苦参碱对PC12细胞的毒性及线粒体损伤机制

目的研究苦参碱(MT)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的毒性作用及其机制。方法用MT 2,4和8 mmol·L-1分别作用PC12细胞8,16,24和48 h,MTT法测定细胞存活率。PC12细胞经上述浓度的MT作用24 h后,采用Hoechst33342荧光染色法观察细胞形态变化,采用羟胺法和硫代巴比妥酸(TBA)法分别检测PC12细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(MMP)的改变,Western蛋白印迹法检测胱天蛋白酶原3、胱天蛋白酶原9、活化的胱天蛋白酶3、Bax和Bcl-2蛋白水平。结果随着作用时间及浓度的增加,MT对PC12细胞的抑制作用逐渐增强。MT作用24 h后,与正常对照组相比,MT 2,4和8 mmol·L-1组的细胞数减少,出现染色质凝集和部分破裂的现象,且给药组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01);细胞内ROS和MDA含量显著增加(P<0.05,P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),且MMP降低;细胞内胱天蛋白酶原9、胱天蛋白酶原3和Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01,P<0.05),活化的胱天蛋白酶3和Bax蛋白水平显著上升(P<0.05,P<0.01);且Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01)。结论 MT对PC12细胞具有一定毒性作用,其机制可能与细胞内活性氧堆积而引起线粒体途径诱导细胞凋亡有关。     

7,8-二羟基-4-甲基香豆素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨7,8-二羟基-4-甲基香豆素(Dhmc)对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤凋亡模型,给予Dhmc处理后,MTT法检测细胞增殖;化学检测法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞上清液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;采用荧光法检测活性氧(ROS)的生成;采用流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cyt C、cleaved caspase-3蛋白表达。结果 Dhmc可显著降低由谷氨酸诱导的细胞损伤,提高了细胞存活率,减少LDH漏出量,降低MDA含量,增加SOD活性,抑制ROS的生成,维持线粒体膜电位水平,下调Bcl-2/Bax比率,减少Cyt C的释放,降低Caspase-3活性。结论 Dhmc具有减轻由谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的作用,其机制可能与抗氧化应激和减轻线粒体损伤有关。     

己酮可可碱联合骨髓间充质干细胞对高糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞凋亡及氧化应激的影响

目的探讨己酮可可碱(PTX)联合骨髓间充质干细胞(MSC)对高糖诱导下小鼠肾小球系膜细胞凋亡和氧化应激的影响。方法葡萄糖30 mmol·L~(-1)刺激培养12 h的小鼠肾小球系膜细胞,肾小球系膜细胞分为细胞对照组、高糖组、高糖+MSC组(高糖系膜细胞与MSC按1∶10共培养)、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组,孵育48 h。酶联免疫法检测系膜细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量;流式细胞术检测系膜细胞凋亡;Western印迹法检测系膜细胞中Bcl-2,Bax,胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平。结果与细胞对照组相比,高糖组系膜细胞的SOD活性显著降低,MDA和ROS含量显著升高(P<0.01)。与高糖组相比,高糖+MSC组、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组SOD活性显著升高,MDA和ROS含量显著降低(P<0.01)。与细胞对照组相比,高糖组细胞凋亡率显著升高(P<0.01);Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平显著升高(P<0.01),但Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与高糖组相比,高糖+MSC组、高糖+MSC+PTX 0.1,0.3和1.0 mmol·L~(-1)组细胞凋亡率显著降低(P<0.01);Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶8和胱天蛋白酶9蛋白表达水平显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论 PTX联合MSC可通过减少肾小球系膜细胞凋亡以及抑制其氧化应激来改善糖尿病肾病。     

芪苈强心胶囊通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡

目的探讨芪苈强心胶囊对氧化应激损伤心肌细胞线粒体途径凋亡的作用及机制。方法动物实验:通过结扎SD大鼠左冠状动脉前降支建立心梗后慢性心力衰竭(慢性心衰)大鼠模型,按分组分别灌胃给予芪苈强心超微粉(QLQX)或生理盐水4周。彩超检测心功能,ELISA法及荧光法检测血清乳酸脱氢酶(LDH)释放水平、活性氧(ROS)表达水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性,TUNEL检测心肌细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白表达水平及信号通路相关因子p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β表达相对比。细胞实验:使用H9c2心肌细胞给予或不给予QLQX或PI3K抑制剂LY294002,然后暴露于H2O2中共孵育24 h,MTS检测H9c2细胞生存活性,检测LDH和ROS表达水平及SOD活性,QRT-PCR法检测血红素氧合酶(HO-1)和过氧化氢酶(CAT)mRNA表达水平。流式细胞术测H9c2细胞凋亡率,Western印迹法测凋亡相关蛋白及信号通路相关因子蛋白表达水平。同时评估线粒体分裂、线粒体通透性转运孔(m PTP)开放和线粒体膜电位(MMP)水平。结果动物实验结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠血清LDH和ROS水平显著增加,SOD活性降低(P<0.01);心肌细胞凋亡率明显增加,促凋亡蛋白Bax、细胞色素c、凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)、活化胱天蛋白酶9、活化胱天蛋白酶3蛋白表达水平升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达水平、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β蛋白表达相对比降低(P<0.01),心功能下降(P<0.01)。给予不同剂量QLQX后均不同程度降低心衰大鼠血清LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性(P<0.05);抑制心肌细胞凋亡率及促凋亡蛋白表达,升高Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT和p-GSK3β/GSK3β相对比,提高心衰大鼠心功能(P<0.05)。细胞实验结果显示,与H2O2组相比,QLQX促进H2O2损伤H9c2心肌细胞24 h后细胞增殖,抑制LDH释放水平和ROS表达水平,升高SOD活性、HO-1及CAT mRNA表达水平(P<0.01);抑制H9c2细胞凋亡率,下调上述促凋亡蛋白表达水平,上调Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT及p-Gsk3β/Gsk3β相对比(P<0.01)。同时,QLQX抑制H2O2损伤H9c2细胞线粒体分裂、mPTP开放及MMP下降(P<0.01)。然而,QLQX改善氧化应激诱导H9c2心肌细胞线粒体损伤及凋亡作用可被PI3K抑制剂LY294002阻断。结论 QLQX可能通过激活PI3K/AKT/Gsk3β通路延缓氧化应激损伤心肌细胞线粒体依赖性凋亡。     

亚硫酸氢钠穿心莲内酯对人肾小管上皮HK-2细胞的毒性作用（英文）

目的探讨亚硫酸氢钠穿心莲内酯(ASB)对人肾小管上皮细胞HK-2的细胞毒性作用。方法HK-2细胞在DMEM/F12培养液培养24 h后,在经ASB作用2 h前,分别加入N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)10 mmol·L-1、2-氨基-4(丁基磺酸亚氨)-丁酸(BSO)2 mmol·L-1及30 min前分别加入过氧化氢酶(CAT)1000 U·L-1、环孢素A(Cs A)50μmol·L-1,再经ASB作用24 h,MTT法检测细胞存活率;用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)、总ATP酶(T-ATP)活性;流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、线粒体膜电位(MMP)和活性氧(ROS);Western蛋白质印迹法检测胱天蛋白酶酶原3、Bcl-2、Bax和细胞色素c(Cyt c)蛋白的表达。结果 ASB呈浓度依赖性地抑制HK-2细胞增殖,作用24和48 h后IC50值分别为19.1±3.6和(11.6±3.9)g·L-1。ASB 20 g·L-1处理HK-2细胞24 h后,G2/M期细胞由对照组的(23.3±1.0)%增至(37.0±0.8)%(P<0.01)。与正常对照组相比,ASB组LDH漏出率和ROS水平明显增加,MMP呈下降趋势;与ASB 20 g·L-1组相比,加入还原剂NAC后,细胞存活率和MMP水平明显增加(P<0.05),LDH和ROS水平明显降低(P<0.05);加入Cs A后,细胞存活率显著降低(P<0.01),LDH和细胞内ROS水平明显增加(P<0.05)。随着ASB浓度增加,HK-2细胞上清液中的MDA水平明显增加,GSH,SOD和T-ATP酶活性逐渐减弱;同时细胞内胱天蛋白酶原3、Bax和Cyt c蛋白表达升高。结论 ASB对HK-2细胞的毒性作用可能是通过干扰HK-2细胞线粒体能量代谢,改变细胞内氧化还原状态,耗竭细胞内GSH和SOD,导致细胞内ROS大量堆积,引发脂质过氧化作用,破坏细胞膜的通透性,导致Cyt c等凋亡因子从线粒体释放,进而引发细胞凋亡或坏死。     

瓜子金皂苷丙对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的观察瓜子金皂苷丙对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响,并且探讨其作用机制。方法采用MTT法检测细胞存活率,碘化丙啶染色流式细胞术(FCM)检测PC12细胞凋亡,Western blotting检测Bax和Bcl-2蛋白的表达,罗丹明123染色FCM检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm),荧光酶标仪检测细胞内活性氧(R0S)的含量。结果不同浓度MPP+作用PC12细胞24 h后,细胞存活率显著下降(P<0.01),细胞凋亡明显,凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比之下降,线粒体膜电位降低,细胞内ROS显著增加。与MPP+处理组相比,瓜子金皂苷丙10μmol·L-1组,细胞存活率显著升高(P<0.01);细胞凋亡率下降(P<0.01);Bcl-2/Bax比率增加(P<0.01),线粒体膜电位上升(P<0.01),ROS含量减少。结论瓜子金皂苷丙可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机理可能与上调Bcl-2和下调Bax蛋白的表达,维持线粒体正常膜电位,稳定线粒体功能,清除R0S有关。     

Bcl-2介导的芹菜素抗心肌细胞缺氧/复氧损伤作用

目的探讨芹菜素(apigenin,Api)在心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用,并阐明Api对心肌损伤的保护作用是否主要由Bcl-2介导。方法培养H9c2心肌样细胞;随机分为正常对照(Cont)组、缺氧/复氧(Anoxia/Reoxygenation,A/R)组、Api预处理组、Api+ABT-737组。MTT法检测细胞存活率;Western blot法检测Bcl-2表达;比色法检测培养液LDH活性、细胞SOD及GSH-Px活性、MDA含量;流式细胞仪检测心肌细胞ROS含量、线粒体膜电位及细胞凋亡。结果 Api预处理25 h后,心肌细胞Bcl-2表达呈剂量依赖性上调(P<0.01);细胞存活率升高,培养液LDH活性降低,细胞SOD、GSH-Px活性升高,MDA含量与ROS生成减少,线粒体膜电位更为稳定,细胞凋亡减少(P<0.01);Bcl-2抑制剂ABT-737则可取消Api的上述心肌保护作用。结论Api抗心肌A/R损伤作用涉及Bcl-2信号通路,至少部分依赖于其对Bcl-2表达水平的上调。     

基于Nrf2信号通路的三七总皂苷对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用机制研究

目的探讨三七总皂苷对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及分子机制。方法利用Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤模型,MTT法检测PC12细胞活力,试剂盒测定LDH漏出量、ROS水平、MDA含量、Caspase-3活力以及抗氧化酶SOD、CAT和GHS-Px活力,TUNEL染色检测细胞凋亡,JC-1染色观察线粒体膜电位,Western blot检测相关蛋白HO-1、Lamin-B、细胞核内Nrf2及总Nrf2的蛋白表达。结果三七总皂苷能够明显抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞活力下降(P<0.01)和LDH漏出(P<0.01),减少ROS和MDA的产生(P<0.01),增加SOD、CAT和GSH-Px活力(P<0.01),稳定线粒体膜电位,抑制caspase-3的活化(P<0.01)。而且,三七总皂苷还能够上调PC12细胞细胞核Nrf2、总Nrf2和细胞质中HO-1的蛋白表达。HO-1抑制剂Sn PP能够抑制三七总皂苷的神经保护作用。结论三七总皂苷可能通过上调Nrf2/HO-1信号通路,从而抑制Aβ25-35诱导PC12细胞氧化应激和凋亡。     

一氧化氮供体PABA/NO经线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡

目的研究新型一氧化氮(NO)供体,O~2-{2,4-二硝基-5-[4-(N-甲基氨基)苯甲酰氧基]苯基}-1-(N,N-二甲基氨基)偶氮-1-鎓-1,2-二醇(PABA/NO)对人肝癌细胞凋亡的影响。方法 PABA/NO 7.5,15.0和30.0μmol·L~(-1)处理细胞24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,倒置显微镜下检测细胞形态,DAF-FM DA荧光染色法检测细胞内NO水平,膜联蛋白(Annexin)Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rh123)染色法检测细胞线粒体膜电位,Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax、活化胱天蛋白酶3、细胞色素c(Cyt c)和凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达。结果与细胞对照组比较,PABA/NO可显著抑制HepG2细胞存活,24 h时IC50值为(10.8±0.6)μmol·L~(-1);形态上出现胞膜皱缩、细胞扁圆等变化;细胞内NO水平提高,荧光强度分别为121±9(P<0.05),174±31(P<0.05)和230±43(P<0.01);凋亡率由原来的(2.9±0.5)%增加至(17.0±4.5)%,(39.8±5.4)%和(74.3±45.2)%(P<0.01);细胞内Rh123的荧光强度由原来的668±69下降到605±73,420±65(P<0.05)和242±47(P<0.01);PABA/NO引起Bcl-2表达下调(P<0.01)、Bax及活化胱天蛋白酶3表达上调,胞浆中Cyt c的表达由原来的0.15±0.04升高到0.27±0.06(P<0.05),0.38±0.07(P<0.01)和0.82±0.16(P<0.01)。胞核中AIF的表达由原来0.183±0.032升高至0.231±0.011,0.682±0.020(P<0.01)和0.966±0.090(P<0.01)。加入NO清除剂羧基(carboxy)-PTIO后,可逆转PABA/NO引起的Bcl-2表达下调,对Bax、活化胱天蛋白酶3、胞浆中Cyt c和胞核中AIF蛋白表达的上调也有一定的逆转作用(P<0.01)。结论 PABA/NO可能经线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

黄芪甲苷对甲基乙二醛诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用研究

目的研究黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对甲基乙二醛(MGO)诱导的人视网膜色素上皮细胞损伤的保护作用及分子机制。方法利用MGO诱导ARPE-19细胞损伤,CCK-8法检测细胞活力,Hoechst 33342染色法观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒测定细胞内活性氧(ROS)水平、超氧化物歧化酶(SOD)水平和脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,JC-1染色法观察线粒体膜电位的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax和PARP蛋白的表达量,荧光酶标法检测caspase家族蛋白caspase-9和caspase-3的活化水平。结果MGO能剂量依赖性地降低ARPE-19的细胞活力,AS-Ⅳ预处理能够明显逆转MGO引起的细胞活力下降(P<0.05),改善细胞核形态,减少细胞凋亡,减少ROS和MDA的产生(P<0.05),增加SOD活力(P<0.05),抑制线粒体膜电位的下降,提高Bcl-2/Bax蛋白表达率(P<0.05)和PARP的表达水平,降低caspase-9和caspase-3的活化水平(P<0.05)。结论 AS-Ⅳ对MGO损伤的ARPE-19细胞有明显的保护作用,其作用机制是提高细胞抗氧化能力,调节线粒体通路蛋白的表达,从而抑制细胞凋亡。     

神经妥乐平对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用

目的 探索神经妥乐平对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响及其潜在机制.方法 用CCK-8法检测细胞存活率,以流式细胞术检测细胞氧化损伤的发生、细胞内活性氧的生成及线粒体膜电位的变化,荧光显微镜观察细胞内活性氧的产生,qRT-PCR测定Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA的表达.结果 PC12细胞存活率随H2O2浓度的增加而逐渐下降.其中,450μM H2O2处理细胞24 h后细胞存活率、凋亡率、坏死率明显降低;细胞内活性氧水平表达明显升高;线粒体膜电位JC-1红/绿荧光比值下降;Bax和Caspase-3的mRNA表达升高,而Bcl-2的mRNA表达下降,以上指标与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而预先给予0.01UN/ml的NTP处理细胞12h可明显提高细胞存活率,降低细胞凋亡率和坏死率,减少细胞内活性氧生成并提高线粒体膜电位,抑制Bax和Caspase-3的mRNA表达,促进Bcl-2 mRNA的表达,以上指标与H2O2组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NTP能抑制H2O2诱导的PC12细胞损伤,其神经细胞保护作用可能与其降低细胞内活性氧水平、维持线粒体膜电位的高能状态和抑制促凋亡基因表达、促进抗凋亡基因表达有关.     

姜黄素对Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和线粒体途径细胞凋亡的抑制作用

目的探讨姜黄素对Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和凋亡的抑制作用。方法采用体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分为溶剂对照组、Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组、Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)+姜黄素1,5和10μmol·L~(-1)保护组及姜黄素10μmol·L~(-1)对照组;噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,酶活性法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量以考察细胞损伤程度;AnnexinⅤ-FITC/PI染色法测定细胞凋亡;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;比色法测定胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3的活性;Western蛋白印迹法检测胱天蛋白酶3表达。结果与溶剂对照组比,Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组细胞存活率显著降低(P<0.01)。与Aβ_(1-42)10μmol·L~(-1)损伤组比较,姜黄素5和10μmol·L~(-1)缓解了Aβ_(1-42)诱导的细胞存活率下降(P<0.05),降低了Aβ_(1-42)诱导的乳酸脱氢酶释放水平(P<0.01)和细胞早期及晚期凋亡率(P<0.01)。姜黄素抑制了Aβ_(1-42)诱导的细胞线粒体膜电位去极化作用(P<0.01);姜黄素1~10μmol·L~(-1)抑制了Aβ_(1-42)诱导的胱天蛋白酶9及胱天蛋白酶3级联激活作用,且呈浓度依赖性(r=0.990,P<0.01;r=0.996,P<0.01)。姜黄素10μmol·L~(-1)对照组以上指标与溶剂对照组无明显差异。结论姜黄素可能通过升高线粒体膜电位、降低胱天蛋白酶活性抑制Aβ_(1-42)诱导的细胞损伤和线粒体途径细胞凋亡。     

雷公藤甲素诱导人肝细胞凋亡的机制

目的 探讨雷公藤甲素诱导人肝细胞L-02凋亡的机制.方法 将L-02细胞分为对照组和雷公藤甲素50 nM实验组,处理48 h后,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率、活性氧(ROS)的荧光强度,试剂盒检测细胞色素C的浓度以及半胱天冬氨酸蛋白酶9(Caspase-9)和Caspase-3的活性,Western blot检测细胞中B细胞淋巴瘤-白血病2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)的表达.结果 与对照组相比,实验组细胞存活率下降,细胞凋亡率上升,Bcl-2表达下调,Bax表达、细胞色素C浓度、ROS荧光强度、Caspase-9和Caspase-3活性均明显上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 雷公藤甲素可以抑制L-02细胞的存活,通过激活线粒体凋亡途径促进L-02细胞凋亡,下调Bcl-2与Bax比率,促进细胞色素C释放,诱导ROS生成,进一步破坏线粒体膜,增加细胞色素C的释放,激活Caspase-9和Caspase-3介导的细胞凋亡通路,最终诱导细胞凋亡.     

7-羟乙基白杨素对低压缺氧致PC12细胞损伤的改善作用及机制

目的 探讨7-羟乙基白杨素(7-HEC)对低压缺氧致PC12细胞损伤的改善作用及可能机制。方法 以大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞系PC12为对象，以低压缺氧(5%CO₂、94%N₂、1%O₂、54 004 Pa)条件培养，考察不同浓度7-HEC(100、10、1、0.1、0.01μmol/L)对低压缺氧细胞存活率的影响；检测7-HEC(1μmol/L)对低压缺氧细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性，凋亡率，周期，以及细胞中活化的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响。结果 与对照组比较，低压缺氧组细胞的存活率显著降低(P<0.01);10、1、0.1μmol/L的7-HEC可逆转低压缺氧导致的细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较，低压缺氧组细胞上清液中LDH含量、细胞中MDA含量、凋亡率、G₁期细胞比例和细胞中cleaved caspase-...     

孪药ST-11对氧糖剥夺/再灌注致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的 研究川芎嗪-灯盏乙素苷元孪药ST-11对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)致大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用及机制。方法 将细胞分为空白组、模型组、尼莫地平组(阳性对照,5μmol/L)、ST-11不同浓度组(5、10、20μmol/L)。预先给药干预24 h后,除空白组外的其余各组细胞均以含10 mmol/L Na₂S₂O₄的无糖DMEM培养基缺糖缺氧培养4 h,待复糖复氧培养4 h后,检测各组细胞的存活率,细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,细胞凋亡率,细胞活性氧(ROS)和线粒体膜电位(MMP)水平,以及B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)及胱天蛋白酶3(caspase-3)蛋白的表达情况。结果 与空白组比较,模型组的细胞存活率,上清液中CAT、GSH和SOD含量,细胞MMP水平,细胞Bcl-2蛋白的相对表达量和Bcl-2/Bax比值均显著降低(P<0.05),而上清液中L...     

线粒体通路在大戟大枣汤对乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及凋亡诱导中的调控作用

目的探讨大戟大枣汤(DEFSJ)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用及其相关机制。方法 SPF级SD大鼠每天2次分别ig给予溶剂(生理盐水)、DEFSJ 2.5,5.0和10.0 g·kg~(-1),共3 d。末次给药1 h后,腹主动脉采血,分离制备DEFSJ含药血清(DEFSJ-CS)。乳腺癌MCF-7细胞分别用对照血清、DEFSJ-CS 2.5,5.0和10.0 g·kg~(-1)及紫杉醇8 mg·L~(-1)处理48 h。用甲基纤维素克隆形成实验检测细胞克隆能力;JC-1染色后激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Bcl-2,Bax和Bim mRNA表达水平;免疫荧光法检测Bcl-2,Bax和Bim蛋白表达水平。结果与含溶剂(生理盐水)血清对照组相比,DEFSJ-CS 2.5,5.0和10.0 g·kg~(-1)组及紫杉醇组人乳腺癌MCF-7细胞克隆形成率显著降低(P<0.05,P<0.01);MCF-7细胞线粒体膜电位显著降低(P<0.01);细胞内ROS含量显著升高(P<0.01);Bcl-2基因和蛋白的表达下调,Bax和Bim基因和蛋白的表达上调(P<0.05,P<0.01)。结论细胞内线粒体通路参与调控DEFSJ抑制MCF-7细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用。     

滇乌碱通过线粒体凋亡途径致大鼠心肌损伤的研究

目的 研究滇乌碱对大鼠心肌损伤的影响及其线粒体凋亡途径相关机制。方法 采用随机数字表法将40只SD大鼠随机分为正常组（生理盐水）,滇乌碱高、低剂量组（0.14、0.09 mg/kg）,乌头碱组（阳性对照,0.88 mg/kg）,每组10只,每天灌胃给药1次,连续7 d。检测大鼠血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平和心肌组织中活性氧（ROS）水平,观察大鼠心肌组织病理形态学和心肌组织线粒体超微结构变化情况,检测大鼠心肌细胞凋亡情况,检测大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶9(caspase-9)、活化的胱天蛋白酶9(cleaved-caspase-9)、caspase-3和cleaved-caspase-3蛋白相对表达水平。结果 与正常组比较,滇乌碱高、低剂量组大鼠血清中LDH、CK、CK-MB、MDA水平和心肌细胞凋亡数量及心肌组织中ROS水平、caspase-3蛋白表达水平均显著升高/增加（P<0.05或P<0.01）,血清中SOD水平和...     

羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯通过调控线粒体凋亡途径诱导HepG2细胞凋亡

目的 探究羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯对HepG2细胞凋亡的作用及机制。方法 采用0、2.5、5、10、20、40、80μmol/L的羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯作用于HepG2细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活性。采用0、4、8、16μmol/L的羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯作用于HepG2细胞48 h后,AO/EB染色法和Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞的凋亡率;JC-1染色法观察HepG2细胞的线粒体膜电位变化;DCFH-DA染色法观察细胞的活性氧（ROS）水平。Western blotting法检测各组细胞线粒体凋亡途径相关蛋白表达变化。结果 羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯呈时间和浓度相关性地抑制HepG2细胞增殖（P<0.01）。与对照组相比,羽扇豆醇-3β-琥珀酸酯组细胞的ROS水平、总凋亡率、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞色素C、裂解半胱氨酸蛋白酶9(cleaved-Caspase-9)、cleaved Caspase-3蛋白水平呈浓度相关性升高（P<0.01、0.001）;线粒体的膜电位、Bcl-2蛋白表达则显著降低（P&...     

异鼠李素对H_2O_2引起的H9C2细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的探讨异鼠李素对氧化应激诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法用MTT实验确定异鼠李素的心肌细胞毒作用浓度,以及抗H2O2氧化应激损伤的最佳作用浓度。将实验组分为正常组、模型组、治疗组、单给药组。治疗组、单给药组均用最佳浓度的异鼠李素预孵育12h,模型组、治疗组在预孵育结束后用300μmol·L-1H2O2作用4 h,模拟心肌细胞的氧化应激损伤。利用流式细胞术检测心肌细胞凋亡细胞比例、ROS产生等指标,利用荧光显微镜检测细胞的线粒体膜电位去极化,利用荧光酶标仪检测抗氧化酶与氧化产物MDA产量,利用Western blot检测线粒体凋亡信号通路与Nrf2/ARE信号通路的相关蛋白表达。结果与正常组相比,单给药组心肌细胞的凋亡细胞比例,ROS产生,线粒体膜电位去极化,细胞质细胞色素C、caspase-9、caspase-3、Bcl-2、Bax表达,抗氧化酶与氧化产物MDA产量差异均无显著性(P>0.05);与模型组相比,治疗组心肌细胞凋亡比例明显降低(P<0.01),ROS产生明显降低(P<0.05),线粒体膜电位去极化明显改善(P<0.01),细胞质细胞色素C、caspase-9、caspase-3、Bax表达明显降低(P<0.01),Bcl-2表达增加(P<0.01),抗氧化酶表达增加(P<0.01),氧化产物MDA表达降低(P<0.01);心肌细胞中Nrf2核转位与HO-1表达均随着异鼠李素预孵育时间的延长而增加。结论异鼠李素能够保护H2O2引起的心肌细胞损伤。其机制为影响线粒体凋亡通路以及激活Nrf2/ARE信号通路,实现抗氧化、抗凋亡功能。     

八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制研究

目的 研究八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制。方法 将H9c2细胞分为空白组、模型组和八味沉香散低、中、高剂量组（含药血清剂量依次为2.5、8、12 g/kg）。体外培养H9c2细胞并建立氧糖剥夺损伤模型,含药血清干预后检测细胞存活率,观察细胞形态,检测生化指标乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、呼吸链复合酶Ⅰ（ComplexⅠ）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）水平,检测细胞内活性氧（ROS）含量、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,检测氧化应激相关蛋白[Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、NADH氧化还原酶辅酶10(Ndufa10)、硫氧还蛋白（Trx）]、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和细胞色素C(Cytc)]的表达。结果 与空白组比较,模型组细胞形态破损,LDH、CK和MDA水平均显著升高（P<0.01）,CAT、ComplexⅠ、SOD...