羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其作用机制的研究

目的 通过体外抗肿瘤实验观察羊栖菜多糖(SFPS)对6种不同组织肿瘤的抑制作用及其对肿瘤治疗的组织特异性，并揭示其作用机制。方法 采用MTT法和集落形成实验法观察SFPS体外抗肿瘤作用；采用流式细胞仪观察SFPS对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响；采用Fluo-3／AM探针标记，激光共聚焦技术观测细胞内[Ca^2 ]i。结果 SFPS对人胃癌细胞SGC-7901和人直肠癌COLO—205有较好的疗效。可阻滞SGC-7901人胃癌细胞由G0／G1期进入S期，升高细胞凋亡指数(APO)。可使SGC-7901细胞内[Ca^2 ]i先升高后下降，给CaCl2后[Ca^2 ]i又升高。结论 SFPS对人胃癌细胞和直肠癌细胞效果较好，这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡达到的。SFPS诱导肿瘤细胞凋亡是通过升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i达到的。[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞内钙库释放。     

生长抑素对人胰腺癌细胞株ASPC—1的生长调控

目的：观察生长抑素（SS）对人胰腺癌细胞ASPC－1的生长作用；测定神经鞘磷脂（SM）、环磷酸腺苷（cAMP）和细胞内[Ca^2 ]i水平。方法：细胞培养，分别加入不同浓度的的SS。应用MTT法来观察细胞增殖程度；薄层层析法测定细胞内SM，放射免疫法测定细胞内cAMP含量；荧光法测定[Ca^2 ]i。结果：不同浓度的SS（10^-6～10^-12mol/L）均能有效地抑制ASPC－1的生长，能抑制ASPC－1细胞内SM，cAMP生成和细胞内[Ca^2 ]i水平（P＜0．01），cAMP生成量和细胞内[Ca^2 ]i水平与SS浓度呈负相关。结论：生长抑素能抑制ASPC－1细胞的生长，经过特异性受体调节。     

一氧化氮合酶抑制剂对培养人分泌中期子宫内膜细胞内钙的影响

目的：探讨已受雌，孕激素影响的人子宫内膜细胞受一氧化氮作用引起细胞生理变化的机制。方法：取人分泌中期子宫内膜，体外原代培养24－28小时，用钙荧光探剂Fluo-3-AM负荷钙离子，采用激光扫描共聚焦显微镜测定加入一氧化氮合酶抑制剂L－NAME后，子宫内膜细胞内游离钙离子[Ca^2 ]i浓度的动脉变化。结果：加和L－NAME后，腺上皮细胞和间质细胞[Ca^2 ]i立即开始升高，约在加入后400秒上升到高峰，加入后900秒稍有下降，然后继承升高并保持在高水平。同时发现腺上皮细胞和间质细胞对L－NAME的反应不同，其中腺上皮细胞[Ca^2 ]i升高的幅度显著高于间持细胞。结论：在雌，孕激素作用的基础上，NO通过改变子宫内膜细胞[Ca^2 ]i进行信号转导，实现其生理效应。     

胎脑低分子抑瘤物对白血病细胞作用的研究

目的：探讨人胎脑低分子肿瘤抑制物对白血病细胞的作用机制及其细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i)的变化。方法：通过超滤技术分段提取胎脑低分子抑瘤物，采用光镜、相差显微镜和流式细胞仪检测凋亡，Fura-2荧光负荷技术测[Ca^2 ]i。结果：胎脑低分子抑瘤物可明显抑制K562白血病细胞的增殖，作用4h后可出现典型的凋亡改变，白血病细胞凋亡过程中，胞内[（Ca^2 ]i明显升高。结论：胎脑低分子抑瘤物可能有是通过诱导白血病细胞凋亡而抑制其增殖，在白血病细胞凋亡过程中[Ca^2 ]i升高。     

新城疫病毒D90株对乳腺癌MCF－7细胞作用的实验研究

目的:国内外研究表明,新城疫病毒在体内外对多种肿瘤具有明显抑制作用?本研究旨在探讨新城疫病毒D90株体外对乳腺癌MCF－7细胞的作用及可能机制?方法:CCK－8法检测MCF－7细胞增殖抑制;光学显微镜及DAPI染色观察D90株对MCF－7细胞形态学影响;流式细胞术检测MCF－7细胞凋亡率;Western blot检测MCF－7细胞凋亡相关蛋白的表达情况?结果:D90株对MCF－7细胞具有显著抑制作用并呈浓度和时间依赖性;D90株能够诱导MCF－7细胞凋亡并调节凋亡相关蛋白的表达,包括上调Bax蛋白?下调Bcl－2蛋白,并促进Caspase－3和 Caspase－9的裂解活化?结论:D90株能够调节凋亡相关蛋白的表达,并促进Caspase－3和 Caspase－9的裂解活化,通过线粒体途径诱导MCF－7细胞凋亡并呈浓度和时间依赖性?     

海嘧啶对SGC—07901人胃癌细胞凋亡的影响

目的 揭示海嘧啶的抗肿瘤作用机制。方法 采用流式细胞仪测定海嘧啶对人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响;采用激光扫描共聚焦技术观察海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca^2 ]i的影响及[Ca^2 ]i;变化时Ca^2 的来源。结果 海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡,可升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i的浓度,[Ca^2 ]i升高时Ca^2 来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。结论 海嘧啶的抗肿瘤机制为诱导肿瘤细胞凋亡,通过开放细胞膜鲺通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca^2 ]i,启动细胞凋亡机制,从而诱导肿瘤细胞凋亡。     

苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙含量的影响

目的：观察苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内游离钙([Ca^2 ]i)含量的影响。方法：体外培养大鼠皮层神经细胞，加入谷氨酸观察细胞内[Ca^2 ]i,培养液一氧化氮（NO含量的变化及苯海索的干预作用。结果：加入谷氨酸后细胞内[Ca^2 ]i、细胞死亡数、NO含量显著升高，苯海索各浓度显著抑制[Ca^2 ]i及NO的升高，减少细胞死亡。结论：苯海索对谷氨酸引起的神经细胞内[Ca^2 ]i、NO含量的升高具有抑制作用，其机制可能与钙拮抗作用有关。     

奥曲肽-对MCF-7人乳腺癌细胞株生长及凋亡的影响

目的：研究生长抑素类似物奥曲肽（OCT）对乳腺癌细胞生长及凋亡的影响。方法：将OCT作用于体外培养的雌激素受体（ER）阳性人乳腺癌细胞株MCF－7,应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞术测定细胞周期分布和凋亡率,光镜、电镜观察细胞形态和超微结构。结果：OCT可抑制MCF－7细胞生长、抑制细胞周期,并可诱导细胞凋亡。结论：OCT对人乳腺癌细胞增殖具有抑制作用,其机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

糖尿病肾病系膜细胞增殖功能、[Ca2+]I和分泌纤维连接蛋白的研究

目的：探讨糖尿病肾病系膜细胞功能改变及意义。方法：采用STZ复制糖尿病模型，取肾进行系膜细胞培养，^3H－TdR法测定细胞增殖，用fluro-3探针经共聚集显微镜检测[Ca^2 ]i变化，ELISA法测定纤维连接蛋白（FN）分泌量。结果：糖尿病大鼠系膜细胞^3H-TdR掺入率和FN分泌量较正常大鼠增加，基础[Ca^2 ]i两组无差异，但糖尿病系膜细胞[Ca^2 ]i对血管紧张素Ⅱ反应明显减弱。结论：糖尿病系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚，其[Ca^2 ]i对Ang Ⅱ反应弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过。     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的 研究肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法，动态测定细胞[Ca2 ]i，MTT法测定细胞增殖。结果 血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的升高，并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时，对细胞游离钙却无影响。结论 肾小球系膜细胞[Ca2 ]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联，但[Ca2 ]i的升高并非细胞增殖的唯一途径。     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

内毒素对睾丸功能影响的研究进展

众所周知生殖道感染、炎症和其他疾病可抑制雄性生殖功能,但对系统性炎症和疾病引起男性不育的具体机制却所知甚少。内毒素是一种高效炎症激活物,可诱导炎症感染、内毒素血症、败血症休克及多组织器官损伤等,虽然内毒素广泛用于其他系统的炎症研究,但对其在生殖系统炎症的研究较少,因而深入了解内毒素对睾丸功能的影响,有助于进一步理解内毒素所致疾病对雄性生殖功能的影响。本文就内毒素的结构和生物学功能及其对睾丸生精细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞功能的影响进行了相关研究。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

莪术注射液抑制K562细胞增殖及诱导其凋亡的研究

目的：探寻新的抗白血病药物。方法：采用ＭＴＴ法,以柔红霉素（ＤＮＲ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）和羟基脲作对照,了解莪术注射液对Ｋ５６２细胞增殖抑制作用;通过流式细胞仪检测和ＤＮＡ凝胶电泳,观察莪术注射液诱导Ｋ５６２细胞凋亡的情况。结果：莪术注射液对Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显强于对照ＤＮＲ、Ａｒａ－Ｃ和羟基脲;而它更主要的作用是诱导Ｋ５６２细胞不仅具有强大的增殖抑制作用,功效明显     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

免疫性肝损伤大鼠枯否细胞对肝星状细胞增殖的影响及芍药苷的作用

目的探讨芍药苷(Pae)通过免疫性肝损伤大鼠枯否细胞(KC)影响肝星状细胞(HSC)的增殖能力。方法用卡介苗加脂多糖诱导大鼠肝损伤模型,肝脏原位灌流分离大鼠KC和HSC,观察共培养的形态学改变,观察Pae作用后的KC培养上清对HSC增殖的影响。结果免疫性肝损伤大鼠KC能明显促进HSC的增殖,在Pae作用后,KC培养上清能抑制HSC的增殖。结论KC是Pae发挥作用的靶细胞之一,Pae可通过作用于KC抑制HSC的增殖。