CD147及MMP-2在胶质细胞瘤中的表达及意义

目的研究CD147、MMP-2在胶质细胞瘤中的蛋白质表达及其相关性,探讨CD147、MMP-2在胶质细胞瘤侵袭行为中的作用,从而进一步阐明胶质细胞瘤侵袭性的分子机制,为其诊治提供理论依据。方法应用免疫组织化学S-P法检测60例不同病理分级人脑胶质细胞瘤和10例正常脑组织标本中CD147、MMP-2的蛋白表达,测定其阳性细胞数,分析该三项指标与胶质细胞瘤侵袭性的关系。结果 （1）CD147在正常脑组织中无表达（0/10）,在胶质细胞瘤组织中阳性表达率为56.7%（34/60）,两者间表达差异具有显著性（P〈0.01）;CD147在不同病理分级胶质瘤中阳性表达率分别为Ⅰ级35.7%,Ⅱ级43.8%,Ⅲ级66.7%,Ⅳ级80%,与胶质瘤的恶性程度呈正相关（rs=0.5835,P〈0.05）。（2）MMP-2在正常脑组织中无表达（0/10）,在胶质细胞瘤组织中阳性表达率为63.3%（38/60）,两者间表达差异具有显著性（P〈0.01）;MMP-2在不同病理分级胶质瘤中阳性表达率分别为Ⅰ级35.7%,Ⅱ级50%,Ⅲ级80%,Ⅳ级86.7%,与胶质瘤的恶性程度呈正相关（rs=0.6454,P〈0.05）。（3）CD147、MMP-2在胶质细胞瘤中的表达具有相关性（P〈0.01）。结论 CD147、MMP-2与胶质细胞瘤的恶性程度呈正相关,在胶质细胞瘤的侵袭性生长中起着协同作用,共同参与胶质瘤的侵袭性生长。CD147、MMP-2可以作为临床判断胶质细胞瘤恶性程度、侵袭性及预后的有效参考指标。     

乳腺浸润性导管癌组织中CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的表达

目的:检测乳腺浸润性导管癌组织中CD147、MMP-9及AnnexinⅡ蛋白的表达。方法:应用免疫组织化学SP法检测60例乳腺浸润性导管癌组织及60例乳腺纤维腺瘤组织中CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的表达,并分析3者与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系。结果:乳腺浸润性导管癌组织中CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的阳性表达率分别是91.7%、86.7%及90.0%,明显高于各自在乳腺纤维腺瘤组织中的表达率(6.7%、6.7%及3.3%,P<0.001);伴有淋巴结转移的浸润性导管癌组织中CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的表达率明显高于无淋巴结转移组(P<0.05);组织学分级越高,以上3种蛋白的表达率越高(P<0.05)。结论:CD147、MMP-9和AnnexinⅡ蛋白的异常高表达可能促进了乳腺浸润性导管癌的发展。     

CD147、MMP-2在人脑胶质瘤中的表达及其与预后的关系

目的 探讨CD147和基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)在胶质瘤中的表达,及其与胶质瘤预后的关系.方法 采用免疫组化SP法检测50例胶质瘤标本中CD147和MMP-2蛋白的表达,采用RT-PCR对各级别胶质瘤中CD147的mRNA进行半定量分析,并结合随访资料进行分析.结果 胶质瘤标本中CD147蛋白阳性表达率为72.0%,MMP-2蛋白阳性表达率为78.0%,二者联合表达率70.0%,CD147蛋白的表达与MMP-2蛋白的表达之间存在正相关(r=0.737,P＜0.01),RT-PCR检测到各级别胶质瘤标本中均有CD147 mRNA的表达;且随着胶质瘤级别增高,CD147和MMP-2蛋白的表达强度增高,CD147 mRNA表达水平也增高.预后分析证实CD147的表达越高,患者生存期越短.结论 CD147和MMP-2的表达与胶质瘤的恶性程度及预后关系密切,二者可作为胶质瘤患者判断临床预后和制定诊疗计划有意义的参考指标.     

P21和survivin蛋白在脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义

目的:探讨不同级别人脑胶质瘤组织和正常脑组织中P21和survivin蛋白的表达情况,分析其临床意义。方法:按2007年WHO制定的病理分级标准,将41份脑胶质瘤组织标本分为Ⅰ级9份、Ⅱ级14份、Ⅲ级10份和Ⅳ级8份,另外12份正常脑组织作为对照组,采用免疫组织化学法检测脑胶质瘤和正常脑组织中P21和survivin蛋白的表达情况,并分析两者表达的关系。结果:在正常脑组织和脑胶质瘤组织中P21及survivin蛋白阳性表达率分别为91.7%和53.7%及0%和51.2%,不同组织中P21和survivin蛋白的阳性表达率比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Ⅰ-Ⅱ和Ⅲ-Ⅳ级脑胶质瘤组织中P21蛋白阳性表达率分别为69.6％及33.3%,而survivin蛋白阳性表达率分别为34.8%和72.2%,Ⅲ-Ⅳ级脑胶质瘤组织中P21蛋白阳性表达率明显低于Ⅰ-Ⅱ级,而survivin蛋白的阳性表达率明显高于Ⅰ-Ⅱ级(P<0.05)。结论:P21蛋白的表达缺失和survivin蛋白的过度表达与脑胶质瘤恶性程度有关联,P21蛋白有抑制脑胶质瘤发生发展的作用,而survivin蛋白在脑胶质瘤的恶变过程中起促进作用。     

survivin在脑胶质瘤中的表达及其与bcl-2、bax相关性的研究

目的:探讨凋亡抑制基因survivin在脑胶质瘤中的表达,及其与bcl-2、bax蛋白表达的相关性.方法:应用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接法(SP法),检测40例脑胶质瘤瘤组织中survivin、bcl-2、bax蛋白的表达,与正常脑组织10例进行对照.结果:胶质瘤中survivin蛋白阳性表达率为42.5%,明显高于正常脑组织的阳性表达率0%(P＜0.05),其中Ⅲ级、Ⅳ级阳性表达率分别为50.0%、80.0%,明显高于Ⅰ～Ⅱ级的阳性表达率16.7%(P＜0.01);survivin蛋白表达与bcl-2蛋白表达呈正相关(P＜0.01),而与bax蛋白表达呈负相关(P＜0.05).结论:survivin可通过抑制肿瘤细胞凋亡,对脑胶质瘤的发生、发展起作用;survivin可能与凋亡相关基因bcl-2、bax在脑胶质瘤的发展中分别起协同和拮抗作用.     

IMP3蛋白及Ki-67在脑胶质瘤中的表达及临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子IImRNA结合蛋白3(IMP3蛋白)及Ki-67在脑胶质瘤中的表达以及临床意义。方法选取我院2008年1月至2012年10月手术切除的不同级别的胶质瘤60例(Ⅰ级5例,Ⅱ级20例,Ⅲ级20例,Ⅳ级15例)及5例正常脑组织,应用免疫组化Envision二步法检测IMP3蛋白及Ki-67在不同级别胶质瘤中的表达,分析二者与胶质瘤恶性程度的关系以及二者的相关性。结果 IMP3在胶质瘤各级别的表达中有统计学意义(χ2=41.17,P<0.05),其中胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级阳性表达率明显高于Ⅰ~Ⅱ级(91.4%vs8%,χ2=41.34,P<0.05)。胶质瘤标本的Ki-67指数(Ki-67LI)范围为0%~50%,在胶质瘤各级别的表达中有统计学意义(χ2=29.80,P<0.05),其中胶质瘤Ⅲ~Ⅳ级阳性表达率明显高于Ⅰ~Ⅱ级(91.4%vs 20%,χ2=50.29,P<0.05)。IMP3蛋白的阳性表达率与Ki-67蛋白的阳性表达率有正相关性(r=0.774,P<0.05)。结论 IMP3及Ki-67在脑胶质瘤中的表达均与胶质瘤的恶性程度呈正相关,二者联合应用可作为评价胶质瘤级别的重要参考指标。     

人脑胶质瘤中Bcl-2蛋白及Fas受体表达的研究

目的:探讨凋亡基因bcl-2与凋亡信号受体FasR在胶质瘤中的表达以及与胶质瘤的发生和治疗的关系。方法:采用流式细胞术方法检测8例正常脑组织及36例胶质瘤组织中Bcl-2蛋白及FasR的表达水平。结果:正常脑组织中无Bcl-2蛋白及FasR的阳性表达,而胶质瘤组织中Bcl-2蛋白的阳性表达率为38.89%(14/36),FasR的阳性表达率为75%(27/36)。与低度恶性胶质瘤(WHOⅠ-Ⅱ级)相比,高度恶性胶质瘤(WHOⅢ-Ⅳ级)中Bcl-2蛋白的阳性表达率明显升高(P<0.05)。结论:胶质瘤中高表达Bcl-2蛋白及FasR,提示Bcl-2基因过度表达与胶质瘤的发生有关,并为Fas配体或Fas单克隆抗体治疗胶质瘤提供参考。     

PTEN、E-cd和MMP-9在人脑胶质瘤的表达和意义

目的 通过分析PTEN、E-cd和MMP-9在人脑胶质瘤中的表达,为胶质瘤的靶分子治疗提供依据.方法 采用免疫组织化学方法检测50例人脑胶质瘤和11例正常脑组织中的PTEN、E-cd蛋白和MMP-9的表达.分析人脑胶质瘤组织学分级之间的PTEN、E-cd蛋白和MMP-9的表达关系及胶质瘤与正常脑组织之阃的PTEN、E-cd蛋白和MMP-9的表达关系,并探讨其临床意义.结果 PTEN、E-cd在正常脑组织中的阳性表达为100%,PTEN在Ⅰ～Ⅱ级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为75%和38%,组织学分级之间有显著差异(P<0.05),与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);E-cd在Ⅰ～ⅡI级和Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤中阳性表达率分别为42%和23%,组织学分级之间差异无统计学意义(P>0.05),与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05);MMP-9在对照组阳性表达率为14%,在脑胶质瘤Ⅰ～Ⅱ级为33%,Ⅲ～Ⅳ级为62%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);对照组与神经胶质瘤组相比,MMP-9表达差异有统计学意义(P<0.05).结论 PTEN、E-cd、MMP-9在神经胶质瘤的生物学行为中起重要作用,且可能与其侵袭性有关.     

MMP-2，MMP-9，TIMP—1和TIMP-2在胶质瘤中的表达及临床意义

目的 探讨胶质瘤MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2的表达与其恶性程度及侵袭性之间的关系及临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2在45例不同恶性程度胶质瘤及10例正常脑组织中的表达.结果 MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2在胶质瘤细胞和内皮细胞的胞浆明显表达;不同恶性程度胶质瘤MMP-2和MMP-9的表达率分别为Ⅰ～Ⅱ级65.0%,45.0%,Ⅲ级86.7%,73.3%,Ⅳ级100.0%,80.0%,显著高于对照组脑组织（P〈0.01）,与胶质瘤恶性程度成正相关（P〈0.01）;TIMP-1 和TIMP-2的表达率分别为Ⅰ～Ⅱ级35.0%,45.0%,Ⅲ级40.0%,53.3%,Ⅳ级50.0%,70.0%,高于对照组（P〈0.05）,与胶质瘤恶性程度无相关性（P〉0.05）.结论 MMP-2 和MMP-9的表达与胶质瘤恶性程度密切相关,可作为临床判断胶质瘤恶性程度、侵袭性及预后的指标.     

皮肤鳞状细胞癌组织中CD147、MMP-9及TIMP-2蛋白的表达

目的:检测皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)蛋白的表达.方法:采用免疫组织化学SP法检测51例SCC,17例正常皮肤组织石蜡标本中CD147,MMP-9及TIMP-2蛋白的表达.结果:SCC组织中CD147,MMP-9蛋白的阳性表达率(65%和59%)明显高于正常皮肤(12%和18%,P<0.05),TIMP-2(37%)明显低于正常皮肤(76%,P<0.05).SCC组织中CD147的阳性表达率与MMP-9的阳性表达率呈正相关(r=0.466,P<0.05),与TIMP-2的阳性表达率呈负相关(r=-0.427,P<0.05).结论:在SCC的发生过程中CD147,MMP-9和TIMP-2起一定作用.     

EBV-LMP1基因杆状病毒表达载体的构建及其在昆虫细胞中的表达

目的：构建EBV-LMP1基因的杆状病毒重组供体质粒，包装重组LMP1的杆状病毒，感染昆虫细胞进行表达。方法：先将已克隆的LMP1 cDNA与线性化的pFastBACHTb进行连接，使pFASTBACHTb-LMP1与DHl0BAC感受菌进行转座重组，利用抗性及蓝白斑筛选重组Bacmid／LMPl克隆，提取Bacmid／LMP1转染昆虫细胞Sf9包装杆状病毒，利用病毒感染Sf9细胞进行蛋白表达，通过免疫荧光、SDS-PAGE和Western-blot检测表达情况。结果:获得了重组LMP1的杆状病毒，细胞能表达出与LMP1单抗结合的蛋白，分子量为63kDa左右，细胞可直接分泌LMP1蛋白至上清。结论:LMPl能在昆虫细胞中获得良好表达，为研究肿瘤疫苗及LMPl在EBV致瘤分子机理中的作用奠定了基础。     

人脂联素球状结构域基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达

目的 利用杆状病毒表达系统表达人脂联素球状结构域(gAd)基因.方法 以人基因组为模板,PCR法扩增人gAd基因,将gAd基因与供体质粒pFastBacHTB连接,转化含有穿梭载体:Bacmid的大肠杆菌DH10Bac.筛选转座成功的重组穿梭载体Bacmid-gAd,通过脂质体介导,转染昆虫细胞Sf9,经SDS-PAGE、免疫印迹法检测表达产物.结果 重组杆状病毒感染的Sf9细胞形态变化明显,SDS-PAGE电泳结果 显示,Bacmid-gAd组和对照组相比,在相对分子质量15 000～25 000之间多出一清晰的蛋白条带,免疫印迹法证实该条带能与相应的抗His标签抗体结合.结论 人gAd基因成功在真核细胞中表达,为后续的实验研究奠定了基础.     

利用杆状病毒表达载体系统表达重组乙型肝炎病毒核心蛋白

目的利用杆状病毒表达载体系统制备重组乙型肝炎病毒核心蛋白。方法构建含有HBVC基因的杆状病毒转移载体pFastBac Dual—HBV core，转化大肠埃希菌DH10Bac进行转座，提取重组Bacmid DNA转染昆虫细胞Sf9，获得含有HBVC基因的重组杆状病毒。用重组杆状病毒感染Sf9细胞进行乙型肝炎病毒核心蛋白表达，然后通过SDS-PAGE电泳和Western blot分析表达情况。结果成功构建了含HBVC基因的重组杆状病毒，而且在昆虫细胞Sf9中表达了乙型肝炎病毒核心蛋白。结论利用Bac to Bac杆状病毒表达系统，成功地表达了乙型肝炎病毒核心蛋白，为进一步研究奠定了基础。     

Fas、Fas—L和Bcl—2蛋白在胃癌的表达及其意义

目的：研究凋亡相关蛋白Fas、Fas-L和Bcl-2在胃癌中的表达及其意义。方法：应用免疫组化S－P法对10例正常胃粘膜、66例胃癌及28例癌旁组织进行检测。结果：①Fas、Fas-L和Bcl-2在胃癌中表达的阳性率分别为57.58％、50.00％和51.51％;在癌旁为80.14％、53.33％和28.57％;在正常胃粘膜中为100％、0％和0％;②Fas表达在I、II期组织明显高于III、IV期组,在无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移 组;③Fas-L和Bcl-2在肠型胃癌中的表达明显高于弥漫型胃癌;④肿瘤周围浸润的淋巴细胞有明显的Fas及Fas-L表达。结论：Fas的下调表达及Fas-L的上调表达在胃癌的发生发展中起重要作用,Fas-L和Bcl-2在肠型胃癌的发病机制中发挥重要的作用,Fas的表达对估计病人的预后 有一定的价值。     

部分喉切除术后喉狭窄瘢痕组织中TGF-β1和α-SMA的表达

[目的]研究喉狭窄瘢痕组织的病理变化,了解转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在喉狭窄瘢痕组织中表达及意义.[方法]垂直喉部分切除术后2～3个月出现喉狭窄10例和未狭窄16例喉瘢痕肉芽组织为实验组及1O例正常声带组织为对照组,进行免疫组化染色,观察组织切片中TGF-β1和α-SMA的表达,并在KONTRON IBAS 2.5全自动图像分析系统下进行阳性细胞计数.[结果]TGF-β1阳性表达主要分布于炎症细胞及成纤维细胞的胞浆,α-SMA阳性表达的主要分布于肌成纤维细胞胞浆.比较非狭窄喉瘢痕组织及正常声带组织,喉狭窄瘢痕组织的TGF-β1和α-SMA的表达均明显增强,阳性细胞数量差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]喉狭窄瘢痕组织的TGFβ1及α-SMA高表达,这些改变可能是喉狭窄发生重要内在因素.     

实验性病毒性心肌炎心肌MHCⅡ类抗原的表达

[目的]研究病毒性心肌炎(VMC)心肌组织相容性抗原Ⅱ类(MHCⅡ类抗原)的表达特点,探索轻度、不典型VMC的法医病理学诊断方法.[方法]以1035TCID50的CoxsackieB3病毒接种Balb/c小鼠,诱导小鼠轻度VMC.用免疫组化技术检测VMC小鼠心肌MHCⅡ类抗原的表达.[结果]VMC小鼠心肌组织内MHCⅡ类抗原异常表达,部分心肌细胞膜局灶性MHCⅡ类抗原阳性.[结论]心肌MHCⅡ类抗原的异常表达参与了轻度VMC的发病机制;心肌MHCⅡ类抗原-LSAB染色可望成为诊断轻度、不典型VMC的免疫病理学指标.     

实验性大鼠腮腺细胞缺血再灌注TGF—β1的表达

目的：探讨TGF—β1(Transforming growth facto-r-β1-转化生长因子—β1)在实验性大鼠腮腺导管细胞、腺泡细胞的表达区别与形态学改变的关系。材料和方法：采用颈总动脉结扎法建立腮腺缺血再灌注模型，用光镜、免疫组化的方法，观察腮腺导管细胞、腺泡细胞形态学及TGF—β1的表达变化。结果：实验组在缺血再灌注早期，开始出现形态学改变，中期明显，后期渐修复。在缺血和再灌注时间均相同时，TGF—β1在导管细胞较腺泡细胞表达高，前者增殖抑制明显。结论：①实验性腮腺缺血再灌注大鼠腮腺导管细胞有形态学改变。②TGF—β1在导管细胞表达比腺泡细胞高，导管细胞可能比腺泡细胞更客易发生增殖抑制。     

HBV全基因真核细胞表达载体的构建及表达

目的：构建全基因HBV真核细胞表达载体,并对其在细胞内的复制、转录、翻译进行研究。方法：采用分子亚克隆技术,将长约3.2Kb的HBV全基因克隆到真核细胞表达载体pBK-CMV折EcoPI位点,构建的pKB-HBV经FUGENE^TM6导入人肝癌细胞系SMMC－7721细胞中。结果：经PCR、RT－PCR验证pBK-HBV能够在SMMC－7721细胞中有效复制和转录。固相放免法显示HBV转染细胞内的HBsAg、HBeAg的合成和分泌。免疫组化法证明,胸内浆型分布为主的HBcAg的表达。结论：HBV全基因真核细胞表达载体pBK-HBV能够在SMMC－7721细胞中有效复制、转录及表达。     

人端粒酶启动子(hTERTp)真核表达载体的构建

目的克隆人端粒酶催化亚单位（hTERT）的启动子，构建真核表达载体pEGFP—hTERT。方法以人类基因组DNA为模板，应用PCR方法扩增hTERT上游序列长约1135bp的启动子片段，克隆入绿色荧光蛋白GFP的基因上游，测序鉴定。结果DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致，片段长度为1135bp。结论人端粒酶启动子的真核表达载体pEGFP—hTERT构建成功，为hTERTp调控元件用于肿瘤靶向性基因治疗奠定了基础。