去乙酰化修饰调控瘦素诱导乳腺癌细胞增殖的分子机制

【目的】 研究去乙酰化修饰在瘦素(Leptin)诱导的乳腺癌细胞增殖过程中的调控作用。 【方法】 应用MTT法测定Leptin对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长的诱导作用,并测定乳腺癌细胞活力、侵袭力及细胞周期的变化情况;实时定量PCR、蛋白质印迹法测定Leptin诱导后MDA-MB-231细胞周期关键因子及相关酶的表达情况;染色质沉淀法(ChIP)检测Leptin作用MDA-MB-231细胞后核心组蛋白H3、H4乙酰化水平变化情况。 【结果】 Leptin诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖呈现时间和剂量依赖性,1.25 nm (20 mg/mL)、24 h为Leptin最佳作用浓度和孵育时间;经Leptin处理后,乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡明显减少、活力增强,同时由G₁进入S期的细胞显著增多;荧光显微镜观察发现Leptin诱导后BrdU荧光染色增强,且主要集中在MDA-MB-231细胞核内;Transwell小室侵袭实验也显示细胞侵袭力增强;实时定量PCR及蛋白质印迹法检测 发现Leptin处理后的 MDA-MB-231细胞中与G₁/S 期限制点调控相关的细胞周期调控因子CDK2、cyclin E1以及与抑制细胞凋亡有关的Bcl-2均显著增加,细胞中HDAC酶活性增强,且与细胞周期G₁/S 期调控密切相关的HDAC1 mRNA及蛋白表达水平也明显增强;ChIP 实验发现Leptin处理后的乳腺癌MDA-MB-231细胞中GAPDH 启动子区域核心组蛋白乙酰化水平显著降低,而经HDAC抑制剂SAHA阻断后MDA-MB-231细胞p21WAF 1/CIP 表达水平显著提高。 【结论】 Leptin通过HDAC1的去乙酰化修饰抑制p21WAF 1/CIP的表达,激活细胞周期关键因子CDK 2、cyclin E1的表达,从而加速乳腺癌细胞周期G₁/S 期的进程。     

菱角提取物诱导 HL-60 细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨菱角提取物对人早幼粒细胞性白血病细胞株 HL-60 细胞增殖和凋亡的影响及凋亡的分子机制。方法 采用 MTT 法检测菱角提取物对 HL-60 细胞的增殖抑制作用;吖啶橙染色和 DNA 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位的变化;比色法测定 Caspase-3、9 蛋白活性。结果 菱角提取物能抑制 HL-60 细胞的增殖,其作用呈明显的时间和剂量依赖性。菱角提取物可诱导 HL-60 细胞凋亡并显示一定的剂量依赖关系。与对照组比较,菱角提取物可明显降低 HL-60 细胞线粒体膜电位,上调 Caspase-3、9 蛋白活性。结论 菱角提取物可抑制 HL-60 细胞的增殖,其机制与降低线粒体膜电位、激活 Caspase-3、9 蛋白继而诱导 HL-60 细胞凋亡有关。     

乳康饮及拆方对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究乳康饮及拆方对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法 采用乳康饮及拆方含药血清处理人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别在24、48、72h时间点,用cell counting kit-8（CCK-8法）检测乳康饮及拆方在不同时间点对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,FCM法（流式细胞术）检测乳康饮及拆方诱导MDA-MB-231细胞凋亡。结果 各组中药处理48h后,细胞增殖出现明显抑制,抑制率分别为46.05%、31.85%、41.24%,相对氟尿嘧啶组抑制作用时间有明显延迟,乳康饮组在48h与氟尿嘧啶组抑制率之间差异无统计学意义（P=0.076）。各处理组48h凋亡率分别为40.7%、16.3%、23.2%、57.5%,比空白对照组凋亡率显著增加（P<0.05）,乳康饮组与氟尿嘧啶组凋亡率差异无统计学意义,但高于拆方2组（P=0.000）。结论 乳康饮及其拆方能够显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。     

小檗碱通过Notch途径抑制人T淋巴细胞性白血病Molt-4细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨小檗碱对人T淋巴细胞白血病细胞株Molt-4细胞体外增殖抑制、凋亡诱导及相关机制。方法 CCK-8法检测不同浓度的小檗碱对Molt-4细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测Molt-4细胞Notch1、Bcl-xl、Deltex1基因表达情况。结果 小檗碱诱导Molt-4细胞毒性及凋亡作用,呈剂量依赖性（P<0.05）;RT-PCR显示Molt-4细胞株有Notch1 mRNA的表达,且随着小檗碱剂量的增加,Notch1、Bcl-xl、Deltex1 mRNA的表达逐渐下降。结论 小檗碱可能通过Notch信号途径抑制Molt-4细胞增殖并诱导凋亡。     

鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用

目的研究鱼藤素对乳腺癌细胞MDA-MB-231线粒体通透性转换孔的作用。方法MTT法检测鱼藤素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;罗丹明123单染法观察线粒体膜电位变化;蛋白免疫印迹法检测细胞质中Cytc的表达;分光光度法检测caspase-3蛋白活性;Fluo-3/AM荧光指示剂检测细胞内钙离子浓度变化;RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2和Bax mRNA及其蛋白表达。结果鱼藤素对MDA-MB-231细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时效和量效依赖关系(P0.05);鱼藤素处理细胞后,细胞线粒体膜电位降低,细胞质内Cytc蛋白表达水平升高,caspase-3活性明显提高,与未处理组相比差异具有统计学意义(P0.01)。流式细胞术检测显示细胞凋亡率和细胞内钙离子浓度随鱼藤素浓度的增加而增多;RT-PCR和蛋白印迹检测结果发现鱼藤素能使Bcl-2 mRNA和蛋白表达减少,而Bax表达增加。结论鱼藤素对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用可能与细胞内钙超载,Bcl-2和Bax表达改变影响线粒体通透性转换孔开放,诱导线粒体膜电位降低及Cytc释放有关。     

白藜芦醇对高糖诱导足细胞损伤的改善作用及机制探讨

[目的]观察白藜芦醇（RSV）对高糖诱导足细胞凋亡的影响及作用机制。[方法]采用体外高糖诱导作为足细胞损伤模型,细胞分为3组：对照组为5 mmol/L低糖培养液（LG）;模型组为30 mmol/L高糖培养液（HG）;RSV干预组：HG+5 μmol/L RSV;HG+10 μmol/L RSV,培养48 h后采用流式细胞术检测足细胞的凋亡情况;DHE探针观察细胞内活性氧自由基（ROS）生成;激光共聚焦检测线粒体膜电位及线粒体内ROS合成;Western blot检测线粒体凋亡途径相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（caspase）3、caspase 9的表达情况。[结果]与HG组相比,RSV可呈剂量依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡;荧光探针结果显示,RSV干预后细胞内及线粒体ROS生成明显低于HG组;JC-1染色显示,与HG组相比,RSV干预可显著提高线粒体膜电位;Western blot结果显示,随RSV干预浓度的提高,caspase 3、caspase 9表达水平明显下调,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]RSV呈浓度依赖性的抑制高糖诱导的足细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧化应激,改善线粒体功能障碍相关。     

银杏内酯A、B混合物抑制永久性大脑中动脉栓塞大鼠神经细胞JNK凋亡途径

目的 研究银杏内酯A、B混合物（GKAB）对永久性大脑中动脉栓塞（pMCAO）大鼠神经元的保护作用及相关分子机制。方法 取雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组、pMCAO模型组和GKAB处理低、中、高剂量组。除假手术组（仅分离动脉而不阻断）外,其余4组均采用阻断右侧大脑中动脉的方法制备大鼠pMCAO模型。GKAB处理低、中、高剂量组于术后10 min分别经舌下静脉注射GKAB 12.5、25、50 mg/kg,假手术组、pMCAO模型组给予中剂量组药物等容量的生理盐水。用药12 h后,采用TUNEL法检测各组大鼠脑组织神经细胞凋亡率,免疫组织化学法检测神经细胞磷酸化JNK（p-JNK）表达,蛋白质印迹法检测脑组织中p-JNK、Bcl-2、Bax、细胞色素C（Cyt C）、caspase-9、caspase-3以及cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 与假手术组相比,pMCAO模型组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK表达水平均增加（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达均升高（P<0.01）,Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达均降低（P<0.01）;给予GKAB处理后,与pMCAO模型组比较,GKAB处理低、中、高剂量组大鼠神经细胞凋亡率和p-JNK水平均降低（P<0.01）,凋亡相关蛋白Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3的表达也呈下降趋势（P<0.01）,而Bcl-2、caspase-9、caspase-3的表达呈升高趋势（P<0.01）,并表现出一定的剂量依赖性。与假手术组相比,pMCAO模型组神经细胞胞质Cyt C表达升高,线粒体Cyt C表达降低（P<0.01）;与pMCAO模型组比较,GKAB低、中、高剂量组神经细胞胞质Cyt C表达逐渐降低,线粒体Cyt C表达逐渐升高（P<0.05,P<0.01）。结论 GKAB可抑制pMCAO大鼠脑神经细胞凋亡,其机制可能与其抑制JNK磷酸化、抑制JNK信号通路的激活、阻断线粒体凋亡途径有关。     

紫草素通过促进ROS的产生诱导人非小细胞性肺癌A549细胞凋亡的机制

目的 研究紫草素对人非小细胞性肺癌A549细胞的抗肿瘤作用,并探讨其可能的机制。方法 不同浓度紫草素处理A549细胞和人正常肺MRC-5细胞,四氮唑盐还原（MTT）法检测细胞的活性;流式细胞术结合PI-FITC双染色测定细胞凋亡;2''7''-二氯双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针测定活性氧（reactive oxygen species,ROS）;Western blot法测定caspase-8、caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-xL蛋白表达。结果 紫草素对A549细胞的增殖有明显的抑制作用,且呈现出时间和剂量依赖性（P<0.05,P<0.01）;当剂量≤10μmol/L时,其对MRC-5细胞的增殖没有明显的影响（P>0.05）。不同浓度紫草素处理24h后,A549细胞的凋亡率（早期凋亡+晚期凋亡）显著增加（P<0.05或P<0.01）,caspase-8、caspase-9和caspase-3蛋白被诱导活化,caspase抑制剂（Z-VAD-FMK）预处理则明显降低A549细胞的凋亡率（P<0.01）,并抑制以上3种蛋白的活化。另外,紫草素处理可引起A549细胞ROS的产生,且呈现出一定的剂量依赖性。ROS抑制剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）和L-谷胱甘肽（GSH）预处理可使A549细胞的凋亡率下降（P<0.01）。同时,紫草素处理可明显下调抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）,NAC和GSH预处理亦能上调Bcl-2和Bcl-xL的表达（P<0.01）。结论 紫草素可明显抑制肺癌A549细胞的增殖,其作用机制与诱导A549细胞产生大量的ROS,抑制抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xL表达,进而激活caspase依赖的凋亡途径有关。     

泰山银杏外种皮多糖对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

【目的】 探讨泰山银杏外种皮多糖(Ginkgo biloba exocarp polysaccharides,GBEP)对体外培养的食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 【方法】 通过沸水浸提,有机溶剂沉淀,并通过sevage法除去蛋白,获得GBEP。利用MTT法检测不同浓度的GBEP对食管癌细胞EC-9706增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期的分布;Annexin-V/PI双染分析凋亡率;蛋白质印迹法检测与细胞周期及细胞凋亡相关的蛋白表达变化。 【结果】 GBEP显著抑制EC-9706细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性。其半数抑制浓度(IC50)为138.9 μg/mL。细胞周期分析结果表明,GBEP处理后G1期细胞比例由52.25%增加至69.76%,蛋白质印迹结果显示细胞周期蛋白D1的表达呈浓度依赖性下降。说明GBEP诱导EC-9706细胞G1期阻滞。流式细胞术分析结果表明,GBEP诱导的EC-9706细胞凋亡随剂量和作用时间增加而增加。同时GBEP抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,增加促凋亡蛋白Bax的表达,促进caspase3的激活和PARP的剪切。 【结论】 泰山银杏外种皮多糖抑制食管癌细胞的增殖,诱导细胞G1期阻滞,并激活内源性细胞凋亡。     

氧化苏木素诱导人乳癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制

【目的】 探讨氧化苏木素对人乳癌MCF-7细胞的凋亡作用及其相关作用机制。 【方法】 MTT实验检测氧化苏木素对MCF-7细胞和正常乳腺上皮细胞MCF 10A的细胞毒作用;Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡的发生;荧光染料DiOC6染色,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位的变化;Western blot实验检测细胞浆细胞色素C及细胞内caspase-9和survivin蛋白的变化。 【结果】 氧化苏木素对人乳癌MCF-7细胞具有高效的细胞毒作用,而对正常乳腺上皮MCF 10A细胞毒性较弱,IC50值分别为(7.15 ± 0.43)μmol/L 和(33.56 ± 2.87) μmol/L;0、7.5、15、30 μmol/L的氧化苏木素处理MCF-7细胞48 h后,细胞的凋亡率从(3.37 ± 0.66)%依次升高到(16.8 ± 1.27)%、(31.31 ± 4.22)%、(51.23 ± 5.55)%;DiOC6染色流式细胞仪检测结果显示氧化苏木素可以剂量依赖性地降低线粒体膜电位;Western blot结果显示氧化苏木素诱发了线粒体内细胞色素C的释放和细胞内caspase-9蛋白的剪切激活,同时氧化苏木素也可剂量依赖性地降低survivin蛋白的表达。 【结论】 氧化苏木素可通过线粒体通路诱导MCF-7细胞凋亡,下调survivin蛋白可能是其诱导细胞凋亡的主要机制。     

二烯丙基二硫对口腔鳞癌CAL-27细胞增殖及凋亡的研究

目的 探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS)对口腔鳞癌CAL-27细胞的增殖抑制及促进凋亡的作用.方法 体外培养口腔鳞癌CAL-27细胞,采用不同浓度二烯丙基二硫对CAL-27细胞进行干预,并设立对照组,采用倒置显微镜观察细胞的形态学改变,MTT法检测细胞的增殖情况,Hoechst33342染色法检测细胞凋亡,用比色法检测caspase-3活性的改变.结果 倒置相差显微镜下观察对照组的细胞贴壁,形态呈多边形,生长活跃;实验组细胞形态改变,细胞脱壁,变小、变圆,细胞膜皱缩.MTT结果显示,随着浓度的增加,时间的延长,二烯丙基二硫对CAL-27细胞的生长及增殖有显著的抑制作用,并且各实验组相比及实验组与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).荧光显微镜下观察到经Hoechst33342染色的凋亡细胞.实验组caspase-3活性较正常对照组明显增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 二烯丙基二硫体外能抑制CAL-27的细胞增殖,呈一定的时间及剂量依赖性,并且诱导细胞凋亡,caspase-3可能参与了细胞凋亡的调控.     

联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒对MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

目的 探讨联氨基姜黄素（hydrazinocurcumin,HC）脂质体纳米颗粒（NPs）对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法 通过薄膜分散-超声法制备联氨基姜黄素脂质体纳米颗粒（HC-NPs）。用HC-NPs处理细胞后,MTT法检测细胞增殖,刘氏染色法检测细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞周期与凋亡,Transwell检测细胞的侵袭和迁移,Western blotting检测与细胞周期、凋亡、侵袭及迁移相关蛋白分子的变化。结果 HC-NPs可抑制MDA-MB-231细胞的增殖,使细胞形态变圆,诱导细胞发生G₂/M期阻滞,使细胞凋亡率明显增加（P＜0.01）,抑制细胞的侵袭和迁移。HC-NPs可下调磷酸化-信号转导和转录激活因子（p-STAT3）以及下游分子Cyclin D1、Survivin、Bcl-2及MMP-9的表达,上调Bax的表达。结论 HC-NPs可能通过抑制STAT3的激活,抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞凋亡。     

p66Shc-线粒体信号通路在氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡中的作用

【立论依据】 氧化低密度脂蛋白(oxLDL)可经线粒体途径诱导巨噬细胞凋亡并影响动脉粥样硬化斑块稳定性,但具体的分子机制尚未阐明。近有研究显示:在人内皮细胞,oxLDL可通过激活蛋白激酶C-β(PKCβ)与c—Jun氨基末端激酶(JNK)从而使衔接蛋白p66^Shc发生磷酸化;另有文献报道:磷酸化的p66^Shc可转位到线粒体引起线粒体损伤。本实验旨在探讨p66^Shc-线粒体信号通路在oxLDL诱导的人巨噬细胞凋亡中的作用。 【设计思路】 本实验分两部分:第一部分拟证明oxLDL可促进巨噬细胞中p66^Shc的磷酸化及线粒体转位;第二部分拟证明p66^Shc磷酸化及转位在oxLDL诱导的线粒体损伤、线粒体凋亡途径中起重要作用。 【实验内容】 采用序列超速离心法分离健康人新鲜血浆LDL,继而用CuSO4氧化制备oxLDL;体外培养THP-1细胞(人外周血单核细胞)并用佛波酯诱导为巨噬细胞,蛋白质印迹法检测oxLDL对p66^Shc及胞浆和线粒体中磷酸化p66^Shc(Ser36)蛋白表达的影响;而后将细胞分为对照组、oxLDL组及oxLDL+SiRNAp66^Shc组,用流式细胞仪及荧光显微镜检测线粒体膜电位、线粒体内超氧阴离子及细胞凋亡的变化,蛋白质印迹法检测线粒体凋亡途径相关蛋白的表达。 【材料】 采用含10%FBS的高糖1640培养液培养细胞;采用Rhodamine 123染色检测线粒体膜电位,MitoSOX Red试剂盒染色检测线粒体内超氧阴离子,AnnexinV FITC 试剂盒双染检测细胞凋亡;采用p66^Shc、phospho-p66^Shc( Ser36)、细胞色素C、caspase-9等抗体检测相关蛋白的表达。 【可行性】 我们前期预实验结果显示oxLDL可加速p66^Shc磷酸化和线粒体损伤,且两者呈正相关,这为该假说的成立提供了有力证据;实验负责人跟随导师进行科研工作两年,已熟练掌握相关实验技术;本实验承担单位泰山医学院动脉粥样硬化研究所具备实验所需全部仪器设备,实验条件完善。 【创新性】 本实验首次研究p66^Shc在oxLDL诱导的人巨噬细胞线粒体凋亡中的作用,可进一步阐明p66^Shc与AS发生发展的关系,从而为AS的防治锁定新靶点。     

汉防己甲素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和凋亡的影响

目的 探讨汉防己甲素对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞株的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法 通过CCK-8实验检测汉防己甲素对于细胞生长的抑制率,流式细胞术检测Tet作用于细胞后,对细胞活性氧、线粒体膜电位、凋亡和周期的影响。结果 汉防己甲素能显著抑制SH-SY5Y细胞生长,基本呈时间－剂量依赖性。流式细胞术检测显示不同浓度汉防己甲素处理后,活性氧明显升高,线粒体膜电位明显下降,细胞凋亡比例明显升高,G₀/G₁期细胞占比明显增高。结论 汉防己甲素能够抑制SH-SY5Y细胞增殖并且诱导其发生凋亡。     

α-硫辛酸对高糖培养施万细胞线粒体凋亡通路的影响

目的 探讨α-硫辛酸（alpha lipoic acid,ALA）对高糖培养施万细胞氧化应激损伤及线粒体凋亡通路的影响。方法 原代培养并纯化后的大鼠施万细胞为研究对象,分为正常组（5.6mmol/L葡萄糖培养基）、高糖组（50mmol/L葡萄糖培养基）、渗透压对照组（5.6mmol/L葡萄糖培养基+44.4mmol/L甘露醇）,以及高糖内分别加入不同浓度ALA （50、100、200μmol/L）组。流式细胞术检测施万细胞活性氧（ROS）及线粒体膜电位水平,Tunnel法检测施万细胞凋亡率,Western blot法检测bcl-2、bax、cyto C、cleaved-caspase-3及cleaved-caspase-9的表达。结果 与正常组比较,高糖组施万细胞内ROS水平明显增高（P<0.01）,线粒体膜电位下降,bcl-2蛋白表达降低（P <0.01）,bax蛋白的表达增加（P <0.01）,cyto C从线粒体到胞质的释放增加,caspase-9、caspase-3的活化水平增高,细胞凋亡率明显增高（P<0.01）。ALA降低高糖所致的施万细胞内ROS水平的增高（P<0.01）,提高了线粒体膜电位（P<0.01）,上调bcl-2蛋白的表达（P<0.01）,下调bax蛋白的表达（P <0.01）,减少了cyto C从线粒体到胞质的释放（P<0.01,P< 0.05）,降低了caspase-9及caspase-3的活化（P<0.01）,从而抑制了施万细胞凋亡。结论 ALA可以抑制高糖所致的施万细胞氧化应激损伤及线粒体凋亡通路的激活。     

MiR-101通过靶向RAP1B调节上皮间质转化并抑制乳腺癌的侵袭和转移

【目的】 探讨微小RNA miR-101在乳腺癌细胞转移与侵袭中的功能及靶点。 【方法】 首先通过脂质体转染的方法在MDA-MB-231、BT549和MDA-MB-4355细胞系中瞬时过表达miR-101模拟物,进而通过划痕实验、transwell迁移和侵袭实验来反映细胞运动能力的改变;然后应用荧光素酶报告基因分析技术和蛋白质印迹技术寻找并验证miR-101的靶基因。 【结果】 在功能学上miR-101的过表达可显著抑制MDA-MB-231、BT549和MDA-MB-4355细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01);在线软件预测RAP1B和RAB5A是miR-101的潜在靶基因;荧光素酶报告基因分析初步证明RAP1B是miR-101的靶基因;蛋白质印迹从蛋白质水平进一步验证RAP1B是miR-101的靶基因。 【结论】 在乳腺癌中,miR-101可以通过靶向RAP1B抑制细胞的侵袭和转移能力,这是miR-101作为一种特殊的基因调节因子,在乳腺癌的发生发展中起的重要作用之一。     

和厚朴酚对人白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响

 【目的】 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞系U937细胞增殖和凋亡的影响&#65377;【方法】 将U937细胞和正常外周血单核细胞分别与HNK共培养,Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡形态,用噻唑蓝比色法(MTT)检测HNK对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测凋亡;罗丹明123检测线粒体膜电位;Caspase3/7活性检测试剂盒检测Caspase3/7活性;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Caspase-3&#65380;Caspase-7 mRNA水平变化&#65377;【结果】 HNK对U937的体外增殖有显著抑制作用,48 h半数抑制浓度(IC50)为11.8 μg/mL,而对正常外周血单核细胞的IC50为40.3 μg/mL,Annexin V/PI双标染色显示,细胞凋亡与和厚朴酚呈浓度和时间依赖相关&#65377;HNK明显降低U937细胞线粒体膜电位,增加Caspase3/7活性及mRNA表达水平,但对正常外周血单核细胞的增殖抑制和凋亡作用不明显&#65377;【结论】 HNK可能通过激活caspase-3/7抑制U937细胞增殖&#65380;诱导U937细胞凋亡&#65377;     

昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌 PC-3 细胞及 bcl-2、caspase-3 基因表达的影响

目的 研究昆布多糖硫酸酯 (LAMS) 对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌 PC-3 细胞株的作用,以及对 bcl-2 和 caspase-3 基因表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法 分别用 0、50、100、200 μg/mL LAMS 作用于 PC-3 细胞,用 WST-8 法检测细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术 (FCM) 分析细胞周期和凋亡的变化,用荧光显微镜观察 PC-3 细胞形态,RT-PCR 和 Western blotting 检测细胞增殖、凋亡相关基因 bcl-2 和 caspase-3 mRNA 及蛋白的表达。结果 LAMS 能抑制 PC-3 细胞的增殖,呈时间-剂量效应;不同质量浓度 LAMS 诱导 PC-3 细胞出现剂量依赖性 S+G₂ 期阻滞;LAMS 作用于 PC-3 细胞后出现凋亡的形态学改变,LAMS 对 PC-3 细胞 bcl-2 mRNA 和蛋白表达均呈剂量依赖性减弱,对 PC-3 细胞 caspase-3 mRNA 和蛋白表达均呈剂量依赖性增强。结论 LAMS 能抑制体外 PC-3 细胞的生长,并促进其 S+G₂ 期阻滞和凋亡,LAMS 影响 PC-3 细胞相关基因蛋白的表达,可能是其抑制前列腺癌的作用机制之一。     

丹参注射液对细胞基底样乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的:探讨丹参注射液对细胞基底样乳腺癌(basal-like)MDA-MB-231细胞增殖凋亡的影响。方法:实验分为对照组和5个不同剂量的丹参注射液组。MTT法检测增殖,流式细胞仪分析细胞周期,PI染色检测凋亡。结果:丹参注射液作用于MDA-MB-231细胞24 h,随着药物剂量的下降,其作用由促进增殖过渡为对增殖无影响再到抑制增殖,48 h、72 h分别表现出抑制增殖和促进增殖的作用。高、中剂量组诱导细胞凋亡;中低剂量组降低MDA-MB-231细胞G0/G1期DNA含量,增加S、G2-M期细胞DNA含量,可能促进了有丝分裂。结论:丹参注射液对basal-like型乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响与药物剂量相关,有时间依赖性。丹参诱导了MDA-MB-231细胞的凋亡,可能是P53基因调节的。     

小檗碱抑制人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞增殖及其与过氧化物酶体增殖物激活受体γ的关系

目的 探讨小檗碱对人乳腺癌细胞 MDA-MB-231 体外生长的影响及其与过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的关系,以评价其在乳腺癌治疗中的应用潜力。方法 采用 MTT 法检测小檗碱对 MDA-MB-231 细胞的生长抑制效应;TUNEL 法检测细胞凋亡;联合 PPARγ拮抗剂 GW9662,分析小檗碱对 MDA-MB-231 细胞增殖的影响与 PPARγ受体的关系;实验同时采用罗格列酮作为阳性药进行平行比较分析。结果 小檗碱呈量-效和时-效关系抑制 MDA-MB-231 细胞生长,24 h 的半数抑制浓度 (IC₅₀) 为 0.21 μmol/L;小檗碱诱导 MDA-MB-231 细胞凋亡作用随药物浓度的增加而增强;PPARγ受体拮抗剂不能逆转小檗碱对细胞增殖的抑制作用。结论 小檗碱可明显抑制 MDA-MB-231 细胞生长,但与罗格列酮不同,其作用不通过 PPARγ受体介导;小檗碱诱导 MDA-MB-231 细胞凋亡的效应较罗格列酮更为显著;小檗碱可望成为治疗乳腺癌的有效药物。