硬脑膜体外培养模型的建立及修复机制研究

本研究拟建立一种兔硬脑膜缺损的体外培养模型,观察不同细胞外基质对其愈合过程的影响,研究硬脑膜修复的机制,为以后检测各种硬脑膜移植物提供方便。取1.5cm×1.5cm大小兔硬脑膜在其中央做直径2mm的孔,模仿硬脑膜缺损,放于24孔板中培养。8d~10d后预先铺过胶原的培养板中有细胞从硬脑膜缺损的边缘逸出,增殖,13d~15d硬脑膜缺损愈合;而以多聚赖氨酸及层粘连蛋白铺底的培养板中没有看到细胞的逸出现象。硬脑膜细胞对波形蛋白抗体呈强阳性反应,对第Ⅷ因子抗体则为阴性反应;在电镜下可以看到新生胶原的生成。本研究成功建立一种硬脑膜缺损的体外培养模型,并证实成纤维细胞从硬脑膜创缘的逸出、增殖是硬脑膜缺损愈合的重要机制。     

碱性成纤维细胞生长因子对瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对瘢痕成纤维细胞生物学特性的影响。方法采用细胞培养、MTT、ELISA法、氯胺T和RT—PCR法检测bFGF在不同作用剂量下对瘢痕来源的成纤维细胞生长增殖和细胞外基质（ECM）合成的影响。结果（1）MTT检测bFGF对瘢痕成纤维细胞有明确的促增殖作用，并具有剂量相关性；（2）氯胺T法显示实验组和对照组HPr含量无显著性差异，RT—PCR法显示各组Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达水平无明显变化；说明bFGF对瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的合成无促进作用；（3）ELISA法表明随着bFGF作用浓度的升高，FN的表达表现为增高趋势，且以100ng／ml浓度下作用最显著。结论bFGF可以促进创面愈合，但不引起瘢痕的过度形成。     

异体脱细胞真皮基质在硬脑膜修复中的应用

硬膜结构的缺损常常造成脑脊液漏、出血以及颅内感染等并发症,因此寻找一种合适的材料用于硬膜修补非常重要.就异体脱细胞真皮基质（allograft dermal matrix,ADM）研究现状及其在硬膜修补中的应用作一回顾.     

异体脱细胞真皮基质在硬脑膜修复中的应用

硬膜结构的缺损常常造成脑脊液漏、出血以及颅内感染等并发症,因此寻找一种合适的材料用于硬膜修补非常重要。就异体脱细胞真皮基质(allograftdermalmatrix,ADM)研究现状及其在硬膜修补中的应用作一回顾。     

输尿管细胞外基质修复输尿管缺损的实验研究

为了寻求理想的输尿管替代材料 ,采用生化方法制备了一种新型的组织工程材料细胞外基质 (Extra-cellular Matrix ,ECM) ,并用于替代同种异体输尿管缺损 ,结果表明 ECM很好的促进了缺损组织的再生 ,替代术后 16周再生组织的形态与功能已与正常组织无明显差异。异体输尿管细胞外基质是一种理想的输尿管替代材料     

羟丁基几丁糖膜修复兔硬脑膜缺损的实验研究

目的研究羟丁基几丁糖膜修复兔硬脑膜缺损的效果。方法取健康成年新西兰兔15只,颅中线两侧对称造成0.8 cm×0.8 cm硬脑膜缺损,左侧(实验组)使用羟丁基几丁糖膜覆盖硬脑膜缺损,右侧(对照组)使用生物膜(牛肌腱I型胶原)覆盖缺损,术后30、90、180 d分别处死5只实验动物,观察手术区域的大体情况及切取手术区域组织行HE染色,行成纤维细胞计数。结果实验组术后30、90、180 d,均可见羟丁基几丁糖膜下半透明新生膜形成,与周围组织无粘连;术后180 d,新生膜中成纤维细胞计数与正常兔硬脑膜比较差异无统计学意义(P0.05),大体观察及HE染色下结构与正常兔硬脑膜相似性高。对照组术后90 d生物膜被吸收,手术区域形成一较厚不透明结缔组织覆盖脑表面;术后180 d,新生结缔组织成纤维细胞计数与正常兔硬脑膜比较差异有统计学意义(P0.05),大体观察及HE染色观察较正常兔硬脑膜相似性低。结论羟丁基几丁糖膜修复兔硬脑膜缺损,膜下有新生膜形成,新生膜与兔正常硬脑膜相似性高,可以达到修复硬脑膜缺损的要求。     

成年SD鼠骨髓基质细胞的细胞分化及抗凋亡的研究

目的：探讨用不同的抗凋亡剂与诱导剂组合进行诱导，以延长分化后神经元样细胞存活时间，为临床治疗提供长寿细胞。方法：采用全骨髓法培养成年SD大鼠股骨骨髓基质细胞。传至第5代，用单一或组合的诱导剂诱导分化，诱导分6组：RA、褪黑素（10^-9mol/L)、bFGF、bFGF RA、褪黑素＋RA、褪黑素＋bFGF。于诱导后第5h行神经细胞特异性抗原MAP－2和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组织化学鉴定，并分别在诱导后的第1、5和24h计数各组神经元样细胞的分化率，比较各组诱导后神经元样细胞的存活率。结果：神经元样细胞皆呈MAP－2阳性，GFAP阴性。RA、RA、褪黑素（10^-9mol/L)、bFGF、bFGF＋RA、褪黑素＋RA、褪黑素＋bFGF各组诱导后第1h分化率分别为0．24、0．28、0、0、0．4、0．64；5h为0．56、0．40、0、0．76、0．83；24h为0．10、0．27、0、0．14、0．35、0．59。诱导后24h神经元样细胞存活率在RA、褪黑素、褪黑素＋RA、 褪黑素＋bFGF4组分别为0．08、0．37、0．05、0．51。结论：1．bFGF单独不能诱导骨髓基质细胞向神经元样细胞分化，且拮抗RA的诱导作用，但对褪黑素的诱导有互补作用。2．单独用褪黑素可诱导骨髓基质细胞分化为神经元样细胞并有对抗神经元样细胞凋亡作用。3．褪黑素及bFGF联合诱导不仅使神经元样细胞分化率提高且使存活时间明显延长。     

SMYD2特异性抑制剂对高糖环境下大鼠肾成纤维细胞活化的影响及其机制

目的：明确赖氨酸甲基转移酶SMYD2(SET and MYND domain containing 2)特异性抑制剂对体外高糖（HG）环境下大鼠肾成纤维细胞（NRK-49F）活化的影响并探索其可能机制。方法：采用CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂LLY507对体外培养的NRK-49F细胞活力的影响。实验分组为正常糖（NG；含5.5 mmol/L葡萄糖）组、HG（含30 mmol/L葡萄糖）组、NG+LLY507(1.5μmol/L)组和HG+LLY507(1.5μmol/L)组，37℃培养48 h后收集各组细胞蛋白。采用Western blot实验检测SMYD2、组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）、纤维连接蛋白（fibronectin）、I型胶原蛋白（Col I）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1(TGF-β1)、p-Smad3、Smad3、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子κB(NF-κB) p65、NF-κB p-p65、白细胞介素6(IL-6)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)及p-STAT3蛋白水平。结果：LLY507浓度低于1.6μ...     

左心辅助泵(人工心)内皮细胞化的实验研究

培养猪主动脉内皮细胞,用预衬细胞外基质结合使用bFGF的方法实现静置条件下PU材料的内皮细胞化,并观察内皮化材料在LVAP泵腔内模拟流体条件下内皮细胞的贴壁率和丢失率以及内皮细胞的形态变化。结果显示用预衬基质结合使用bFGF的方法,静置条件下可以实现PU材料的内皮化。镜下观察细胞形态良好,在LVAP泵腔内模拟流体条件下冲击1、2h后,细胞贴壁率分别为74.42%和59.7%,丢失率分别为25.58%和40.30%。扫描电镜观察,细胞总的形态变化不明显,轻度收缩,部分细胞有脱落。本实验为实现LVAP泵腔内壁流体条件下内皮化初步摸索了条件和实验方法。     

整合素在烧伤创面愈合中的作用研究进展

整合素家族为跨膜糖蛋白受体家族,其作用是介导细胞与细胞外基质之间的相互作用,参与细胞相互之间的黏附功能。整合素通过双向信号转导,影响细胞的分化、增生与凋亡;整合素信号系统还可以通过调控细胞周期,产生细胞凋亡,影响瘢痕的形成。本文就整合素家族参与烧伤创面成纤维细胞分化、促进创面收缩,增强细胞外基质的收缩能力以及整合素连接激酶与创面愈合之间的关系作一综述。     

小鼠矽肺模型的建立及bFGF参与矽肺形成的研究

目的: 建立小鼠矽肺动物模型,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与矽肺进程的关系,揭示其在细胞以及分子水平的调控。方法:用手术方法暴露小鼠气管,定量注射二氧化硅悬液入气管内,收集不同染尘时间的小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),用MTT法检测灌洗液对成纤维细胞的促增殖作用以及抗bFGF抗体对这种作用的抑制。结果:建立了矽肺的纤维化模型,其BALF具有明显促进成纤维细胞增殖的作用,且这种作用可被bFGF的中和抗体所抑制。结论: 矽肺小鼠BALF具有明显的促进成纤维细胞增殖作用,且抗bFGF抗体可抑制这种作用,显示染尘小鼠BALF中有bFGF的释放,并参与了矽肺纤维化进程。     

腰骶部硬膜黄韧带间连结的形态及其临床意义

目的：探讨腰骶部椎管后路手术中发生硬膜撕裂的解剖学原因及预防办法。方法：解剖５０例成尸腰骶部标本,对硬膜与黄韧带之间的连结结构进行大体观测和光镜组织学观察。结果：在腰骶部硬膜与黄韧带之间存在有正常的连结结构,Ｌ５～Ｓ１节段占９８％,Ｌ４～Ｌ５占６８％,Ｌ３～Ｌ４占１２％;以单束者居多,多束者常见于Ｌ～Ｓ;呈线状、条索状、网络状和膜状四种类型;Ｌ４～Ｌ５长１３．９±５．７ｍｍ,Ｌ５～Ｓ１为９．２±４．２ｍｍ。光镜下观察为密集排列的胶原纤维束。结论：据腰骶部硬膜黄韧带间连结的形态学特点,拟称其为“硬膜黄韧带间韧带”。此韧带是造成术中硬膜撕裂的解剖学因素,建议相关术中应先行寻认并切断,再行去除黄韧带,以免造成硬膜撕裂     

远端硬膜环及颈动脉窝解剖结构的MR研究

目的 探讨双反转恢复黑血高清(HR-DIR)-MRI和3D可变翻转角快速自旋回波成像(3D-SPACE)技术在显示远端硬膜环(DDR)及颈动脉窝精细解剖结构中的应用价值。方法 2015年4—10月招募健康志愿者20名进行前瞻性研究。其中男11名,女9名;年龄19～35岁,平均27岁。采用3D-SPACE及HR-DIR-MRI技术扫描DDR、颈动脉窝,在3D-SPACE T₂WI和HR-DIR-T₂WI图像上观察DDR的形态、走行,观察颈动脉窝的形态,并测量颈动脉窝深度;在HR-DIR-T₂WI图像上测量比较DDR双侧的外内侧平面倾斜角、前后侧平面倾斜角。比较3D-SPACE与HR-DIR-MRI关于DDR成像的信噪比(SNR)、对比噪声比(CNR),以及DDR图像质量评分。结果 在3D-SPACE-T₂WI和HR-DIR-T₂WI序列上,冠状位DDR外内侧平面40侧均呈外高内低型,矢状位DDR前后侧平面36侧呈前高后低型、4侧呈前低后高型。3D-SPACE-T₂WI、HR-DIR-T₂WI不同序列间DDR外内侧平面倾斜角和前后侧平面倾斜角比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05);而在同一序列中,DDR左右侧的外内侧平面倾斜角和前后侧平面倾斜角比较,差异均无统计学意义(P值均>0.05)。HR-DIR-T₂WI序列冠状位、矢状位DDR成像SNR、 CNR及图像质量评分均高于3D-SPACE-T₂WI序列,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。3D-SPACE-T₂WI序列上,观察到颈动脉窝23侧,其中A型17侧、B型16侧、C型7侧;颈动脉窝深度1.0～7.5 mm,平均(2.07± 1.31)mm。HR-DIR-T₂WI序列上,观察到颈动脉窝19侧,其中A型21侧、B型13侧、C型6侧;颈动脉窝深度1.1～7.5 mm,平均(2.13 ± 1.33)mm。两种序列显示颈动脉窝深度差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高分辨 MRI 多序列技术相结合,能够较为准确地定位DDR,进而识别动脉瘤,对病情评估及治疗方式的选择具有良好的临床价值。在MR的3D-SPACE基础上应用HR-DIR-MRI序列可以清晰地显示DDR及颈动脉窝周围精细解剖。HR-DIR利用双反转黑血技术和脉搏门控技术,使DDR图像得以优化。     

含重组碱性成纤维细胞生长因子培养基中3T3成纤维细胞在血纤维蛋白凝块上生长的可能性（英文）

目的：重组碱性成纤维细胞生长因子对培养条件下３Ｔ３成纤维细胞在血纤维蛋白凝块上生长的可能研究。方法：采用Ｇｉｅｍｓａ染色和ＭＴＴ检测法,经过电镜扫描,分段对比观察,研究３Ｔ３细胞在血纤维蛋白凝块上的生长情况。结果：ｒｈｂＦＧＦ促进细胞生长产维持细胞存活的最佳浓度是１００ｎｇ／ｍｌ,在含有１００ｎｇ／ｍｌ的低血清培养基中细胞可在血纤维蛋白凝块生长。经４８ｈ培养以后仍有大量的细胞存活。结论：３Ｔ３成纤     

Basement membrane formation and re-distribution of the β1 integrins in a human intestinal co-culture system

We have developed a co-culture system suited for the study of epithelial-mesenchymal interactions in the human fetal small intestine. As the epithelial component of this model, we used the human intestinal cell line Caco-2 that is unique in its property to differentiate in vitro into a mature fetal enterocyte-like cell type. A sheet of human intestinal mesenchymal cells, which we derived from an 18-week-old fetus, was used as mesenchymal element. Expression and distribution of cell-specific markers (cytokeratin 18 and dipeptidyl peptidase IV), major basement membrane components, and β1 integrins were analyzed. In 14-day co-cultures, Caco-2 cells formed a cytokeratin 18-positive epithelial-like sheet covering the vimentin-positive HIM cell layers. As assessed by brush border dipeptidyl peptidase IV expression, co-cultured Caco-2 cells achieved cytodifferentiation as when cultured on plastic. A complete deposition of all known major human fetal intestinal basement membrane components occurred at the Caco-2/HIM interface. Type IV collagen and tenascin were produced from the mesenchymal compartment, whereas laminin and fibronectin were contributed by both cell types. Interestingly, synthesis and deposition of basement membrane heparan sulfate proteoglycan were exclusively observed in co-cultures, suggesting modulation of epithelial expression of this molecule by HIM cells. Finally, we observed that epithelial integrin-β1 chains redistributed at the basal domain of co-cultured Caco-2 cells. Taken to gether, these observations indicate that the Caco-2/HIM co-culture model is a valuable system to study in vitro human basement membrane formation in the context of intestinal epithelial-mesenchymal interactions. © 1993 Wiley-Liss, Inc.     

Embryology of the internal carotid artery dural crossing: apropos of a continuous series of 48 specimens

The aim of this study was to describe the embryologic and foetal development of the anterior paraclinoid region and more precisely the relationship of the internal carotid artery to the dura mater. This has been done by examining a collection of histological sections, representing a continuous series of 48 embryologic and foetal specimens, covering the period of the first 6 months of intra-uterine life. Neurological and vascular elements develop during the embryologic period; the internal carotid artery is recognizable in the various sections of its course and acquires a histological adult parietal constitution. The foetal period corresponds to the development of the meningeal structures. The superior, medial and lateral walls appear on the fifteenth week of amenorrhoea and do not change after that. The internal carotid artery enters subarachnoid space accompanied by a sleeve of mesenchymatous cells, which fixes it to the anterior clinoid process. The constitution of this sleeve, arising from the superior wall of the lateral sellar compartment, remained independent of the principle vascular part, which allows the formation of a plan of cleavage. The foetal relations of the dura mater and the internal carotid artery were seen to be different from those of adult subjects described in the literature, suggesting an existence of period of maturation postnatally.     

成纤维细胞生长因子受体2基因与肿瘤的相关性研究

成纤维细胞生长因子受体2(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)是人成纤维细胞生长因子受体(FGFRs)家族中的一员,FGFRs在细胞的增殖、分化、血管生成、骨骼发育中起着十分重要的作用.研究表明成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)与肿瘤的发生存在一定相关性.本文就其特点作如下总结.     

血小板衍生性生长因子对体外培养人肾小球系膜细胞生长的影响

目的观察血小板衍生性生长因子（ＰＤＧＦ）对体外培养的人肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）生长、基质合成和分泌以及ｃ┐ｍｙｃ癌基因表达的影响。方法体外培养的ＭｓＣ培养液中掺入５┐溴脱氧尿嘧啶（ＢｒｄＵ）,采用ＢｒｄＵ单克隆抗体免疫组化法检测ＭｓＣ的增殖情况;应用［３Ｈ］脯氨酸掺入酶消化法测定ＭｓＣ细胞内、外胶原蛋白总量;采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法检测纤维连接蛋白（ＦＮ）、Ⅳ型胶原、核癌基因ｃ┐ｍｙｃｍＲＮＡ表达结果。结果（１）ＢｒｄＵ掺入法的阳性细胞标记指数在对照组为１９．５％,ＰＤＧＦ组为３４．５％（Ｐ＜０．０１）;（２）ＭｓＣ经ＰＤＧＦ作用后,细胞内、外胶原蛋白量分别为２．６９±０．６０％和３．８７±０．６５％,较正常对照组１．２５±０．５０％和１．６１±０．５１％明显增加（Ｐ＜０．０１）;（３））Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法显示ＰＤＧＦ组细胞的ＦＮ、Ⅳ型胶原及ｃ┐ｍｙｃｍＲＮＡ的表达明显高于正常组。结论ＰＤＧＦ不仅可刺激肾小球ＭｓＣ的增殖和胶原蛋白合成,而且可从基因转录水平增加ＦＮ、Ⅳ型胶原及ｃ┐ｍｙｃ癌基因的表达。由此推断ＰＤＧＦ在肾小球疾病的发生、发展中可能起着重要作用