HPLC法同时测定金黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的含量

[目的]建立HPLC法同时测定金黄连口服液中绿原酸和黄芩苷的含量测定方法。[方法]色谱柱为Agilent TC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液进行梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为318 nm,柱温为35℃。[结果]绿原酸和黄芩苷的线性范围分别为0.1602~1.6016μg(r=0.999)和0.1002~1.0020μg(r=1.000)。绿原酸平均回收率为98.01%,RSD为1.21%;黄芩苷平均回收率为99.54%,RSD为1.16%。[结论]HPLC法简便、快捷、重复性好,可作为该制剂质量控制的方法。     

HPLC梯度洗脱法同时测定玉女煎多指标成分含量

[目的]建立同时测定玉女煎中芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷含量的高效液相色谱法。[方法]采用Ultimate XB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速:1.0 m L/min;检测波长:250 nm(芒果苷、β-蜕皮甾酮)和330 nm(毛蕊花糖苷)。[结果]芒果苷、β-蜕皮甾酮、毛蕊花糖苷质量浓度在10.0~400.0μg/m L(r=0.999 9)、2.4~96μg/m L(r=0.999 9)、2.0~80μg/m L(r=0.999 9)范围内线性关系良好,3种成分的平均加样回收率(n=9)分别为100.2%、101.0%、98.1 8%,RSD分别为2.73%、1.95%、1.39%。[结论]该方法简便,重复性好,可为玉女煎的质量控制提供参考。     

HPLC法同时测定二花青叶抗敏洗剂中绿原酸、咖啡酸、芍药苷的含量

目的:建立同时测定二花青叶抗敏洗剂中绿原酸、咖啡酸和芍药苷的HPLC方法。方法:色谱柱:Inertsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相(乙腈-0.02%磷酸水溶液11∶89);流速1.00 m L·min-1;绿原酸和咖啡酸检测波长323 nm,芍药苷检测波长230 nm。结果:绿原酸、咖啡酸和芍药苷与峰面积呈良好线性关系,线性范围分别是:绿原酸1.87~120.00μg(r=0.999 9),加样回收率为99.85%(RSD=0.88%)、咖啡酸1.25~80.00μg(r=0.999 9),加样回收率为99.97%(RSD=2.07%)、芍药苷7.03~450.00μg(r=1.0000),加样回收率为100.42%(RSD=2.20%)。结论:该方法快速、准确,适用于同时测定二花青叶抗敏洗剂中绿原酸、咖啡酸和芍药苷的含量。     

UPLC法测定抗601合剂中黄芩苷、绿原酸的含量

目的探讨一种快速同时测定抗601合剂中黄芩苷及绿原酸含量的方法。方法采用超高效液相色谱(UPLC)法,色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3column(2.1mm×100mm,1.8μm),流动相为甲醇-0.3%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速0.3mL/min,检测波长:280nm。结果黄芩苷在28.8~288μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9),绿原酸在6.6~66μg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9)。平均加样回收率分别为98.71%(n=6)、98.27%(n=6),RSD分别为0.66%和0.95%。结论所用方法快速、简便、准确,可为抗601合剂的质量控制提供依据。     

合煎与单煎对四物汤中4种化学成分溶出量的影响

[目的]建立同时测定四物汤水提液中芍药苷、阿魏酸、藁本内酯和洋川芎内酯I 4种化学成分含量测定的方法,并考察合煎与单煎对这4种成分溶出量的影响。[方法]采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Cosmosil C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.3%甲酸水溶液梯度洗脱,检测波长为280 nm,流速为1 m L/min,柱温为30℃,分析在合煎、单煎条件下四物汤中4种化学成分溶出量的变化。[结果]芍药苷、阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯I在19.38~310.00μg/m L(r=0.999 4),1.51~24.16μg/m L(r=0.999 4),1.50~24.00μg/m L(r=0.999 6),2.00~32.00μg/m L(r=0.999 4)线性范围内关系良好;平均加样回收率分别为95.89%(RSD=2.90%),97.08%(RSD=2.28%),96.84%(RSD=2.87%),98.77%(RSD=1.98%)。四物汤合煎液中洋川芎内酯I的溶出量低于当归、川芎药材溶出总量,而阿魏酸和藁本内酯的溶出量均高于当归、川芎药材溶出总量,芍药苷溶出量高于芍药药材溶出量。[结论]合煎与单煎中化学成分的溶出量并不是组方药味的简单叠加,而有其内在的配伍规律。     

地骨皮中咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素和绿原酸含量测定方法研究

目的建立地骨皮中咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素与绿原酸的含量测定方法。方法采用单因素考察方法建立供试品溶液制备方法;采用高效液相色谱(HPLC)法测定咖啡酰丁二胺、地骨皮乙素与绿原酸的含量,色谱条件为Waters Xbridge C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,甲醇-0.05%三氟乙酸溶液梯度洗脱,流速1.0 m L/min,检测波长为290 nm,柱温30℃。结果地骨皮药材采用100倍量的70%甲醇回流提取60 min,制备供试品溶液;咖啡酰丁二胺在0.013 75~0.220 0 g/L范围内线性关系良好,r=0.999 5,平均加样回收率为99.25%,RSD=1.81%(n=6);地骨皮乙素在0.057 875~0.926 0 g/L范围内线性关系良好,r=0.999 8,平均加样回收率为101.01%,RSD=2.81%(n=6);绿原酸在0.009 25~0.148 0 g/L范围内线性关系良好,r=0.999 5,平均加样回收率为99.51%,RSD=2.32%(n=6)。结论所建立的含量测定方法简便准确,重现性好,为地骨皮药材质量控制和评价奠定基础。     

HPLC-MS/MS法同时测定枳壳厚朴汤冻干粉中7个香豆素类成分的含量

目的建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法同时测定枳壳厚朴汤冻干粉中异欧前胡素、佛手柑内酯、花椒毒酚、橙皮油素、6',7'-羟基佛手柑素、佛手柑素以及佛手酚7个香豆素类成分含量的方法。方法采用Waters BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相:乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)梯度洗脱,流速:0.25 m L/min,柱温:35℃,进样量10μL。质谱采用电喷雾离子源(ESI)进行正离子模式检测,多反应监测模式(MRM)用于定量测定。结果 7个香豆素类成分中异欧前胡素在1.01~101.20μg/L(r=0.999 6)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.42%,RSD为1.88%。佛手柑内酯在5.25~525.00μg/L(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.92%,RSD为1.30%。花椒毒酚在5.06~506.40μg/L(r=0.999 6)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100.40%,RSD为1.76%。橙皮油素在4.96~496.00μg/L(r=0.999 7)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为98.65%,RSD为1.80%。6',7'-羟基佛手柑素在4.98~497.80μg/L(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为101.16%、RSD为1.36%。佛手柑素在0.99~98.60μg/L(r=0.999 6)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为102.05%,RSD为1.65%。佛手酚在5.05~505.00μg/L(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系,平均回收率为100.73%,RSD为1.71%。结论所建立的方法快速、灵敏、准确,可用于枳壳厚朴汤冻干粉中异欧前胡素、佛手柑内酯、花椒毒酚、橙皮油素、6',7'-羟基佛手柑素、佛手柑素以及佛手酚7个香豆类成分的含量测定。     

腹安颗粒中有效成分的含量分析

目的建立测定腹安颗粒中金丝桃苷含量的高效液相色谱方法。方法采用Fortis C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸(14:86)为流动相,流速1.0m L/min,柱温30℃,检测波长360nm。结果金丝桃苷在1.8-36.0μg/m L浓度范围内有良好线性关系(r=0.9999),平均加样回收率为99.2%,RSD1.18%。结论本方法简便,快速,准确,重复性好,可用于腹安颗粒中金丝桃苷的含量测定。     

HPLC法测定地萸补肾丸中3种有效成分含量

目的:建立地萸补肾丸中黄芪甲苷、莫诺苷、马钱苷的含量测定方法。方法:分别采用HPLC-ELSD方法测定黄芪甲苷含量,色谱条件:Shimadzu C18色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相∶乙腈-水(30∶70);流速:1.0 m L·min-1;柱温:30℃;ELSD参数:漂移管温度:105℃,载气流速:2.7 m L/min;采用HPLC方法测定莫诺苷、马钱苷含量,色谱条件:Kromasil 100A C18色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm);流动相为乙腈(A)-0.3%磷酸溶液(B)梯度洗脱;检测波长240 nm;流速1.0 m L·min-1;柱温40℃。结果:黄芪甲苷、莫诺苷、马钱苷分别在0.4464~8.928μg(r=0.99985),0.0506~1.012μg(r=0.99997),0.0492~0.984μg(r=0.99991)范围内线性良好,平均加样回收率分别为100.18%(RSD1.25%)、99.54%(RSD1.07%)、99.60%(RSD1.60%)。结论:实验表明,该方法方便快捷、准确、灵敏度高、重现性好,可用于地萸补肾丸的质量控制。     

HPLC法测定桂枝茯苓丸有效部位中苦杏仁苷、芍药苷的含量

目的建立测定桂枝茯苓丸有效部位中苦杏仁苷、芍药苷质量分数的方法。方法采用Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(体积比35∶65);流速为1.0 m L·min-1;检测波长为215 nm;柱温为30℃。结果苦杏仁苷和芍药苷的线性范围分别为0.354~7.088μg·m L-1(r=0.999 5)和0.356~7.128μg·m L-1(r=0.999 7),平均回收率分别为98.48%(RSD=1.47%)和99.06%(RSD=1.49%)。结论本方法专属性强、操作简便,适用于桂枝茯苓丸中有效部位的质量控制。     

金钗石斛茎的化学成分研究

目的 对金钗石斛Dendrobium nobile茎的化学成分进行研究。方法 采用正相及反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱及制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,根据波谱数据进行结构鉴定。结果 分离得到11个化合物,分别鉴定为石斛碱（1）、石斛醚碱（2）、邻苯二甲酸丁酯（3）、松脂素（4）、N-反式桂皮酸酰对羟基苯乙胺（5）、N-反式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（穆坪马兜铃酰胺,6）、N-顺式阿魏酸酰对羟基苯乙胺（7）、N-反式香豆酰酪胺（8）、N-顺式香豆酰酪胺（9）、山药素III（10）、二氢松柏醇二氢对羟基桂皮酸酯（11）。结论 化合物3、5～9均为首次从该植物中分离获得,其中化合物9为首次从石斛属植物中分离获得。     

七花牌七灵宝软胶囊缓解体力疲劳功能评价

目的 对以三七提取物、黄芪提取物、灵芝提取物等为原辅料制成的保健食品七花牌七灵宝软胶囊,依据《保健食品检验与评价技术规范》（2003年版）进行缓解体力疲劳功能研究。方法 根据人口服推荐用量,设样品低、中、高剂量组分别为200、400、800 mg/kg（分别相当于人体推荐用量的5、10、20倍）,同时设一个阴性对照组,每组10只动物。分别ig 给予10、20、40 mg/mL的七灵宝软胶囊溶液,给药体积为20 mL/kg,对照组给予等体积的玉米胚芽油,每天1次,连续30 d。结果 该样品对小鼠的体质量增长无影响;具有延长小鼠的负重游泳时间的作用;能减少或抑制疲劳小鼠血清尿素氮的产生;具有促进小鼠的肝糖原储备的作用;能减少小鼠运动后的血乳酸曲线下面积。结论 七花牌七灵宝软胶囊具有缓解小鼠体力疲劳的作用。     

宋金元时期《灵枢经》流传情况初探

<灵枢经>古称<九卷>、<黄帝针经>,系<黄帝内经>的一部分.北宋时期到史崧本刊出之前的传本则多为<黄帝针经>或简称<针经>.对<灵枢经>在北宋、南宋及金元时期的流传情况进行了考查,并把金元时期医家著作中引用<灵枢经>及<针经>部分与现行史崧本<灵枢经>进行对照分析,认为<针经>自身可能有不同传本,今本<灵枢经>可能来自<针经>.     

葫芦科植物通用DNA条形码的筛选

目的 评价几个热点DNA条形码候选序列对葫芦科植物的鉴别能力。方法 使用ITS2、rbcL、matK和psbA-trnH序列的通用引物对葫芦科植物进行PCR扩增和测序,通过比较各序列的扩增和测序成功率、种内和种间的变异、barcoding gap,并采取相似性探索BLAST 1和最近距离Nearest Distance 方法评价不同序列的鉴别能力。结果 ITS2序列对葫芦科33个属、90个物种、182个样本进行分析,其鉴定成功率较高,在属水平为100.0%,在物种水平为88.5%;psbA-trnH序列对201个样本进行分析,其鉴定成功率在属水平为93.0%,在物种水平为73.1%,但其可以补充部分ITS2不能分析的物种区域。结论 ITS2和psbA-trnH是适合葫芦科植物鉴别的一个较好的DNA条形码序列组合。     

KPC-2基因在克雷伯菌属中传播机制研究

目的 研究克雷伯菌属对亚胺培南耐药机制以及KPC-2基因在克雷伯菌属中传播机制。方法 收集四川大学华西医院两个阶段（2009～2010年和2012～2013年）分离的对亚胺培南耐药的克雷伯菌属细菌。琼脂稀释法测定亚胺培南最低抑菌浓度(MIC),CARB ChromID平板和改良Hodges试验检测碳青霉烯耐药表型,PCR检测细菌的KPC-2基因表达。质粒接合试验检测质粒传播性。随机引物扩增多态性DNA（RAPD）方法和肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链反应（ERIC-PCR）技术分别用于分析质粒和菌株的同源性。结果 第一阶段筛选并确证耐亚胺培南的3株产酸克雷伯菌首先获得碳青酶烯类抗生素耐药性,第二阶段筛选并确证耐亚胺培南的7株肺炎克雷伯菌出现相同的获得性耐药。PCR显示10株细菌均携带KPC-2型基因。质粒接合试验显示产酸克雷伯菌中携带KPC-2基因的质粒可以传递到受体菌,且与KPC-2基因阳性的肺炎克雷伯菌中携带的质粒具有同源性。ERIC-PCR结果显示7株KPC-2基因阳性的肺炎克雷伯菌具有同源性。结论 四川大学华西医院分离的对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌主要耐药机制是产生KPC-2型碳青霉烯酶。产酸克雷伯菌中携带KPC-2基因质粒,该质粒具有传递性且与肺炎克雷伯菌携带质粒相同。肺炎克雷伯菌中耐药株的传播形式为同一克隆传播,而在克雷伯菌属中不同菌种间耐药传播途径为同一质粒的水平传播。     

药物肠道代谢研究方法进展

肠道是口服药物的必经通道, 肠道中不仅存在着影响药物吸收的转运体, 还含有许多与药物代谢相关的酶, 包括消化道上皮细胞存在的结合酶和消化道菌丛产生的酶, 这些酶不同程度的影响着药物在体内的存在形式、吸收过程等。因此, 胃肠道对药物的有关代谢作用日益受到重视, 其研究方法也不断改进。现就目前药物在肠道中代谢的研究方法及其特点进行综述。     

N-脂肪酰-N-三甲基壳聚糖的合成及其对蛇床子素的增溶作用

目的 合成2类两亲性壳聚糖（chitosan,CS）衍生物,自组装成聚合物胶束作为难溶性药物的新型递药载体。方法 先将CS与碘甲烷反应生成N-三甲基壳聚糖（trimethyl chitosan,TMC）,然后在TMC的氨基上引入长链脂肪酸（软脂酸和癸酸）,合成了两亲性的N-脂肪酰-N-三甲基壳聚糖（N-fatty acyl-N-Trimethyl chitosan,FA-TMC）衍生物。通过FT-IR、¹H-NMR和元素分析法,对衍生物的分子结构和N-位取代度进行表征,同时以疏水性药物蛇床子素（osthole,OST）为模型,探讨其胶束增溶特性。结果 实验合成了2类6种不同的新型CS衍生物,分析显示季胺化程度和脂肪酰基接枝率对FA-TMC的胶束性质有较大的影响;对于超声法制备的OST载药胶束,季胺化程度为62.00%、软脂酰基接枝率为13.37%的N-软脂酰-N-三甲基壳聚糖（N-palmitoyl-N-trimethyl chitosan,PA-TMC）和季胺化程度为43.06%、癸酰基接枝率为22.00%的N-癸酰-N-三甲基壳聚糖（N-caprinoyl-N-trimethyl chitosan,CA-TMC）的包封率分别为76.67%、79.11%,载药量分别为19.01%、19.08%,可使OST在水中的溶解度提高两个数量级。结论 FA-TMC是一种具有潜在应用价值的增溶载体,其在水中能自组装形成胶束,并对OST有明显的增溶作用,为OST制剂深入研究与应用奠定了基础。     

实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用

目的建立快速检测多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的多重PCR方法。方法根据Gen Bank基因设计出特异性引物;经过多重PCR的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系。应用该PCR体系检测人工感染样本和实验动物的气管分泌物,并与传统方法做对比。结果多重PCR扩增出多杀巴氏杆菌(356 bp)、支气管鲍特杆菌(237 bp)、支原体(266 bp)和肺炎克雷伯杆菌(142 bp)的目的条带。肺炎克雷伯杆菌敏感性为10 pg,多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体敏感性为1 pg,特异性检测未从其他病原菌中检测出目的条带。应用建立的多重PCR体系检测人工感染样本的不同组合,45只实验动物气管检测出15只多杀巴氏杆菌阳性,9只肺支原体阳性,但传统培养方法和血清学方法未检测出阳性标本。结论本文建立的多重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的快速检测。     

5种马鞭草科药用植物的抗补体活性

采用细胞溶血法考察了千解草(Pygmaeopremna herbacea)、白花灯笼(Clerodendrum fortunatum L.)、尖尾枫[Callicarpa longissima(Hemsl.)Merr.]、赪桐[Clerodendrum japonicum(Thunb.)Sweet]及臭茉莉(Clerodendrum philippinum Schauer var.simplex Moldenke)等5种马鞭草科药用植物提取物经典途径和旁路途径的抗补体活性。结果表明:千解草水提取物、白花灯笼水提取物和醇提取物、尖尾枫水提取物和醇提取物、赪桐醇提取物及臭茉莉醇提取物有较强的经典途径抗补体活性,对经典途径的抗补体活性(CH50)分别为0.092±0.008,0.074±0.008,0.088±0.006,0.134±0.017,0.123±0.010,0.380±0.080及0.200±0.015 g/L;仅千解草和尖尾枫水提取物及白花灯笼醇提取物具有旁路途径抗补体活性,对旁路途径的抗补体活性(AP50)分别为0.533±0.033,0.758±0.031和0.362±0.029 g/L。因此,5种植物均具有不同程度的抗补体活性,其中白花灯笼醇提取物抗补体活性最强。     

中国西南地区汉族脊肌萎缩症患者SMA相关基因分子特征

目的 以中国西南地区汉族人群为研究对象,构建脊肌萎缩症（SMA）相关基因拷贝数变化频率,为SMA的临床诊断和分型提供依据。方法 收集62例临床诊断为SMA的无亲缘关系患者,以及50例无亲缘关系的正常人作为健康对照组,采用多重连接酶依赖的探针扩增技术（MLPA）分析运动神经元基因（SMN）和神经原凋亡抑制蛋白基因（NAIP）的拷贝数。 结果 62例患者中,SMAⅠ～Ⅳ型分别占30.65%（19/62）、41.94%（26/62）、16.13%（10/62）、11.29%（7/62）。SMN1基因外显子7纯合缺失占98.38%（61/62）,SMN1基因外显子8纯合缺失占82.26%（51/62）。SMAⅠ型患者中NAIP基因外显子5有68.42%（13/19)纯合缺失,26.32%（5/19）杂合缺失;SMAⅡ～Ⅳ型患者中NAIP基因外显子5有13.95%（6/43）纯合缺失,62.79%（27/43）杂合缺失。SMAⅠ型患者中68.42%（13/19）有1～2拷贝的SMN2基因,SMAⅡ型中84.62%（22/26)有2拷贝以上的SMN2基因,90.00%（9/10)SMAⅢ型和85.71%（6/7)SMAⅣ型患者有2拷贝以上的SMN2基因,且发现有5拷贝和6拷贝SMN2基因。结论 SMN1基因缺失是SMA的主要致病原因,SMN2和NAIP基因拷贝数变化可以影响SMA病情严重程度。