妊娠晚期维生素C干预对大鼠先天性膈疝模型中胎肺的作用

目的建立大鼠先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)模型,检验妊娠晚期维生素C干预对先天性膈疝的发生率以及胎肺发育的作用。方法妊娠S-D雌鼠12只采用抽签法随机分为4组,对照组(C)、维生素C组(W)、膈疝组(N)及治疗组(T)。N、T组除草醚(nitrofen)灌胃建立胎鼠先天性膈疝模型;孕晚期W、T组维生素C干预。正常孕期前一天(孕21天)剖腹取出胎鼠,记录体质量及肺脏质量;检查胎鼠膈疝的发生率、发生部位、膈肌缺损程度;采用免疫组织化学技术显示ki-67的表达,计算机软件分析计算胎肺组织中增生细胞的比例。结果膈疝组与治疗组膈疝发生率差异无统计学意义。治疗组胎鼠平均体质量高于另3组,差异有统计学意义。维生素C组及治疗组的平均胎肺质量均高于对照组,对照组高于膈疝组,差异有统计学意义。膈疝组增生细胞比例低于另3组,差异有统计学意义。结论通过除草醚的应用,成功建立了大鼠的先天性膈疝模型。膈疝组胎鼠的肺脏质量降低,增生细胞比例减少,可能存在肺脏发育不良。维生素C不能明显改变胎鼠先天性膈疝的发生率,但可提高胎鼠肺脏质量,提高增生细胞的比例,促进胎肺发育。     

产前地塞米松对胎鼠组织维生素A水平的影响

目的:探讨产前用地塞米松(Dexamethasone,Dex)对胎鼠肺和肝组织维生素A(Vitarain A,VA)水平的影响.方法:健康清洁级SD大鼠随机分为Dex组和生理盐水(NoHnal saline,Ns)对照组,妊娠第16、17、18d连续3d分别给予药物干预后,第19d剖宫取出胎鼠,测定肺和肝组织VA水平,观察Dex对组织VA水平的影响.结果:(1)胎鼠肺和肝单位组织VA水平Dex组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),尤以肺单位组织VA水平升高明显(P<0.01).(2)胎鼠肝组织VA总水平两组比较差异无统计学意义(P>0.05),而肺组织VA总水平Dex组仍高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:产前用Dex可以提高胎鼠肺和肝单位组织VA水平,同时提高胎鼠肺组织VA总水平,但对胎鼠肝组织VA总水平无显著影响.     

汉防己甲素对大鼠先天性膈疝模型胎仔肺发育影响的电镜观察

目的探讨产前应用汉防己甲素（TET）对先天性膈疝（CDH）大鼠模型肺发育不良的影响。方法6只雌性SD大鼠孕后9．5d随机分为对照组、膈疝组和治疗组,各2只。膈疝组和治疗组给予除草醚125mg／只灌胃,对照组给予等量食用花生油。11．5d,治疗组给予30mg／kgTET灌胃（1次／d,连续3d）,膈疝组和对照组给予等量生理盐水。第21天剖宫取出胎鼠两侧肺组织,记录胎鼠膈疝形成情况,分别用光镜和透射电镜进行组织学观察,并对Ⅱ型肺上皮细胞进行记数和比较。结果膈疝组与治疗组共32只胎鼠有膈疝形成,致畸率为78％（32／41）,两组之间致畸率差异无统计学意义（P=0．645）。光镜与透射电镜观察下可见膈疝组无论在组织结构还是细胞亚微结构方面均存在肺发育不良,其发育明显滞后于正常对照组,通过TET治疗后的治疗组肺发育较膈疝组成熟,形态结构接近于正常对照组。各组Ⅱ型肺上皮细胞数量差异无统计学意义（P=0．779）。结论产前应用TET干预治疗对CDH大鼠肺发育不良具有明显的改善作用,使其肺内结构无论在组织结构还是细胞结构上,都更接近于成熟形态。故产前应用TET可促进CDH大鼠胎肺发育,为临床治疗CDH提供新的思路。     

苦杏仁苷通过调节PI3K/Akt信号通路对先天性膈疝大鼠模型肺血管重构的影响

摘要:目的 观察苦杏仁苷对先天性膈疝(CDH)大鼠模型肺血管重构的影响,并探讨其作用机制。方法 将配种后 成功受孕的30只健康SD雌鼠随机分为对照组、模型组、苦杏仁苷低、中、高剂量组(10、20、40mg/kg)和西地那非组,5 只/组;采用100mg除草醚灌胃诱导CDH 模型;苦杏仁苷低、中、高剂量组及西地那非组于造模后给药,模型组和对照组 给予等量生理盐水。于妊娠21.5d,剖宫取胎鼠,观察 CDH 形成情况;采用 HE染色观察胎鼠肺组织病理变化并分析肺 小动脉中层血管壁厚度占肺小动脉外径的百分比(MT%)以及肺小动脉中层横截面积占总横截面积的百分比(MA%); Westernblot检测胎鼠肺组织血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、蛋 白激酶 B(Akt)、磷酸化蛋白激酶 B(p-Akt)蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组胎鼠肺小动脉 MT%、MA%均增加 (均P<0.05),肺组织 VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平上调(均P<0.05),p-Akt/Akt比值升高(P<0.05)。与模 型组比较,苦杏仁苷中、高剂量组及西地那非组胎鼠肺小动脉 MT%、MA%均降低(均P<0.05);苦杏仁苷中、高剂量组 胎仔肺组织 VEGF、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平下调(均 P<0.05),p-Akt/Akt比值降低(P<0.05)。结论 产前给 予苦杏仁苷可能通过抑制 PI3K/Akt信号通路激活从而改善 CDH 胎鼠肺血管重构。     

血晶素对先天性膈疝大鼠模型胎仔肺发育肺血管重构的影响

目的 探讨血晶素对先天性膈疝(CDH)动物模型胎仔肺发育不良和肺血管重构的影响.方法 将6只SD大鼠配种后第9.5天随机分为对照组、膈疝组和干预组.以除草醚诱导建立大鼠CDH动物模型,并以血晶素进行干预,第21天剖宫取出胎鼠及其肺,进行HE、弹力纤维染色观察,并进行图像分析.结果 除草醚诱导膈疝的发生率达63.6%(28/44),干预组胎肺发育接近对照组,其右肺重/体重值[(16.6±1.0)mg/g]和肺泡面积比[(45±6)%]均大于膈疝组[(14.6±1.7)mg/g、(28±6)%,P=0.03、P＜0.01],而肺泡间隔面积比[(44±6)%]低于膈疝组[(64±8)%,P＜0.01];同时腺泡前/内动脉(PAPA/IAPA)的平均中膜厚度百分比[(21.2±2.2)%、(18.2±2.1)%]低于膈疝组[(24.3±4.0)%、(21.9±3.9)%,P=0.03、P=0.006];单位视野内腺泡内动脉(IAPA)非肌型血管的比例[(78.2±3.0)%]高于膈疝组[(72.8±3.2)%,P=0.001],小动脉的肌化受到抑制.结论 血晶素产前干预虽不能降低CDH大鼠模型胎仔膈疝的发生率,但有助于促进CDH胎仔肺的发育,抑制其血管重构.     

Rho激酶抑制剂对先天性膈疝大鼠模型胎仔肺血管重构的作用

目的：探讨先天性膈疝（congenital diaphragmatic hernia,CDH）大鼠模型胎仔肺Rho激酶的表达及其抑制剂法舒地尔对肺血管重构的影响。方法：将定时配种成功的SD雌鼠随机分为对照组（5只）、膈疝组（6只）和法舒地尔干预组（6只）。分别给予膈疝组和干预组除草醚（100 mg/只）一次性灌胃建立CDH动物模型,对照组灌等量橄榄油。孕16.5 d给予干预组腹腔注射法舒地尔（15 mg/kg,1次/d,连续３ d）,对照组和膈疝组予等量生理盐水腹腔注射。定时剖宫产取出胎肺,光镜下进行肺血管重构观察,采用RT-PCR法和Western blot法观察肺组织Rho激酶表达变化;Western blot法检测Rho激酶底物肌球蛋白磷酸酶的磷酸化状态。结果：膈疝组肺小动脉管壁厚度占血管外径百分比（WT%）和肺小动脉中膜厚度百分比（MT%）均明显高于对照组[（26.88±2.41） vs. （13.50±1.45）;（25.59±2.57） vs. （16.47±2.07）,P=0.000];管腔面积与血管总面积百分比（LA%）明显低于对照组[（39.22±2.23） vs. （61.20±3.23）,P=0.000]。法舒地尔干预组WT%、MT%显著低于膈疝组[（15.38±2.14） vs. （26.88±2.41）;（17.69±1.79） vs. （25.59±2.57）,P=0.000],LA%明显高于膈疝组[（58.67±3.06） vs. （39.22±2.23）,P=0.000]。与对照组相比,膈疝组Rho激酶mRNA和蛋白质表达明显升高,肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平也明显增高（P=0.000）。法舒地尔干预后Rho激酶mRNA和蛋白、肌球蛋白磷酸酶磷酸化水平均较膈疝组明显降低（P<0.01）。结论：先天性膈疝胎仔肺内存在肺血管重构,Rho/Rho激酶信号通路参与此过程,产前给予法舒地尔明显改善CDH胎仔的肺血管重构。     

盐酸氨溴索对大鼠膈疝模型肺发育的影响

目的 探讨盐酸氨溴索(沐舒坦)对大鼠先天性膈疝模型及其肺发育的影响及可能机制.方法 9只孕9.5 d的大鼠分为3组:对照组(2只)仅给予橄榄油灌胃,膈疝组(2只)及沐舒坦干预组(沐舒坦组,5只)给予除草醚200 mg灌胃.孕18.5、19.5、20.5 d,对照组及膈疝组分别腹腔注射生理盐水,沐舒坦组每日腹腔注射盐酸氨溴索100 mg/kg.孕21 d行剖宫产,观察各组膈疝发生率,取胎肺称重,行HE、弹力纤维EVG染色及肿瘤转化生长因子(TGF)-β1免疫组化染色,检测双肺湿重/体重、平均终末支气管密度(MTBD)、肺泡面积百分比(PLAA)、中小动脉中膜厚度百分比(MT%)和TGF-β1在肺的表达强度.结果 对照组30只子鼠无膈疝发生;膈疝组19只子鼠发生膈疝13只,沐舒坦组43只子鼠发生膈疝28只,两组间膈疝发生率差异无统计学意义(P=0.502).对照组肺发育成熟,膈疝组处于假腺体期,沐舒坦组发育居中.膈疝组双肺湿重/体重、PLAA均低于对照组[(45±6)mg/g比(60±7)mg/g,(50.1±4.0)%比(58.4±3.0)%,均P=0.001];MTBD、MT%均高于对照组[(14.0±1.8)比(8.5±1.1),(45±6)%比(29±6)%,均P=0.001];而沐舒坦组PLAA[(54.0±2.0)%]高于膈疝组(P=0.001),MTBD、MT%[12.2±2.1,(39±4)%]均低于膈疝组(P=0.006,P=0.002).膈疝组TGF-β1在肺的表达强度与对照组比较,差异有统计学意义(13 594±3113比9447±1355,P=0.001),沐舒坦组(10 015±818)低于膈疝组(P=0.01).结论 沐舒坦不影响膈疝的发生率,但在一定程度能促进膈疝大鼠胎肺发育、改善肺小动脉发育不良;抑制TGF-β1的表达、抗氧化可能是其下游的作用.     

汉防己甲素对先天性膈疝大鼠模型肺泡Ⅰ型上皮的影响

目的 探讨先天性膈疝（CDH）大鼠肺泡Ⅰ型上皮细胞的分化情况及汉防己甲素产前干预对其分化的影响。方法 将孕9.5 d的SD大鼠随机分为3组（对照组、膈疝组和治疗组）,分别给予膈疝组和治疗组除草醚（以125 mg/只的剂量一次性灌胃）,对照组等量花生油。孕18.5 d,分别给予治疗组汉防己甲素（灌胃给药30 mg/kg,1次/d,连续3 d）,膈疝组和对照组等量生理盐水。孕21.5 d,剖宫产取出胎肺,分别行HE染色并检测各组肺泡面积比,免疫组化检测甲状腺转录因子1（TTF1）蛋白的表达,实时荧光定量PCR(real-time PCR）检测RT140、TTF1 mRNA的表达,电镜检测各组肺内Ⅰ型上皮细胞/Ⅱ型上皮细胞百分比（Ⅰ/Ⅱ％）。结果 光镜和电镜下膈疝组胎肺明显发育不良,Ⅰ型上皮减少、Ⅱ型上皮增多,治疗组明显改善,且肺泡面积比呈对照组>治疗组>膈疝组（ P<0.01）;透射电镜提示Ⅰ/Ⅱ％呈对照组>治疗组>膈疝组（ P<0.01）;免疫组化及RT-PCR提示:TTF1表达呈对照组＜治疗组＜膈疝组（ P<0.01）,RT140表达呈对照组＞治疗组＞膈疝组（ P<0.01）。结论 先天性膈疝大鼠肺内存在肺泡Ⅰ型上皮分化障碍,汉防己甲素产前干预能促进CDH胎鼠肺发育。     

粉防己碱对先天性膈疝大鼠模型胎仔肺Rho/Rho激酶表达的影响和意义

目的 探讨中药粉防己碱(TET)产前干预对先天性膈疝(CDH)大鼠模型胎仔肺内RhoA蛋白和Rho激酶表达的影响和意义.方法 将孕9.5d的SD雌鼠随机分为对照组、膈疝组和TET组,给予膈疝组和TET组除草醚灌胃建立CDH动物模型.孕16.5d给予TET进行干预.孕21.5d剖宫产取出胎肺,测肺质量/体质量比(Lw/Bw),苏木素-伊红(HE)染色光镜下观察肺发育及肺血管情况,免疫组化和Western blot法检测Rho蛋白A及Rho激酶ROCK1的表达情况.结果 膈疝组胎肺明显发育不良,TET组胎肺发育接近对照组.膈疝组肺发育指标Lw/Bw、肺泡面积比(PAA％)及肺血管重构指标管腔面积与血管总面积比值(LA％)明显低于对照组(2.11±0.36 vs.4.24±0.31;33.60±3.12 vs.58.81±2.92;38.58±2.15 vs.61.20±3.23,均P＜0.05).TET干预后Lw/Bw、PAA％、LA％指标较膈疝组明显改善(3.61±0.24 vs.2.11±0.36;42.46±3.68 vs.33.60±3.12;56.07±3.32 vs.38.58±2.15,均P＜0.05);膈疝组肺小动脉管壁厚度占血管外径百分比(WT％)和肺小动脉中膜厚度百分比(MT％)均明显高于对照组(26.64±2.41 vs.13.50±1.45;25.98±2.79 vs.16.47±2.07,均P＜0.05),TET组WT％、MT％显著低于膈疝组(16.02±2.35 vs.26.64±2.41和17.96±1.95 vs.25.98±2.79,均P＜0.05).免疫组化及West-ern blot检测提示,RhoA、ROCK1表达由低到高为对照组、TET组、膈疝组(P=0.000).结论 先天性膈疝胎仔肺内存在肺发育不良和肺血管重构,Rho/Rho激酶信号通路参与此过程,产前给予TET可能通过调节Rho/Rho激酶信号通路发挥肺保护作用.     

天性膈疝产前程序化管理的临床结局

目的总结先天性膈疝（congenital diaphragmatic hernia, CDH）产前程序化管理的临床结局。方法收集产前诊断为左侧膈疝患儿，回顾分析在产前程序化管理下CDH的新生儿期临床结局。结果左侧胎儿膈疝共计39例。4例(10.3%)胎儿膈疝终止妊娠(TOP)。1例TOP患儿产前超声和MRI评估为中重度并染色体异常，另外3例未做产前严重程度分级。在出生的病例中，产前超声或MRI评估为中重度者17例，轻度者19例。CDH新生儿期病死率为15.4%(6/39)（均产前评估为中重度者）。在分娩的中重度CDH患儿中，新生儿期病死率为26.7% (4/15)，体外膜肺氧合（ECMO）使用率为26.7%（4/15）。50%（2/4）的ECMO患儿在新生儿期存活。与轻度膈疝患儿相比，中重度膈疝患儿的补片使用比例更高(60.0% vs.25.0%，P<0.05)，住院的中位时间［34.0(15.9，63.7) d vs. 16.0(12.5，21.3) d，P<0.05］及机械通气的中位时间更长［14.0(7.6，22.2) d vs. 3.5(2.7，7.3) d，P<0.05)。结论产前程序化管理对于胎儿CDH的救治具有必要性和重要性，新生儿期临床结局满意。     

汉防己甲素对先天性膈疝大鼠模型肺组织内皮素表达的影响及意义

目的探讨汉防己甲素对先天性膈疝动物模型肺发育及肺动脉高压的影响及意义。方法25只成年雌性SD大鼠随机分为5组,每组5只。定时配种成功后,于配种后第9．5天,正常对照组孕鼠每只给予食用油灌胃,膈疝组每只给予Nitrofen灌胃。配种后第18．5天,正常对照组每只腹腔内注射生理盐水;各膈疝组分别给予相应的干预措施;配种后第21天对所有孕鼠行剖宫产,取出胎鼠肺组织,将肺组织进行内皮素免疫组化染色和图像分析。结果正常对照组4只雌鼠共产仔38只,均无膈疝形成。膈疝组雌鼠19只共产仔126只,有膈疝形成者57只,致畸率45．2％。图像分析及数据统计结果显示各膈疝组之间内皮素在肺小动脉、细支气管中的表达强度差异有统计学意义。而且肺小动脉和细支气管之间内皮素表达强度以及肺小动脉相对血管壁厚度、相对血管壁面积和肺小动脉相对积分光密度之间存在正相关（r=0．847、0．851、0．844,均P〈0．01）。结论汉防己甲素能明显改善先天性膈疝大鼠模型的肺组织发育不良、减轻肺动脉高压,同时能降低内皮素在肺内的表达强度。汉防己甲素可能是通过抑制肺组织内皮素的合成与释放,抑制内皮素与相应受体结合而发挥其作用的。     

孕期和生后维生素A缺乏及干预对幼鼠胫骨生长的影响

目的 探讨孕期和生后维生素A缺乏(vitamin A deficiency,VAD)及其补充对幼鼠长骨发育的影响.方法 健康成年雌性Wistar大鼠18只,分为5组.实验组母鼠及其仔鼠饲含维生素A 400 IU/kg、对照组及干预组于不同干预时间点改饲6 500 IU/kg饲料,实验持续至生后7周龄.各组子代鼠分别于生后0 d、4、7周分3批处死后称体质量、测胫骨长度,取血及骨样本待测,采用HPLC测血清维生素A水平、HE染色观测软骨组织形态学.结果 ①VAD组幼鼠的血清维生素A与正常组比较在生后0 d、4周和7周显著降低(P＜0.01).②VAD组幼鼠胫骨长度与正常组比较在生后0 d、4周和7周均明显变短(P＜0.01),至7周时,正常组与0 d补充组和胚补组比较无明显差别,而4周幼鼠干预组较正常组下降(P＜0.05),但仍长于VAD组(P＜0.05).③VAD组骺板软骨细胞增殖和钙化受到抑制,结构层次紊乱,同源细胞明显减少,软骨细胞陷窝小,核分裂象少且多幼稚.结论 维生素A缺乏对大鼠的软骨细胞发育有明显的影响,给予维生素A干预时间越早其纠正骨发育障碍的作用越有效.     

肾阳虚型大鼠子宫发育不良模型的建立及其特征研究——子宫组织形态学特性研究

目的:建立肾阳虚子宫发育不良动物模型,进行子宫组织形态观测。方法:将36只雌性大鼠随机分为4组。A组:空白组,8只;B组:地塞米松加假手术组,9只;C组:卵巢切除加地塞米松组,9只;D组:卵巢切除加地塞米松加右归丸组,10只。实验25d后处死大鼠,称取子宫重量并测定子宫内膜、肌层厚度,观察内膜组织结构。结果:子宫重量、内膜、肌层厚度D组与A组比较无显著差异(P>0.05),C组与D组比较差异显著(P<0.05);子宫组织结构C组细胞分化不良,D组明显改善。结论:卵巢切除加地塞米松可建立肾阳虚子宫发育不良动物模型;右归丸不仅可改善动物模型一般行为学表现,而且具有类性激素样作用,促进大鼠子宫发育。     

Effect of prenatal tetrandrine therapy on pulmonary vascular structur al remodeling in the nitrofen-induced CDH rat model

Ｃｏｎｇｅｎｉｔａｌｄｉａｐｈｒａｇｍａｔｉｃｈｅｒｎｉａ (ＣＤＨ)ｒｅｓｕｌｔｓｆｒｏｍｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｄｉａｐｈｒａｇｍｉｎｕｔｅｒｏｗｉｔｈｈｅｒｎｉａｔｉｏｎｏｆａｂｄｏｍｉｎａｌｖｉｓｃｅｒａｉｎｔｏｔｈｅｔｈｏｒａｘ Ｓｕｒｇｉｃａｌｒｅｐａｉｒｏｆｔｈｅｈｅｒｎｉａ ,ａｌｔｈｏｕｇｈｎｏｔａｌｗａｙｓｒｏｕｔｉｎｅ ,ｉｓｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｕｎｅｖｅｎｔｆｕｌ Ｈｏｗｅｖｅｒ,ｔｈｅｍｏｒｔａｌｉｔｙｒｅｐｏｒｔｅｄｆｏｒｇｒｏｕｐｓｏｆｔｈｏｓｅｈ…     

B族维生素治疗肾移植受者高同型半胱氨酸血症

目的：探讨叶酸、维生素B6及B12在治疗肾移植患者高同型半胱氨酸（Hcy）血症中的作用。方法：将195例预接受首次肾移植患者随机分为两组：试验组103例,口服叶酸5mg/d,维生素B6 50mg/d及维生素B12 1mg/d,连续2个月左右;对照组92例则未口服B族维生素。分别于服药治疗前、术前1d、术后1、10、20及30d检测血浆Hcy浓度和血清肌酐水平。结果：试验组血浆Hcy浓度与对照组相比具有统计学意义（P＜0.0001）,试验组术后血清肌酐水平下降较快,发生急性排斥反应的比例低于对照组。结论：肾移植患者围手术期适当补充叶酸、维生素B6及B12可降低血浆Hcy浓度,有助于移植肾功能的快速恢复,是减少肾移植并发症及急性排斥反应的重要措施。