平喘方对哮喘小鼠NF-κB信号通路的调控及对TLR4 mRNA和蛋白表达的影响

目的研究平喘方通过调节核因子-K B(NF-K B)信号通路对哮喘小鼠的作用及其对Toll样受体4(TLR4)mRNA和蛋白表达的影响。方法将60只SPF级雄性Balb/c小鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组,每组15只。除空白组外,其余组均采用先卵清蛋白(OVA)+氢氧化铝凝胶[AI(OH)3]腹腔注射致敏,采用OVA雾化激发的方法来建立哮喘模型。地塞米松组、平喘方组分别予0.075 mg/mL地塞米松溶液、5.33 g/mL平喘方灌胃治疗1周,空白组、模型组给予等量生理盐水灌胃。末次给药24 h后,采用HE、Masson染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,Western Blot观察肺组织中NF-κB亚单位(p65)、NF-κB的抑制蛋白(IκBα)、TLR4、髓样分化因子(MyD88)蛋白表达,RT-PCR法观察p65、IκBα、TLR4、MyD88 mRNA水平。结果HE及Masson染色可见模型组小鼠肺组织明显炎症细胞浸润,上皮基底膜增厚,胶原纤维增多,平喘方组小鼠肺部炎性细胞浸润明显减轻,胶原纤维面积减小;与空白组比较,模型组小鼠BALF中IL-6、TNF-α浓度,肺组织中p65、MyD88蛋白表达及mRNA水平,气管中TLR4mRNA及蛋白表达水平均升高(均P<0.01),IκBα蛋白表达及mRNA水平降低(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组和平喘方组BALF中IL-6、TNF-α浓度均降低,MyD88、p65、TLR4蛋白表达及mRNA水平下调(P<0.01,P<0.05),地塞米松组IκBα蛋白表达及mRNA水平升高(均P<0.01),平喘方组IκBαmRNA水平升高(P<0.01),IκBα蛋白表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。与地塞米松组比较,平喘方组BALF中IL-6、TNF-α因子水平、p65 mRNA水平、TLR4 mRNA水平、MyD88蛋白表达及mRNA水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),p65及TLR4蛋白表达升高(P<0.05)。结论平喘方对OVA诱导哮喘小鼠的气道炎症有较好的改善作用,其机制可能与降低TLR4及MyD88活性,调控NF-κB信号通路有关。     

隐丹参酮通过抑制p38 MAPK/NF-κB通路改善哮喘气道炎症

目的探究隐丹参酮(CTS)对哮喘小鼠气道炎症的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将50只雌性BALB/c小鼠随机分为5组:生理盐水对照组(Control)、OVA哮喘组(OVA)、CTS低剂量组(CTS 50)、CTS高剂量组(CTS 100)、地塞米松阳性对照组(DEX),每组10只。建立卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)诱导的哮喘小鼠模型,分别用50 mg·kg^-1、100 mg·kg^-1 CTS及10 mg·kg^-1地塞米松腹腔注射处理各组小鼠,对照组用等量生理盐水代替。末次激发24 h后处死小鼠,取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺脏。以Diff-Quick染色对小鼠BALF中炎症细胞进行分类计数;ELISA法检测小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量;小鼠肺石蜡包埋,切片,行HE和PAS染色,观察小鼠肺组织的病理学改变;Western Blot观察核因子(NF)-κB p65表达水平,以及IkB-α、p38 MAPK磷酸化水平。结果 CTS显著减少哮喘小鼠BALF中炎症细胞数量,并降低小鼠BALF中IL-4、IL-5、IL-13含量(P<0.05);CTS显著抑制肺组织中炎症细胞浸润、杯状细胞增生及黏液分泌;CTS抑制NF-κB p65活化并抑制IkB-α、p38 MAPK磷酸化(P<0.05)。结论 CTS可抑制哮喘小鼠气道炎症,其机制可能与抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路有关。     

苜蓿素对哮喘小鼠肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88/NF-κB通路的抑制作用

目的观察苜蓿素对低剂量脂多糖(LPS)诱导的哮喘小鼠气道炎症的抑制作用。方法采用低剂量LPS+卵白蛋白(OVA)建立BALB/c小鼠哮喘气道炎症反应模型,随机分为哮喘模型组、苜蓿素组、地塞米松(阳性药)组,另设空白对照组。ELISA法对小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症介质NO、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平进行检测;HE染色观察小鼠肺组织病理情况;RT-PCR法和Western blot法对小鼠肺泡巨噬细胞的Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子κB p65(NF-κB p65)mRNA及蛋白表达进行检测。结果苜蓿素可显著降低哮喘小鼠BALF液中NO、TNF-α、IL-1β水平,有效改善哮喘小鼠肺部炎症,显著下调肺泡巨噬细胞的TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA和蛋白相对表达量。结论苜蓿素对哮喘小鼠气道炎症有抑制作用,其机制可能与干预TLR4/My D88/NF-κB通路有关。     

固本防哮饮对小鼠哮喘缓解期TLR4及TLR7的调节作用

目的:观察固本防哮饮对哮喘缓解期小鼠模型Toll-样受体(TLR) 4,TLR7,核转录因子-κB p65(NF-κB p65),NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的调节作用,探讨固本防哮饮治疗哮喘缓解期的机制。方法:呼吸道合胞病毒(RSV)联合鸡卵蛋白(OVA)对3周龄BALB/c小鼠制备哮喘缓解期模型,将60只小鼠分为空白组、模型组、地塞米松组(0. 001 g·kg~(-1))以及固本防哮饮低、中、高剂量(6. 5,13,26 g·kg~(-1))组,分别进行干预,共给药28 d,每天1次。给药结束后处死小鼠,苏木素-伊红(HE)染色观察哮喘小鼠肺组织病理形态学变化,并对肺部炎症情况进行评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织TLR4,TLR7,IκBα及肺组织细胞核内NF-κB p65蛋白表达水平;免疫荧光共聚焦观察NF-κB p65在细胞核表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠肺组织有明显炎症细胞浸润及支气管狭窄(P 0. 01),同时小鼠肺组织细胞核内NF-κB p65分布显著增多(P 0. 01),表达明显增高(P 0. 05),TLR4,TLR7,IκBα蛋白表达明显降低(P 0. 05);与模型组比较,固本防哮饮各剂量组能显著缓解小鼠肺组织炎症浸润(P 0. 01),降低肺组织核蛋白NF-κB p65的表达(P 0. 01),核蛋白NF-κB p65入核情况减轻(P 0. 01),同时显著增加TLR4,TLR7,IκBα蛋白的表达(P 0. 01)。结论:固本防哮饮能够缓解气道炎症,并且可能是通过调节TLR4,TLR7,NF-κB p65,IκBα实现其治疗作用。     

补肾解毒通络方对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠TLR4/IκBα/NF-κB信号通路相关因子的影响

目的观察补肾解毒通络方对Ⅱ型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠TLR4/IκBα/NF-κB信号通路相关因子的影响,探讨其抗炎作用机制。方法 32只SPF级雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、甲氨喋呤组和补肾解毒通络方组,每组8只。除正常组外,其余各组均采用牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂注射制备CIA大鼠模型。模型制备成功后,各给药组分别给予相应药物干预,连续21 d。每隔7 d测量大鼠体质量、关节炎指数和左后足趾厚度,HE染色观察膝关节滑膜组织病理变化,ELISA检测血清白细胞介素(IL)-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,Western blot检测滑膜组织Toll样受体4(TLR4)、核因子(NF)-κB p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)表达,RT-PCR检测滑膜组织TLR4、NF-κBp65、IκBαm RNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠体质量减轻,四肢关节明显肿胀,关节炎指数明显升高(P0.01),滑膜组织增生显著,大量炎性细胞浸润;血清IL-6、IL-8和TNF-α含量明显增加,IL-10含量明显减少(P0.01);膝关节滑膜组织TLR4、NF-κBp65蛋白和m RNA表达明显升高,IκBα蛋白和m RNA表达明显降低(P0.01)。与模型组比较,补肾解毒通络方组大鼠体质量明显增加,关节肿胀减轻,关节炎指数降低,滑膜增生改善,炎性细胞浸润减少;血清IL-6、IL-8和TNF-α含量明显减少,IL-10含量明显增加(P0.01);膝关节滑膜组织TLR4、NF-κBp65蛋白和m RNA表达明显降低,IκBα蛋白及m RNA表达明显升高(P0.01,P0.05)。结论补肾解毒通络方可显著减轻CIA大鼠炎症反应,改善滑膜组织损伤,其机制可能与抑制TLR4/IκBα/NF-κB信号通路激活有关。     

芪仙汤对苯并芘加剧哮喘小鼠气道炎症及黏液高分泌的影响及机制研究

目的 观察芪仙汤(黄芪、仙灵脾、巴戟天等)对暴露于大气污染物苯并芘(BaP)的哮喘小鼠气道炎症及黏液分泌的影响,并探讨其分子机制。方法 将雌性BALB/c小鼠随机分为空白组、哮喘组[卵白蛋白(OVA)致敏]、BaP组(OVA+BaP)和芪仙汤组(OVA+BaP+芪仙汤37.5 g·kg^-1),每组10只。采用OVA致敏法复制小鼠哮喘模型,并以BaP滴鼻法模拟大气污染暴露。采用HE、AB-PAS染色法分别检测小鼠肺组织炎症及黏液分泌水平;qRT-PCR法检测肺组织白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素13(IL-13)mRNA表达;免疫组化法检测肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)及磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达;DCFH-DA探针法检测肺组织活性氧(ROS)水平。结果 与空白组比较,哮喘组小鼠的气道、血管周围炎症细胞明显增多,气道黏膜出现中断、不连续,炎症评分显著升高(P<0.01);小鼠肺组织IL-4、IL-13 mRNA表达明显上调(P<0.05);小鼠的气道黏液分泌显著增多(P<0.01);小鼠气道MUC5AC、p-ERK蛋白表达显著...     

平喘方对哮喘模型小鼠气道平滑肌内TLR4mRNA和蛋白及相关炎症因子水平的影响

目的:通过研究平喘方对哮喘模型小鼠支气管平滑肌Toll样受体4(Toll-likereceptors,TLRs) mRNA及蛋白和肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BA LF)中白介素6(Interleukin 6,IL-6)、白介素10(Interleukin 10,IL-10)、白介素17(Interleukin 17,IL-17)因子水平的影响,进一步探索平喘方治疗哮喘和干预气道炎症的作用机制。方法:对40只BALB/c雄性小鼠用卵蛋白(ovalbumin,OVA)和氢氧化铝腹腔注射致敏并雾化吸入激发,建立小鼠支气管哮喘模型。40只小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组、平喘方组4组,每组10只。给药期间记录并观察各组小鼠基本情况,给药28天后取材,运用逆转录PCR法(Realtime-PCR)及蛋白质印迹法法(Western Blot)检测哮喘模型小鼠支气管平滑肌TLR4的mRNA和蛋白水平表达,酶联免疫吸附法(Elisa)检测BALF中IL-6、IL-17、IL-10的因子水平。结果:治疗28d后,哮喘模型组TLR4mRNA水平高于明显高于其他各组(P 0. 01);空白组水平与平喘方组mRNA水平无差异(P 0. 05)。哮喘模型组TLR4蛋白WB灰度值高于平喘方组(P 0. 05);平喘方组TLR4蛋白WB水平高于地塞米松组(P 0. 05)。哮喘模型组IL-6、IL-17因子水平明显高于其他组(P 0. 01);平喘方组IL-6、IL-17因子水平明显高于地塞米松组(P 0. 01)。哮喘模型组IL-10因子水平明显低于其他组(P 0. 01);空白组IL-10水平明显高于其他组(P 0. 01);平喘方组IL-10与地塞米松组因子水平无差异(P 0. 05)。结论:平喘方可以减少气道平滑肌内TLR4mRNA的表达,以降低TLR4蛋白水平,进而影响肺内炎症因子IL-6、IL-17、IL-10的分泌,缓解哮喘模型小鼠的气道炎症。     

肝脾同治方对支气管哮喘BALB/c小鼠CD4~+ T 细胞亚群影响的实验研究

目的从CD4 ~+ T细胞亚群角度探讨肝脾同治方对支气管哮喘慢性气道炎症小鼠的作用机制。方法 60只SPF级雌性BALB/c小鼠,随机分为6组:空白(NC)组、模型(MC)组、肝脾同治方低剂量组(GPTZF, 3.95g·kg~(-1))、肝脾同治方中剂量组(GPTZF, 7.90g·kg~(-1))、肝脾同治方高剂量组(GPTZF, 15.80g·kg~(-1))、地塞米松组(1.56×10~(-3)g·kg~(-1)),OVA建立小鼠支气管哮喘气道炎症模型,建模后取肺组织行石蜡切片,常规染色,观察各组小鼠肺组织病理变化。采用ELISA法取小鼠血清及支气管肺泡灌洗液行白介素-4(IL-4)和干扰素(IFN-γ)检测。采用Real-time PCR技术检测脾脏Foxp3的表达情况。结果 HE染色MC组小鼠肺组织肺泡壁变薄,形态结构异常,排列紊乱,支气管及其伴行气管周围有大量炎症细胞浸润,各药物干预组肺组织病理形态均有不同程度改善。与NC组相比,小鼠哮喘模型组IL-4值显著升高,IFN-γ值显著降低,其间差异均具有统计学意义;与MC组相比,低、中、高剂量组和地塞米松组IL-4水平显著降低,IFN-γ水平显著升高,差异具有统计学意义(P0.05)。Real-time PCR检测Foxp3基因含量结果表明:与NC组相比,模型组Foxp3表达量显著降低(P0.05);与MC组相比,各药物治疗组Foxp3表达量显著升高(P0.05),与MC组相比,肝脾同治方高剂量组和地塞米松组Foxp3表达量显著升高(P0.05)。结论肝脾同治方可能通过升高IFN-γ水平、降低IgE、IL-4水平,升高组织Foxp3mRNA水平而起到良性调节CD4~+ T细胞亚群的效应,起到调节哮喘小鼠慢性气道炎症的作用,为从分子生物学角度研究肝脾同治方干预哮喘小鼠机制提供参考。     

细芥化痰平喘凝胶贴膏对哮喘小鼠气道炎症的影响

[目的]观察细芥化痰平喘凝胶贴膏对哮喘小鼠气道炎症的影响,探讨其治疗支气管哮喘的作用机制。[方法]选取60只健康雄性BALB/c小鼠,随机分为正常组、哮喘模型组、细芥化痰平喘凝胶贴膏低剂量组、中剂量组、高剂量组、细芥敷贴丸组,每组10只。除正常组外,其余各组采用卵清蛋白（OVA）致敏和激发建立小鼠哮喘模型,取小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）进行炎性细胞的总数及炎细胞分类计数检测,苏木素-伊红（HE）染色、丽春红酸性品红-苯胺蓝（Masson）染色观察肺组织病理学变化。采用酶联免疫吸附法（ELLSA）检测小鼠BALF中γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)的含量。[结果] 1)OVA成功致敏和激发,建立小鼠哮喘模型。2）与正常组相比,BALF中炎症细胞总数及以嗜酸性粒细胞（EOS）为主的各分类炎症细胞均显著增加（P<0.01）,细芥化痰平喘凝胶贴膏低中高3个剂量组、细芥敷贴丸组均能不同程度地抑制炎性细胞总数及炎症细胞的增加（P<0.01）,细芥敷贴丸组、细芥化痰平喘凝胶贴膏中剂量组两组对白细胞及EOS等炎...     

宣肺平喘方对哮喘小鼠气道炎症及Th17/Treg平衡的影响

目的:探讨宣肺平喘方对卵清蛋白(OVA)致敏哮喘小鼠模型气道炎症及Th17/Treg平衡的影响。方法:55只6~8周雌性Balb/C小鼠随机分为正常组、模型组、泼尼松组(7.5 mg·kg-1·d-1)、宣肺平喘方低、高剂量组(16.72,66.88 g·kg-1·d-1),每组11只。除正常组用生理盐水注射及气道雾化外,其余各组小鼠均采用OVA致敏及激发的方法建立哮喘模型,各干预组于哮喘激发后给予相应的药物灌胃,正常组、模型组用生理盐水,连续15 d,末次给药后处死小鼠,取肺组织进行病理切片及苏木素-伊红(HE)染色,酶联免疫吸附法(ELISA)法检测小鼠血清白细胞介素(IL-4),转化生长因子-β(TGF-β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,流式细胞术检测血液中Th17细胞和Treg细胞的比例。结果:与模型组比较,各治疗组的肺组织损伤均有减轻,IL-4,TNF-α水平均低于模型组(P0.05),TGF-β水平均高于模型组(P0.05),血液中Th17细胞水平低于模型组,Treg细胞水平高于模型组。宣肺平喘方低、高剂量组在降低IL-4,TNF-α水平,升高TGF-β水平方面与泼尼松组比较无统计学差异,在降低血液Th17细胞比例,升高血液Treg细胞比例方面优于泼尼松组。结论:宣肺平喘方对哮喘小鼠的肺组织黏膜损伤具有一定的保护作用,其机制可能与下调Th17细胞水平,上调Treg细胞水平,恢复Th17/Treg细胞平衡,从而使得血清中炎症因子IL-4,TNF-α的含量降低,抑炎因子TGF-β的含量增加有关。     

温阳散瘀平喘方对哮喘模型小鼠p65、STAT6蛋白及相关炎症因子的影响

目的探讨温阳散瘀平喘方对哮喘模型小鼠核因子κ-B(NF-κB)p65、信号转导和转录活化因子(STAT6)及相关炎症因子水平的影响。方法将40只BALB/c雄性小鼠随机分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组、温阳散瘀平喘方组,每组10只。除空白对照组小鼠外,其余各组建立哮喘模型,在此基础上给予相应药物干预。28 d后取材,HE染色法观察肺组织病理学改变,ELISA法测定IL-4、IL-13、IFN-γ与IgE水平,Western blot法检测p65、STAT6蛋白含量。结果与空白对照组比较,哮喘模型组IL-4、IL-13水平与p65、STAT6含量明显升高(P0.01),IFN-γ水平显著降低(P0.01);与哮喘模型组比较,地塞米松组及温阳散瘀平喘方组IL-4、IL-13水平,地塞米松组p65、STAT6,温阳散瘀平喘方组STAT6含量显著降低(P0.01),地塞米松组及温阳散瘀平喘方组IFN-γ水平显著升高(P0.01),温阳散瘀平喘方组p65含量降低(P0.05);与地塞米松组比较,温阳散瘀平喘方组IL-4水平升高(P0.05),IL-13水平显著升高(P0.01),IFN-γ水平显著降低(P0.01),而地塞米松组及温阳散瘀平喘方组p65、STAT6含量差异无统计学意义(P0.05)。结论温阳散瘀平喘方可以降低肺组织内p65、STAT6蛋白含量,进而影响肺内炎症因子IL-4、IL-13、IFN-γ分泌;温阳散瘀平喘方可能是通过调节NF-κB、Janus激酶/信号转导与转录激活子(JAK/STAT)信号通路,缓解哮喘模型小鼠的气道炎症。     

玉屏风散对过敏性鼻炎小鼠GATA3，Foxp3表达的影响

目的:研究玉屏风散对卵清蛋白(OVA)诱导的过敏性鼻炎(AR)小鼠肺组织中GATA结合蛋白(GATA3)和叉头转录因子3(Foxp3)蛋白表达水平的影响,初步探讨玉屏风散治疗AR的作用机制。方法:采用OVA+Al(OH)_3腹腔注射致敏,然后OVA滴鼻激发的方法建立过敏性鼻炎小鼠模型,将小鼠分为正常组、模型组、氯雷他定组(3 mg·kg~(-1))和玉屏风散组(6.5 g·kg~(-1))。灌胃给药3周后,苏木素-伊红(HE)染色观察鼻黏膜组织中的肥大细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等炎性细胞的浸润情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组小鼠外周血中OVA特异性免疫球蛋白(Ig)E及白细胞介素-4(IL-4),IL-5,γ-干扰素(INF-γ)等细胞因子水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠肺组织中GATA3和Foxp3蛋白的表达。结果:AR模型小鼠出现挠鼻、喷嚏、流涕等症状;鼻黏膜切片HE染色可见AR小鼠鼻黏膜纤毛大量脱落,组织间质水肿明显,小血管扩张,大量嗜酸性细胞、淋巴细胞、浆细胞浸润。而玉屏风散灌胃给药可明显改善过敏性鼻炎小鼠的鼻部症状;鼻黏膜上皮结构完整,排列均匀,未见明显组织间隙水肿和血管扩张,炎性细胞浸润情况明显减轻。与正常组比较,AR模型组小鼠外周血中OVA特异性Ig E以及IL-4,IL-5等细胞因子水平显著升高(P0.01),而INF-γ水平显著降低(P0.01);与模型组比较,氯雷他定和玉屏风散灌胃给药能显著降低AR小鼠外周血中OVA特异性Ig E以及IL-4,IL-5等细胞因子水平(P0.05),同时上调INF-γ水平(P0.05,P0.01);Western blot结果显示,与正常组比较,AR模型组小鼠肺组织中GATA3蛋白的表达显著增加,而Foxp3蛋白的表达明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,玉屏风散能显著降低GATA3蛋白的表达,并显著升高Foxp3蛋白的表达(P0.01)。结论:玉屏风散对OVA诱导的过敏性鼻炎具有改善作用;玉屏风散可能通过调节Th2/Treg平衡等机制调节机体的免疫反应。     

固本防哮饮对哮喘小鼠NLRP3和TLR4的影响

目的观察中药复方固本防哮饮对哮喘小鼠肺组织中炎症小体3(NLRP3)及Toll样受体4(TLR4的影响并探讨其防治哮喘机制。方法采用卵蛋白(OVA)联合人呼吸道合胞病毒(RSV)致敏激发雌性Balb/c小鼠,建立哮喘持续期小鼠模型,随机分为正常组、模型组、中药组(固本防哮饮组)。苏木精-伊红染色法观察小鼠肺组织病理变化,Western blotting法及real-time q PCR法测定小鼠肺组织中NLRP3、TLR4、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白及mRNA表达,ELISA法测定小鼠肺组织、血清中IL-1(IL-1)及IL-18(IL-18)表达水平。结果模型小鼠肺组织内TLR4、IL-1β蛋白及mRNA表达均高于正常组(P 0.05),固本防哮饮组小鼠肺组织中TLR4、IL-1β蛋白、mRNA表达均低于模型组(P 0.05);肺组织中NLRP3蛋白及m RNA表达、肺组织及血清中IL-18蛋白表达3组间差异无统计学意义(P 0.05)。结论 TLR4的激活可能与哮喘持续期气道炎症持续存在有关。固本防哮饮可能通过下调TLR4,减少IL-1的释放,减轻气道炎症,从而缓解哮喘症状。     

从祛瘀化痰法探讨平喘方及拆方对哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的干预机制

目的研究平喘方及拆方干预哮喘小鼠Th1/Th2免疫失衡的作用机制,并探究"化痰"与"祛瘀"两种治法干预气道炎症的疗效。方法对60只BALB/c雄性小鼠按随机数字表分为空白对照组、哮喘模型组、地塞米松组、平喘方组、拆方1(祛瘀方)组、拆方2(化痰方)组共6组,每组10只,运用卵蛋白(OVA)和氢氧化铝腹腔注射致敏并雾化吸入激发,建立小鼠支气管哮喘模型,末次激发后给药7 d并杀检取材,运用HE染色观察各组小鼠气道及肺组织病理改变,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中白介素4(IL-4)、干扰素γ(INF-γ)、白介素17(IL-17)、白介素10(IL-10)表达,蛋白质印迹法法(Western Blot)检测肺组织中转录因子GATA结合蛋白3(GATA-3)、T盒子转录因子(T-bet)蛋白表达。结果与空白组比较,模型组病理染色显示炎症细胞侵润明显,管壁及肺组织结构受到破坏,周围组织伴有炎性物质渗出,IL-4、IL-17、GATA-3表达增高(P<0.05),INF-γ、IL-10、T-bet表达减低(P<0.05)。与模型组对比,平喘方及拆方组可显著减少病理染色中的气道炎症程度,减低IL-4、IL-17、GATA-3表达(P<0.05),升高INF-γ、IL-10、T-bet表达(P<0.05),拆方组间比较祛瘀方在改善气道病理优于化痰方,在降低IL-4、IL-17、GATA-3因子水平具有优于化痰方的统计学趋势。结论:平喘方及拆方可减少哮喘小鼠IL-4、IL-17、GATA-3表达,升高INF-γ、IL-10、T-bet表达,改善Th1/Th2免疫失衡,祛瘀与化痰两种治法相比较,祛瘀法在改善气道炎症方面疗效较优。     

小青龙汤对支气管哮喘小鼠肺泡灌洗液中炎性细胞及IL-4,IFN-γ水平的影响

目的:探讨中药方剂小青龙汤对小鼠哮喘模型气道炎症白介素-4(IL-4)及干扰素(IFN-γ)表达的影响.方法:30只SPF级BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、小青龙汤治疗组(C组).B,C组采用卵白蛋白(OVA) ip致敏与雾化吸人激发制作哮喘模型,在实验21 ～28 d,A,B组以生理盐水15 mL· kg-1 ig,C组激发前1 hig小青龙汤15 g·kg-1.于OVA激发结束后24 h收集支气管肺泡灌洗液(BALF)计数炎性细胞总数及嗜酸粒细胞(EOS)数目,并测定BALF上清液中IL-4和IFN-γ水平变化.结果:小青龙汤的干预治疗能显著降低小鼠BALF中炎性细胞总数及嗜酸粒细胞数量;BALF上清液中IFN-γ水平明显升高,IL-4水平显著下降.C组与A组、B组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:小青龙汤能明显降低哮喘小鼠BALF中炎性细胞数量,影响细胞因子水平变化,从而改善哮喘气道炎症.     

桔梗多糖对哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响

目的:探讨桔梗多糖对OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响。方法:将60只小鼠随机分成6组,每组10只,即正常组、模型组、桔梗多糖(PGP)低、中、高剂量(20、60、80 mg/kg)组和阳性对照地塞米松组。采用卵白蛋白致敏的方法建立哮喘模型后,各组分别予以相应药物干预8周。给药结束后,测定小鼠气道高反应性。分别取材,用于ELISA检测、HE染色、AB-PAS染色和吉姆萨染色计数,Western blot检测肺组织中气道重塑相关蛋白转化生长因子-β1(TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和周期蛋白(Cyclin D1、Cyclin D2)的蛋白表达变化。结果:与正常组相比,模型组小鼠肺阻力(RL)显著升高,动态顺应性(Cdyn)显著降低,BALF中Eotaxin(嗜酸细胞活化趋化因子)、IL-4、IL-5、IL-13和血清中Ig E显著升高,肺组织中炎症细胞浸润和黏液分泌明显增多,支气管杯状细胞增生明显,气道重塑相关蛋白表达显著升高;桔梗多糖高、中、低剂量组均能降低小鼠RL,升高Cdyn,降低BALF中Eotaxin、IL-4、IL-5、IL-13和血清Ig E的含量,明显减少肺组织中炎症细胞的产生、黏液的分泌和杯状细胞的增生以及气道重塑相关蛋白的表达;且桔梗多糖高剂量组与阳性对照地塞米松组比,无统计学差异。结论:桔梗多糖能够降低哮喘小鼠的气道高反应性,减轻炎性反应,降低血清Ig E水平,同时能够降低肺组织TGF-β1、α-SMA、Cyclin D1和Cyclin D2蛋白表达,延缓气道重塑。     

蒙药平喘灵胶囊防治支气管哮喘过程中的相关因子分析研究

目的:探讨蒙药平喘灵胶囊对哮喘模型小鼠气道炎症及白细胞介素17A (IL-17A)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、Smad2/3和Smad7的影响。方法:清洁级雌性BALB/c小鼠60只,随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松片组及平喘灵胶囊1、2、4 g/kg组,采用鸡蛋清白蛋白(OVA)建立实验性哮喘小鼠模型,激发第21 d开始灌胃给予相应药物,模型对照组和正常对照组以生理盐水代替,连续给药8 w。末次给药后24 h内,眼球取血处死,细胞计数器计数肺泡灌洗液(BALF)中白细胞分类数目;HE染色观察小鼠肺组织病理变化;免疫组织化学法(IHC)检测肺组织Smad2/3、Smad7蛋白相对表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF及血清IL-17A、TGF-β1、TNF-α的含量。结果:与正常对照组比较,模型对照组BALF白细胞分类、BALF及血清IL-17A、TNF-α及TGF-β1含量显著升高、哮喘小鼠肺组织smad2/3蛋白表达水平显著下调(P<0.01);小鼠肺组织Smad7蛋白表达水平显著下调(P<0.01)。与模型对照组比较,蒙药平喘灵胶囊各组BALF白细胞分类、BALF及血清中IL-17A、TNF-α及TGF-β1含量显著降低、哮喘小鼠肺组织Smad2/3蛋白表达水平显著下调,小鼠肺组织Smad7蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。结论:蒙药平喘灵胶囊对哮喘小鼠气道炎症有较好的改善作用,其机制可能与降低BALF及血清IL-17A、TNF-α、TGF-β1含量及下调小鼠肺组织smad2/3蛋白表达水平和上调小鼠肺组织smad7蛋白表达水平有关。     

当归挥发油对哮喘BALB/c小鼠的平喘作用及对Treg细胞活性的影响

目的:探讨当归挥发油对哮喘BALB/c小鼠的平喘作用及对IL-10、Foxp3等Treg细胞活性因子的影响。方法:通过注射卵清白蛋白(OVA)致敏、吸入OVA激发的方法来复制哮喘BALB/c小鼠模型,在当归挥发油的防治下,考察当归挥发油对哮喘行为学、肺功能、肺组织病理学、血清IL-10及肺组织Foxp3表达的影响。结果:60、120、240mg/kg当归挥发油可维持哮喘小鼠体重的正常增长,改善哮喘行为学、肺功能及肺组织病理学变化,促进IL-10与Foxp3的表达而提高Treg细胞的免疫活性。结论:当归挥发油具有明显的平喘作用,促进IL-10、Foxp3的表达而提高Treg细胞免疫活性是其作用机制之一。     

定喘汤对哮喘模型小鼠肺组织炎性病变及Th2细胞相关炎性因子的影响

目的:研究定喘汤对哮喘模型小鼠气道炎症及气道阻力的干预作用及其可能的作用机制。方法:104只雄性C56BL/6小鼠随机均分为生理盐水对照组、定喘汤对照组、哮喘模型组、定喘汤治疗组,每组26只。哮喘模型组与定喘汤治疗组小鼠予卵蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘模型。末次激发24h后,每组取10只小鼠测定气道阻力;每组取8只小鼠右下肺组织行HE染色及肿瘤坏死因子α(TNF-α)免疫组化观察肺组织炎性病变,同时取左上肺组织提取蛋白,行蛋白印迹试验(westernblot)检测肺组织中GATA-3蛋白表达;每组取8只小鼠采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白介素(IL)-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量,计数BALF及外周血中炎性细胞。结果:与生理盐水对照组比较,哮喘模型组小鼠气道阻力显著升高,肺组织出现炎性病变,TNF-α表达升高,BALF及外周血的炎性细胞比例上升,BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量升高,肺组织中GATA-3蛋白表达水平上升。与哮喘模型组比较,定喘汤治疗组小鼠气道阻力显著降低,肺组织炎性病变缓解,TNF-α表达降低,BALF及外周血的炎性细胞比例下降,BALF中IL-4、IL-5、IL-13和TNF-α含量降低,肺组织中GATA-3蛋白表达水平下降。上述指标在生理盐水对照组与定喘汤对照组间无显著性差异。结论:定喘汤可减轻哮喘小鼠的气道炎性病变,降低气道高反应性,可能与经GATA-3介导抑制Th2细胞相关炎性因子有关。     

咳喘六味合剂对RSV感染哮喘小鼠气道炎症的影响

目的:观察咳喘六味合剂对RSV感染哮喘小鼠肺组织中气道炎症的影响。方法:将40只雄性Balb/C小鼠随机分为4组,每组10只。PBS组为非OVA致敏和不感染RSV的对照组。OVA组应用OVA注射和OVA气道雾化吸入致敏。OVA/RSV组和咳喘六味合剂组(KLH组)在应用OVA致敏后用RSV滴鼻,复制急性病毒性哮喘模型。咳喘六味合剂组(KLH组)还用咳喘六味合剂治疗。处死动物,RT-PCR检测肺组织中白细胞介素13(IL-13)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-17A(IL-17A)mRNA的表达;HE染色观察肺病理变化。结果:HE染色显示咳喘六味合剂能显著改善RSV感染哮喘小鼠气道炎症。与PBS组相比,OVA组IFN-γ降低,IL-13、IL-17A增高(P<0.05,P<0.01);OVA/RSV组IL-13、IL-17A增高(P<0.01),IFN-γ虽降低,但无统计学意义(P>0.05),且IFN-γ、IL-13均较OVA组增高(P<0.05,P<0.01)。较OVA/RSV组相比,KLH组能显著升高IFN-γ(P<0.05,P<0.01);降低IL-13、IL-17A mRNA的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:咳喘六味合剂可抑制气道炎症,改善肺组织中炎性因子的表达,达到控制哮喘的目的。