Oct-4在精原干细胞定向诱导分化中的表达

目的：检测Oct-4在小鼠精原干细胞（mouse spermatogonial stem cells,mSSCs）体外诱导分化中的表达。方法：①体外培养mSSCs;②用干细胞因子（SCF,stem cell factor）对mSSCs进行精母细胞方向诱导分化;③通过形态学观察和c-kit,GCNF间接免疫荧光染色鉴定mSSCs是否发生分化;④通过间接免疫荧光染色和RT-PCR分别从蛋白水平和mRNA水平检测Oct-4在mSSCs诱导分化前后的表达情况。结果：①形态学观察mSSCs细胞核较大,细胞质少,SCF诱导培养后,随着培养时间的延长,细胞克隆逐渐增长缓慢,并出现衰退、凋亡的细胞;②c-kit,GCNF间接免疫荧光染色结果显示,mSSCs经SCF诱导后发生分化;③Oct-4间接免疫荧光染色和RT-PCR结果显示,Oct-4在mSSCs诱导前表达水平最高,诱导2天后下降,5天后几乎不表达。结论：Oct-4是mSSCs未发生分化的标志。     

NR4A孤儿核受体亚家族在代谢综合征中的作用

核受体家族是一组能在生物体内调控发育、代谢、炎症、免疫等多种生物作用的转录因子,而孤儿核受体则是指一群非配体依赖或未知配体的核受体,其中包括NR4A孤儿核受体亚家族。NR4A孤儿核受体亚家族由高度同源的3种受体:Nur77(NR4A1)、Nurr1(NR4A2)和NOR1(NR4A3)组成,他们可被环境中的刺激信号快速诱导,作为非配体依赖的转录因子和早期反应基因行使功能。最近的研究表明,NR4A受体亚家族成员在代谢综合征的各个组分,包括糖代谢异常、脂代谢异常、胰岛素抵抗等方面发挥重要作用。     

核受体对基因转录的调控

核受体成员包括雌激素受体、雄激素受体、视黄酸受体、糖皮质和盐皮质激素受体、甲状腺激素受体、维生素D受体和一些配体尚未确定的"孤儿受体".核受体为依赖配体的转录因子,通过对基因转录的调控影响生长、增殖、分化等细胞生命活动的方方面面.核受体对基因转录的调控是通过对协同调节因子的征集和对染色质的重塑开始的.本文对近年来作者在核受体基因表达调控研究领域的工作进行了总结,着重介绍了雌激素受体和雄激素受体在调节基因表达过程中,受体与协同调节因子之间、各协同调节因子之间、协同调节因子与基因顺式作用元件之间以及基因各顺式元件(增强子和启动子)之间相互作用的方式和机制方面的研究工作(原文见Cell和Molecular Cell).核受体在不同组织中可以呈现不同的生物活性,文章最后总结了作者最近对雌激素受体在乳腺和子宫内膜中所表现的组织特异性的分子机制的探讨工作(原文见Science).     

核因子κB在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是引起女性肿瘤相关性死亡的主要原因,基因表型分析提示乳腺癌是一种异质性的疾病。根据雌激素受体(ER)、孕激素受体及人表皮生长因子受体2(HER2)的表达情况,可将乳腺癌分为不同亚型。核因子κB(NF-κB)信号通路通过与ER及HER2相互作用,促进乳腺癌干细胞自我更新,在乳腺癌的发生、发展中发挥重要作用。因此,NF-κB信号通路可能是乳腺癌治疗中的一个潜在靶点。     

肝X受体在脂质代谢和炎症反应中的作用

近年来，对于核受体的研究进展迅速，肝X受体属于孤核受体家族，是配体依赖性转录因子超家族成员。目前研究发现肝X受体的信号转导对于脂质代谢、炎症反应和先天性免疫意义重大，肝X受体调控下的靶基因改变是脂质代谢、运输、转化、合成，以及糖代谢的关键调控点。现已证实肝X受体和发育过程的基因表达、细胞分化、代谢等生理过程密切相关。本文将就肝X受体的研究现状进行综述，阐明肝X受体调控下的信号转导途径和靶基因表达改变对脂质代谢和炎症反应的作用。     

肺癌干细胞基因Oct-4表达的临床意义

目的研究肺癌干细胞的基因表达与临床特征、病理特征、预后间的关系。方法应用流式细胞仪分选出肺癌干细胞,并应用RT^2 Profiler TMPCR仪检测肺癌干细胞与非肺癌干细胞问的差异性基因表达。应用免疫组化分析十细胞基凶Octamer-4（Oct-4）的表达与临床病理特征之间的关系。应用Western—blot检测肺癌干细胞中Oct-4蛋白的表达情况。结果肺癌干细胞与非肺癌干细胞间显著差异性表达的基因共7种,包括干细胞分化相关因子（CD44、Oct-4和nestin）、细胞周期调节因子（APC和CDC2）以及生长因子（HGF和TGF）。其中,Oct-4蛋白在癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P=0．001）。经过生存分析,Oct-4蛋白高表达病例的术后无病生存期明显短于Oct-4低表达或无表达的病例（P=0．001）。在Cox回归模型中,肿瘤大小、淋巴结转移和Oct-4的表达为独立预后网子（分别为P=0．031、0．002和0．003）。结论Oct-4在肺癌干细胞中高表达,并可作为肺癌发生、进展及分化的潜在生物标志。     

转录因子Oct-4的研究进展

Oct-4是维持干细胞多能性和自我更新的转录因子,它通过结合靶基因调控区,选择性地抑制分化基因表达或促进多能性基因表达。通常只在多能干细胞中表达,在分化细胞中不表达;它最终决定干细胞是保持多能性还是分化,以及向哪个方向分化。此外,Oct-4在生殖细胞肿瘤研究中也发挥重要作用。     

核转录因子协同刺激物OCA-B作用研究进展

OCA-B,又称为BOB.1或OBF.1,为B淋巴细胞的特异性核转录因子协同刺激物,可通过与核转录因子POU家族中的Oct-1及Oct-2相互作用而激活免疫球蛋白基因,促进抗体的生成,此外OCA-B还与B细胞的活化及生发中心的形成有密切的关系。此外在T淋巴细胞中也可检测到OCA-B表达,说明OCA-B对T细胞亦可发挥调节基因转录的作用。本文主要对OCA-B的结构、分布及生物学作用的研究进展做一阐述。     

核受体GCNF对H9C2心肌细胞的影响及作用机制

目的:研究人孤儿核受体生殖细胞核因子(hGCNF)对H9C2心肌细胞的影响并初探其机制。方法:通过感染Ad-hGCNF腺病毒使H9C2中的GCNF基因表达上调,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,通过MTT法研究GCNF表达对细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡水平,实时定量PCR及Western blot技术检测受体结合蛋白激酶2(RIPK2)和受体结合蛋白激酶3(RIPK3)的表达水平。结果:Ad-hGCNF腺病毒感染后,H9C2心肌细胞GCNF表达上调,亚细胞定位位于细胞核,细胞活力降低,凋亡水平显著增加,RIPK2和RIPK3表达水平均升高。结论:感染Ad-hGCNF腺病毒表达载体降低H9C2细胞活力,增加其凋亡水平,机制与RIPK2和RIPK3的表达上调有关。     

Oct-4在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的 分析Oct-4在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达特点及规律,探讨Oct-4的表达在NSCLC发生、发展中的意义及其与肿瘤干细胞的关系.方法 采用免疫组化SP法检测Oct-4蛋白在135例NSCLC组织和20例正常对照肺组织中的表达情况.结果 NSCLC组织中Oct-4表达的阳性率明显高于正常对照肺组织,二者之间的差异具有显著性（P＜0.05）.Oct-4表达的阳性率与NSCLC患者的临床分期、有无淋巴结转移及肿瘤分化程度有关（P〈0.01）,而与患者的性别、年龄及NSCLC的组织学类型无关（P＞0.05）.结论 Oct-4的表达与NSCLC的分化程度、临床分期和淋巴结转移有关,提示Oct-4的表达在NSCLC发生、发展中的可能具有一定的意义,表达Oct-4的肿瘤细胞很可能是肿瘤干细胞,推测Oct-4有可能成为分离和鉴定NSCLC肿瘤干细胞的标志物.     

生殖细胞核因子在不同成长期大鼠附睾中的表达

目的 讨生殖细胞核因子(GCNF)在大鼠附睾中的时空表达与分布。方法 用免疫组化和蛋白质免疫印迹技术,检测GCNF蛋白在出生后7、14、28、45、60、90天龄和18月龄大鼠附睾内的表达、定位和发育变化,并通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行统计学分析。结果 CNF表达于出生后14天龄至18月龄大鼠附睾上皮的细胞核内,其表达呈明显的年龄相关性和附睾区段以及细胞特异性。14天龄附睾上皮内出现散在的阳性细胞核,28天龄时阳性细胞数和阳性强度明显增强,45天龄时达到高峰。成年后阳性细胞数维持不变而阳性染色强度开始逐渐减弱,18月龄时减弱非常明显。附睾管上皮内的各种细胞如主细胞、基细胞、顶细胞、狭窄细胞和亮细胞等均呈GCNF阳性染色,从附睾起始段到尾段均有阳性染色,其中以近端头部最强;远端尾部主细胞核阳性减弱非常明显甚至呈阴性,而亮细胞核则阳性较强。14d后各年龄组附睾抽提物中均可见55000处有GCNF特异性条带,其年龄变化与免疫组化结果一致。结论 CNF在大鼠附睾上皮内的表达与附睾上皮分化和发育过程明显相关,且其分布表现出明显的附睾区段和细胞特异性。     

人胚生殖嵴干细胞多能性调节基因Oct4 的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的:克隆人胚生殖系细胞多能性调节基因Oct4,并使其在大肠杆菌中表达.方法:取4～6周人胚胎分离生殖嵴和背侧肠系膜,利用RT-PCR技术扩增编码Oct4的全长cDNA,并插入到原核表达载体pGEX5T中,构建成 pGEX5T-Oct4重组质粒.β硫代半乳糖苷(IPTG)诱导使该基因在k802菌中表达.结果:用PCR方法扩增获得大小约1.1 kb条带;全自动测序与GenBank中登录的序列97％同源.获得了pGEX5T-Oct4 重组子并在k802菌中获得了表达,SDS-PAGE分析有一特异性的62 000条带.结论:扩增和克隆了人胚生殖系细胞多能性调节蛋白Oct4 全长cDNA并在大肠杆菌中获得表达,为进一步研究人胚生殖系细胞多能性调节与分化奠定了基础.     

Oct4对鼠-猪异种核移植胚胎早期发育的影响

目的进行脂质体长春新碱(Liposome Vincristine,L-VCR)的动物体内药代学研究、体内抗肿瘤药效学研究以及毒理学研究,探讨L-VCR的作用特点及其可能的作用机制。方法Wistar大鼠接种Walker256肿瘤,用高效液相色谱-紫外检测法(HPLC-UV),测定其体内以及肿瘤内的血药浓度,用药动学计算软件拟合处理得药动学参数;小鼠接种B16黑色素瘤,静脉给予L-VCR,计算其肿瘤抑制率以及去瘤体重;测定L-VCR小鼠的LD50。结果与游离长春新碱(Free Vincristine,F-VCR)相比,L-VCR血浆以及肿瘤内浓度增高,维持时间明显延长,AUC0-t增加约121倍;L-VCR能明显减轻小鼠B16黑色素瘤模型的瘤体重量,并呈现一定的量效关系;L-VCR小鼠的LD50明显高于游离药物。结论L-VCR可显著延长VCR半衰期,增大药时曲线下面积,药效明显高于F-VCR,且毒性明显降低。其作用可能是通过脂质体包裹,增加肿瘤中的药物量,延长VCR的作用时间,药物释放缓慢,从而减轻VCR的毒性而达到的。     

Expression of transcription factor Oct4 in bladder cancer cell line T24 and its effects on the biological characteristics of the cells

The expression of octamer binding factor 4 （Oct4） gene in bladder cancer cell line T24 and its effects on the biological characteristics of the cells were investigated. RT-PCR and Western blot were employed to detect the expression of Oct4 in T24 cells. The changes of biological characteristics in T24 cells were analyzed before and after gene-silencing by Boyden chamber and MTT. The results showed that the expression of Oct4 gene was detectable in T24 cells by RT-PCR and Western blot. The expression of Oct4 gene and protein was down-regulated by siRNA, and average number of transwell cells in interference group, negative control group and blank control group was 101.40±54.56, 104.20± 10.03 and 111.00±11.90, respectively. There was significant difference in the proliferation abilit,） of the cells from 48 h, 72 h to 96 h after the interference by siRNA between interference group and negative group or blank control group （P〈0.05）. It was suggested that Oct4 gene was related with proliferation ability of T24 cells, but not with invasive capability.     

Oct4基因在猪孤雌激活和体外受精早期胚胎中的表达特征

摘 要：[目的]研究植入前胚胎发育重要基因Oct4在猪孤雌和体外受精胚胎中的表达特征。[方法]收集成熟卵母细胞、孤雌和体外受精2细胞、4细胞、8细胞和囊胚，做荧光定量PCR，以成熟卵母细胞做对照分析相对表达量。[结果]孤雌组和体外受精组在8细胞期Oct4表达量均最高（p<0.05），在孤雌和体外受精组囊胚相对于其他时期Oct4表达量最低（p<0.05）。在同一时期孤雌和体外受精Oct4表达并没有差异。[结论]多能性基因Oct4在卵裂发育时期表达量动态变化，孤雌胚胎在一定程度上可作为体外胚胎基因表达的模型，且不同的胚胎培养条件可能导致基因表达的不同。     

c-kit/SCF、VEGF和Oct4在精原细胞瘤中的表达及其意义

c-kit/SCF、血管内皮生长因子、Oct4是新近研究精原细胞瘤的诊断过程中几个热点基因,c-kit是一个癌基因,发生异常极易导致正常睾丸发生恶变向精原细胞瘤发展。Oct4是新型的精原细胞瘤的特异性基因,在精原细胞瘤中的表达率接近100%。血管内皮生长因子是广谱癌基因,在大多数肿瘤中都有表达,且与肿瘤的预后和转移密切相关。这3个基因非常具有代表性,就这些基因与精原细胞瘤的关系及它们在精原细胞瘤中的诊断作用进行综述。     

八聚体结合蛋白-4对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的：探讨八聚体结合蛋白-4（octamer-bindingprotein-4,Oct 4）在胃癌（gastriccarcinoma）组织及其4株细胞系（ MKN-28、SGC-7901、BGC-823和GES-1）中的表达,并分析其对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法收集20例胃癌手术患者的癌变组织和20例正常组织,通过Real time PCR（ RT-PCR）和Western blot法检测Oct 4在胃癌组织及其4株细胞系中的表达水平。在干扰掉Oct 4后,采用MTT的方法检测BGC-823细胞的增殖活性,通过Transwell小室法检测BGC-832细胞的侵袭活性,利用Western blot法检测MMP-2及MMP-9的表达。结果 RT-PCR检测发现Oct 4 mRNA在胃癌组织中高表达,而在正常组织中低表达,Western blot法检测发现Oct 4在BGC-832表达水平最高。下调Oct 4的表达导致BGC-823细胞增殖和侵袭活性被抑制,MMP-2及MMP-9的表达水平均降低。结论 Oct 4在胃癌组织和胃癌细胞系中高表达,并且敲除Oct 4会导致胃癌细胞的增殖和侵袭活性明显减弱,降低MMP-2及MMP-9的表达水平。 Oct 4在胃癌组织中的过量表达有助于胃癌的临床诊断,同时Oct 4在胃癌的恶性肿瘤生物活性中发挥着重要作用。     

人重组Oct3/4真核表达载体构建及在卵巢癌细胞中的表达研究

目的 构建人Oct3/4真核表达载体并转染人卵巢癌细胞株(SKOV3),观察Oct3/4在SKOV3稳定细胞株中的表达.方法 采用RT-PCR技术扩增获得目的 基因Oct3/4 cDNA产物,利用pcDNA3.1载体质粒构建人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,酶切及DNA测序鉴定.利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染SKOV3,以空载体转染细胞和未转染细胞作为转染对照组和阴性对照组.经G418(neomycin)筛选获得SKOV3稳定转染细胞株,Western blotting分析检测细胞Oct3/4蛋白的相对表达水平.结果 PCR扩增产物经12 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定目的 基因条带大小约1 000 bp,与理论预期值一致.构建完成人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,DNA测序结果与GenBank数据库进行比对序列一致.Western blotting检测显示,转染pcDNA3.1-Oct3/4组稳定转染细胞中Oct3/4蛋白相对表达量(10.225±0.987)显著高于转染对照组(1.713±0.896)和阴性对照组(校正值为1)(P＜0.01).结论 成功构建人重组0ct3/4真核表达载体并转染SKOV3,稳定转染细胞株中Oct3/4蛋白呈稳定过量表达.实验为进一步研究Oct3/4基因在卵巢癌发生、发展及耐药机制中的作用奠定了基础.     

人重组Oct3／4真核表达载体构建及在卵巢癌细胞中的表达研究

目的 构建人Oct3/4真核表达载体并转染人卵巢癌细胞株（SKOV3）,观察Oct3/4在SKOV3稳定细胞株中的表达.方法 采用RT-PCR技术扩增获得目的 基因Oct3/4 cDNA产物,利用pcDNA3.1载体质粒构建人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,酶切及DNA测序鉴定.利用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒转染SKOV3,以空载体转染细胞和未转染细胞作为转染对照组和阴性对照组.经G418（neomycin）筛选获得SKOV3稳定转染细胞株,Western blotting分析检测细胞Oct3/4蛋白的相对表达水平.结果 PCR扩增产物经12 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定目的 基因条带大小约1 000 bp,与理论预期值一致.构建完成人重组Oct3/4真核表达载体pcDNA3.1-Oct3/4,DNA测序结果与GenBank数据库进行比对序列一致.Western blotting检测显示,转染pcDNA3.1-Oct3/4组稳定转染细胞中Oct3/4蛋白相对表达量（10.225±0.987）显著高于转染对照组（1.713±0.896）和阴性对照组（校正值为1）（P＜0.01）.结论 成功构建人重组0ct3/4真核表达载体并转染SKOV3,稳定转染细胞株中Oct3/4蛋白呈稳定过量表达.实验为进一步研究Oct3/4基因在卵巢癌发生、发展及耐药机制中的作用奠定了基础.     

T细胞因子3基因沉默对小鼠睾丸胚胎癌细胞Oct4表达的影响

目的：探讨T细胞因子3 (TCF3)基因沉默对小鼠睾丸胚胎癌F9细胞干性基因Oct4表达的影响,阐明TCF3对F9细胞中Oct4表达调控的作用机制。方法：采用RNAi技术将TCF3基因沉默作为TCF3干涉组,同时设立空白对照组和阴性对照组。采用RT-PCR和Western blotting方法观察各组细胞TCF3和Oct4 mRNA和蛋白表达水平,细胞免疫荧光法观察F9细胞中Oct4的表达。结果：Oct4在F9细胞核中高度表达。与空白对照和阴性对照组比较,TCF3干涉组TCF3 mRNA和蛋白表达水平显著下调,差异有统计学意义（P<0.01）;Oct4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,差异有统计学意义（P<0.01）;而空白对照组与阴性对照组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论： TCF3基因干涉可以促进F9细胞中Oct4的转录和蛋白表达,提示TCF3可以负向调控F9细胞中Oct4的表达,是Oct4的抑制因子之一。