Notch信号途径与肾细胞癌发生发展的相关性研究

目的通过免疫组织化学方法检测人肾细胞癌中Notch信号途径相关蛋白的表达水平,探究Notch信号途径分子与人肾细胞癌发生发展的可能关系。方法手术方法获得6例肾细胞癌组织标本,通过HE染色和免疫组织化学染色的方法对肾细胞组织和癌旁组织中Notch信号通路受体、配体蛋白表达水平进行检测。结果与癌旁组织相比,癌症组织中Notch信号的受体Notch-1以及配体Jagged-1的表达水平有明显的降低;而相对于癌旁组织,Notch信号途径的另一个受体Notch-2及配体Jagged-2表达水平有明显的升高。结论肾细胞癌的发生与Notch信号途径的表现出了一定的相关性,Notch信号途径可能参与了肾细胞癌的发生与发展。     

通腑利尿、化瘀散结方对铜负荷大鼠肝纤维化p38MAPK信号通路的影响

目的:探讨肝豆状核变性(WD)肝纤维化的发病机制,分析通腑利尿、化瘀散结方肝豆灵治疗WD肝纤维化的分子机制。方法:建立铜负荷大鼠模型,光镜观察肝纤维化病理改变,免疫组化检测p38MAPK信号通路蛋白的表达。结果:模型组可见p38MAP信号通路蛋白阳性表达,通腑利尿、化瘀散结方对其表达有抑制作用,特别和青霉胺合用效果更加显著。讨论:p38MAPK信号通路可能参与WD肝纤维化的发生、发展,肝豆灵可能通过干预p38MAPK信号通路的表达而发挥抗纤维化作用。     

人Jagged-1蛋白在真核细胞中的表达及稳定株的建立

Jagged-1蛋白属于Notch信号通路的配体之一,而Notch信号通路是介导细胞和细胞之间接触的主要信号通路之一,在造血微环境中调节造血细胞增殖与分化的过程中起重要作用。为研究Notch信号通路中受体与配体结合后的生物学功能及Notch信号通路在骨髓基质细胞影响细胞耐药的作用机制,构建过表达Jagged-1蛋白的NIH-3T3细胞株。构建含Jagged-1全编码区基因的pEGFP-IRES2-Jagged-1真核表达载体。结果表明,重组质粒转染哺乳动物细胞NIH-3T3后,Western blot分析证实转染后NIH-3T3细胞高效表达Jagged-1蛋白;经过选择性培养基筛选及有限稀释法挑取单克隆细胞后,流式细胞术(FCM)分析证实建立起过表达Jagged-1蛋白的单克隆细胞模型,即NIH-3T3-pEGFP-IRES2-Jagged-1细胞株。结论:本研究成功构建了Jagged-1真核表达载体,并建立了稳定转染的单克隆细胞株。过表达Jagged-1蛋白的NIH-3T3单克隆细胞株的构建为我们研究骨髓基质细胞相关的细胞耐药的作用机制并为发现新的药物作用靶点提供条件。     

Notch配体Delta-like-1和Jagged-1 mRNA在骨髓增生异常综合征患者骨髓间充质干细胞中表达研究

本研究检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路配体Delta-like-1和Jagged-1 mRNA表达水平,探讨其与MDS发病的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测38例M DS患者和16例正常对照者骨髓间充质干细胞中Delta-like-1和Jagged-1的基因表达水平。结果表明,MDS患者的Delta-like-1和Jagged-1 mRNA表达水平较正常对照组均明显升高（P〈0.05）。在WHO分组中,RA/RARS、RCMD及RAEB组Delta-like-1的表达量均高于正常对照组（P〈0.05）,RARB组Jagged-1与正常对照组差异有显著性（P〈0.05）。Delta-like-1表达与骨髓原始细胞比例有显著相关性（r=0.502,P〈0.05）。伴染色体异常MDS组Deltalike-1和Jagged-1 mRNA表达水平较无染色体异常MDS组明显升高（P〈0.05）。在IPSS分组中,较高危组Deltalike-1表达显著高于较低危组（P〈0.01）,而Jagged-1表达在两组间无统计学差异（P〉0.05）。结论：MSC中Delta-like-1和Jagged-1高表达可能参与了M DS的发病过程。     

南瓜蛋白抑制骨髓瘤细胞系RPMI8226 Notch信号表达

本研究探讨南瓜蛋白（cucurmosin,CUS）在体外对骨髓瘤细胞RPMI8226增殖抑制的分子机制.用Western blot法检测不同浓度CUS作用骨髓瘤细胞后Notch信号通路Notch1、Jagged-2、P-Akt和NF-kB的表达水平,结果显示,CUS可以下调骨髓瘤细胞中Notch1、Jagged-2和NF-kB蛋白的表达并呈时间和浓度依赖性,同时降低BCL-2和P-Akt的表达.结论：CUS对体外培养的RPMI8226细胞具有明显的增殖抑制作用,并且能明显下调Notch信号及其下游靶基因的表达水平,因此Notch信号通路可能作为多发性骨髓瘤治疗的新靶点,而CUS也可能成为潜在的调控Notch信号通路的新药之一.     

人肾细胞癌Notch信号途径相关基因的表达及其意义

目的通过检测人肾细胞癌中Notch信号途径相关基因的表达水平,探讨Notch信号途径分子与人肾细胞癌发生发展的可能关系,为临床治疗肾细胞癌提供一定的理论依据。方法手术获得8例肾细胞癌组织标本,用RT-PCR检测癌旁组织和癌症组织中Notch信号通路受体、配体的表达水平,并对电泳结果的灰度值进行统计学分析。结果与癌旁组织相比,癌症组织中Notch信号的受体Notch-2、Notch-3以及配体Jagged-1的表达水平有明显的上升,差异有统计学意义;但相对于癌旁组织,Notch信号途径的另一个配体Delta-1在癌症组织中的表达不确定。结论肾细胞癌发生发展与Notch信号途径的呈现出一定的相关性,表明Notch信号途径可能参与了肾细胞癌的发生与发展。     

Notch信号通路和多发性骨髓瘤

Notch信号通路是介导细胞和细胞之间直接接触的主要信号通路之一,调控了多细胞机体的细胞凋亡、增殖和分化,是造血微环境调节造血细胞增殖与分化的重要信号通路,与多种血液系统恶性肿瘤的发病有关。多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是以浆细胞克隆性增殖为特征的B系肿瘤。由于骨髓瘤细胞的增殖比例低及多药耐药的形成,因此其对常规剂量的化疗药耐药,使得MM的临床治疗仍十分困难。近年来的研究发现,多发性骨髓瘤病人肿瘤细胞和骨髓瘤细胞株都大量表达Notch的配体Jagged-2,而正常的浆细胞或是其它恶性疾病来源的病人肿瘤细胞低量表达Jagged-2。Jagged-2可诱导基质细胞分泌白介素6（IL-6）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、胰岛素样生长因子－1（Insulin—like growth factor 1,IGF－1）。Notch信号通路激活后可通过与NF－κB,C—myc的相互作用,调节细胞的增殖,促进骨髓瘤细胞的生长,从而抑制骨髓瘤细胞的凋亡,它与骨髓瘤的发生和耐药有关。抑制Notch信号通路能诱导骨髓瘤细胞的凋亡,增强化疗药的细胞毒作用。研究表明,单独使用Notch信号通路的特异性化学抑制剂γ－分泌酶抑制剂（γ－secrctase inhibitors,GSI）可通过特异性阻滞Notch信号通路从而诱导骨髓瘤细胞的凋亡,并且与传统化疗药物联合应用可以增强骨髓瘤细胞对化疗药的敏感性。本文就Notch信号通路的组成、Notch信号通路的作用机制及Notch信号通路与多发性骨髓瘤的关系进行综述．     

水飞蓟宾卵磷脂复合物对肝纤维化大鼠肝脏中TIMP-1表达的影响

目的：应用二甲基亚硝胺（DMN）建立肝纤维化大鼠模型，研究水飞蓟宾卵磷脂复合物（SPC）对纤维化肝组织中TIMP-1表达的影响。方法：70只大鼠随机分为正常对照组、模型组、SPC干预组、模型对照组及SPC治疗组。采用DMN腹腔内注射的方法建立肝纤维化大鼠模型。按6期分类法评价各组肝纤维化程度。应用RT—PCR检测各组肝组织中TIMP-1 mRNA水平；应用免疫组织化学技术检测各组动物肝组织TIMP-1的表达。结果：SPC干预组与治疗组的大鼠肝纤维化程度、肝组织中TIMP-1 mRNA水平及肝组织中TIMP-1的阳性表达均分别较模型组与模型对照组显著减轻与下降。结论：SPC能明显改善纤维化肝组织病理改变和减轻肝纤维化程度，抑制TIMP-1的表达是其抗肝纤维化的机制之一。     

从Notch通路探讨电针促进局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经干细胞增殖的作用机制

摘要 目的：通过Notch信号通路探讨电针对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠海马神经干细胞增殖的促进作用,阐明其治疗脑梗死的可能机制。 方法：将54只SD大鼠随机分为假手术组、模型组及电针组,以大脑中动脉闭塞（MCAO）法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,通过巢蛋白（nestin）免疫组化法观察脑缺血大鼠海马神经干细胞增殖情况,应用蛋白免疫印迹法（Western blot）和RT-PCR检测海马组织中Notch信号通路上关键信号分子Notch1和胞内片段（NICD）的表达情况,同时使用酶联免疫吸附法（ELISA）测定大鼠血清中血管内皮生长因子（VEGF）浓度。 结果：电针“曲池”、“足三里”穴可明显改善MCAO大鼠的神经功能缺损症状;促进脑缺血后海马神经干细胞（nestin+）的增殖（模型组 vs 电针组：173.40±38.76 vs 246.80±47.73, P=0.028）;增强Notch信号通路中Notch1和NICD的表达,并提高血清中VEGF的分泌。 结论：电针可通过活化Notch信号通路,同时促进VEGF的分泌,促进海马神经干细胞的增殖,来实现对脑缺血的治疗作用。     

即刻早期基因锌指结构9在肝纤维化大鼠肝脏中的表达

目的：通过研究肝纤维化大鼠肝组织锌指结构9（zinic finger9，ZF9）基因的表达及其变化，初步探讨ZF9在大鼠肝纤维化发生中的作用。方法：雄性SD大鼠，随机分为正常组、1周组、4周组和8周组，皮下注射40％植物油四氯化碳（CCl4），并分别于注射后1、4、8周取肝组织免疫组化检测转化生长因子-β1（TGF-β1）蛋白，RT-PCR检测ZF9 mRNA水平．苦味酸-酸性品红染色观察胶原纤维表达变化。结果：（1）正常大鼠肝组织ZF9基因少量表达，模型组大鼠注射CCl4 1周后其表达增强，注射CCl4 4周后明显增强，8周时仍呈高表达。（2）正常大鼠TGF-β1在少许肝窦周细胞和汇管区部分间质细胞着色，大鼠注射CCl4 1周后，上述着色细胞增多，范围增加，注射CCl4 4周后，TGF-β1表达进一步增加，第8周TGF-β1表达更加丰富，部分肝细胞也可见表达。（3）正常肝组织几乎不表达胶原，模型组注射CCl4 1周后可见胶原有少量着色，到第4和第8周表达明显增多。结论：ZF9基因转录水平在肝纤维化的形成过程中逐渐增加．并与TGF-β1的表达同步，与胶原纤维的增加一致，可能通过活化肝星状细胞促进肝纤维化的发生。     

雷帕霉素与大鼠肝纤维化演变的相关研究

的肝纤维化动物模型大鼠应用雷帕霉素后,检测大鼠肝组织切片中转移生长因子（TGF-β1）表达,探讨雷帕霉素与肝纤维化病理演变的相关性。方法作者将实验大鼠随机分为3组：①正常对照组大鼠（A组）;②肝纤维模型组大鼠（B组）;③肝纤维模型灌注雷帕霉素组（C组）。C组大鼠按2mg/kg体重胃内灌注雷帕霉素,每天1次,持续2周。3组大鼠同期处死,取肝组织进行形态学及组织学研究分析。结果 3组大鼠肝组织切片经HE及免疫组织化等染色后,图片经Image-pro plus 6.0图像分析软件整理。A、B、C 3组大鼠肝组织切片中TGF-β1表达呈显著性差异,具有统计学意义（P〈0.01）。结论转化生长因子表达在肝纤维化的发生发展中具有重要的正相关性作用,实验中B组大鼠肝组织内TGF-β1高表达,加重大鼠肝组织的纤维进程,本实验显示雷帕霉素具有调控降低肝组织内TGF-β1的表达,缓解模型大鼠肝脏纤维变性的进程。     

狗肝菜多糖对肝纤维化大鼠肝组织Leptin及HIF-1α蛋白表达的影响

[目的]研究狗肝菜多糖对二甲基亚硝胺诱导的肝纤维化大鼠肝组织中瘦素(Leptin)及缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)蛋白表达的影响.[方法]用二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,不同浓度狗肝菜多糖干预后,取肝脏标本做HE染色和免疫组化染色,观察各组大鼠肝组织病理学改变...     

羟基红花黄色素A对实验性大鼠肝纤维化TGF-β1-CTGF的影响

目的探讨羟基红花黄色素A(HYSA)抗四氯化碳所致肝纤维化的作用及对TGF-β1/CTGF表达的影响,为探索HYSA抗肝纤维化治疗的应用提供实验依据。方法将SD大鼠36只随机分为对照组、模型组和HYSA组(每组12只),以四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型,HYSA组给予10 mg/kg HYSA治疗,8周后通过HE染色和Masson染色对肝纤维化程度进行评分;免疫组织化学观察TGF-β1、CTGF表达。结果 HYSA组与模型组相比,在纤维沉积面积[(2.168±0.160)%vs.(3.984±0.398)%]、纤维化评分(9.250±4.126 vs.19.333±3.448)、TGF-β1表达(0.184±0.018vs.0.287±0.019)及CTGF表达(0.082±0.011 vs.0.129±0.015)差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 HYSA可明显减轻四氯化碳所致的肝纤维化的程度,HYSA可能通过抑制TGF-β1和CTGF的表达发挥抗肝纤维化的作用。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸抑制大鼠肾间质纤维化的研究

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化的的改善作用并探讨其机制。方法将雄性Wistar大鼠36只随机分为假手术组,UUO组,处理组(AcSDKP+UUO),每组各12只。于造模第3、14d各处死大鼠6只,取其梗阻侧肾脏组织行HE染色,光镜下观察肾组织病理改变,计算肾间质纤维化指数。免疫组织化学方法检测其各组肾脏组织转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及a平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle actin,a-SMA)表达,RT-PCR方法检测TGF-β1及a-SMA mRNA含量。结果与假手术组相比,各时间点UUO组大鼠肾脏病理损害进行性加重,AcSDKP处理后可明显减轻UUO组大鼠肾间质纤维化程度(P0.05);免疫组化染色及RT-PCR显示:TGF-β1、a-SMA的蛋白及mRNA表达UUO组和处理组明显多于假手术组,但处理组较UUO组明显减轻(P0.05)。结论 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)可通过抑制TGF-β1及a-SMA表达,进而抑制大鼠肾间质纤维化,减缓肾纤维化的病程进展。     

红细胞生成素对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的抑制作用及其与VEGF和TSP-1表达变化的关系

目的 探讨红细胞生成素(EPO)对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾小管上皮-间充质细胞转化的作用,以及这种作用与肾组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)和血管形成抑制因子(TSP-1)表达变化的关系.方法 将60只雄性Wistar大鼠分为假手术组(n=20)、UUO对照组(n=20)及EPO治疗组(n=20),分别于手术后第3、7、14、21天处死动物留取肾组织标本.应用免疫组化方法和Western blot方法测定肾组织中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、VEGF和TSP-1的表达程度.结果 手术后第3、7天EPO治疗组较UUO对照组α-SMA表达明显减少(P<0.05),E-cadherin表达明显增加(P<0.05).术后第3、7、14天,EPO治疗组TSP-1表达明显低于UUO对照组(P<0.05),而VEGF表达明显高于UUO对照组(P<0.05).结论 EPO具有抑制UUO模型大鼠早期肾小管上皮-间充质细胞转化作用,该作用可能与EPO下调肾组织TSP-1表达,上调VEGF表达有关.     

血吸虫病肝纤维化小鼠中肝星状细胞迁移功能改变的实验研究

目的探讨影响日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织中肝星状细胞(HSCs)迁移运动功能变化的相关因素。方法 SPF级6⁸周龄Balb/c小鼠16只,随机分为模型组(8只)和对照组(8只),以血吸虫尾蚴腹部贴附法建立感染模型,正常组予以生理盐水代替。于感染后8周末处理小鼠,取部分肝组织石蜡包埋,进行病理学评估,免疫荧光染色检测HSCs(α-SMA,红光)运动蛋白Fascin(绿光)的表达;另取部分肝组织,采用Real-time PCR方法检测迁移诱导因子转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)以及单核细胞趋化因子1(MCP-1)的表达以及HSCs运动蛋白α-SMA、Fascin的表达。结果 8周末时,模型组小鼠肝组织中已形成明显肝纤维化。模型组小鼠肝组织中TGF-β1、PDGF以及MCP-1的基因表达水平分别是对照组的30倍、14倍及14倍,差异具有统计学意义(P=0.033、P=0.039以及P=0.037);同时,模型组中HSCs运动相关蛋白α-SMA和Fascin的基因表达水平分别是对照组的9倍和5倍,差异具有统计学意义(P=0.004、P=0.018);荧光共聚焦结果提示,模型组小鼠肝组织中α-SMA(红色)和Fascin(绿色)表达部位一致,集中在虫卵周围肝纤维化区域,较对照组二者表达明显增加,且红绿光分布多重叠。结论诱导HSCs运动迁移的因子表达增加和HSCs自身的运动相关蛋白表达增加均有利于HSCs运动迁移能力增强。     

双虎清肝颗粒对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠TGF-β1-smads信号通路的干预作用及肝脏组织学的影响

【目的】探讨双虎清肝颗粒对四氯化碳诱发肝纤维化大鼠TGF-β1-smads信号通路的干预作用及肝脏组织学的影响。【方法]Sprague-Dawley大鼠60只,分为正常对照组（A组）、模型组（B组）、双虎清肝颗粒小、中、大剂量组（C1,c2,c3组）、水飞蓟素对照组（D组）。除A组外,均经皮下注射四氯化碳8周,后各治疗组给予不同剂量双虎清肝颗粒8周,D组予水飞蓟素8周,ELISA法检测大鼠血液TGF-13l,免疫组化检测smad3及smad7在肝组织内的表达及定位,肝组织作常规HE及Masson染色,观察脂肪变、炎症及纤维化程度。【结果】TGF-β1：与B组比较C1、C2、C3、D组（P〈O．05）,A组（P〈O．01）。smad3：与B组比较C1、C2、C3、D组（P〈0．05）,A组（P〈0．01）。Smad7：与B组比较C1、C2、c3、D组（P〉0．05）,A组P〈0．01。组织学：A组无异常;B组明显的纤维化和脂肪变性表现;C1、c2、c3、D组：不同程度的纤维化和脂肪变表现,从C1开始至C3程度逐渐减轻,D组和C3组接近。各组大鼠肝纤维化病变半定量：与B组比较,各组大鼠（P〈O．05）。【结论】双虎清肝颗粒能够通过抑制TGF-β1,及smad3的生成而显著改善四氯化碳所诱发的肝纤维化大鼠肝脏组织学的变化并且有量效关系。     

丹参酮IIa磺酸钠注射液抗四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化的作用及机制研究

目的观察丹参酮IIa磺酸钠的抗肝纤维化作用。方法将48只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量给药组、高剂量给药组。通过50％ccld花生油溶液（1ml／kg）灌胃诱导建立肝纤维化模型。低剂量组在建模同时每天腹腔注射丹参IIa磺酸钠注射液5ml／kg,高剂量组在建模同时每天腹腔注射丹参IIa磺酸钠注射液15ml／kg。6周后观察大鼠肝脏大体形态、肝脏重量／体重比;运用HE和Masson染色检测肝纤维化的变化：全自动生化分析仪检测大鼠血清总胆红素（TBIL）、谷丙转氨酶（ALT）及谷草转氨酶（AST）的含量;Westernblot检测肝脏组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与模型组相比,丹参酮IIa磺酸钠能够改善肝纤维化大鼠肝脏病理组织学结构,降低血清中TBIL、ALT、AST表达（P〈0．01）。与模型组相比,丹参酮IIa磺酸钠给药鲴E调大鼠肝脏组织中Bcl-2蛋白的表达,下调Bax蛋白表达（P〈0．01）。结论丹参酮IIa磺酸钠可能是通过调节Bcl-2和Bax蛋白的表达发挥抗肝纤维化的作用。     

姜黄素对大鼠肝纤维化的保护作用及其对肝脏NADPH氧化酶4表达的影响

目的：探讨姜黄素对四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）诱导的大鼠肝纤维化的影响及姜黄素能否抑制肝脏NADPH 氧化酶4（NADPH oxidase 4,NOX4）的表达.方法：腹腔注射CCl4（每周2次,共6周）诱导SD大鼠肝纤维化模型.将SD大鼠随机分成4组：正常对照组（n=10）、单纯给药组（n=10）、模型对照组（n=15）和姜黄素预防组（n=1 5）,姜黄素给药剂量为200 mg/kg体质量.检测血清中ALT、AST及活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）的水平;肝损伤和肝纤维化评估采用肝组织HE染色与天狼星红染色;分别用实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫组织化学方法检测肝组织NOX4的表达.结果：姜黄素能减轻CCl4诱导后大鼠的肝损伤与肝纤维化,抑制血清ROS的产生.与模型对照组相比,姜黄素预防组的肝纤维化大鼠肝脏中NOX4 mRNA与蛋白表达水平显著降低.结论：姜黄素能减轻CCl4诱导大鼠发生的肝损伤与肝纤维化,其效应可能与抑制肝脏NOX4过表达有关.