3D打印支架联合IPSCs-NSCs对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及运动功能的变化

目的：3D打印载重编程IPSCs-NSCs移植对大鼠脊髓损伤(spinal cord injurys,SCI)的作用及其相关机制。方法：制备3D脊髓支架,将UC细胞来源iPS细胞分化为神经干细胞（NSCs）,选择成年雄性SD大鼠42只,按随机数字表法分为假手术组、模型组、IPSCs-NSCs组,每组各14只。采用改良 Allen’s 重物打击法制作SCI大鼠模型,1周后假手术组不做处理,模型组植入DMEM 培养液0.2ml,iPSCs-NSCs 组植入载iPSCs-NSCs的2~3mm支架预处理。于实验干预后1天、3天、7天、14天、28天采用 BBB 评分评估大鼠运动能力,28天后处死大鼠取伤段脊髓组织做病理切片,HE染色观察脊髓组织改变;免疫组化与Western-blot检测脊髓组织中Bax、Bcl-2、Caspase3的表达。结果：①BBB评分：术后 7、14、28天iPSCs-NSCs组与模型组下肢功能均有恢复（P<0.05）,且iPSCs-NSCs组较模型组恢复更明显［（3.76±0.65）分比（2.22±0.46）分, （7.02±0.68）分比（4.41±0.42）分,（11.72±0.81）分比（7.52±0.53）分,P<0.05］。②HE染色：假手术组脊神经生长良好;模型组脊神经受到损伤,组织水肿,细胞稀疏,细胞之间的间隙增大;IPSCs-NSCs组细胞生长较模型组紧密,各组织生长间隙缩小,空泡减小,组织水肿消失。③免疫组化检测：IPSCs-NSCs组Bcl-2阳性细胞的表达较模型组增加［（0.32±0.02）个比（0.14±0.01）个,P<0.05］;IPSCs-NSCs组Bax阳性细胞的表达较模型组少［（0.08±0.00）个比（0.23±0.02）个,P<0.05］;④RT-PCR检测：IPSCs-NSCs组Caspase-3的mRNA含量较模型组减少［（0.96±0.07）ng/L比（1.33±0.03）ng/L,P<0.05］;结论：3D打印支架联合IPSCs-NSCs移植治疗SCI可以显著促进Bcl-2的表达,降低Bax、Caspase3 的表达,改善SCI引起的运动功能下降,其机制可能与上调Bcl-2的表达及下调Bax、Caspase3表达,降低脊髓神经元细胞凋亡相关。     

尿液细胞来源iPSCs-NSCs联合3D打印支架移植修复大鼠急性脊髓损伤的研究

目的探讨尿液细胞（UC）来源重编程诱导性多能干细胞（iPSCs）分化的神经干细胞（NSCs）联合3D打印支架移植修复大鼠急性脊髓损伤（ASCI）的作用。方法将UC诱导分化为iPSCs,通过ALP活性检测、HE染色观察畸胎瘤形成及免疫荧光检测全能性蛋白OCT4、NANOG、TRA-1-81、TRA-1-60的表达验证iPSCs全能性。将iPSCs向NSCs分化,免疫荧光染色检测巢蛋白（Nestin）、神经胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和β-微管蛋白（β-tubulinⅢ）的表达。制备3D打印支架。选择成年雄性SD大鼠42只,按随机数字表法分为模型组、支架模型组、iPSCs-NSCs组,每组14只。采用改良Allens法建立大鼠ASCI模型,1周后模型组于损伤处滴入DMEM培养液0.2ml,支架模型组于损伤处植入载DMEM培养液的2~3mm支架,iPSCs-NSCs组于损伤处植入载iPSCs-NSCs的2~3mm支架。1、2、4、6、8周后采用开放领域运动测试（BBB）评分评价3组大鼠关节协调功能。8周后采用Tarlov和Rivlin评分评价3组大鼠后肢运动功能,生物信号采集处理系统观察大鼠运动、感觉诱发电位潜伏期和振幅;取伤段脊髓组织做病理检查,观察脊髓组织病理改变。结果成功提取UC并诱导分化为iPSCs,ALP染色呈阳性,HE染色显示畸胎瘤形成;免疫荧光染色显示全能性蛋白OCT4、NANOG、TRA-1-81、TRA-1-60表达。成功诱导iPSCs分化为NSCs,GFAP和β-tubulinⅢ表达良好表明细胞分化能力良好。成功打印3D支架,电镜显示内部呈三维立体疏松多孔结构。干预2、4、6、8周后,iPSCs-NSCs组大鼠BBB评分均高于模型组和支架模型组（均P＜0.05）;干预8周后,iPSCs-NSCs组大鼠Tarlov和Rivlin评分均高于模型组和支架模型组,运动和感觉诱发电位潜伏期均短于模型组和支架模型组,运动和感觉诱发电位振幅均大于模型组和支架模型组（均P＜0.05）。HE染色显示模型组大鼠脊髓组织受损,组织水肿明显,细胞稀疏;支架模型组大鼠脊髓组织受损程度轻于模型组,组织水肿,细胞稀疏;iPSCs-NSCs组大鼠脊髓组织生长良好,细胞致密,空泡减小,组织水肿消失。结论UC来源iPSCs-NSCs联合3D打印支架移植可促进ASCI大鼠运动和感觉功能的恢复及受损节段脊神经纤维生长。     

黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的：：观察黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法：雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、黄芪注射液溶剂组、黄芪注射液组,采用四血管阻断法建立脑缺血再灌注模型,分别采用免疫组化法和Western blot法检测海马Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果：与假手术组比,模型组Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达明显升高,Bcl-2/Bax明显降低(P＜0.05);与模型组比,黄芪注射液组Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax明显升高,Bax、Caspase-3蛋白表达明显降低(P＜0.05)。结论：黄芪注射液可通过升高Bcl-2的表达,降低Bax、Caspase-3的表达,抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡。     

针刺联合亚低温对脑缺血/再灌注损伤大鼠Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达的影响

目的 探讨针刺联合亚低温方法对脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤大鼠梗死面积比及Bcl-2、Bax、Caspase-3 蛋白表达的影响. 方法 将 50 只 SD 健康雄性大鼠常规饲养 1 周后, 随机选取假手术组 10 只, 余 40 只用Zea Longa 线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞局灶脑I/R模型,待造模成功后,再将40只SD大鼠随机分为模型组、针刺组、亚低温组、针刺联合亚低温组,每组各10 只. 治疗72 h 后,使用TTC 染色检测脑梗死面积比、免疫组化法检测 Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的阳性细胞数. 结果 与假手术组比较,模型组大鼠梗死面积比、Bax、Caspase-3蛋白表达水平明显增高,Bcl-2表达水平显著下降,差异有统计学意义(P<0.05 或P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠梗死面积比、Bax、Caspase-3 蛋白表达水平明显降低,Bcl-2表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);各治疗组之间Bcl-2、Bax、Caspase-3的差异无统计学意义(P>0.05),但脑梗死面积比针刺联合亚低温组较针刺组和亚低温组低,差异有统计学意义(P<0.05 或 P<0.01).结论 针刺联合亚低温治疗可通过减少脑梗死面积比、提高Bcl-2表达水平、降低Bax与Caspase-3蛋白表达从而实现对脑细胞的保护作用.     

神经干细胞移植对脊髓全横断大鼠运动行为和大脑运动皮质Caspase-3表达的影响

目的 探讨神经干细胞移植对脊髓全横断大鼠运动行为和大脑运动皮质Caspase-3表达的影响.方法 建立成年SD大鼠脊髓全横断(SCT,T9)模型.分假手术组、SCT组、NSC移植组,每组13只动物.其中每组8只动物于NSC移植后7d时用蛋白免疫印迹法检测MC内Caspase-3蛋白的表达变化(β-actin作内参照).另5只动物于NSC移植后16周时进行后肢运动功能(BBB)评分,处死动物用免疫组织化学技术检测Caspase-3在MC的细胞定位分布.结果 与假手术组比较[(21±0)分],大鼠SCT 16周时后肢运动功能BBB评分为[(5.16±1.19)分];而脊髓内NSC移植组BBB评分为[(7.58±0.99)分],组间比较有统计学意义(P＜0.05);Caspase-3蛋白在MC运动神经元表达,免疫阳性反应物分布于细胞浆.SCT导致MC区Caspsse-3蛋白表达(0.89+0.12)较假手术组(0.61+0.10)明显上调(P＜0.05),而NSC移植明显降低MC区Caspase-3表达水平(0.76+0.11)(P＜0.05).结论 NSC脊髓内移植能有效下调皮质运动区Caspase-3表达水平,并促进SCT大鼠后肢运动功能改善.     

参附注射液对脓毒症大鼠心肌组织Bcl-2、Bax表达的影响

目的研究参附注射对脓毒症大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,阐明参附注射液抗脓毒症心肌损伤的相关机制。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和参附组,每组8只。以盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)法建立脓毒症大鼠动物模型,观察各组大鼠心肌酶谱变化;凋亡原位末端标记法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数,RT-PCR法检测心肌细胞Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达。结果与假手术组比较,模型组、参附组心肌肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)均明显升高,差异有统计学意义[CK-MB:(4208.51±382.57)U/L、(3584.59±347.06)U/L比(2187.41±556.63)U/L,P0.05;CK:(3216.75±565.42)U/L、(1986.21±366.73)U/L比(1189.40±245.87)U/L,P0.05];与参附组比较,模型组心肌酶明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。三组均可见大鼠心肌细胞凋亡,与假手术组比较,模型组、参附组TUNEL平均光密度(MOD)升高,差异有统计学意义(0.24±0.11、0.18±0.09比0.09±0.05,P0.05);模型组升高最明显,与参附组比较差异有统计学意义(P0.05)。模型组、参附组大鼠心肌细胞Bcl-2 mRNA表达均较假手术组降低,差异有统计学意义[(3.83±0.07)×10~(-3)、(4.86±0.08)×10~(-3)比(5.75±0.09)×10~(-3),P0.05];参附组Bcl-2 mRNA表达高于模型组(P0.05)。模型组、参附组Bax mRNA表达均较假手术组升高[(7.12±0.08)×10~(-3)、(6.26±0.06)×10~(-3)比(4.61±0.05)×10~(-3),P0.05];参附组Bax mRNA表达低于模型组(P0.05)。结论参附注射液能减轻脓毒症大鼠的心肌损伤,其作用机制与上调Bcl-2 mRNA的表达,下调Bax mRNA表达,减少心肌细胞凋亡相关。     

补阳还五汤对急性脊髓损伤模型大鼠神经细胞凋亡的影响

目的观察补阳还五汤对大鼠急性脊髓损伤(ASCI)的治疗作用及其机制。方法 SD大鼠随机分为空白组、损伤对照组、补阳还五汤组,各10只。采用Allen’s打击法建立急性脊髓损伤模型,空白组和损伤对照组造模后予蒸馏水1m L灌胃,补阳还五汤组造模后予补阳还五汤1m L灌胃,均1天1次,连续3天。各组分别于术后1、7、14天观察其行为学BBB评分,14天通过免疫组化的方法观察脊髓损伤部位神经细胞凋亡(caspase-3p20、Bcl-2与Bax)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平。结果 1行为学观察评分:术后7、14天补阳还五汤组与损伤对照组下肢功能均有恢复(P0.05),且补阳还五汤组较损伤对照组恢复更明显[(9.05±0.95)分比(5.75±1.97)分,(12.6±1.55)分比(8.80±3.34)分,P0.05]。2免疫组化检测:补阳还五汤组caspsase-3p20阳性细胞数表达较损伤对照组少[(16.70±2.21)个比(20.30±4.13)个,P0.05];补阳还五汤组Bcl-2阳性细胞的表达较损伤对照组增加[(10.57±0.97)个比(6.42±3.20)个,P0.05];补阳还五汤组Bax阳性细胞的表达较损伤对照组少[(18.29±2.21)个比(21.14±2.41)个,P0.05];补阳还五汤组VEGF阳性细胞的表达较损伤对照组多[(11.75±1.03)个比(9.50±1.30)个,P0.05]。结论补阳还五汤可提高脊髓损伤部位VEGF的表达,使细胞凋亡明显减少,促进骨髓功能的恢复。     

肌苷对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能改善作用及机制研究

目的 研究肌苷对β-淀粉样蛋白1-40(beta-amyloid protein,Aβ_(1-40))所致的模拟阿尔茨海默病大鼠神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响.方法 成年健康雄性Wistar大鼠30只,用随机数字表法随机分为对照组、模型组和治疗组各10只,经左侧侧脑室微量注射Aβ_(1-40)建立阿尔茨海默病模型,腹腔注射肌苷(100mg·kg~(-1))干预治疗,采用Y型电迷宫检测大鼠学习和记忆功能,HE染色观察神经细胞的结构变化,原位TUNEL法检测神经细胞凋亡,免疫组织化学检法测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 模型组大鼠认知能力[(79.84±6.46)次,(4.83±3.14)次]较对照组[(59.13±7.52)次,(7.94±2.21)次]明显下降(t=5.67,2.25,P＜0.05),神经细胞结构异常,TUNEL阳性细胞数明显增多、Bcl-2和Bax蛋白表达增加(P＜0.05).肌苷组大鼠认知能力[(68.54±8.86)次,(7.11±1.13)次]和细胞结构较模型组[(81.22±3.92)次,(4.61±1.61)次]显著改善(t=3.46,4.64,P＜0.05),相对于模型组(20.24±1.32,41.82±3.71,35.51±2.30),肌苷组Bcl-2蛋白表达(33.52±5.68)明显增强、Bax蛋白表达(25.11±2.45)明显减弱、细胞凋亡数量(23.40±7.07)明显减少(t=6.04,9.94,4.30,P＜0.05).结论 肌苷能促进Bcl-2表达、抑制Bax表达,降低凋亡率,从而改善阿尔茨海默病大鼠大学习和记忆能力.     

夹脊穴电针治疗对急性脊髓损伤大鼠microRNA-21及其介导的神经元凋亡的影响

目的:观察夹脊穴电针治疗对急性脊髓损伤大鼠miR-21的表达及其介导的神经元凋亡的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组和甲强龙组,通过改良版Allen's打击法复制急性脊髓损伤大鼠模型。各组于造模后2 h给予相应的干预治疗,其中电针组予胸8～胸12夹脊穴电针治疗,甲强龙组给予甲泼尼龙琥珀酸钠30 mg/kg腹腔注射,假手术组和模型组不予处置。分别观察各组大鼠治疗后肢体运动功能评分,并取损伤节段脊髓组织,通过Nissl染色观察脊髓神经病理形态的改变,RT-qPCR法检测组织中miR-21的表达水平,Western-Blot法检测组织中凋亡蛋白(Bax、Bcl-2和cleaved-Caspase-3)的表达丰度。结果:与除假手术组相比,模型组术后BBB、神经元存活率和组织中miR-21的表达水平明显低,神经元凋亡率明显增高,组织中Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白的表达及Bax/Bcl-2的比值均明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05);夹脊穴电针治疗能够明显升高ASCI大鼠术后BBB评分、神经元存活率和组织中miR-21的表达,降低神经元凋亡率和Bax/Bcl-2的比值,抑制组织中Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3蛋白的表达,与模型组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:夹脊穴电针治疗可明显促进SCI后小鼠神经功能的恢复,其作用机制可能与其上调组织中miR-21的表达进而抑制Bax/Bcl-2/cleaved Caspase-3信号通路的活化密切相关。     

精索静脉高位结扎术对精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的影响

目的:通过建立实验性精索静脉曲张大鼠动物模型,探讨精索静脉高位结扎术对同侧睾丸生精细胞凋亡机制的影响。方法:雄性大鼠60只,随机分为对照组、假手术组、EV组(模型组)、Varicocelectomy组(治疗组),每组15只。术后取左侧睾丸,采用HE染色观察睾丸组织学变化,TUNEL法检测生精细胞凋亡指数,免疫组化和RT-PCR法分别检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的表达。结果:模型组大鼠左侧睾丸组织可见生精上皮排列紊乱,生精细胞广泛脱落,细胞凋亡指数明显高于对照组、假手术组(P<0.05),治疗后凋亡指数明显减少,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05);治疗组中Bax、Caspase-3表达减少,Bcl-2表达增加,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:精索静脉高位结扎术可抑制睾丸生精细胞凋亡,且Bcl-2、Bax和Caspase-3通过线粒体信号转导通路参与并调控生精细胞凋亡过程,从而在精索静脉曲张疾病中发挥保护作用。     

缺氧诱导神经干细胞凋亡作用机制研究

目的:探讨缺氧处理对神经干细胞(NSCs)凋亡的影响及其作用机制。方法:采用无血清培养法培养新生大鼠NSCs,采用流式细胞术检测NSCs的凋亡率和线粒体跨膜电位,采用免疫印记法检测凋亡执行蛋白Caspase-3和线粒体通路相关蛋白Bcl-2,Bax的表达。结果:缺氧组的早期凋亡率高于正常组,线粒体跨膜电位降低,差异有统计学意义(P<0.05);缺氧条件下Caspase-3、Bax表达升高,Bcl-2表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧可诱发NSCs凋亡,其作用机制可能是通过上调线粒体通路中促凋亡蛋白Bax的表达,下调Bcl-2的表达,最终激活凋亡蛋白Caspase-3,为缺血缺氧性脑损伤病理机制的阐明奠定基础。     

PPARγ激动剂罗格列酮在大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用及机制探讨

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制.方法:建立70%的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,SD大鼠随机分为6组,对照组(control,C),假手术组(sham,S),缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion,IR)组,罗格列酮(rosiglitazone,Ros)预处理组,GW9662预处理组,以及Ros GW9662预处理组.再灌注后,取静脉血检测肝血清酶(ALT、AST)水平,取肝脏组织TUNEL法检测缺血肝脏细胞凋亡指数(apoptotic index,AI),免疫组化检测Bcl-2,Bax,Caspase-3表达.结果:IR组和Ros组与假手术组相比肝脏细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2及Caspase-3均升高.Ros处理组与IR组相比肝脏细胞凋亡指数、Bax及Caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高,GW9662能阻断Ros的保护作用.单独应用GW9662时肝脏细胞凋亡指数、Caspase-3以及Bax表达比IR组升高,而Bcl-2降低.结论:PPARγ激动剂罗格列酮对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,它可能是通过上调Bcl-2表达,下调Bax和Caspase-3表达,抑制肝脏细胞凋亡而起作用的.     

抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的影响

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响。方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组。用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达。结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达的差异有统计学意义(P<0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P<0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3 mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关。     

海马神经元凋亡通路在氯胺酮抗抑郁中的变化

目的全身麻醉药氯胺酮具有快速有效抗抑郁作用,但其具体机制尚不完全清楚。文中观察大鼠海马神经元凋亡通路在氯胺酮抗抑郁中的变化。方法健康成年雄性SD大鼠48只,随机数字表法分为3组(n=16):对照组、不可预知应激组及氯胺酮组。对照组不予处理,不可预知应激组及氯胺酮组采用慢性不可预知应激建立抑郁模型。对照组、不可预知应激组经腹腔分别注射等渗盐水1 m L,氯胺酮组注射氯胺酮(10 mg/kg)。给药后1 h,每组随机取8只大鼠行强迫游泳实验和糖水消耗实验观察其行为学变化;其余8只采用Western blot法检测海马Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达水平。结果氯胺酮组强迫游泳时间[(115.83±9.17)s]较不可预知应激组[(165.33±4.59)s]明显缩短(P<0.01),与对照组[(110.50±12.28)s]差异无统计学意义(P>0.05);不可预知应激组较对照组强迫游泳时间明显延长(P<0.01)。氯胺酮组糖水消耗比例[(80±6)%]较不可预知应激组[(58±5)%]明显增加(P<0.01),与对照组[(86±10)%]差异无统计学意义(P>0.05);不可预知应激组较对照组糖水消耗比例明显减少(P<0.05)。氯胺酮组Bcl-2表达水平[(157±21)%]较不可预知应激组[(73±3)%]明显上升(P<0.05),Bax表达水平[(114±6)%]、Caspase-3表达水平[(78±13)%]较不可预知应激组[(175±4)%、(165±6)%)]明显降低(P<0.01);不可预知应激组Bcl-2表达水平较对照组明显减少(P<0.05),Bax、Caspase-3表达水平明显增加(P<0.05)。结论氯胺酮可能通过抑制大鼠海马神经元凋亡通路参与其抗抑郁作用。     

蛙血清小分子肽对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响

目的 探讨蛙血清小分子肽对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及凋亡相关蛋白的作用,分析其可能的作用机制.方法 将雄性SD大鼠100只,按随机数字表法分为假手术组、模型组和蛙血清小分子肽高(90 mg/kg)、中(30 mg/kg)、低(10 mg/kg)剂量组,每组20只.采用改良线栓法栓塞大鼠大脑中动脉建立大鼠缺血再灌注损伤模型,缺血2 h再灌注24 h,进行神经行为评分,后处死;采用TUNEL法检测细胞凋亡;采用免疫组化法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl相关x蛋白(Bax)、细胞色素c(Cytc)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)的表达情况.结果 在神经行为评分上,假手术组为(0.00±0.00)分,模型组为(2.38±0.78)分,小分子肽高剂量组为(1.47±0.41)分,中剂量组为(1.68±0.52)分,低剂量组为(2.01±0.66)分,小分子肽高、中剂量组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);在凋亡细胞计数上,假手术组为(3.37±1.10)个,模型组为(42.80±3.54)个,小分子肽高剂量组为(28.00±2.28)个,中剂量组为(32.40±3.26)个,低剂量组为(41.40±1.20)个,小分子肽高、中剂量组与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05);在凋亡相关蛋白Bax、Cytc、Caspase-3和Bcl-2表达上(个/高倍视野),假手术组分别为(3.01±1.12)、(2.58±1.74)、(2.34±1.37)、(65.42±3.65),模型组分别为(70.67±3.06)、(58.31±5.04)、(68.04±5.85)、(31.26±2.81),小分子肽高剂量组分别为(40.56±4.52)、(33.65±3.44)、(41.56±4.52)、(55.64±5.49),中剂量组分别为(47.29±5.04)、(38.09±4.24)、(47.29±5.04)、(48.33±4.26),低剂量组分别为(53.20±4.70)、(44.53±4.39)、(53.20±4.70)、(40.35±3.17),小分子肽高、中、低剂量组均能抑制Bax、Cytc、Caspase-3蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),以高剂量组效果最优,且存在量效依赖关系.结论 蛙血清小分子肽是通过增强Bcl-2蛋白表达和抑制Bax、Cytc、Caspase-3蛋白表达来减少神经元细胞凋亡数目,改善神经功能症状,保护脑缺血再灌注损伤.     

3D打印支架载重编程iPSCs定向分化NSCs移植在修复急性脊髓损伤中的应用研究

目的 探讨3D打印支架载重编程iPSCs定向分化神经干细胞(NSCs)移植在修复急性脊髓损伤中的应用。方法 将40只健康成年雌性大鼠随机分为A组(对照)、B组(支架)、C组(支架+NSCs)、D组(支架+iPSCs-NSCs),每组各10只。原代NSCs分离、培养、传代及鉴定;构建并鉴定重编程iPSCs;携带i PSCs基因的逆转录病毒感染NSCs;培养支架+NSCs、支架+iPSCs-NSCs。结果 支架与NSCs和i PSCs-NSCs相容性较好;D组2、4、6、8周后BBB评分显著高于另外三组,4、6、8周后B、C组BBB评分显著高于A组,C组BBB评分高于B组(P0.05);8周后A组Tarlov和Rivlin评分显著低于另外三组,B组低于C组,C组低于D组(P0.05);8周后A组运动和感觉潜伏期显著常于另外三组,B组长于C组,C组长于D组(P0.05);A组运动和感觉振幅显著低于另外三组,B组低于C组,C组低于D组(P0.05);A组纤维断裂,另外三组病变周围脊髓纤维连续中断,C、D组损伤部位纤维数量显著多于B组,D组多于C组(P0.05);8周后D组存活细胞数量、分化率显著高于C组(P0.05)。结论 3D打印支架载重编程iPSCs定向分化NSCs可有效修复ASCI。     

桃红四物汤促进自噬抑制氧糖剥夺诱导心肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨桃红四物汤(TST)对氧糖剥夺(OGD)诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用。方法将H9C2心肌细胞分为对照组、OGD模型组、OGD+TST含药血清组、OGD+TST含药血清+雷帕霉素组、OGD+TST含药血清+氯喹组。采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法(Western blot)检测微管相关蛋白轻链3Ⅱ/3Ⅰ(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)比值及核孔糖蛋白62(p62),B-细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)和B-细胞淋巴瘤因子2相关X蛋白(Bax)表达量。结果与对照组比较,OGD模型组细胞活力显著下降[(42.23±3.19)%比(100.00±1.54)%,P0.05],细胞凋亡比例显著增多[(32.14±2.88)%比(3.54±0.23)%,P0.05],p62和Bax蛋白表达增多,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Bcl-2蛋白表达减少;与OGD模型组比较,OGD+TST含药血清组细胞活力显著升高[(80.04±5.19)%比(42.23±3.19)%,P0.05],细胞凋亡明显减少[(10.01±1.04)%比(32.14±2.88)%,P0.05],LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Bcl-2表达增多,p62和Bax蛋白表达减少。与OGD+TST含药血清组比较,OGD+TST含药血清+雷帕霉素组细胞活力显著升高[(89.01±5.35)%比(80.04±5.19)%,P0.05],细胞凋亡比例显著减少[(7.45±0.13)%比(10.01±1.04)%,P0.05],LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Bcl-2表达增多,p62和Bax蛋白表达减少;OGD+TST含药血清+氯喹组细胞活力下降[(53.13±4.13)%比(80.04±5.19)%,P0.05],凋亡细胞比例升高[(17.42±1.93)%比(10.01±1.04)%,P0.05],LC3-Ⅱ/Ⅰ比值、Bcl-2表达减少,p62和Bax蛋白表达增多。结论桃红四物汤可能促进氧糖剥夺H9C2心肌细胞自噬,抑制心肌细胞凋亡,对心肌缺血起保护作用。     

Effect of Depression on Cardiac Myocyte Apoptosis and the Expression of Bcl-2, Bax and Caspase-3 in Rats with Myocardial Infarction

目的:探讨抑郁对心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Caspase-3的影响.方法:大鼠随机分为四组,各组8只,A组为假手术组,B组为抑郁大鼠假手术组,C组为心肌梗死组,D组为抑郁大鼠心肌梗死组.用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,用免疫组织化学法和逆转录-聚合酶链反应方法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3的基因表达.结果:各组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达的差异有统计学意义(P＜0.01),C、D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达均高于A组和B组,差异有统计学意义(P＜0.01),D组大鼠心肌细胞凋亡指数以及心肌细胞Bax、Caspase-3蛋白表达和心肌细胞Bax、Caspase-3mRNA表达高于C组,而心肌细胞Bcl-2蛋白及mRNA表达低于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:抑郁可以加重心肌梗死大鼠缺血心肌细胞凋亡,其机制可能与上调促凋亡基因Bax及Caspase3表达、下调抗凋亡基因Bcl-2的表达有关.     

参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的:观察参麦注射液对脓毒症模型大鼠肾脏细胞凋亡及其Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:45只SD大鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组和参麦组,每组15只。采用盲肠结扎穿刺法(CLP)造模。脓毒症模型组术前1h腹腔内注射生理盐水10mL/kg,假手术组除不结扎和穿刺盲肠外,其余操作同脓毒症模型组。参麦组术前1h腹腔内注射参麦注射液10mL/kg。术后24h取大鼠肾脏组织,采用TUNEL法检测并计算肾脏细胞凋亡指数(AI),免疫组化检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:三组大鼠体质量差异无统计学意义(P>0.05),三组大鼠均可见肾脏细胞凋亡,细胞凋亡多发生于肾小球细胞。脓毒症组和参麦组肾脏细胞AI均高于假手术组(P<0.01),参麦组肾脏细胞AI虽低于脓毒症组,但差异无统计学意义(P>0.05);与假手术组比较,脓毒症组和参麦组肾脏细胞Bcl-2表达下降(P<0.01,P<0.05),Bax表达上调(P<0.01),Bcl-2/Bax比值减小(P<0.01)。与脓毒症组比较,参麦组Bcl-2明显上调(P<0.01),Bax表达下调(P<0.05),Bcl-2/Bax比值增大(P<0.01)。结论:参麦注射液能上调脓毒症模型大鼠肾脏细胞Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少脓毒症大鼠肾脏细胞凋亡。     

白藜芦醇通过线粒体途径减轻大鼠重症急性胰腺炎肺损伤

目的:探讨白藜芦醇(BES)对实验性重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤的保护作用及其机制.方法:32只成年雄性SD大鼠随机分为假手术(SO)组;SAP组;地塞米松(DEX)组和RES治疗组.各组大鼠在制模后12 h采集标本.动脉血气分析检测动脉血氧分压(PaO2);酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清TNF-α和IL-6含量;透射电镜(TEM)观察肺脏超微结构变化;RT-PCR检测凋亡调控基因Bax,Bcl-2和Cozpoze-3 mRNA表达;Western Blot检测凋亡调控蛋白Bax,Bcl-2,Caspase-3和线粒体内细胞色素c(Cyt c)表达.结果:SO组,SAP组,RES组和DEX组PaO2水平分别为:(108.30±8.24),(76.34±5.18),(97.43±6.02),(92.50±5.97)mm-Hg,RES组和DEX组PaO2水平明显高于SAP组(P<0.05).TNF-α含量分别为:(12.54±0.75),(95.59±5.61),(61.66±3.33),(50.90±4.62)ng/L,RES组与SAP组相比较,差异有统计学意义(P<0.05).IL-6含量分别为:(9.29±1.75),(55.68±7.24),(32.29±3.98),(42.51±3.3)ng/L,RES组与SAP组相比较,IL-6含量明显降低(P<0.05).HE和TEM镜下观察结果显示,SAP组肺组织明显充血肿胀,并可见大量炎细胞浸润和细胞凋亡,线粒体肿胀明显;RES组肺组织病理损害程度较SAP组减轻;PCR结果显示,SAP组凋亡调控基因Bax,Caspase-3 mRNA表达较SO组明显升高,Bcl-2mRNA表达降低,RES组Bcl-2 mRNA表达较SAP组升高(P<0.05),Bax,Caspase-3 mRNA表达较SO组明显降低,WesternBlot检测结果与PCR结果一致.结论:RES可以通过线粒体途径抑制SAP大鼠肺组织细胞凋亡,从而起到改善肺脏损伤的作用.