微注射游离铁对大鼠脊髓的损伤作用

我们通过大鼠活体脊髓微量注射游离铁 ,观察脊髓组织丙二醛 (MDA)和形态学变化 ,了解在活体脊髓游离铁对脂质过氧化的诱发作用。一、材料和方法1.实验动物 :江苏大学实验动物中心雄性健康封闭群SD大鼠 42只 ,体重(2 80± 3 0 ) g ,随机分为两大组。损伤组 :椎板切除加脊髓微注射铁 ;对照组 :椎板切除注射等量的Ringer液 ;每组 2 1只 ,分 12、2 4和 48h组测MDA (6只 /组 ) ;3只 /大组伤后 3d形态学观测。2 .试剂准备 :Ringer’氏液 :NaCl8.0 5g ,CaCl2 0 .18g和KCl 0 .42 g加蒸馏水到 10 0ml,0 .2 2 μm滤膜滤过备用。枸橼酸亚铁用Rin…     

大鼠分级脊髓损伤对经颅电刺激运动诱发电位的影响

目的 了解不同程度脊髓损伤（ＳＣＩ）对运动诱发电位（ＭＥＰ）的影响以及ＭＥＰ对ＳＣＩ运动功能预后的价值。方法 采用改良Ａｌｌｅｎ′ｓ法,分别以３０ｇｃｆ、５０ｇｃｆ、８０ｇｃｆ和１００ｇｃｆ冲量打击４０只ＳＤ大鼠Ｔ８￣９脊髓,造成不同程度ＳＣＩ,于伤前及伤后１个月连续记录Ｌ１￣２脊髓硬膜外ＭＥＰ（ｓｃＭＥＰ）和双侧腓肠肌ＭＥＰ（ｍＭＥＰ）,并采用斜板试验和Ｔａｒｌｏｖ评分评估运动神经功能。结果（１     

环氧化酶在大鼠急性打击损伤脊髓中的表达

目的观察正常和急性打击损伤大鼠脊髓组织中环氧化酶（COX）的表达。方法48只Sprague-Dawley大鼠，随机平均分为正常组，手术对照组，脊髓损伤后2、4、8、16、24、48h组。采用改良Allen’s打击脊髓损伤动物模型。应用免疫组织化学染色的方法观察两种COX蛋白的表达变化。结果COX-1蛋白在正常胸椎脊髓组织中有基础性表达，主要分布在脊髓灰质后角和白质后索的神经纤维网中；COX-2蛋白在正常胸椎脊髓组织中也存在基础性表达，主要分布于脊髓灰质神经元细胞；急性打击脊髓损伤后COX—1蛋白的表达没有明显变化；急性打击脊髓损伤后4h，COX-2蛋白的表达开始增高，损伤后24h染色程度达到高峰，并维持至损伤后48h，表达增高主要出现在脊髓灰质的神经元细胞中。结论与环氧化酶在外周组织中的表达特点不同，正常胸段脊髓组织中同时存在COX-1和COX-2蛋白的基础性表达。急性机械打击脊髓损伤后，参与继发损伤的主要环氧化酶亚型是COX-2。     

细胞移植在脊髓损伤修复中的作用

脊髓损伤的修复一直是基础研究人员和临床医生面临的挑战性任务。大量的动物实验已经证明，细胞移植能促进脊髓损伤后轴突的延长和髓鞘的再生，为治疗脊髓损伤带来了新的希望。本文就细胞移植治疗脊髓损伤的有关研究进展进行综述。     

改良大鼠脊髓损伤模型椎管开窗方法的应用研究

目的 探讨新型改良大鼠脊髓损伤模型椎管开窗方法的实用性。 方法 将40只普通级成年SD大鼠按照随机数字表法分为2组：传统组（20只,采用传统蚕食法椎管开窗进行造模）、改良组（20只,采用椎板揭盖开窗法进行造模）,比较2组切口长度、手术时间、术中出血量及术后死亡率,并于术后不同时间点评价2组大鼠运动功能（basso beattie bresnahan,BBB）评分及HE染色结果判定脊髓功能障碍及造模成功与否。 结果 切口长度、手术时间、出血量及术后28 d死亡率的比较,改良组明显优于传统组,差异具有统计学意义（P<0.05）。2组大鼠术后BBB评分及HE染色结果提示以椎板揭盖开窗法制备大鼠脊髓损伤模型成功率与传统方法比较,差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 改良大鼠脊髓损伤模型椎板开窗相较传统椎管开窗方法有明显的优势,可广泛运用于脊髓损伤基础研究的模型制作。     

bFGF对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 :探讨大鼠脊髓损伤后应用碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor ,bFGF)对脊髓损伤区细胞凋亡的影响。方法 :利用Allen氏WD(weightdrop ,WD)技术 ,以 10 g× 2 .5cm致伤力造成SD大白鼠T8脊髓损伤模型 ,并于损伤平面以下蛛网膜下腔置细塑料导管。bFGF治疗组 (A组 )分别于术后即刻 1、2、4、8、12、2 4及 48h经导管注入bFGF溶液 2 0 μl(含bFGF10 0 u) ,以后每周经导管注入 2 0 μlbFGF ;对照组 (B组 )则在同时间注入等量生理盐水。损伤后 1、3、7、14、2 8d对脊髓损伤区进行细胞凋亡的检测 (TUNEL) ,采用计算机图像分析技术进行定量分析。结果 :A、B两组中均发现凋亡细胞 ,B组细胞凋亡率大于A组。结论 :bFGF能抑制脊髓损伤后脊髓损伤区的细胞凋亡。     

实验性大鼠胚胎脊髓移植对损伤脊髓影响的观察

目的 建立了一个胚胎脊髓（ｆｅｔａｌ ｓｐｉｎａｌ ｃｏｒｄ）组织的低温保存方法笔一个损伤移植模式。方法 通过病理学、组织化学和免疫组织化学的研究,选用胎龄１４天的Ｗｉｓｔａｒ大鼠,分离胚胎脊髓,逐步降温,最后置于液氮中保存。１５天后取出,快速复温,并植入损伤大鼠脊椎内。全部动物于伤后８周处死。结果 经过低温保存的移植物能够在异体脊髓内存活并与宿主组织融合,其在损伤移植区的胶质细胞增生少于对照组。     

大鼠脊髓损伤后巢蛋白在脊髓组织中的表达

目的探讨大鼠脊髓损伤后巢蛋白(nestin)的表达规律及其意义。方法30只Wister成年大鼠,随机分为正常对照组(A组)、损伤组(B组)。采用Allen打击模型(25g·cm),在T10段造成急性脊髓损伤,于损伤后1d、3d、1周、4周、8周进行取材,对距离损伤中心5mm处脊髓进行nestin免疫组化检测。应用图像分析软件进行nestin阳性区域面积侧算。结果A组脊髓室管膜细胞只可见极少数细胞胞浆内nestin表达,白质中几乎无表达。B组中nestin于损伤后24h表达于室管膜以及软膜,灰质和白质亦有少量表达,1周达到高峰(P<0.05),4周明显下降,8周时很少或几乎无表达。结论脊髓组织的许多部位可能存在具有分化和更新潜能的祖细胞,脊髓损伤后这些细胞被激活,在功能恢复中可能发挥着重要的作用。     

大鼠脊髓损伤致截瘫后肠道细菌移位的实验研究

目的：探讨大鼠脊髓损伤致截瘫后是否发生肠道细菌移位。方法：建立大鼠脊髓损伤性截瘫模型，以脊髓损伤性截瘫后12h、24h、48h大白鼠为实验组，未损伤脊髓的正常大白鼠为对照组。在无菌条件下，采集动物下腔静脉血进行内毒素定量测定和细菌培养，采集肝、脾、肠系膜淋巴结、肠腔内容物作细菌培养并进行菌种鉴定。取实验组和对照组各动物的肝、脾、肠系膜淋巴结、空肠、回肠进行病理切片HE染色检查，取空、回肠进行电镜检查。结果：大鼠脊髓损伤致截瘫后24h开始出现内毒素血症，截瘫后48h出现细菌移位。结论：大鼠脊髓损伤致截瘫后将发生肠道细菌移位，提示脊髓损伤截瘫的病人应尽早给予抗生素治疗。     

脊髓损伤后大鼠骨细胞形态学特点

目的：探讨脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)后大鼠骨细胞形态学变化特点及在SCI后骨代谢改变中的意义。方法：20只3个月龄SD大鼠均分为SCI组与对照组。SCI组于T10椎体处完全横断脊髓；对照组仅行椎板切除术，6周后处死动物取材。透射电镜观察股骨近段超微结构。原位凋亡染色法计数股骨近段骨细胞凋亡指数。结果：SCI组骨细胞有4种改变：(1)细胞器减少，骨陷窝增大，絮状物质增多、凝聚以及骨陷窝壁嗜锇板层形成等骨细胞性溶骨表现；(2)退变相骨细胞表现为胞质和细胞器出现严重囊性改变如线粒体空泡化，细胞壁不完整，细胞器不清晰；(3)出现核固缩，细胞处于崩解状态为坏死的形态学改变；(4)异染色质凝集、边聚，细胞出芽起泡等典型凋亡样改变。SCI组小梁骨中骨细胞凋亡指数显著高于对照组(P＜0．01)。结论：骨细胞的溶骨、退变、坏死和凋亡样改变是SCI后骨细胞的形态学特征，也可能是SCI后骨代谢偶联失调的细胞学基础。     

电针对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞凋亡及相关功能的影响

目的:探讨电针对大鼠急性脊髓损伤后膀胱功能改善的影响及作用机制。方法:取健康成年雄性SPF级SD大鼠60只,体重220～250 g,适应性饲养1周后,将大鼠按照随机数字表法随机分为假手术组、模型组、电针组和电针对照组,各15只。假手术组不予任何刺激,模型组、电针组和电针对照组大鼠采用改良Allens法制作脊髓损伤中度损伤SD大鼠模型,模型组不予治疗,电针组给予秩边与水道穴电针治疗,电针对照组给予秩边与水道穴旁开0.5寸电针治疗,频率 2/100 Hz,电流 1 mA,刺激15 min,电针左右隔次交替,每日1次,共7次;分别于术后1、7 d观察大鼠残余尿量、排尿量的变化;术后7 d处死大鼠取伤段脊髓观察各组大鼠凋亡情况,检测Bcl-2、Bax、Bad含量的变化。结果:造模后3组大鼠均出现不同程度的膀胱功能障碍。术后7 d,电针组、电针对照组残余尿量较术后1 d明显降低(P <0.001),且电针组与电针对照组比较差异有统计学意义(P <0.01);电针组、电针对照组较模型组在术后7 d排尿量增加,且电针组与电针对照组比较差异有统计学意义(P <0.001); TUNEL发现电针可以抑制脊髓神经细胞的凋亡,电针组、电针对照组与模型组相比在术后7 d脊髓神经细胞凋亡率显着增加(P <0.01,P <0.05),且电针组与电针对照组比较差异有统计学意义(P <0.05);与模型组相比,电针组、电针对照组Bax、Bad的阳性表达率降低(P <0.01,P <0.05),而Bcl-2的阳性表达率升高(P <0.01);且电针组与电针对照组比较差异有统计学意义(P <0.05).结论:电针能明显促进急性脊髓损伤的修复,其机制可能为通过增加Bcl-2、抑制Bax、Bad的表达,从而抑制脊髓神经元细胞的凋亡发生作用的。     

淫羊藿苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护作用

目的:研究淫羊藿苷在大鼠脊髓损伤中的神经保护作用。方法:108只SPF级雄性3月龄SD大鼠按随机数字表法分为实验组、对照组及假手术组3组,每组36只。对照组和实验组采用改良Allen法制作脊髓损伤模型,假手术组仅切开椎板不损伤脊髓。术后即刻实验组给予淫羊藿苷(100 mg/kg)灌胃,对照组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,每日2次。术后1、2、3 d采用BBB评分法评定大鼠运动功能;术后72 h采用分光光度法检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白介素(interleukin,IL)-1β的含量,免疫组化染色检测MPO、TNF-α、IL-1β的表达;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用TUNEL法检测细胞凋亡并计算细胞凋亡指数(apoptosis index,AI);光镜观察脊髓损伤后组织病理学的改变并行组织病理学评分。结果:术后各时间点对照组和实验组大鼠BBB评分均显著低于假手术组(P0.05);术后2、3 d实验组大鼠BBB评分均显著高于对照组(P0.05)。术后72 h,对照组和实验组MPO活性和TNF-α、IL-1β的含量显著高于假手术组(P0.05);实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组MPO、TNF-α、IL-1β的表达显著高于假手术组(P0.05);实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组MDA含量显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P0.05);对照组和实验组SOD活性显著低于假手术组,实验组显著高于对照组(P0.05)。对照组和实验组脊髓组织中AI显著高于假手术组,实验组显著低于对照组(P0.05)。对照组和实验组脊髓组织病理学评分均显著高于假手术组,实验组均显著低于对照组(P0.05)。结论:淫羊藿苷能够抑制脊髓损伤后的炎症、脂质过氧化和细胞凋亡,减轻脊髓组织病理学损伤,改善脊髓损伤大鼠的运动功能,有效保护脊髓组织,具有明显的神经保护作用。     

改良大鼠脊髓损伤模型椎管开窗方法的实验研究

目的 探讨新型改良大鼠脊髓损伤模型椎管开窗方法的实用性.方法 将40只普通级成年SD(Sprague-Dawley)大鼠按照随机数字表法分为两组:传统组(20只,采用传统蚕食法椎管开窗进行造模)、改良组(20只,采用椎板揭盖开窗法进行造模),比较两组切口长度、手术时间、术中出血量及术后死亡率,并于术后不同时间点评价两组大鼠运动功能(basso beattie bresnahan,BBB)评分及HE染色结果判定脊髓功能障碍及造模成功与否.结果 切口长度、手术时间、出血量及术后28 d死亡率的比较,改良组明显优于传统组,差异均有统计学意义(均P<0.05).两组大鼠术后BBB评分及HE染色结果提示以椎板揭盖开窗法制备大鼠脊髓损伤模型成功率与传统方法比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论改良大鼠脊髓损伤模型椎板开窗相较传统椎管开窗方法有明显的优势,可广泛运用于脊髓损伤基础研究的模型制作.     

一种新型脊柱撑开器的研制及脊髓牵张性损伤动物模型的建立

目的研制一种新型脊柱撑开器并以此建立大鼠脊髓牵张性损伤模型,为脊髓牵张性损伤机制及治疗研究提供可靠的动物模型。方法在既往研究基础上制备一种新型脊柱撑开器。取成年SD大鼠60只,体重250～300 g,随机分为A、B、C、D、E 5组,每组12只。暴露T12～L3脊柱后方结构,咬除T13～L2棘突椎板,显露脊髓。A组仅安放脊柱撑开器,不撑开。B、C、D、E组大鼠,将脊柱撑开器固定于T12～L3椎体横突上,同时行体感诱发电位(somatosensory evoked potential,SEP)监测,其中B、C组脊髓牵张SEP P1下降50%后分别持续5、10 min,D、E组脊髓牵张SEP P1下降70%后分别持续5、10 min,制备T13～L2脊髓牵张性损伤模型。术后1、7 d各组取6只大鼠采用改良Gale联合评分(ICBS)标准进行行为学评分,然后处死大鼠取脊髓行大体观察及HE、尼氏染色,并计数神经元。结果术后1、7 d,A组ICBS评分均为0分,其余各组与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05);D、E组ICBS评分显著高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后1 d B、C、D、E组脊髓表面见不同程度水肿、充血,正常结构形态破坏;7 d时脊髓表面无光泽,与周围组织有不同程度粘连,在牵拉中心段可见硬膜凹陷,均以E组最明显。术后1、7 d B、C、D、E组部分神经元坏死、溶解,尼氏体溶解或消失;7 d时神经元数量随损伤程度加重而逐渐减少,与A组比较差异均有统计学意义(P<0.05),且B、C、D、E组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 新型脊柱撑开器成功制备了不同损伤程度的大鼠脊髓牵张性损伤模型,脊髓牵张SEP P1下降70%持续10 min更符合脊髓牵张性损伤实验研究的需要。     

腺苷治疗大鼠脊髓损伤的初步研究

目的 通过观察大鼠脊髓损伤后内源性细胞外腺苷含量的变化以及外源性腺苷对脊髓损伤后脊髓组织细胞外钙离子和神经功能的影响,探讨腺苷在脊髓继发性损伤中的作用。 方法 ＳＤ大鼠５８只,制作成Ｔ１３脊髓腹侧压迫模型,用微透析技术每２０ｍｉｎ连续收集脊髓损伤后脊髓组织细胞外液,用高效液相色谱法仪紫外检测法检测细胞外液腺苷的含量;伤前１５ｍｉｎ蛛网膜下给予非特异性腺苷受体激动剂２－氯腺苷,伤后立即开始每１０ｍｉ     

An ovine model of spinal cord injury

Objective: To develop a large animal model of spinal cord injury (SCI), for use in translational studies of spinal cord stimulation (SCS) in the treatment of spasticity. We seek to establish thresholds for the SCS parameters associated with reduction of post-SCI spasticity in the pelvic limbs, with implications for patients.

Study Design: The weight-drop method was used to create a moderate SCI in adult sheep, leading to mild spasticity in the pelvic limbs. Electrodes for electromyography (EMG) and an epidural spinal cord stimulator were then implanted. Behavioral and electrophysiological data were taken during treadmill ambulation in six animals, and in one animal with and without SCS at 0.1, 0.3, 0.5, and 0.9?V.

Setting: All surgical procedures were carried out at the University of Iowa. The gait measurements were made at Iowa State University.

Material and Methods: Nine adult female sheep were used in these institutionally approved protocols. Six of them were trained in treadmill ambulation prior to SCI surgeries, and underwent gait analysis pre- and post-SCI. Stretch reflex and H-reflex measurements were also made in conscious animals.

Results: Gait analysis revealed repeatable quantitative differences in 20% of the key kinematic parameters of the sheep, pre- and post-SCI. Hock joint angular velocity increased toward the normal pre-injury baseline in the animal with SCS at 0.9?V.

Conclusion: The ovine model is workable as a large animal surrogate suitable for translational studies of novel SCS therapies aimed at relieving spasticity in patients with SCI.     

大鼠高位脊髓损伤并创伤失血休克后急性期血流动力学变化

目的：研究大鼠高位脊髓损伤并创伤失血休克后急性期血流动力学及血清去甲肾上腺素（nore-pinephrine，NE）、肾上腺素（epinephrine，E）、神经肽Y（neuropeptide Y，NPY）的变化规律。方法：将50只SD大鼠随机平均分为假手术组（A组）、失血组（B组）、脊髓损伤组（C组）、脊髓损伤并失血组（D组）和多发伤组（脊髓损伤、失血并单侧胫骨骨折，E组）。失血量为大鼠全身血量的20％，动脉瘤夹法制成C7～T1节段完全性脊髓损伤。监测伤后6h内不同时间点血流动力学变化。另取40只SD大鼠复制上述B、C、D、E组模型（每组均为10只），于损伤前及伤后不同时间点测定血清NE、E浓度（酶联免疫吸附法）和血浆NPY浓度（放射免疫测定法）。结果：E组大鼠平均动脉压在伤后1～6h，心率在伤后即刻、0．5、4、5、6h，左室收缩压在伤后3～6h，左心室内压最大变化速率在伤后0．5～6h显著低于其他各组（P〈0．05）。E组大鼠血清E浓度在伤后0．5、1、2、3、5h，NE浓度在伤后2、3、6h轻度高于伤前及C组（P〈0．05）；NPY浓度在伤后0．5～2h和5～6h呈小幅双峰增长（和伤前及C组比，P〈0．05）。E组伤后各时间点血NE、E、NPY浓度与D组比较差异无显著性（P〉0．05），均远低于B组（P〈0．05）。结论：大鼠高位脊髓损伤并创伤失血休克后急性期血流动力学出现严重紊乱，血NE、E、NPY浓度相对缺乏。     

Erythropoietin in spinal cord injury

Spinal cord injury (SCI) is a devastating condition for individual patients and costly for health care systems requiring significant long-term expenditures. Cytokine erythropoietin (EPO) is a glycoprotein mediating cytoprotection in a variety of tissues, including spinal cord, through activation of multiple signaling pathways. It has been reported that EPO exerts its beneficial effects by apoptosis blockage, reduction of inflammation, and restoration of vascular integrity. Neuronal regeneration has been also suggested. In the present review, the pathophysiology of SCI and the properties of endogenous or exogenously administered EPO are briefly described. Moreover, an attempt to present the current traumatic, ischemic and inflammatory animal models that mimic SCI is made. Currently, a clearly effective pharmacological treatment is lacking. It is highlighted that administration of EPO or other recently generated EPO analogues such as asialo-EPO and carbamylated-EPO demonstrate exceptional preclinical characteristics, rendering the evaluation of these tissue-protective agents imperative in human clinical trials.