冰片与顺铂联用对Eca109(DDPr)细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的:探讨冰片与顺铂(cisplatin,DDP)联用对耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr)增殖?细胞周期和凋亡的影响?方法:采用递增药物浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109(DDPr),将冰片联合DDP作用于Eca109(DDPr)细胞,MTT法检测Eca109(DDPr)细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡?结果:递增药物浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1 μg/ml DDP的培养液中稳定生长,其对DDP的耐药指数为15.886;单用冰片浓度≤1.560 μg/ml时,对Eca109(DDPr)细胞无明显抑制作用(P > 0.05),但与1 μg/ml DDP合用能显著促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用(P < 0.05),并促进DDP诱导Eca109(DDPr)的细胞周期改变?细胞凋亡增加,细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P < 0.05),S期细胞?G2期细胞明显减少(P < 0.05),细胞的凋亡率明显增加(P < 0.05)?结论:冰片促进DDP对Eca109(DDPr)细胞增殖的抑制作用,可能与改变Eca109(DDPr)细胞周期?增加细胞凋亡有关?     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞的抑制作用及其机制

目的:观察褪黑素(Mel)联合顺铂(DDP)对人食管癌Eca109细胞生长的抑制作用,并探讨相关的分子机制。方法:通过MTT实验检测Mel与DDP不同浓度分别单用或两药联合处理后食管癌Eca109细胞增殖情况;流式细胞仪检测用药后细胞凋亡情况;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果:Mel与DDP联用对食管癌Eca109细胞增殖的抑制率均高于单用Mel与DDP时对食管癌Eca109细胞的抑制率(P<0.05);Mel单独诱导食管癌Eca109细胞凋亡作用不强,但可增强DDP诱导的食管癌细胞凋亡(P<0.01);Mel与DDP联用后食管癌Eca109细胞Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强。结论:Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并具有增强DDP诱导人食管癌Eca109细胞凋亡的作用,其机制可能与上调Bax表达和下调Bcl-2的表达有关。     

紫杉醇对人食管癌Eca109细胞株生长的影响

目的：观察不同浓度的紫杉醇对食管癌细胞Eca109的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,细胞形态学观察及流式细胞仪等方法对人食管癌细胞Eca109进行检测和观察。结果：MTT实验显示紫杉醇可抑制食管癌细胞增殖;光镜及电镜可发现药物作用组细胞核固缩、解聚以及凋亡小体,流式细胞仪检测显示G1峰前有明显的凋亡峰。细胞周期分析提示紫杉醇可将Eca细胞阻滞于G2－M期,且与浓度相关。结论：紫杉醇对人食管癌细胞系Eca109细胞的生长有明显的抑制作用,使细胞分裂阻滞于G2－M期,并诱导肿瘤细胞凋亡。     

硒、锌对人食管癌细胞株Eca109生长增殖的影响

目的 观察硒、锌单独和联合作用对人食管癌细胞株Eca109生长增殖的影响.方法 用不同浓度硒、锌培养液培养人食管癌细胞株Eca109,以人正常肝上皮细胞株HL7702为正常细胞对照,采用MTT、3H-TDR掺入实验及流式细胞术研究不同浓度硒、锌对两株细胞生长增殖的影响.结果 高浓度硒(0.3μg/ml)、锌(3.5 μg/ml)抑制Eca109细胞增殖,且二者联合作用比单独作用强(P<0.05);高浓度硒、锌单独促进HL7702细胞生长,联合则抑制其生长.生理浓度硒、锌(分别为0.1、1.0μg/ml)对该癌细胞株和正常细胞株生长增殖作用与对照相近(19>0.05).0.3 μg/ml硒引起癌细胞S期阻滞,作用不明显(P>0.05),而3.5 μg/ml锌引起G1期癌细胞显著增加(P<0.05),二者联合使其出现G1期阻滞,并都促进细胞凋亡,联合作用强于单独作用(P<0.05).结论 高浓度硒、锌抑制人食管癌细胞株Eca109生长增殖,且二者联合作用比单独作用强;该联合作用对人正常肝上皮细胞株可能有一定毒性作用.细胞生长周期改变、促进细胞凋亡可能是硒、锌抑制食管癌细胞生长增殖的机制之一.     

雷公藤与金钱草配伍抗食管癌作用的组成配比及其剂量效应关系研究

背景 中药雷公藤与金钱草配伍具有中医药理论依据、应用及现代研究基础,但迄今为止二者配伍在抗食管癌作用方面的研究鲜有报道。目的 考察雷公藤与金钱草配伍抗食管癌增效作用的最佳质量配比及其剂量效应关系。方法 2013年12月选取人食管癌Eca9706细胞,分为对照组、雷公藤组、金钱草组、1∶4组、1∶2组、1∶1组、2∶1组、4∶1组,分别提取水提取物和醇提取物,采用MTT法测量各组人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率,选取雷公藤与金钱草配伍抗食管癌增效作用的最佳质量配比,进一步分为对照组、5氟尿嘧啶（5-Fu）组、不同浓度醇提取物组（50、100、200、300、400 μg/ml组）,测量人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率。结果 与对照组比较,雷公藤组、金钱草组、1∶4组、1∶2组、1∶1组、2∶1组、4∶1组水提取物人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率升高（P＜0.05）;与雷公藤组比较,金钱草组、1∶4组、1∶2组、1∶1组、2∶1组、4∶1组水提取物人Eca9706细胞增殖抑制率升高（P＜0.05）;金钱草组、1∶4组、1∶2组、1∶1组、2∶1组、4∶1组水提取物人Eca9706细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比较,雷公藤组、金钱草组、1∶4组、1∶2组、1∶1组、2∶1组、4∶1组醇提取物人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率升高（P＜0.05）;与雷公藤组比较,金钱草组、1∶4组、1∶2组醇提取物人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率降低,2∶1组、4∶1组醇提取物人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率升高（P＜0.05）;与金钱草组比较,1∶1组、2∶1组、4∶1组醇提物人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率升高（P＜0.05）;与2∶1组比较,4∶1组醇提取物人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率降低（P＜0.05）。雷公藤与金钱草配伍抗食管癌增效作用的最佳质量配比为2∶1。与对照组比较,5-Fu组、50 μg/ml组、100 μg/ml组、200 μg/ml组、300 μg/ml组、400 μg/ml组人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率升高（P＜0.05）;与5-Fu组比较,50 μg/ml组、100 μg/ml组、200 μg/ml组人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率降低,300 μg/ml组、400 μg/ml组人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率升高（P＜0.05）;50 μg/ml组、100 μg/ml组、200 μg/ml组、300 μg/ml组、400 μg/ml组人食管癌Eca9706细胞增殖抑制率两两比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。半数抑制浓度（IC50值）为316 μg/ml。结论 雷公藤与金钱草配伍的醇提取物对人食管癌Eca9706细胞具有抗癌增效作用,二者最佳质量配比2∶1,浓度为50～400 μg/ml时对人食管癌Eca9706细胞的抗癌增效作用呈现出明显的剂量效应关系。     

香菇多糖通过细胞凋亡和细胞周期阻滞增强食管癌细胞的放射敏感性

目的 观察香菇多糖(LNT)对人食管癌细胞Eca109放射敏感性的影响及机制。方法 常规培养Eca109细胞,MTT实验检测不同质量浓度(0、6.125、12.5、25、50、100、200、400、800μg·mL^-1)LNT对Eca109细胞增殖的影响,并筛选后续实验浓度;LNT+放疗组和单纯放疗组细胞均经不同放疗剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后,克隆形成实验检测LNT对Eca109细胞的放射敏感性;Eca109细胞分为4组：对照组、LNT组、单纯放疗组、LNT+放疗组,流式细胞术检测各组细胞凋亡和细胞周期分布。结果 与0μg·mL^-1LNT组比较,LNT呈浓度依赖性抑制Eca109细胞的增殖,后续LNT质量浓度选择200μg·mL^-1;与单纯放疗组比较,LNT+放疗组Eca109细胞存活率下降,放疗增敏比SER为1.27;对照组、LNT组、单纯放疗组、LNT+放疗组细胞凋亡率分别为(4.82±1.42)%、(32.21±1.90)%、(14.14±3.07)%和(55.58±1.87)%,其中LNT+放疗组与...     

硒酸酯多糖对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响

目的研究硒酸酯多糖(KSC)对人食管鳞癌Eca109细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法甲基噻唑基四唑(MTT)法检测不同浓度KSC对Eca109细胞增殖的影响;流式细胞术观察KSC对Eca109细胞凋亡的影响;Westernblot技术检测KSC对Eca109细胞核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的影响。结果 KSC可明显抑制Eca109的增殖(P<0.05),并呈时间及浓度依赖性;经KSC作用后,Eca109细胞的凋亡率随KSC作用时间的延长(24、48、72h)及KSC浓度的增加(30、60、120μg/mL)而明显升高(P<0.01);KSC(60、120μg/mL)显著下调Eca109细胞核中NF-κB蛋白水平(P<0.01)。结论 KSC对Eca109细胞具有抑制增殖、诱导凋亡作用,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

过表达Beclin 1对食管癌Eca109细胞生物学行为的影响

目的：探讨自噬基因Beclin 1对食管癌细胞Eca109生物学行为的影响。方法：运用Beclin 1过表达质粒pIRES2-Zs－Green1-h Beclin 1转染食管癌 Eca109细胞株,RT-PCR和Western blot检测Beclin 1的mRNA和蛋白的表达;电子显微镜观察转染后自噬体的形成情况;MTT法检测转染前后各组细胞生长曲线的变化;血管形成实验检测其对Eca109细胞株血管形成能力的影响;Transwell小室实验检测其对Eca109细胞株迁移和侵袭能力影响;流式细胞技术检测目的基因组和对照组细胞周期的变化。结果：pIRES2-ZsGreen-hBeclin1质粒成功转染食管癌Eca109细胞株。目的基因组Eca109细胞较空载体组和未转染组生长明显抑制（P=0.000,P=0.000）;目的基因组Eca109细胞迁移、侵袭及血管形成能力明显低于对照组（P值均<0.05）;Beclin 1稳定表达后,S期细胞明显减少,细胞增殖受到抑制。结论：Beclin 1基因可以作为食管癌生长及转移的一种抑制基因。     

ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体对食管癌细胞凋亡的影响

目的探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,同时应用原位末端标记（TUNEL）法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果应用MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用（P<0.05）。以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达（P<0.05）。HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量均明显降低（P<0.05）。TUNEL标记检测结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡（P<0.05）,透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征,表现为细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体能显著抑制食管癌细胞生长增殖,降低细胞多胺合成,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供了实验依据。     

Survivin在肾癌组织和肾癌细胞系中的表达及意义

目的探讨存活蛋白(Survivin)在肾癌和肾癌细胞系中的表达情况及其与肾癌发生发展的关系。方法应用免疫组化方法检测66例肾癌患者和20例正常肾组织中Survivin的表达情况,应用Western blot和RT-PCR检测10例肾癌组织,正常肾组织及两种肾癌细胞系786-0和ACHN中Survivin的表达情况。结果肾癌组织和正常肾组织吸光度分别为0.031±0.002和0.875±0.124,差异具有显著性意义(P<0.01)。透明细胞癌,嗜色细胞癌和嫌色细胞癌吸光度值分别为0.873±0.091,0.904±0.103和0.813±0.126,各类型间差异无显著性意义。临床分期Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ、Ⅳ吸光度值分别为0.864±0.121,0.884±0.093和0.853±0.106,各期间比较差异无显著性意义。肾癌组织G1,G2,G3和G4吸光度值分别为0.693±0.092,0.762±0113,0.876±0.106和0.903±0.092,各级间比较,差异具有显著性意义(P<0.05)。Western blot和RT-PCR检测结果显示,正常肾组织表达阴性,肾癌组织和两种肾癌细胞系786-0和ACHN均有不同程度的Survivin蛋白和mRNA表达,统计学表明差异有显著性意义。结论Survivin和肾癌的分期,分型无关,和肾癌的分级有关,可以作为判断预后的标志物。     

大鼠肝卵圆细胞增殖模型建立及其纯化鉴定

为建立大鼠卵圆细胞增殖模型，分离纯化卵圆细胞并对其特性进行研究，SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴(2-acetyailamif1uorene，2-AAF)，剂量分别为5、10、15、20mg／kg，连续给药6d，于第7天行三分之二部分肝切除，术后继续给药1周，每隔3d取肝组织行常规组织学观察，作细胞增殖试验及免疫组化染色。通过免疫磁珠标记C-kit阳性细胞以纯化卵圆细胞(Magnetic activated cell sorting，MACS)，用免疫细胞化学及RT-PCR对纯化细胞进行鉴定。结果：10、15、20mg／kg三种剂量2-AAF均可成功建立卵圆细胞增殖模型，卵圆细胞增殖于第8天较明显，至第11天达高峰，第14天有所减少。卵圆细胞胞核Brdu染色阳性，其除表达卵圆细胞特异性抗原OV6外，尚表达肝细胞标记白蛋白及胆管细胞标记CKl9。胚胎期肝细胞抗原AFP、连接蛋白43在卵圆细胞中亦有高表达，同时还表达造血干细胞标记C-kit。以MACS纯化的C-kit阳性卵圆细胞，90％以上为OV6阳性，并有AFP、白蛋白、CK19 mRNA转录。结论：2-AAF剂量为10～20mg／kg时可获得满意的大鼠卵圆细胞增殖模型，增生的卵圆细胞为具有双向分化潜能的肝干细胞／前体细胞，利用C-kit标记通过MACS可纯化这种肝干细胞／前体细胞。     

钩吻提取液对HL-60细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的 :探讨钩吻提取液对HL 6 0细胞生长和增殖以及细胞周期的影响。方法 :采用XTT法分析细胞殖 ,Timelapse倒置显微镜摄取细胞影像形态学分析 ,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期状态 ,综合评价钩吻提取液抗HL 6 0细胞生长和增殖的作用。结果 :钩吻醇提水沉组分具有明显的抑制HL 6 0细胞增殖的作用 ,且存在明显的剂量和时间 -反应关系 ;经钩吻醇提水沉组分处理的HL 6 0细胞周期状态发生明显变化 ,表现为G0 G1期细胞比例降低 ,S期细胞比例增加 ,并出现较明显的亚二倍体细胞峰型。结论 :钩吻醇提水沉组分对HL 6 0肿瘤细胞具有明显的细胞毒作用 :引起细胞死亡和抑制细胞增殖 ;诱导细胞周期阻滞 ,干扰细胞G1期向S期转化 ,并在此阶段诱发凋亡     

血清剥夺致PC12细胞死亡及对细胞周期的影响

目的 观察血清剥夺致PC12细胞死亡及对细胞周期的影响。方法 流式细胞术检测在含5％和2％胎牛血清的培养基中，PC12细胞死亡和细胞周期的改变。结果 随着血清浓度的下降。PC12细胞死亡或凋亡增加，同时，S期的细胞所占百分比降低，G2期细胞所占的比例增加，在含2％胎牛血清的培养基中培养的细胞更加明显。结论 ①PC12细胞经血清剥夺培养后产生的损伤可能引发了细胞周期阻滞，当损伤未得以及时修复时，导致细胞凋亡。②在细胞周期和细胞死亡之间可能存在密切的联系。     

肿瘤干细胞与结直肠癌肿瘤干细胞

肿瘤干细胞是一类未分化的原始肿瘤细胞,具有三大显著的生物学特性即自我更新的能力、无限增殖的能力及多分化潜能性。它是肿瘤不停生长的罪魁祸首。分离、鉴定包括结直肠癌在内的各种肿瘤干细胞以及寻求针对肿瘤干细胞的治疗措施将是肿瘤研究的新方向。     

细胞增殖周期调控基因p16在非小细胞肺癌中的表达和意义

目的　探讨ｐ１６ 对非小细胞肺癌增殖的作用及其临床诊断应用的价值。方法　运用枸橼酸－ ＡＢＣ－微波免疫组化技术检测ｐ１６ 在７３ 例原发性非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）,６ 例肺炎性假瘤和５ 例癌旁正常肺组织中的表达情况。结果　ｐ１６ 阳性率为２５ ％（１８／７３）,明显低于正常肺组织及肺炎性假瘤（８２ ％） ;ｐ１６ 的表达与肺门淋巴结转移和组织学分级有关;ｐ１６ 的表达、肺门淋巴结转移和组织学类型与患者的生存率有关（Ｐ＜ ０．０５）。结论　表明ｐ１６ 蛋白有抑制肿瘤细胞增殖,在非小细胞肺癌的发生、发展中起作用。ｐ１６ 基因蛋白产物的检测对肺癌的诊断和评估预后有积极意义。     

应用细胞芯片捕获人正常胃细胞系、胃癌细胞系细胞并检测其细胞表面CD表型的差异

目的 构建一种细胞芯片,根据芯片表面固定的CD抗体与细胞膜表面CD抗原免疫结合原理捕获细胞,检测人正常胃黏膜细胞系GES-1、胃腺癌细胞系7901细胞表面CD抗原表达的差异.方法 将64种CD抗体蛋白固定在化学修饰醛基玻片上制成抗体阵列,将GES-1、7901细胞用胶原酶消化制成单个细胞悬液,用吖啶橙荧光标记后与芯片进行孵育,洗去芯片上游离的细胞,激光扫描仪检测芯片上CD抗体各点捕获到细胞的荧光信号,以此判定GES-1、7901细胞膜表面CD表型情况.结果 发现CD9、CD13、CD29、CD44、CD49、CD55、CD71、CD95抗体点均捕获到GES-1、7901细胞;CD15、CD24抗体点仅捕获到GES-1细胞;CD77、CD133、CD103、CD64抗体点仅捕获到7901细胞.结论 CD15和CD24可能是人正常胃黏膜细胞系GES-1细胞的表面标志物,CD77、CD133、CD103、CD64可能是人胃癌细胞系7901细胞的标志物.     

三分群血细胞分析仪显微镜复检标准探讨

目的比较三分群血细胞分析仪和显微镜下白细胞分类结果,探讨三分群血细胞分析仪中间细胞群(mononnuclear,Mo)的显微镜复检标准,以保证血液常规的检验质量。方法应用KX-21三分群血细胞分析仪和普通光学显微镜分别对302例临床血液常规标本进行白细胞分类,并进行对比分析。结果Mo<8%时,仪器分类结果与显微镜分类结果无显著性差异,且有良好的相关性。Mo>8%时,仪器分类结果与显微镜分类结果有显著性差异,其中有8.6%的标本显微镜分类出现异常情况。结论三分群血细胞分析仪仅作为白细胞分类的初筛,尚不能完全替代人工显微镜分类方法。临床应用中引入显微镜复检标准,可为临床提供有价值的诊断信息。     

嗅神经鞘细胞与雪旺氏细胞在脊髓损伤修复中的作用

雪旺氏细胞和嗅神经鞘细胞都能分泌多种神经营养因子、细胞外基质及黏附因子,提供有利于脊髓神经轴突再生的微环境,且两者都能促进轴突的再髓鞘化和再生。嗅神经鞘细胞具有在中枢神经系统内长距离迁移的能力,能够促进神经轴突穿越移植物一宿主界面重新进入中枢神经系统,其与星型胶质细胞相容性也更好。而雪旺氏细胞在促进轴突髓鞘形成的能力上可能更强。该文就两者在脊髓损伤修复中的作用进行综述,以促进中枢神经再生机制的研究,并为进一步修复脊髓损伤奠定理论基础。     

非小细胞肺癌中人乳头瘤病毒感染与细胞增殖及凋亡的关系

目的探讨人乳头瘤病毒（HPV）16、18型感染与原发性非小细胞肺癌（NSCLC）组织中细胞增殖及凋亡的关系及其意义。方法应用PCR、TUNEL和免疫组化SP法分别检测76例NSCLC及13例肺良性病变中HPV16、18型DNA、细胞凋亡和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，并分别计算增殖指数（MI）和凋亡指数（AI）。结果NSCLC中HPV16、18型总阳性率为40．8％（31／76），而肺良性病变组阳性率为7．7％（1／13），差异有显著性意义（P〈0．05）。HPV感染在不同组织学类型及有无淋巴结转移间差异无显著性意义，而在不同组织分化程度间差异有显著性意义（P〈0．05）。NSCLC中HPV阳性组与阴性组之间MI及AI差异均有显著性意义（均P〈0．05）。结论HPV16、18型感染在NSCLC发生中可能有病因学意义，其致癌机制之一可能通过减少癌变细胞凋亡和促进细胞异常增殖而导致细胞癌变。