白花蛇舌草提取物对结肠癌细胞抑制作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞株增殖的抑制作用.方法采用甲基噻唑蓝(MTT)法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50).结果在同一浓度下,白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞的抑制作用随着作用时间的延长而增强,0.08 mg/mL的白花蛇舌草乙醇提取物作用CT-26细胞24 h、48 h、72 h,细胞抑制率分别为(16.67±9.35)%,(34.66±9.23)%,(40.07±9.16)%.白花蛇舌草乙醇提取物作用24 h、48 h、72 h的IC50值分别为0.315,0.155,0.115.在同一作用时间内,白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞的抑制率随着药物浓度的增加而增加,在72 h内不同浓度药物(0.06 mg/mL,0.08 mg/mL,0.10 mg/mL,0.12 mg/mL,0.14 mg/mL,0.16 mg/mL,0.18 mg/mL,0.20 mg/mL)作用下,细胞抑制率分别为(35.46±3.59)%,(40.07±9.16)%,(40.77±6.92)%,(52.81±1.87)%,(54.22±2.35)%,(68.72±3.71)%,(70.04±8.03)%,(71.84±3.12)%.结论白花蛇舌草乙醇提取物可以抑制BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞株的增殖,其对CT-26细胞增殖的抑制作用呈现时效和量效的关系.     

不同生长期罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用研究

目的研究不同生长期罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的体外抑制作用。方法选用果实生长期为30d、50d、90d的罗汉果皂苷提取物,在α-葡萄糖苷酶与4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)作为底物的反应体系中筛选出具有良好抑制作用的罗汉果提取物,并观察罗汉果皂苷对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶的抑制作用。结果罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用与剂量正相关,50d罗汉果皂苷提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用强于30d和90d罗汉果皂苷。经酶动力学研究发现,50d罗汉果皂苷对α-葡萄糖苷酶的抑制作用属于混合型抑制。50d罗汉果皂苷在0.05~50μg/ml范围内对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性呈现先促进后抑制的趋势。浓度为5.0μg/ml和10.0μg/ml时的罗汉果皂苷能一定程度上抑制Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性。结论生长期50d的罗汉果皂苷类提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用强于其他生长期(30d、90d)的罗汉果皂苷提取物,能在体外剂量依赖性地直接抑制α-葡萄糖苷酶的催化活性,并抑制Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性。     

黄芪多糖对Caco-2细胞P-gp功能、表达的影响

目的观察黄芪多糖(APS)对Caco-2细胞P糖蛋白(P-gp)功能、表达的影响。方法采用MTT法考察药物对细胞的毒性,确定药物最大无毒浓度;流式细胞仪测定Caco-2细胞P-gp底物罗丹明-123(Rh-123)和抗体的荧光强度,评价APS对P-gp功能和表达的影响;建立Caco-2细胞单层模型,观察APS对Rh-123跨膜转运的影响。结果细胞毒性实验结果显示,APS在0.1~100μg/m L浓度范围内对Caco-2细胞无明显毒性,细胞存活率90%;不同浓度的APS作用后,增加细胞内Rh-123的蓄积,对P-gp功能表现为抑制作用;中、高浓度50、100μg/m L的APS对P-gp表达有抑制作用[(26.72±2.43)、(23.97±2.08)比(30.10±1.28),P0.05],其表达量分别降低11.23%和16.41%;高浓度APS 100μg/m L明显抑制Rh-123的双向跨膜转运,对P-gp有抑制作用。结论黄芪多糖(APS)对P-gp的功能和表达有一定的抑制作用,且在高浓度尤为明显,能显著增加Rh-123在Caco-2细胞内的蓄积,并抑制其双向跨膜转运。     

GnRH激动剂曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3生长的抑制作用及对GnRH Ⅰ受体、GnRH Ⅱ受体表达的影响

目的 观察促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂曲普瑞林对卵巢癌细胞生长的抑制作用并探讨其对GnRH Ⅰ受体、GnRH Ⅱ受体表达的影响.方法 选用不同浓度曲普瑞林刺激卵巢癌细胞OVCAR3后,采用MTT方法检测其对细胞的增殖活性的影响,并运用RT-PCR方法,检测曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3 GnRHⅠ受体、GnRH Ⅱ受体表达的影响.结果 10-7 mol/L浓度的曲普瑞林作用细胞24 h后,其增殖抑制率为(41.07±0.43)%,随着浓度的增加(10-6 mol/L,10-5 mol/L,10-4 mol/L,10-3 mol/L,10-2 mol/L),抑制率逐渐增加,分别为(50.56±0.76)%、(69.86±1.05)%、(65.43±0.87)%、(62.09±1.24)%、(58.69±0.87)%;以10-5 mol/L浓度的曲普瑞林抑制率最高,有统计学意义(P＜0.05);以10-5 mol/L浓度的曲普瑞林作用于细胞24 h、48 h、72 h后,增殖抑制率分别是(69.86±1.08)%、(58.69±0.98)%、(48.56±1.02)%,最终是作用时间在24 h时抑制率最高,有统计学意义(P＜0.05).GnRH Ⅰ受体、GnRH Ⅱ受体的表达:在曲普瑞林10-5mol/L浓度作用于细胞24 h后最高.结论 曲普瑞林对卵巢癌细胞OVCAR3生长有抑制作用,GnRH Ⅰ受体、GnRHⅡ受体表达变化与GnRH激动剂的作用机制有关.     

中药三七提取液对HepG2细胞侵袭转移性的影响

目的：研究三七提取液体外对人肝癌HepG2细胞株血管生成及其诱导血管内皮细胞迁移的影响.方法：将HepG2细胞分为不同浓度三七提取液处理组及对照组,采用MTT法观察三七处理液对HepG2细胞的抑制率;共培养法（Marigel inva-sion chamber）,观察不同浓度的三七处理液诱导血管内皮细胞迁移的抑制作用,ELISA检测细胞上清液中Ang-1、Ang-2、VEGF、HIF-1α的水平.结果：三七处理液浓度达25 mg/L时,对其诱导人脐静脉内皮细胞迁移开始表现出抑制作用,24,48,72 h抑制率分别达3.57％、11.29％、13.16％,浓度达800 mg/L时,抑制率达64.85％、67.74％、85.53％;经三七提取液处理后HepG2细胞迁移数为（220±2.30）个,抑制率达（63.67±3.32）％,细胞迁移数与阳性对照组（614±3.32）个比较,差异有统计学意义（P＜0.01）.Ang-1、Ang-2、VEGF、HIF-1α水平与对照组比较,分别为（17.13±2.86）μg/L vs（32.54±6.82）μg/L、（332.28±64.22）μg/L vs（202±28.22）μg/L、（4.02±0.58）μg/L vs（2.56±0.25）μg/L、（258.74±123.56）μg/L vs（90.32±36.66）μg/L,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：三七提取液对HepG2细胞增殖具有抑制作用,且能诱导血管内皮细胞迁移,对Ang-1、Ang-2、VEGF、HIF-1α也具有抑制作用.     

超抗原活化淋巴细胞对喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的 观察超抗原活化淋巴细胞后对喉癌细胞的抑制作用.方法 金黄色葡萄球菌肠毒素A与人淋巴细胞混合培养24 h,激活淋巴细胞,再加入人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞混合培养72 h,通过MTT法观察喉癌细胞的抑制情况.结果 ①实验组金黄色葡萄球菌肠毒素A激活淋巴细胞后对人喉鳞癌Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率是42.68%,高于对照组4.82%(P＜0.01).②抑制作用呈现时间的依赖性.③金黄色葡萄球菌肠毒素A在不同浓度时对喉癌细胞的生长均有抑制作用,特别在浓度是1 μg/ml、72 h培养时抑制率最高,达82.83%.结论 超抗原活化淋巴细胞后明显抑制喉癌细胞的生长.     

1-甲基乙内酰脲对SW480细胞作用的研究

目的探讨1-甲基乙内酰脲对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用。方法以体外培养的人结肠癌SW480细胞株为实验研究对象。实验分为对照组(等量PBS)和1-甲基乙内酰脲组(M)。MTT比色法检测细胞增殖抑制率,1-甲基乙内酰脲对SW480细胞增殖的抑制作用:根据文献数据和预实验,将1-甲基乙内酰脲组设8个浓度组(M:0.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、500 mg/L);1-甲基乙内酰脲八个浓度组分别干预人结肠癌SW480细胞24、48及72 h后,MTT法检测1-甲基乙内酰脲对SW480细胞增殖的抑制作用。结果 MTT法检测结果显示:①1-甲基乙内酰脲在5~500 mg/L浓度范围能抑制SW480细胞增殖,增殖抑制率呈浓度递增趋势。各组间两两比较差异有显著性(P<0.05)。②1-甲基乙内酰脲作用于结肠癌SW480细胞48 h后,对SW480细胞增殖抑制作用最强。结论 1-甲基乙内酰脲在体外对人结肠癌SW480细胞有抑制增殖的作用。     

莱菔子素诱导结肠癌细胞株Caco-2凋亡的研究

目的:探讨莱菔子素(SFN)诱导结肠癌细胞凋亡的抗肿瘤机制。方法:体外培养人结肠腺癌细胞Caco-2,观察10-100μmol/L SFN对Caco-2细胞增殖动力学的影响。MTT法检测细胞生长抑制率, 倒置相差显微镜及扫描电镜观察凋亡细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期。结果: 30-100μmol/L浓度范围的SFN抑制细胞增殖,且呈剂量和时间依赖效应。倒置相差显微镜及扫描电镜观察,25μmol/L处理组无明显改变,50、75、100μmol/L处理组细胞形态学发生明显变化,典型者出现凋亡小体。流式细胞仪检测结果表明,随着SFN浓度的增高,细胞凋亡率增加,细胞周期阻滞于G0-G1期, 与对照组差异有统计学意义(P<0.01)。结论:SFN对Caco-2细胞的生长增殖具有抑制作用,呈剂量和时间依赖效应;大剂量SFN诱导Caco-2细胞凋亡。SFN对Caco-2的生长增殖抑制作用可能是通过诱导细胞凋亡、抑制细胞增殖两条途径实现的。     

平阳霉素对血管内皮细胞的生长抑制作用和细胞周期的影响

目的观察平阳霉素(PYM)对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法检测不同浓度PYM(10-2~103 μg/ml)作用不同时间(24、48、72 h)后对ECV304细胞的生长抑制率。利用流式细胞仪检测一定浓度PYM刺激下细胞周期分布。结果10 μg/ml浓度PYM作用24、48、72 h后的细胞生长抑制率分别为44.7%、59.7%、74.4%,药物抑制效应表现为剂量依赖性和时间依赖性。药物作用24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为32.94、2.56、0.75 μg/ml。1 μg/ml浓度PYM作用ECV304细胞24 h,实验组S期细胞比例较对照组明显下降,G2-M期细胞比例明显增加(P<0.01),细胞被阻滞在G2-M期。结论PYM对ECV304细胞的增殖具有较强抑制作用,其机制与细胞周期阻滞作用有关。     

大麻提取物对人结肠癌细胞LS174T体内外抑制及诱导凋亡作用

目的：研究大麻提取物在体内外对人结肠癌细胞LS174T的生长抑制及诱导凋亡作用。方法：体外培养结肠癌细胞,加以不同浓度（500,250,125,62.5,31.25μg/mL）的大麻提取物培养72 h,用MTT法检测大麻提取物对结肠癌细胞抗增殖的作用;用DNA末端原位标记染（TUNEL）法检测大麻提取物对结肠癌细胞的诱导凋亡作用;建立结肠癌小鼠模型,将实验动物随机分为五组：空白对照组、阳性药物组、低剂量组（25 mg/kg）、中剂量组（50 mg/kg）、高剂量组（100 mg/kg）,每组5只小鼠,2周后处死动物测定肿瘤的重量和体积。结果：不同浓度的大麻提取物处理细胞72 h后,结肠癌细胞的抑制率分别为（93.12±2.66）%（、74.56±4.62）%（、62.37±3.77）%（、36.84±6.24）%（、19.16±4.24）%,各组间抑制率相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;用TUNEL法可检测到典型的结肠癌细胞凋亡形态;在结肠癌小鼠模型上给药组肿瘤生长被抑制,其肿瘤体积、重量均较对照组减小,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论：大麻提取物在体内外具有抑制结肠癌细胞LS174T增殖及诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。     

穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株体外增殖的影响

目的 研究穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株体外增殖的影响.方法 在不同浓度的穿心莲内酯培养基中将人结肠癌细胞株Caco-2（高分化）、HT-29（中分化）和Lovo（未分化）培养24、48、72 h,用MTT法检测穿心莲内酯对各种癌细胞的药物半数抑制浓度（IC50）,比较穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株之间的增殖抑制的差异.结果 穿心莲内酯对结肠癌细胞Caco-2、HT-29和Lovo有明显增殖抑制作用,且其抑制作用呈剂量效应和时间效应关系;低分化结肠癌细胞株对穿心莲内酯的敏感性高于分化程度较高的结肠癌细胞株.结论 穿心莲内酯对不同分化结肠癌细胞株体外增殖抑制作用不同.     

齐拉西酮对脂多糖损伤海马神经干细胞的保护作用

目的 探讨齐拉西酮对脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）损伤后海马神经干细胞（neural stem cells,NSCs）活性的作用及其凋亡的影响.方法 建立体外大鼠海马NSCs的LPS损伤细胞模型,分为对照组（sham组）、LPS组、LPS＋齐拉西酮组（包括1μmol/L、5μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L等4个不同剂量组）,药物作用48 h或72 h后,采用WST-1试剂检测细胞活性,乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）试剂盒检测乳酸脱氢酶释放情况,并采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 （1）细胞活力：作用48 h后,与对照组（吸光度值0.380±0.029）相比,LPS组（吸光度值0.265±0.047）细胞活力显著下降（P＜0.01）,而LPS＋齐拉西酮5μmol/L组（吸光度值0.316±0.008）组与LPS＋齐拉西酮10 μmol/L组（吸光度值0.321±0.006）则显著提升其活力（与LPS相比较,均P＜0.05）.作用72 h后的细胞活力结果与48 h相似,LPS组细胞活力显著低于对照组（P＜0.01）,而LPS＋齐拉西酮5μmol/L组与LPS＋齐拉西酮10μmol/L组则缓解了LPS对其活力的抑制.（2）LDH检测结果显示,作用48 h或72 h后,LPS组LDH的释放水平显著高于sham组（均P＜0.01）,而LPS＋齐拉西酮5μmol/L组与LPS＋齐拉西酮10 μmol/L组的LDH释放水平均显著低于LPS组（均P＜0.01）.（3）流式细胞术检测凋亡的结果显示,作用48 h后,与对照组[（9.15±1.54）％]相比,LPS组[（22.67±2.15）％]凋亡百分率显著上升（P＜0.01）,而LPS＋齐拉西酮5μmol/L组[（18.45±3.84）％]组与LPS＋齐拉西酮10 μmol/L组[（17.87±2.29）％]则显著抑制其凋亡（与LPS相比较,均P＜0.05）.作用72 h后,LPS组的凋亡百分率[（15.70±2.97）％]仍然显著高于对照组[（8.45±1.04）％],而LPS＋齐拉西酮10 μmol/L组[（10.52±1.42）％]则显著低于LPS组（P＜0.05）.结论 适当浓度的齐拉西酮能抑制LPS导致的海马NSCs损伤,这一作用可能是其发挥神经保护效应的细胞学基础之一.     

蓝莓提取物对人结肠癌细胞的体外抑制作用及机制研究

目的研究蓝莓提取物对人结肠癌细胞株HCT116增殖的体外抑制作用及其机制。方法应用不同浓度梯度蓝莓提取物处理人结肠癌HCT116细胞,噻唑蓝（M1T11）比色法检测肿瘤细胞增殖情况,应用流式细胞术检测蓝莓提取物对HCT116细胞体外凋亡情况影响,并进一步研究了Caspase-3活性以及NF-KB表达变化情况以探讨相关机制。结果蓝莓提取物对HCT116细胞的增殖抑制作用呈现明显的剂量及时间效应关系;流式细胞仪检测显示各浓度（0．25、0．50、1．00、2．00mg／L）蓝莓提取物处理组HCT116细胞平均凋亡率分别为（8．86±1．03）％、（16．33±1．99）％、（49．29±6．73）％、（63．68±8．26）％,除0．25mg／L组外,均显著高于对照组的（6．62±0．97）％：1．00mg／L蓝莓提取物还可显著升高肿瘤细胞巾Casepase-3活性,抑制NF-κB表达。结论蓝莓提取物可能通过激活Casepase-3级联反应通路和抑制NF-κB表达,诱导人结肠癌HCT116细胞凋亡从而抑制其体外的生长与增殖。     

石榴皮多酚对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响

[目的]研究石榴皮多酚对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖及凋亡的影响。[方法]四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测石榴皮多酚对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡。[结果]石榴皮多酚对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖有抑制作用,且呈现浓度和时间依赖性;石榴皮多酚能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,使癌细胞周期被阻滞在G2-M期。[结论]石榴皮多酚可抑制人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖,诱导癌细胞凋亡,并阻滞癌细胞在G2-M期。     

OSTP增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用

目的 研究卵巢癌特异性结合肽（OSTP）及联合紫杉醇对卵巢癌A2780细胞生长及凋亡的影响.方法 体外培养卵巢癌A2780细胞,随机分为4组：溶剂对照组（1640和0.1％ DMSO组）、OSTP组、紫杉醇组、OSTP联合紫杉醇组.采用四甲基偶氮唑盐（MTT法）检测OSTP对A2780细胞生长的影响;用Annexin-V-FITC和PI双染法标记A2780细胞,通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 MTT法检测OSTP以不同浓度作用于卵巢癌A2780细胞时,可对该细胞的生长起到抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.应用流式细胞技术检测细胞凋亡发现：不同浓度的OSTP（20、40、80、160、320μmol/L）对A2780细胞的凋亡率分别7.88％、8.348％、8.727％、9.393％和10.68％,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）,提示OSTP可诱导细胞凋亡.OSTP和紫杉醇联合应用,在不同的预处理组（加OSTP80μ mol/L 0、3、6、12h）后再加紫杉醇10μmol/L作用48h,结果发现细胞凋亡率分别是39.40％、53.09％、48.18％和45.62％,均高于OSTP和紫杉醇单独用药及两者的凋亡率相加值,且差异有统计学意义（P ＜0.001）.提示OSTP能增强紫杉醇诱导的卵巢癌A2780细胞凋亡作用.结论 OSTP对卵巢癌A2780细胞有生长抑制及凋亡作用,尤其是OSTP能增强紫杉醇诱导卵巢癌A2780细胞凋亡的作用,对于探讨和开发OSTP作为靶向化疗增敏剂治疗卵巢癌有良好的应用前景.     

As2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力和细胞周期的影响及机制探讨

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对恶性淋巴瘤CA46细胞株增殖、活力和细胞周期的影响及机制探讨。方法磺酰罗丹明B（SRB）法观察不同浓度（O．625,1．25,2．5,5．0,10．0,20．0μmol／L）As2O3分别处理24,48,72,96h后CA46细胞系生长曲线,并计算上述各浓度As2O3处理72h后CA46细胞系的细胞增殖抑制率;观察不同浓度（0．5,1．0,2．0μmol／L）As2O3作用72h后CA46细胞系的克隆形成率;流式细胞仪DNA倍体分析法探讨不同浓度（O．5,1．0和2．0μmol／L）As2O3作用72h对CA46细胞系细胞周期的影响;RT—PCR法检测不同浓度（0．5,1．0和2．0μmol／L）As2O3作用72h后CA46细胞系p16基因mRNA的表达。同时设相应对照组进行比较。结果（1）与未处理组相比,各浓度As2O3均可明显抑制CA46细胞生长,且G0～G1期细胞逐渐增加,呈剂量依赖性。（2）未处理组细胞p16基因呈微弱表达,不同浓度As2O3作用72h后,未处理组、不同浓度（0．5,1．0和2．0μmol／L）As2O3处理组p16基因表达阳性条带灰度值与actin比值分别为（O．11±0．11）,（0．33±0．10）,（O．57±0．11）和（0．67±0．09）,各As2O3处理组p16基因mRNA表达明显高于未处理组,其差别有统计学意义（P〈0．01）。结论As2O3可将细胞周期阻滞于G0～G1期,抑制肿瘤细胞的增长,其机制可能与诱导p16基因表达有关。     

塞来昔布抑制人胃癌细胞MGC803细胞增殖及其分子机制

目的：研究塞来昔布在体外对人胃癌细胞MGC803生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法：体外培养人胃癌细胞MGC803,MTT法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算IC50值;RT-PCR法检COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响;结果：MTT结果显示：相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为：（98.67±11.755）μmol/L、（67.506±6.646）μmol/L、（57.662±15.809）μmol/L;RT-PCR结果显示：人胃癌细胞MGC803正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为：0.918±0.031,0.301±0.002（t=16.037,P=0.000）;MMP-9mRNA灰度值分别为：0.928±0.041,0.360±0.012（t=10.487,P=0.003）;结论：塞来昔布抑制胃癌细胞增殖,塞来昔布抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现的。     

自噬在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导甲状腺髓样癌TT细胞凋亡中的作用

目的 观察在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）作用下甲状腺髓样癌TT细胞自噬发生情况,明确自噬在TRAIL诱导甲状腺癌TT细胞凋亡中的作用.方法 采用MTT法检测细胞增殖抑制率;MDC染色检测自噬的发生情况;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测相关蛋白的表达.结果 ①MTT实验显示：TRAIL对TT细胞增殖抑制作用弱,在浓度为250、500、1000、2000 ng/ml的TRAIL作用48 h后对TT细胞增殖抑制率分别为（3.02±1.82）％、（4.87±1.45）％、（7.51±1.57）％及（12.76±3.23）％;②TRAIL作用48 h后,胞内代表自噬小体的绿色荧光亮点明显增多,且随TRAIL浓度的增加而增加;③3-MA预处理TT细胞4h,TRAIL 500 ng/ml及1000 ng/ml的凋亡率分别为（17.83 ±1.54）％及（27.81±1.79）％,明显高于单用TRAIL（3.70±0.34、6.55 ±0.59）％与3-MA （7.71±0.64）％之和,差异有统计学意义（t=3.282,P＜0.05;t=7.830,P＜0.01）.④各实验组可见明显的caspase-8的活化裂解片段,自噬相关蛋白Beclin 1的表达明显减低.结论 甲状腺髓样癌TT细胞对TRAIL不敏感,TRAIL能诱导TT细胞内自噬发生,抑制自噬可明显改善TT细胞对TRAIL的敏感性.     

5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响

目的观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-aza-2-′deoxyc ityd ine,5-Aza-CdR）对体外培养的膀胱癌EJ细胞增生、细胞周期影响及其对此细胞株中Apaf-1基因的甲基化状态的影响。方法不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养膀胱癌EJ细胞后,用MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理72 h后的细胞周期分布;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;Real-time RT-PCR法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA表达变化。结果2×10^-6、5×10^-6、1×10^-5mol/L 5-Aza-CdR处理膀胱癌EJ细胞24、48、72 h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量依赖性。流式细胞仪分析表明,不同药物浓度处理EJ细胞72 h后细胞增殖指数降低明显：5×10^-6、1×10^-5mol/L组分别为（34.09±0.79）、（28.55±1.76）,与对照组（42.78±1.23）相比,差异有统计学意义（P〈0.05）。在5-Aza-CdR处理前未检测到膀胱癌EJ细胞系的Apaf-1基因的mRNA表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在膀胱癌EJ细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA重新表达。结论5-Aza-CdR对膀胱癌EJ细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。