兔抗人TGF-β_1多克隆抗体的制备

目的以人重组TGF-β1蛋白作为抗原,制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体。方法重组蛋白与弗氏佐剂等体积混匀,免疫新西兰白兔,获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清。饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验检测多克隆抗体效价,Western-blot技术进行抗体特异性检测。结果成功获得兔抗人TGF-β1多克隆抗体,纯化后抗体效价达1∶110 000。结论获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体具有良好的特异性,能满足进一步实验的需要。     

人Lrp蛋白多克隆抗体的制备

目的:制备人Lrp蛋白多克隆抗体. 方法:克隆全长lrp-cDNA编码序列并进行原核表达与鉴定. 用镍离子螯合柱(Ni-NTA)纯化原核表达的全长Lrp蛋白,获得纯度较高的目的蛋白. 用纯化后蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并吸附去除非特异性反应成分. 结果:Western印迹结果表明,纯化前后的抗血清在69 ku处均检测到目的蛋白条带,说明吸附纯化后的抗体可以与Lrp蛋白特异结合. 而纯化后抗体Western印迹结果目的条带只有一条,说明吸附纯化后得到高特异性抗血清,其免疫印迹的效价在10-6以上,有较高免疫印迹滴度. 结论:成功制备了高效价高特异性的兔抗人Lrp蛋白的多克隆抗体,为Lrp功能的进一步研究提供了重要的实验工具.     

Parkin蛋白C端的表达及抗体的制备

目的：构建Parkin基因3‘端的表达质粒，在大肠杆菌中表达并制备多克隆抗体。方法：构建Parkin基因3‘端（937－1959bp）的谷氨酰胺硫转移酶（glutathion-sulfate-transferase,GST)融合表达质粒，在JM105中获得表达。用Triton-100(1%）和Tween-20(1%）处理，并用亲和层析纯化表达产物。将其免疫新西兰兔，用免疫印迹分析收获的兔抗血清。结果：构建的ParkinC表达质粒在JM105中获得表达，以分子量为42kD的包涵体存在；目的蛋白纯度为95％；得到效价为1：64的抗血清；免疫印迹分析表明，制备的抗血清可与鼠脑细胞抽提物中51.6kD的蛋白产生特异的免疫反应。结论；Parkin蛋白C端在JM105中获得高铲表达并得到特异性多克隆抗体。     

兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶多克隆抗体的制备

目的：制备兔辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢／还原酶（NRDR）多克隆抗体。方法：应用原核表达的兔NRDR免疫豚鼠,制备豚鼠抗兔NRDR多克隆抗体,并以Western blot法分析抗体特异性。结果：免疫豚鼠获得了高效价抗血清,效价为1：2000时检测极限为160rig蛋白,与NRDR蛋白能特异性结合。结论：获得的多克隆抗体应用于Western blot中检测兔NRDR效果良好。为NRDR的进一步研究打下基础。     

抗双胸蚓核酸酶EWD-2多克隆抗体的制备及鉴定

目的将从双胸蚓组织中纯化的核酸酶EWD2免疫新西兰大白兔制备兔抗EWD2多克隆抗体。方法将纯化的双胸蚓核酸酶EWD2免疫新西兰兔，制备兔抗EWD2血清，以Western Blotting和ELISA方法分析其特异性和效价。结果EWD2蛋白免疫新西兰兔成功获得多克隆抗体。Western Blotting结果显示制备的抗体具有较高的特异性，ELISA显示效价为1：6000。结论获得了双胸蚓核酸酶EWD2多抗血清，为今后对双胸蚓核酸酶活性和结构的研究建立了基础。     

短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白多克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定

目的：纯化短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白并制备和鉴定其多克隆抗体。方法：通过凝胶过滤和离子交换层析,分离纯化短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白并以此作抗原,免疫家兔制备多克隆抗体。用双向免疫扩散法测定抗体滴度,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗血清效价,免疫印迹法进行鉴定。结果：成功地制备了短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白多克隆抗体,双向免疫扩散测定抗体滴度高达1∶32,酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗血清效价高达1∶12800,免疫印迹法鉴定证明该抗体对磷脂结合抗凝蛋白具有专一性。结论：成功地制备了短尾蝮蛇毒磷脂结合抗凝蛋白多克隆抗体,该抗体对磷脂结合抗凝蛋白具有专一性。     

兔抗人RBBP10多克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备兔抗人RBBP10多克隆抗体并进行鉴定.方法 用人工合成的RBBP10蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot方法检测制备的抗血清效价和特异性.结果此次获得的抗血清ELISA方法检测抗体效价达到1:16000,检测RBBP10的灵敏度最低为10μg/μ1.Western blot检测表明抗体效价高,特异性强.结论 应用该方法成功制备了人RBBP10多克隆抗体,此抗体可通过免疫组化方法检测RBBP10蛋白在各种肿瘤中的表达,具有一定的应用价值.     

人基质金属蛋白酶—1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的：获得兔抗人基质金属蛋白酶-1(MMP-1)多克隆抗体，并将其初步应用于临床检测。方法：将人MMP-1融合蛋白经亲和层析法纯化，并将其作为抗原免疫家兔，获得兔抗血清，经饱和硫酸铵纯化，获得初步纯化的兔抗人MMP-1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验(ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP-1的OD值。结果：获得初步纯化的兔抗人MMP-1特异性多克隆抗体，该抗体能与人MMP-1起反应。结论：制备的MMP-1多克隆抗体可初步用于临床检测。     

特异性RBBP10多克隆抗体的制备

目的：制备RBBP10多克隆抗体。方法：用纯化的RBBP10蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体，间接ELISA法检测抗体效价，Western印迹检测抗体特异性。结果：抗血清效价可达1：1000以上。结论：经Western印迹检测证明抗体效价高，特异性强．此抗体可通过免疫组化方法检测RBBP10蛋白在各种肿瘤中的表达。具有一定的应用价值。     

Parkin蛋白C端的表达及抗体的制备

目的 :构建Parkin基因 3’端的表达质粒 ,在大肠杆菌中表达并制备多克隆抗体。方法 :构建Parkin基因3’端 (937～ 195 9bp)的谷氨酰胺硫转移酶 (glutathion sulfate transferase ,GST)融合表达质粒 ,在JM 10 5中获得表达。用Triton 10 0 (1% )和Tween 2 0 (1% )处理 ,并用亲和层析纯化表达产物 ,将其免疫新西兰兔 ,用免疫印迹分析收获的兔抗血清。结果 :构建的ParkinC表达质粒在JM 10 5中获得表达 ,以分子量为 4 2kD的包涵体存在 ;目的蛋白纯度为 95 % ;得到效价为 1∶6 4的抗血清 ;免疫印迹分析表明 ,制备的抗血清可与鼠脑细胞抽提物中 5 1 6kD的蛋白产生特异的免疫反应。结论 :Parkin蛋白C端在 JM 10 5 中获得高效表达并得到特异性多克隆抗体     

Anti-NEP1-40多克隆抗体的制备与检测

目的制备Anti-NEP1-40多克隆抗体。方法合成NEP1-40多肽,采用弗氏佐剂制备免疫抗原,多次多点皮下注射健康雄性家兔,刺激机体产生相应抗体,颈动脉放血分离兔血清。结果获得含NEP1-40抗体的免疫血清,其抗体特异性好,亲和力较高。结论 NEP1-40兔多克隆抗体可以满足NEP1-40相关的科学研究。     

兔抗人心肌肌钙蛋白I抗体的制备与鉴定

目的制备兔抗人心肌肌钙蛋白I抗体并进行鉴定。方法用人工合成的cTnI蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA及Western blot方法检测制备的抗血清效价和特异性。结果此次获得的抗血清 ELISA方法检测抗体滴度达到了1:16 000,检测cTnI的灵敏度最低为10μg/L。Western blot检测表明该抗体可有效识别原核细胞表达及大鼠心脏组织提取物中存在的cTnI蛋白。结论应用该方法成功制备了人cTnI的多克隆抗体,为进一步研究cTnI的结构与功能打下基础,并为有效制备高特异性的单克隆抗体提供借鉴。     

增强型绿色荧光蛋白兔多克隆抗体的制备

目的:制备增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的兔多克隆抗体.方法:用谷胱甘肽-增强型绿色荧光蛋白(GST-EGFP)融合抗原加福氏完全佐剂背部皮内注射首次免疫新西兰大白兔,第28天用GST-EGFP融合抗原加福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第35天时再次免疫.第49天心脏采血30 mL,4℃静置过夜,收集血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗血清中EGFP多克隆抗体的效价;免疫印迹法检测EGFP多克隆抗体的特异性;利用荧光免疫细胞化学检测该抗体和观察转染EGFP贴壁生长的大鼠脑皮层混合培养细胞中EGFP的表达.结果:ELISA检测EGFP多克隆抗体滴度最高为1:9 549;免疫印迹检测结果显示该抗体特异性高;荧光免疫细胞化学检测显示存混合培养细胞中EGFP呈阳性表达.结论:直接使用GST-EGFP融合蛋白免疫新西兰大白兔,可在较短时间内制备大量EGFP多克隆抗体.     

SP-B中间产物特异性抗体的制备与鉴定

目的制备和鉴定表面活性物质蛋白B(surfactant protein B,SP-B)加工处理过程中部分中间产物的特异性抗体。方法利用Lasergene 7.0和Macvector 11.0.4软件进行抗原表位分析,确定作为抗原的3条多肽序列,将人工合成的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)偶联,免疫兔制备抗血清,间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫前血清背景和免疫后血清效价,抗原亲和纯化抗血清,超滤浓缩抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测抗体纯度,间接ELISA法检测抗体效价,蛋白质印迹(Western blot)鉴定抗体特异性。结果免疫前兔血清背景均低,免疫后抗血清效价均达到要求,抗原亲和纯化后所得抗体纯度及效价高,特异性好。结论成功制备了3种SP-B中间产物特异性多克隆抗体,为深入研究SP-B的加工处理奠定了基础。     

辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶的表达与多克隆抗体制备

目的：制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶（NRDR）多克隆抗体.方法：应用大肠杆菌BL21-AI表达NRDR,制备NRDR包涵体,使用从SDS-PAGE凝胶中回收的重组NRDR作为免疫原,采用肩胛骨下注射作为免疫途径免疫兔.斑点杂交测定抗血清效价,HiTrap Protein G柱纯化兔IgG,免疫印迹鉴定抗体特异性.结果：BL21-AI对NRDR进行了高效表达.回收的NRDR蛋白溶液的浓度为0.36mg/ml,回收率为48.5%.所有免疫的动物在第2次追加免疫之后都产生了高效价的抗血清,血清的效价是1：500,检测极限是8ng NRDR蛋白.纯化后的NRDR抗体具有较高的免疫活性和特异性.结论：建立了高效制备辅酶Ⅱ依赖性视黄醇脱氢/还原酶多克隆抗体的方法.     

小鼠Tnfaipl基因的克隆、表达及抗体制备

目的克隆小鼠Tnfaipl基因，并在大肠杆菌中表达，通过免疫新西兰兔，获得小鼠Tnfaipl多克隆抗体，为进一步研究小鼠Tnfaipl的功能奠定基础。方法用RT-PCR方法从小鼠肝脏组织中扩增获得Tnfaipl基因的蛋白质编码区，将目的片段连接到PMD18-T载体，然后亚克隆至pGEX-4T-2中，进而在大肠杆菌BL21（DE3）中表达融合蛋白质GST-Tnfaipl，并用其免疫新西兰兔，获得小鼠Tnfaipl多克隆抗血清。结果得到了小鼠Tnfaipl多克隆抗体。结论成功得到了特异性好的、效价高的小鼠Tnfaipl多克隆抗体。     

人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体β基因(PILRβ)的克隆、表达、纯化及其多克隆抗体的制备

目的:表达和纯化人Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体蛋白PILRβ,制备并鉴定其多克隆抗体.方法:应用RT-PCR从人的外周血细胞总RNA中反转录并扩增出PILRβ基因,将其克隆到表达载体pET-32a,在大肠杆菌中IPTG诱导表达,经Ni2 -NTA亲和层析柱纯化,纯化后的蛋白多次注射免疫新西兰大白兔,获取多克隆抗血清,ELISA法检测抗体效价,Western印迹检测抗体特异性.结果:获得了较高纯度的PILRβ蛋白(Mr约为42 000)及其抗体,多抗效价达到1:10 000,且特异性较好.结论:成功克隆了PILRβ基因并表达纯化了其蛋白,获得了效价较高、特异性较强的多克隆抗体,为进一步研究PILRβ蛋白的功能和潜在的药物开发打下了基础.     

人基质金属蛋白酶-1融合蛋白的纯化及其多克隆抗体的制备与初步应用

目的 :获得兔抗人基质金属蛋白酶 1 (MMP 1 )多克隆抗体 ,并将其初步应用于临床检测。方法 :将人MMP 1融合蛋白经亲和层析法纯化 ,并将其作为抗原免疫家兔 ,获得兔抗血清 ,经饱和硫酸铵纯化 ,获得初步纯化的兔抗人MMP 1多克隆抗体。用双抗夹心间接酶联免疫吸附实验 (ELISA)测定正常对照、慢性肝病、肝硬化患者血清MMP 1的OD值。结果 :获得初步纯化的兔抗人MMP 1特异性多克隆抗体 ,该抗体能与人MMP 1起反应。结论:制备的MMP 1多克隆抗体可初步用于临床检测     

流行性乙型脑炎病毒重组E蛋白的纯化及多克隆抗体制备

目的：纯化原核表达的JEV E蛋白并制备其多克隆抗体。方法：IPTG诱导大肠杆菌表达JEV E蛋白,Ni-NTA亲和层析纯化。将纯化后的JEV E蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗血清。琼脂糖双向扩散实验及间接ELISA检测抗体效价。结果：获得浓度1.85mg/ml、纯度92%的JEV E蛋白,并制备了JEV E蛋白兔多克隆抗体血清。琼脂糖双向扩散实验显示多克隆抗体血清1∶16稀释时仍能观察到沉淀线,间接ELISA法显示1∶200稀释时具有较高效价。结论：纯化了JEV E蛋白,并制备出了多克隆抗体。     

抗P37多克隆抗体的制备 纯化与鉴定

目的：用P37融合蛋白免疫动物制备抗血清,为猪鼻支原体感染作用的分子机制提供依据。方法：诱导表达GST-P37蛋白并以其免疫兔制备免疫血清,ELISA法检测抗血清的效价;Western blot-ting检测抗血清特异性。结果：免疫家兔并纯化抗血清得到特异的抗P37抗体,该抗体能检测到P37蛋白的表达。结论：成功制备了抗P37的多克隆抗体,对进一步研究P37的功能提供了一个有用的工具。