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抗HBV最佳反义寡核苷酸片段的体外筛选 总被引:15,自引:1,他引:14
目的 寻找抗HBV最佳反义寡核苷酸区段。方法 合成4种互补于HBV不同区段的反义硫代寡核酸(asON),加入HBV基因转染的肝癌细胞模型HepG22.2.15,以ELSA法测定HBsAg、HBeAg含量。结果 互补于pre-S2翻译起始区的asON(序列Ⅰ)抗HBV基因表达作用最强(P〈0.02),对HBsAg、HBeAg的最高表达抑制率分别为66%和91%,针对增强Ⅱ(ENⅡ)的序列Ⅲ也有较强的 相似文献
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反义寡脱氧核苷酸在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒复制与 … 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 研究反义核酸的抗病毒作用。方法 设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)前S(PreS)基因区第951-968位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN),以20μg/g体重/日剂量对3只腹腔感染DHBV5.2毒株后,血清DHBsAg及DHBV DNA阳性鸭连续静脉注射10天,同时以等体积生理盐水注射另3只感染鸭作为对照。结果 对照鸭注射生理盐水后,血清DHBsAg及DHBV DNA阳性未 相似文献
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ASODN对白细胞抗原Ⅰ类基因表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的为观察针对乙型肝炎病毒(HBV)x基因特异性反义核酸(ASODN)对2215细胞表面白细胞抗原Ⅰ类基因(HLA-Ⅰ)表达的影响。方法人工合成互补于x基因关键区的三段反义核酸,用流式细胞仪检测ASODN对2215细胞表面HLA-Ⅰ表达的影响,细胞原位杂交观察作用细胞内HLA-ⅠmRNA含量变化,同时用PAP-ELISA法检测作用细胞上清中HBxAg的含量。结果三段ASODN均能抑制HBxAg的表达,2215细胞表面HLA-Ⅰ类抗原的表达及细胞内HLA-ⅠmRNA含量也降低。结论HBxAg表达量的降低可能系ASODN序列特异性抑制作用所致,而HLA-Ⅰ表达的降低可能是HBxAg对HLA-Ⅰ基因启动子的激发减少的间接结果。 相似文献
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ASODN对白细胞抗原I类基因表达的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 为观察针对乙型肝炎病毒(HBV)x基因特异性反应核酸(ASODN)对2215细胞表面白细胞抗原I类基因(HLA-I)表达的影响。方法 人工合成互补于x基因关键区的三段反义核酸,用流式细胞仪检测ASODN对2215细胞表面HLA-I表达的影响,细胞原位杂交观察作用细胞内HLA-ImRNA含量变化,同时用PAP-ELISA法检测作细胞上清中HBxAg的含量,结果 三段ASODN均能抑制HBxAg 相似文献
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修饰的反义寡脱氧核苷酸对胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用 总被引:4,自引:0,他引:4
目的观察修饰过的反义寡脱氧核苷酸(ASOND)对人胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用。方法用人工合成与c-myc和Ki-ras帽区互补的修饰的反义寡脱氧核苷酸,即反义硫代正磷酸寡脱氧核苷酸(antisensephosophorothioateoligodeoxynucleotide,ASPODN)处理人胰腺癌细胞系PC-2和PC-3。多次小剂量(10μg)或一次性剂量(15μg)ASPODN处理细胞后计数细胞生长率和3H掺入率,并用逆转录聚合酶链反应检测靶基因表达。结果多次小剂量ASPODN处理后,细胞生长、3H掺入和靶基因表达的抑制可长达2周以上,到第14天时实验组的细胞生长率仅为对照组的38%~43%,3H掺入率为对照组的18%~33%;靶基因表达明显受抑或下调,经一次性15μgASPODN处理后,细胞生长、3H掺入和靶基因表达的抑制可达4天。结论与以往的研究比较,表明ASPODN较ASODN有更强的抑制细胞生长、3H掺入、靶基因表达的作用。 相似文献
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反义寡脱氧核苷酸在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒复制与表达的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究反义核酸的抗病毒作用。方法设计合成了针对鸭乙型肝炎病毒(DHBV)前S(PreS)基因区第951968位核苷酸的硫代反义寡脱氧核苷酸(ASODN),以20μg/g体重/日剂量对3只腹腔感染DHBV52毒株后,血清DHBsAg及DHBVDNA阳性鸭连续静脉注射10天,同时以等体积生理盐水注射另3只感染鸭作为对照。结果对照鸭注射生理盐水后,血清DHBsAg及DHBVDNA阳性未见明显改变,肝组织DNASouthern杂交在30与23kb左右杂交信号明显。注射ASODN鸭在10天后,2/3鸭血清DHBsAg及DHBVDNA量显著降低,3/3鸭肝组织中30kb左右的杂交信号显著减弱,23kb左右未见杂交信号。结论说明该段ASODN在鸭体内能部分抑制DHBV的复制与抗原表达。 相似文献
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通过受体介导法将核酶特异导入肝细胞以阻断HBV蛋白表达的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
应用半乳糖末端糖蛋白受体(ASGP-R)介导的内吞作用,将外源基因导入真核细胞,与脂质体介导的转染和细胞表面转铁蛋白受体(Tf-R)介导的内吞作用相比,虽然三种方式均能有效介导外源基因的转移,但ASGP-R法具有肝细胞特异性,而脂质体法和Tf-R法不具此特性。将克隆于真核表达载体的针对乙型肝炎病毒(HBV)mRNAPreC/C区的核酶质粒pCMV-Ripc特异性导入肝细胞并发挥作用,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液中的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg),评价核酶在细胞水平对HBV抗原表达的阻断作用。结果表明当核酶质粒pCMV-Ripc与HBV抗原表达质粒pUC-2HBV共转染HepG2细胞时,核酶对HBsAg和HBeAg表达的抑制率分别为55.29%和68.73%。 相似文献
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慢性肝炎和肝癌病人血清中乙型肝炎病毒DNA的检测 总被引:5,自引:0,他引:5
为了了解慢性肝炎和肝癌病人患者体内乙型肝炎病毒(HBV)复制与HBV血清标志之间的关系,用酶联免疫吸附实验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)及斑点杂交方法对61例慢性肝炎和47例肝癌患者的HBV表面抗原(HBsAg)、相关e抗原(HBeAg)、表面抗体(抗-HBs)、核心抗体(抗-HBc)、相关e抗体(抗-HBe)进行了检测。结果表明:HBVDNA在HBsAg、HBeAg、/抗-HBc阳性的慢性肝炎和肝癌患者血清中的检出率分别为90.50%和50.00%;在HBsAg/抗-HBe、抗-HBc阳性者的检出率分别为45.40%和7.14%;在HBsAg阳性、HBeAg阴性/抗-HBe阴性者中的检出率分别为60.00%和40.00%;HBsAg阴性、/抗-HBc阳性或/抗-HBe阳性或/抗-HBs阳性者中的检出率分别为20.00%和22.22%;在血清学指标全阴性时,慢性肝炎和肝癌患者血清中HBVDNA的检出率均为0。实验提示:无论是肝炎或肝癌,在HBsAg、HBeAg同时阳性时,HBV复制最为活跃;在单独HBsAg阳性时,HBV有一定程度的复制;HBV复制在肝癌细胞中受到一定程度的抑制。 相似文献
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preS2反义寡核苷酸降低端粒酶活性及诱导肝癌细胞凋亡的作用 总被引:2,自引:0,他引:2
反义核酸技术从分子水平破坏靶基因 ,已用于多种抗病毒的试验。我们以人工合成的硫代反义寡核苷酸研究针对HBV不同区段反义寡核苷酸HBV的抑制作用 ,从中筛选了效果最好的针对HBVpreS2的反义序列 (as preS2 )。为进一步探讨as preS2在肝癌治疗中的应用价值 ,以HBVDNA整合的肝母细胞瘤细胞HepG2 .2 .15为研究对象 ,采用FAC SCAN流式仪检测细胞凋亡率 ,TRAP银染测定细胞端粒酶活性 ,同时以RIA法检测培养上清中的血清铁蛋白浓度。设计合成针对pre S2基因 (per S2 )翻译起始区 (32 0 3… 相似文献
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反义bcl—2寡脱氧核苷酸对U937细胞增殖和存活能力的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
本实验观察了与人类bcl-2 mRNA翻译起始部位相互补的硫代反义bcl-2寡脱氧核苷酸(AS-oODN)对U937细胞增殖和存活能力的影响,结果表明:一定浓度的AS-sODN可明显抑制细胞Bcl-2蛋白的表达,但对细胞增殖和存活能力无明显影响。这一研究结果为在不同表达bcl-2的肿瘤细胞中探讨bcl-2反义核酸作用的普遍性和正确评价其作用地位积累了资料。 相似文献
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目的 应用新型杆状病毒表达系统快速构建含有HBsAg基因的重组杆状病毒,高效表达HBsAg,为HBV诊断试剂、疫苗及治疗研究提供依据。方法 构建含有HBsAg基因的供体质粒pFB-BS,转化Bac-to-Bac杆状病毒表达试剂盒中的DH10Bac致敏菌,利用其含有的细菌Tn7转座繁忙将HBsAg基因重组至穿梭质粒Bacmid上,快速筛选出含有HBsAg基因的重组杆状病毒。结果 此重组病毒能在昆虫细 相似文献
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脂质转染剂促进反义核酸的摄取和抗病毒作用 总被引:1,自引:0,他引:1
人工构建特异性互补于乙型肝炎病毒mRNA SPⅡ增强子区的15聚反义硫代寡核 ,并用r^32P末端标记,然后用脂质转染包装,在HBV基因转染的HepG2细胞上证明,Lipo-asON细胞内摄入量及抗病毒活性较末修饰体明显提高。 相似文献
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肝硬变内HBV DNA及其五种抗原的表达及意义 总被引:1,自引:1,他引:1
取225例人肝硬变活检组织石蜡切片,检测了HBVDNA及其5种抗原。分别用免疫组化ABC法检测HBxAg、pre-S_1和pre-S_2抗原;用PAP法检测HBsAg和HBcAg;用原位杂交方法检测HBVDNA;用免疫组化、原位杂交双标记方法检测HBVDNA和HBsAg、HBxAg或HBcAg。结果显示,阳性检出率HBsAg为70.0%(128/183例),pre-S_1抗原为64.4%(85/132例)、pre-S_2抗原为61.4%(81/132例),HBxAg为75.3%(113/150例),HBcAg为22.4%(39/174例),HBVDNA为62.4%(58/93例)。双标阳性检出率HBVDNA和HBsAg为37.3%(19/51例),HBVDNA和HBx-Ag为86.3%(44/51例),HBVDNA和HBcAg为39.2%(20/51例)。HBVDNA和HBV5种抗原阳性病例中80%以上均伴有肝细胞不典型增生。这一结果表明,在我国肝硬变的发生发展与HBV慢性感染有密切的关系。 相似文献
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目的 方法利用Zhoujian教授提供的重组质粒DNA pBV220/eAg,转染DH5^α细胞经30℃培养3小时,42℃培养6小时温度诱导后,提取乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)。经DEAE-Sepharose Fast Flow层折 纯化后免疫打点分析,收集阳性蛋白。经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝G250染色,显为单一的蛋白带,用免疫印迹法(Western blot)和免疫打点(lmmun 相似文献
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合成多肽体外诱导乙肝病毒抗原特异性CTL杀伤机制研究 总被引:3,自引:0,他引:3
为探讨合成多肽体外诱导乙肝病毒抗原特异性T细胞杀伤机制,应用免疫组化检测HGV-CTLsFas配体表达情况,燕分析培养上清一氧化氮含量与细胞毒活性的关系。结果显示,HBV-CTLs对转染HBV DNA的肝癌细胞存在明显的特异性细胞毒活性,其Fas配体表达阳性率分别为58%,56%,明显高于CD3-AK细胞组,细胞培养上清NO含量动态分析显示,HBV-CTLs细胞培养上清NO含量与细胞毒活性存在正相 相似文献
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目的:分析广西地区肝癌中c-myc、N-ras癌基因的表达与乙型肝炎病毒(HBV)感染的关系及其在肝癌发生中的作用。方法:应用原位cDNA-RNA杂交方法和免疫组化方法检测31例广西地区肝癌和相应癌旁组织中的c-mycmRNA、N-rasmRNA和HBsAg、HBxAg。结果:肝癌及癌旁均有较高的c-myc,N-ras癌基因的表达。检出率都在85%以上,其在不同分化程度肝癌中的表达差异无显著性意义:HBsAg和HBxAg的检出率分别为87.09%和79.31%。癌基因的表达与HBsAg,HBxAg的检出呈平行的状态。结论:c-myc、N-ras在广西地区肝癌的形成和保持恶性表型中有协同作用。HBxAg可能有激活c-myc、N-ras癌基因的作用 相似文献
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用含HBV全基因和HBV大、中、小分子表面蛋白基因的真核细胞表达质粒(CMV-HBV、CMV-LS、CMV-MS、CMV-S)分别与含HDV cDNA三聚体的重组质粒共转染CHO细胞。转染后3天在上述4种转染细胞内及培养上清中均检出了HDV RNA和HDAg表明上述4种转染细胞的培养上清中均有HDV病毒颗粒的包装和分泌。提示:HDV病毒的包装可能仅需HBV S 基因及其小分子表面蛋白的辅助。 相似文献
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《国外医学:病毒学分册》1996,(1)
选择性扩增法检测HBV前C终止密码突变:在HBeAg阳性健康携带者中的高频率检出[英]/NakahoriS...JGastroenterolHepato.-1995,(10).-419~425乙型肝炎病毒(HBV)前C区是分泌e抗原不可缺少的,因此,... 相似文献
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不同剂量6-羟基多巴胺注射大鼠单侧前脑内侧束后对中脑多巴胺能神经元损伤作用的观察 总被引:2,自引:0,他引:2
将不同剂量的6-羟基多巴胺(6-OHDA)注入大鼠一侧黑质(SN)头端的前脑内侧束(MFB),47天后用酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色法,观察旋转鼠整个SN和腹侧被盖区(VTA)不同切面上DA神经元的损伤程度,结果发现:损伤侧SN和VTA的TH阳性神经元数在所有观察水平上均有明显下降,并从前囟后5.1mm开始呈现6-OHDA剂量依赖性。而下降率(与健侧相比)为SN致密部(snc)>网状部和外侧部(snr+snl)>VTA。同时还发现,snc的TH阳性细胞在黑质两端分布比率较高,而VTA的相应细胞在黑质中部分布率较高。另外,在健侧前囟后4.8mm处出现非6-OHDA剂量依赖性的TH阳性神经元计数明显增加的现象。本文的结果提示:6-OHDA对中脑DA神经元的总体损伤程度取决于多种因素,如6-OHDA剂量、神经元对6-OHDA的敏感度以及敏感神经元的分布等。同时健侧中脑组织对邻侧发生的损伤并非毫无反应,一些交叉投射的纤维可能起着传递损伤信息的作用 相似文献