柚皮素对自身免疫性肝炎小鼠保护作用及TRAF6/JNK信号通路的影响

目的：探讨柚皮素对自身免疫性肝炎(AIH)小鼠保护作用及肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)/c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法：将72只雄性C57BL/6小鼠随机分为阴性对照组、模型组、柚皮素低(30 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(120 mg/kg)剂量组和阳性对照组(2 mg/kg),每组12只。除阴性对照组外,其余各组小鼠一次性尾静脉注射刀豆球蛋白A(ConA)(12 mg/kg)制备AIH模型,阴性对照组尾静脉注射等量生理盐水。注射完毕之后,柚皮素低、中、高剂量组和阳性对照组分别灌胃相应药物,阴性对照组和模型组灌胃给予等量生理盐水,每天1次,持续给予5d。末次灌胃24 h后检测小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平,苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肝组织病理学改变,酶联免疫吸附(ELISA)检测小鼠肝组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,蛋白免疫印迹法检测小鼠肝组织中TRAF6、JNK、磷酸化JNK(p-JNK)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果：阴性对照组小鼠肝脏结构未见明显异常;模型组小鼠见大量片肝细胞坏死区域,肝索排列紊乱,同时伴有炎性细胞浸润;柚皮素各剂量组和阳性对照组病理改变较模型组减轻,且柚皮素高剂量组与阳性对照组只存在轻度肝细胞坏死。与阴性对照组比较,模型组小鼠血清中ALT、AST、肝组织中IL-6、TNF-α、TRAF6、p-JNK和Bax蛋白水平增加,Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax水平降低(P＜0.05);与模型组比较,柚皮素低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠血清中ALT、AST、肝组织中IL-6、TNF-α、TRAF6、p-JNK和Bax蛋白水平降低,Bcl-2蛋白和Bcl-2/Bax水平增加,柚皮素各剂量组之间呈剂量效应关系(P＜0.05);各组小鼠肝组织中JNK蛋白水平变化不显著(P＞0.05);柚皮素高剂量组与阳性对照组作用相似(P＞0.05)。结论：柚皮素可能通过抑制TRAF6/JNK信号通路,减轻AIH小鼠肝脏炎症反应,对AIH小鼠肝脏具有保护作用。     

柚皮素对溃疡性结肠炎小鼠肠组织中miR-30a-3p/PTEN信号轴表达的影响

目的 探讨柚皮素对溃疡性结肠炎小鼠肠组织中miR-30a-3p/PTEN信号轴表达的影响。方法 选取60只健康雄性BALB/c小鼠,按随机数字表法均分为阴性对照组、模型组、阳性对照组、柚皮素低剂量组、柚皮素中剂量组和柚皮素高剂量组,每组各10只。用DSS灌胃法制备BALB/c小鼠溃疡性结肠炎模型,阴性对照组和模型组灌胃给予生理盐水（0.2 mL/10g）,阳性对照组灌胃给予泼尼松龙（2 mg/kg）,柚皮素低、中、高剂量组分别灌胃给予柚皮素（剂量依次为50、100、200 mg/kg）,持续给予7 d。计算疾病活动度评分（DAI）,对BALB/c小鼠肠组织进行形态学检查,同时采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肠组织中白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,实时荧光定量PCR（RT-PCR）法及Elisa法分别检测肠组织miR-30a-3p、PTEN、PI3K、Akt和Caspase-3 mRNA及蛋白水平。结果 模型组小鼠结肠有部分肠壁凹陷,形成溃疡,周围组织水肿明显,部分细胞坏死、脱落,炎性细胞浸润;与模型组比较,阳性对照组和各柚皮素剂量组小鼠结肠组织病理损伤明显改善。与阴性对照组比较,其余各组小鼠肠组织DAI、IL-4、TNF-α、PTEN和Caspase-3 mRNA及蛋白升高,IL-10、miR-30a-3p、PI3K和Akt mRNA及蛋白降低（均P＜0.05）;与模型组比较,阳性对照组和各柚皮素剂量组小鼠肠组织DAI、IL-4、TNF-α、PTEN和Caspase-3 mRNA及蛋白降低,IL-10、miR-30a-3p、PI3K和Akt mRNA及蛋白升高,各柚皮素剂量组效应呈剂量反应关系（均P＜0.05）;柚皮素高剂量组与阳性对照组各指标比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 柚皮素可以降低溃疡性结肠炎小鼠的结肠炎性,减轻病理损伤,其机制可能与调控miR-30a-3p/PTEN信号轴有关。     

JNK信号通路在小鼠术后肠麻痹发病机制中的作用

目的 探讨JNK信号通路在小鼠术后肠麻痹（POI）发病机制中的作用。方法 将野生型C57/BL6小鼠（WT）及同品系的JNK-/-小鼠均随机分成假手术组（Sham组,n=6）和肠麻痹组（POI组,n=6）。采用经典小肠操作方法诱导POI模型,术后24h给小鼠碳末灌胃,20min后麻醉小鼠,开腹取小肠评估肠动力,取回肠评估组织学改变,检测髓过氧化物酶（MPO）、IL-1β、IL-6水平及Claudin-2蛋白表达。结果 与Sham组小鼠相比,无论WT或JNK-/-小鼠其POI组的小肠排推率（分别为21%与33%）均明显降低（P=0.034及P=0.045,均P<0.05）,小肠组织MPO活性水平（分别为0.608U/g与0.433U/g）明显升高（均P<0.05）;与WT小鼠POI组比较,JNK-/-小鼠POI组的小肠运动功能及其组织病理变化有所改善,炎症介质如MPO、IL-1β及IL-6水平均有明显降低（均P<0.05）,小肠Claudin-2蛋白表达也降低（P<0.01）。结论 JNK基因敲除减轻小鼠肠道炎症反应、改善POI,表明JNK信号通路参与POI的发病过程。     

双氢青蒿素对大鼠烧伤创面愈合及ERK/JNK信号通路的影响

目的 探讨双氢青蒿素对大鼠烧伤创面愈合及ERK/JNK信号通路的影响。方法 采用金属砝码烧伤法构建大鼠烧伤模型,并将造模成功的大鼠随机分成模型组、双氢青蒿素低(25 mg/kg)、中(50 mg/kg)、高剂量组(100 mg/kg)和磺胺嘧啶银(SS)组,每组10只。另取10只大鼠作为假手术(sham)组,将金属砝码置于37℃温水中,其余按烧伤模型构建相同方法处理大鼠。sham组和模型组使用橄榄油和无水乙醇混悬液涂抹创面,双氢青蒿素低、中、高剂量组使用含双氢青蒿素的橄榄油和无水乙醇混悬液涂抹创面,SS组大鼠使用SS乳膏涂抹。在药物处理3,7,14,21 d时分别观察记录大鼠创面愈合情况并计算愈合率。药物处理21 d时,苏木素-伊红(HE)法检测大鼠创面组织病理变化;ELISA法检测血清中炎症因子水平,包括肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6);试剂盒检测创面组织氧化应激反应因子活性,包括丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT);Western blot法检测创面组织ERK/JNK信号通路相关蛋白(ERK1/2、J...     

乳岩宁方联合依西美坦对乳腺癌荷瘤裸鼠 JNK/MAPK信号通路的影响*

目的观察乳岩宁方联合依西美坦对MDA-MB-435乳腺癌细胞荷瘤裸鼠JNK/MAPK信号通路相关蛋白表达的影响,探讨乳岩宁方联合依西美坦治疗绝经后难治性（HER-2/neu高表达）乳腺癌的作用机制。方法造MDA-MB-435乳腺癌细胞荷瘤去势裸鼠移植模型,分为4组：空白对照组、乳岩宁方组、依西美坦组、联合组（乳岩宁方+依西美坦）,分别每日1次灌胃给药,21 d后处死裸鼠,取材瘤体。采用Western blot及RT-PCR法检测瘤组织中JNK/MAPK信号通路JNK蛋白及其下游相关蛋白STAT3、Bcl-2、p53、caspase8的表达。结果乳岩宁方组、依西美坦组、联合组的抑瘤率分别为37.53%、60.83%、66.09%。与空白对照组相比,乳岩宁方组、依西美坦组和联合组的JNK、STAT3、Bcl-2的蛋白表达均明显下降,有统计学意义（P<0.05）。其中JNK蛋白的表达,联合组较乳岩宁方组、依西美坦组明显下降,有统计学意义（P<0.05）;STAT3蛋白的表达,乳岩宁方组较依西美坦组和联合组明显下降,有统计学意义（P<0.05）;Bcl-2蛋白的表达乳岩宁方组、依西美坦组、联合组之间无统计学意义（P>0.05）。与空白对照组相比,乳岩宁方组、依西美坦组和联合组p53、Caspase8的基因表达均明显升高,有统计学意义（P<0.05）。联合组p53、Caspase8的基因表达较乳岩宁方组、依西美坦组明显升高,有统计学意义（P<0.05）。结论乳岩宁方联合依西美坦可能对JNK/MAPK信号通路有双向调节作用,一方面下调JNK蛋白表达及其下游蛋白STAT3、Bcl-2表达起到抑制乳腺癌细胞增殖的作用;另一面能上调p53、Caspase8基因表达,起到促进乳腺癌细胞凋亡的作用,最终起到抗肿瘤的作用。中药复方联合内分泌治疗将成为激素受体阳性乳腺癌在后芳香化酶抑制剂时代（AI+）治疗的新模式。     

柚皮素对肺结核大鼠肺组织损伤的影响及其机制

目的 探究柚皮素(NAR)对肺结核(PTB)大鼠肺组织损伤的影响及其机制。方法 120只大鼠分为对照组(control)、模型组(PTB)、柚皮素低[25 mg/(kg·d)]、中[50 mg/(kg·d)]、高剂量[100 mg/(kg·d)]组和柚皮素高剂量+Colivelin[信号转导与转录激活因子3(STAT3)激活剂]组(NAR-H+Colivelin),每组20只。计算肺组织湿重/干重(W/D)比值;ELISA法检测干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;Western blot检测IL-6和STAT3蛋白表达。结果 与control组相比,PTB组肺组织损伤严重,肺泡结构紊乱、塌陷,有大量炎症细胞浸润,肺间质充血增厚;W/D比值、IL-6、IL-1β、TNF-α和IFN-γ、MDA水平及α-SMA、IL-6表达和STAT3...     

柚皮素对脂肪间充质干细胞增殖的影响

目的探讨柚皮素在体外对人脂肪间充质干细胞（adipose-derived stem cell, ADSC）增殖的影响。方法采用CCK-8法检测柚皮素对ADSC细胞活性的影响,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹法检测P16ink4a的表达水平,β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞衰老的情况,活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧类（ROS）含量,mRNA测序（RNA-seq）分析相关调控信号通路。结果CCK-8结果表明柚皮素在浓度为25μmol/L时能够明显促进ADSC的增殖（P<0.01）,流式细胞术结果显示柚皮素能使ADSC快速进入S期,促进了细胞的增殖（P<0.05）,Western印迹法检测结果显示柚皮素能够下调P16ink4a的表达（P<0.05）,β-半乳糖苷酶染色检测结果显示柚皮素能够延缓细胞衰老（P<0.01）,活性氧检测结果显示柚皮素能够清除细胞内活性氧的含量（P<0.01）,RNA-seq结果表明柚皮素能够通过激活核苷酸结合寡聚结构域样受体（NOD-like receptors, NLRs）信号通路上调SOD2基因的表达促进hADSC的增殖。结论柚皮素能够促进ADSC的增殖,其相关机制可能与激活核苷酸结合寡聚结构域样受体信号通路上调SOD2基因的表达有关。     

苗药金乌健骨胶囊对胶原诱导关节炎模型大鼠肠道、滑膜炎症及IL-17α/TRAF6/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨苗药金乌健骨胶囊对胶原诱导关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）模型大鼠肠道、滑膜炎症及参与NF-κB信号通路基因IL-17受体信号分子ACT1(nuclear factor kappa B activator 1, ACT1)、泛素化TRAF6(TNF receptor associated factor 6, TRAF6)、转化生长因子β激活激酶1(transforming growth factor-β-activated kinase 1, TAK1)、核因子-κB上游激酶（IκB kinase α, IKKα）、核因子κB/p65、核因子κB/p50表达的影响。方法 将70只SPF级6～8周龄雌性Wistar大鼠随机分为7组,分别为空白对照组、模型组、金乌健骨胶囊低剂量组、金乌健骨胶囊中剂量组、金乌健骨胶囊高剂量组、甲氨蝶呤组及益生菌组,每组10只。适应性喂养后除空白对照组外,其余6组构建CIA模型,两次免疫造模成功后分别进行药物金乌健骨胶囊、甲氨蝶呤、益生菌灌胃治疗,治疗4周后静脉取血,处死大鼠,分离大鼠滑膜组织及肠道组织。利用H...     

GAS6/AXL信号通路失活对小鼠能量代谢的影响

目的 研究小鼠生长停滞特异蛋白6（growth arrest-specific gene 6,GAS6）信号通路的失活对维持机体能量代谢稳态的影响。方法 以GAS6主要受体Axl基因敲除（Axl^-/-）小鼠及其野生型（Axl^+/+）小鼠为研究对象,比较两组动物基础血糖值、血脂四项指标、脂肪系数及骨骼肌中糖代谢信号蛋白PI3K、AKT与葡萄糖转运蛋白4（glucose transporter 4,GLUT4）基因表达水平及其蛋白磷酸化水平间的差异;同时检测人工诱发2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus,T2DM）造模前后小鼠血清GAS6蛋白水平与T2DM模型成模率的改变之间是否存在相关性。结果 Axl^-/-小鼠血脂出现异常波动,且脂肪沉积率显著高于野生型小鼠（P<0.01）。Axl^-/-小鼠血糖调节能力受损,其空腹血糖值显著高于野生型,骨骼肌Glut4的mRNA水平升高,而PI3K、AKT和GLUT4蛋白的磷酸化水平均略有下降。经人工诱发T2DM后,Axl^+/+和Axl^-/-小鼠血浆中GAS6浓度均显著低于各自对照组,且Axl^-/-小鼠T2DM模型的成模率是Axl^+/+小鼠的2倍（P<0.01）。结论 GAS6/AXL信号通路的激活在一定程度上降低血糖和抑制脂肪沉积。     

JNK/c-Jun信号通路对非酒精性脂肪性肝炎脂性凋亡的影响

非酒精性脂肪性肝炎(NASH)是非酒精性脂肪性肝病的一个重要病理阶段,其可以发展为肝硬化,甚至肝细胞癌,对疾病的进展起决定性作用。对NASH发生、发展机制的研究普遍接受"二次打击"学说。其中,肝细胞脂毒性凋亡是NASH的一个重要病理组织学特征。c-Jun氨基端激酶(JNK)是丝裂原活化蛋白激酶家族的成员。JNK/应激活化蛋白激酶应激信号通路与NASH的发病机制密切相关,在NASH中多种应激刺激都能激活肝脏内的JNK信号通路,诱导细胞凋亡。     

益气活血通络方对糖尿病周围神经病变小鼠JNK信号通路蛋白及炎性因子的影响

目的研究益气活血通络方对糖尿病周围神经病变模型小鼠(db/db小鼠)JNK信号通路蛋白及炎性因子的影响,探讨其对db/db小鼠周围神经的保护作用机制。方法 40只db/db小鼠随机分为5组:模型组、硫辛酸组和益气活血通络方高、中、低剂量(6.4、3.2、1.6 g/kg)组,另设8只db/m小鼠作为正常组。灌胃给药,1次/d,连续8周。末次给药后,测定小鼠足底热敏反应时间和运动神经传导速度(MNCV);酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法检测背根神经节中c-jun氨基末端激酶(JNK)和磷酸化的c-jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠MNCV减慢,足底热敏反应时间延长,血清中IL-1β、TNF-α水平升高,背根神经节中JNK、p-JNK蛋白的表达增强,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05)。与模型组比较,益气活血通络方能提高小鼠MNCV,缩短足底热敏反应时间,降低血清中IL-1β、TNF-α水平,一定程度下调背根神经节中JNK、p-JNK的蛋白表达(P0.01或P0.05)。结论益气活血通络方能抑制JNK信号转导通路的异常激活,减轻db/db小鼠炎症反应,从而保护周围神经的功能。     

柚皮素对缺氧损伤大鼠心肌细胞的保护作用

目的 探究柚皮素对缺氧损伤的大鼠心肌细胞是否有保护作用.方法 用大鼠心肌细胞系H9c2细胞制备心肌细胞缺氧损伤模型,并用乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒进行模型鉴定.实验分为5组:对照组,模型组,以及柚皮素低、中、高剂量组(20、40、80μmol/L).用CCK-8检测细胞增殖抑制率,间接免疫荧光法检测细胞肥大...     

丹枝饮对盆腔炎性疾病后遗症小鼠JNK信号传导通路及相关炎性因子的影响

目的建立盆腔炎性疾病后遗症(SPID)小鼠模型,通过观察丹枝饮对IL-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)表达影响,以c-Jun氨基末端激酶(JNK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)为观察指标,探讨丹枝饮药理作用及JNK信号传导通路的相关性。方法选用雌性小鼠24只,随机分为空白组、模型组、丹枝饮组及阿司匹林组。采用宫腔种植鼠衣原体方法建立SPID小鼠模型。给药治疗3个动情周期后小鼠眼眶取血,ELISA法检测IL-6及IL-8蛋白水平;Western Blot法检测子宫组织MCP-1、MIP-2、p-JNK、JNK相对蛋白量;免疫组化法检测子宫组织JNK磷酸化水平。结果与空白组比较,模型组IL-6、IL-8、MCP-1、MIP-2及JNK磷酸化水平升高(P0.01),差异有统计学意义;与模型组比较,丹枝饮组IL-6、IL-8、MCP-1、MIP-2及JNK磷酸化水平降低(P0.01),差异有统计学意义。结论丹枝饮的抗炎作用可能与调节SPID炎症机体血清中IL-6、IL-8含量相关,其抗炎作用机制可能是通过抑制JNK信号传导通路而下调MCP-1及MIP-2表达。     

ROS 介导的 JNK 信号通路及其对细胞自噬的调节

活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）是生物有氧代谢过程中产生的一类活性含氧化合物的总称,作为细胞内的一种信号分子,ROS 可通过多种途径激活 c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun NH2-terminal kinase,JNK）。调节细胞自噬是 ROS 介导的 JNK 信号通路的一个重要功能,其能够以 ROS 水平依赖的方式激活细胞自噬和凋亡。下面本文仅就近年来研究发现的ROS 介导 JNK 信号通路激活的主要途径,以及其对细胞自噬的作用作简要综述。     

JNK信号通路在细胞凋亡与自噬中作用的研究进展

JNK信号通路在多种疾病的发生与发展中起着至关重要的作用,导致JN K信号通路激活的因素复杂多样,具体机制尚不明确.JN K信号通路参与细胞凋亡与自噬这两种密切相关的应激反应,但其之间的分子相互作用有待探究.本文主要综述了JN K信号通路及其在细胞凋亡与自噬中的部分机制.     

柚皮素对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的改善作用及其作用机制

目的 探讨柚皮素(NAR)对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响及其可能作用机制.方法 将60只雄性ICR小鼠随机分成正常对照组(Control)、模型组(Model)、阳性对照地塞米松组(DXM,3 mg/kg)、NAR低剂量组(L-NAR,25 mg/kg)和NAR高剂量组(H-NAR,100 mg/kg),每组12只....     

槲皮素对口腔鳞癌细胞增殖凋亡等细胞生物学行为及p38/JNK MAPK信号通路的影响

目的:探讨槲皮素对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p38/JNK MAPK信号通路的影响。方法:以体外培养的口腔鳞癌Tac8113细胞为研究对象,分别设置空白对照组,槲皮素低剂量组(25μmoL/L)、高剂量组(50μmoL/L)及阳性对照组(顺铂4μg/mL)。CCK-8法检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞增殖的影响;流式细胞仪检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞凋亡的影响;Transwell实验检测槲皮素对口腔鳞癌Tac8113细胞迁移、侵袭的影响;WB法检测p38/JNK MAPK信号通路相关蛋白表达。结果:与空白对照组相比,槲皮素低、高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数及侵袭数均下降,凋亡率增加(P<0.05);与槲皮素低剂量组相比,槲皮素高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数及侵袭数均下降,凋亡率增加(P<0.05),呈现剂量依赖性;槲皮素高剂量组及阳性对照组Tac8113细胞增殖活力、迁移数、侵袭数及凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组相比,槲皮素低、高剂量组p-p38、p-JNK及Caspase...