异(P＜0.01),恢复期高剂量组KIM-1仍有显著变化.ROC分析三者的曲线面积为0.846,0.837,0.863(P＜0.01),远远高于BUN,CR等.而联合检测的面积达0.947.结论:尿液NGAL,IL-18,KIM-1能在一定程度上预测或提示肾损伤的发生、发展,具有较高的敏感性和部位特异性.其联合检测更能提高检验效能.