CK13基因与EB病毒DNA在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的 探讨细胞角蛋白基因13（CK13）和EB病毒DNA在人鼻咽癌（NPC）组织中的表达及意义。方法 应用Northern杂交对32例NPC和8例慢性鼻咽炎（CINE）组织进行CK13mRNA水平检测,同时应用PCR方法进行EB病毒DNA检测。结果 ＣＫ１３基因在鼻咽炎组织中高表达,在ＮＰＣ组织中的表达显著下调。下调的频率达６５.63%(21/32)。结论 ＮＰＣ组织的分化可能与ＣＫ１３基因的表达下调有关。     

CK13基因5′旁侧活性与其组织特异性表达的相关性研究

目的 检测CK13基因′旁侧在不同细胞中的报告基因活性，探讨CK13基因组织特异性表达及上皮性肿瘤中异常表达与CK13基因′旁侧活性的关系。方法 采用报告基因分析的方法，构建CK13基因′旁侧帝侧413bp与氯霉素乙酰转移酶报告基因载体pCAT－Enhancer的重组体，并通过脂质体介导的转染技术导入不同细胞，检测该重组体报告基因的瞬间表达，探讨CK13基因′旁侧报告基因枯不同细胞中的活性。同时采用Northern-blot的方法检测这些细胞中CK13基因的表达情况，探讨CK13基因组织特异性表达与其5′旁侧活性的关系。结果 不同类型细胞中的CK13基因′旁侧报告基因活性不一，报告基因活性很低的细胞不表达CK13基因，报告基因活性很强的细胞明显表达CK13基因。结论 CK13基因组织特异性表达及上皮性肿瘤中异常表达与CK13基因′旁侧活性明显相关。     

细胞连接蛋白基因在鼻咽癌中的表达

目的：为了解细胞连接蛋白（Ｃｏｎｎｅｘｉｎ,Ｃｘ）基因在鼻咽癌组织中的表达,探讨Ｃｘ基因表达与鼻咽癌组织的相关性。方法：采用定量逆转录－聚合酶链反应（ｑＲＴ－ＰＣＲ）及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹检测方法。系统研究了２８例鼻咽癌活检组织、６例慢性鼻咽炎组织中Ｃｘ２６、Ｃｘ３２、Ｃｘ３７、Ｃｘ４０、Ｃｘ４３、Ｃｘ４６６种Ｃｘ基因的表达情况,并进行了相对定量研究。结果：人类慢性鼻咽炎组织和鼻咽癌组织中均有Ｃｘ３７和Ｃｘ４３表达,且表达水平未见有明显差异,Ｃｘ２６、Ｃｘ３２、Ｃｘ４０和Ｃｘ４６未见可检出的表达。结论：鼻咽癌的发生和发展与Ｃｘ基因的表达水平可能无明显关系。说明细胞间隙连接通讯功能的缺陷并不一定是鼻咽癌形成及恶性转变的共同事件。     

凋亡抑制基因Survivin mRNA在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的　探讨凋亡抑制基因Survivin在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法　应用OneStepRT PCR方法对 31例鼻咽癌组织及对应的对侧鼻咽部黏膜、11例其他头颈部肿瘤、10例正常人的鼻咽部黏膜进行SurvivinmRNA的半定量检测。结果　 31例鼻咽癌组织中 ,Survivin表达阳性率 87.1% (2 7/ 31) ,明显高于对应的对侧鼻咽部黏膜 (45 .2 % ,14 / 31,P <0 .0 5 )。鼻咽癌组织中SurvivinmRNA表达的强度 (Survivin/GAPDH 0 .5 0± 0 .2 1)明显高于对应的对侧鼻咽部黏膜 (0 .16± 0 .19)和正常人的鼻咽部黏膜Survivin表达强度 (0 .10± 0 .13,P <0 .0 0 1) ,但与其他头颈部肿瘤表达强度 (0 .4 0± 0 .2 9)比较无显著性差异 (P >0 .0 5 )。Ⅲ Ⅳ期的鼻咽癌病人中SurvivinmRNA表达强度 (0 .6 0± 0 .0 7)明显高于Ⅰ Ⅱ期的鼻咽癌病人 (0 .36± 0 .2 7,P <0 .0 1) ,但SurvivinmRNA表达强度与病人的年龄、性别、VCA IgA及有无淋巴结转移等无相关性。结论　SurvivinmRNA的过度表达可能在鼻咽癌发生、发展过程中起一定作用 ,检测Survivin在鼻咽癌中的表达对鼻咽癌的诊断、临床分期等有一定意义。     

CK4与CK13在喉咽鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的：探讨喉咽鳞状细胞癌组织中细胞角蛋白13（CK13）和细胞角蛋白4（CK4）的表达与喉咽鳞状细胞癌临床病理特征的关系。方法：应用免疫组织化学方法检测56例喉咽鳞状细胞癌患者的癌组织标本及癌旁正常组织中CK13及CK4的蛋白表达,应用VIDAS图像分析仪分析其图像的积分光密度,并进行统计学处理。结果：CK4与CK13在癌旁正常组织中均呈强阳性表达,而在喉咽鳞状细胞癌组织中的表达下降（P〈0．01）,且与病理分化程度均呈正相关（P〈0．05）。CK4在T1、T2期的表达最强,在T3、T4期的表达依次减弱（F=93．814,P〈0．05）;CK4在Ⅰ～Ⅱ期的表达最强,在Ⅲ期、Ⅳ期中的表达逐渐减弱（F=127．894,P〈0．05）;CK4在无淋巴结转移的鳞状细胞癌组织中的表达较强,而在有淋巴结转移的鳞状细胞癌组织中表达较弱（T=10．678,P〈0．05）。而CK13与肿瘤大小、临床分期及有无淋巴结转移无显著相关。结论：CK4与CK13共同检测对喉咽鳞状细胞癌的早期诊断、手术方法的选择以及判断预后具有指导意义。     

维甲酸抑制鼻咽癌端粒酶和hTR表达及诱导凋亡的研究

目的:探讨维甲酸(RA)诱导鼻咽癌端粒酶及hTR表达下降和凋亡改变。方法:10-5mol/L维甲酸处理HNE1细胞后,采用TRAP PCR ELISA、逆转录巢式PCR、凋亡指数及透射电镜检测端粒酶、hTR表达及凋亡改变。结果:加入维甲酸6 d后,HN E1细胞形态不规则,细胞悬浮,细胞数减少,端粒酶及hTR表达受抑制,间接定量显示端粒酶活性(0.68±0.14)U只及对照组(1.16±0.46)U的1/2,凋亡指数及细胞明显高于对照组(P<0.05)。结论:维甲酸能明显抑制鼻咽癌细胞中端粒酶及hTR表达,并诱导该类肿瘤细胞增殖受阻及发生凋亡改变。     

反义角蛋白13慢病毒质粒对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的探讨反义角蛋白13（Keratin-13,KRT13）慢病毒质粒对鼻咽癌HNE-1细胞放射敏感性的影响。方法构建稳定表达反义KRT13基因的慢病毒质粒,并通过G418筛选出稳定转染该质粒的鼻咽癌HNE-1细胞。按数字随机法将细胞分为control（正常HNE-1细胞）组、lentivirus（转染慢病毒空载体）组和anti—KRT13（转染慢病毒质粒组）。并分别检测各组细胞中KPT13含量。同时采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡的变化。在0、1、2、4、6、8Gy6个放射剂量点下,采用克隆形成实验分析转染反义KRT13基因对细胞的存活影响,并分别用单击多靶模型和线性二次模型拟合出细胞的剂量存活曲线,对比放射生物学参数DO、Dq、N值、α、β和SF2值,评价细胞放射敏感性的变化。结果转染慢病毒质粒组的HNE-1细胞DO、Dq、N和SF2值较其他两组均增加,仪／B值减小,且差异具有统计学意义（P均〈0．05）;反义KRT13可以阻滞细胞于G2／M期,同时抑制细胞凋亡。结论反义KRT13慢病毒质粒可降低鼻咽癌HNE-1的放疗敏感性。     

Pulsed-dye laser and retinoic acid delay progression of oral squamous cell carcinoma: a murine model

OBJECTIVES/HYPOTHESIS: This study examined the role of the pulsed-dye laser (PDL) at 585 nm coupled with retinoic acid at therapeutic (5.0 mg/kg) and nontherapeutic (0.5 mg/kg) doses to delay the progression of cancer with a two-hit approach. The existing vasculature is selectively targeted by the laser, whereas retinoic acid inhibits future angiogenesis. STUDY DESIGN: Randomized, prospective study in a murine model. METHODS: Twenty-five athymic nude mice were inoculated with oral squamous cell cancers on six flank sites and randomly divided into five groups: 1) control subjects, 2) treatment with 0.5 mg/kg retinoic acid (RA 0.5), 3) treatment with 5.0 mg/kg retinoic acid (RA 5.0), 4) treatment with RA 0.5 + PDL, and 5) treatment with RA 5.0 + PDL. The PDL groups received irradiation after inoculation. The retinoic acid was administered daily. The tumors were counted and measured for 14 days. RESULTS: The control group developed visible tumors in 50% of the inoculation sites at 3 days compared with 3 days (RA 0.5) and 4 days (RA 5.0) for the retinoic acid groups and 9 days (RA 0.5 + PDL) and 10 days (RA 5.0 + PDL) for the laser treatment groups. There was no tumor growth until day 7 in the RA 5.0 + PDL group. The tumor volume was statistically different between the treatment groups. CONCLUSION: This study demonstrated the superiority of a single treatment with the PDL coupled with retinoic acid to delay the progression of cancer when compared with treatment with retinoic acid alone, thus introducing a novel strategy in cancer control.     

人头颈鳞癌细胞中CDH13的表达及其甲基化状态研究

目的 研究抑癌基因H-钙黏素(CDH13)在人头颈部鳞癌细胞系SCC10A和PCI-37B中的表达水平及其启动子区域的甲基化状态。 方法 定量 PCR和Western blotting检测CDH13在头颈鳞癌细胞系SCC10A和PCI-37B及两种正常组织中的mRNA和蛋白表达变化,并通过甲基化特异性PCR和硫化测序检测CDH13基因启动子区域的甲基化情况。 结果 与正常组织比较,头颈鳞癌细胞SCC10A和PCI-37B中CDH13的mRNA和蛋白表达水平均降低。SCC10A和PCI-37B细胞中CDH13基因甲基化水平高于口腔黏膜正常组织,人头颈鳞癌细胞系中CDH13基因启动子区域呈高甲基化状态。 结论 CDH13启动子区域高甲基化可能是导致人头颈鳞癌中CDH13表达沉默的重要因素,但其影响肿瘤发生发展的具体机制仍需进一步探究。     

KAI1基因在喉癌及转移淋巴结中的表达

目的 通过研究KAI1基因在人类喉鳞状细胞癌及转移淋巴结中的蛋白表达情况,试图阐明KAI1基因蛋白的表达与喉癌转移之间的关系。方法 取喉鳞状细胞癌组织标本蜡块40例及转移的淋巴结13例,以癌旁正常组织标本蜡块30例作为对照,采用免疫组织化学SP法,检测KAI1单克隆抗体在喉鳞状细胞癌、转移淋巴结及癌旁正常组织标本中蛋白的表达,并结合患者临床病理资料进行统计学分析。结果 KAI1基因在癌旁正常组织、喉鳞状细胞癌及转移淋巴结中的表达率分别为93.33%（28/30）、62.50%（25/40）、30.77%（4/13）,且各组之间差异均有统计学意义（P＜0.05）。KAI1基因的蛋白表达与喉鳞状细胞癌的临床分期差异有统计学意义（P＜0.05）,与性别、年龄、原发部位、病理学分级及有无淋巴结转移无关(P＞0.05)。 结论 KAI1基因在喉鳞状细胞癌转移淋巴结中的表达较在喉鳞状细胞癌中的表达呈显著性下降,该基因可能在喉癌转移过程中起一定作用。     

端粒酶抑制因子PinX1基因在鼻咽癌细胞中的表达及作用效应分析

目的 探讨PinX 1基因在鼻咽癌细胞中的表达及其作用效应分析.方法 构建包含全长人PinX 1基因序列的质粒载体pEGFP-C 3-PinX 1及Pinx 1的小干扰RNA,PinX1-FAMsiRNA.脂质体法转染人鼻咽癌5～8F细胞,采用RT-PCR检测PinX 1基因和端粒酶催化亚单位( hTERT) mRNA...     

The Effects of 13-cis Retinoic Acid on Squamous Cell Carcinoma Proliferation and Adhesion to Extracellular Matrix Proteins

To understand the role of retinoids in chemoprevention, the authors examined the effects of 13-cis retinoic acid (cRA) on squamous cell carcinoma proliferation and adhesion to extracellular matrix proteins. The antiproliferative effects of cRA were first seen on day 11 (66% inhibition) and progressed through day 19 (96% inhibition). Using an adhesion assay, the authors then investigated the effects of cRA and transforming growth factor-beta₁ (TGF-β₁) on cellular adhesion to purified type IV collagen, fibronectin, and laminin matrices. Cells treated for 4 days with TGF-β₁ increased adhesion by 15% to 29%, and cells treated with cRA increased adhesion by 19% to 39%. However, the use of cRA alone resulted in a decrease in adhesion when tumor cells were treated for 7 days (20% to 32%) and 15 days (25% to 40%). The authors also discuss how cRA acts as a differentiating agent on squamous cell carcinoma.     

喉癌组织中FHIT基因蛋白表达的研究

目的:以喉鳞状细胞癌为研究对象,探讨FHIT基因蛋白表达在喉癌发生、发展中的作用及临床意义.方法:用免疫组织化学SP法检测52例喉癌组织、23例癌旁组织及10例正常组织中FHIT基因蛋白的表达,分析在不同临床病理指标下FHIT蛋白表达的情况.结果:FHIT蛋白在正常组织中的阳性表达率(90.0%)及癌旁组织中的阳性率(78.3%)均高于癌组织中的阳性率(46.2%),差异有统计学意义(均P＜0.01).癌组织FHIT蛋白阳性表达率与临床分期和颈淋巴结转移有关,与病理分级无关.结论:喉癌的发生、发展与FHIT抑癌基因的失活有密切关系,FHIT基因很可能是喉癌重要的侯选抑癌基因.     

鼻咽癌中Rad52的表达及其临床意义

目的：研究同源重组修复相关基因Rad52在鼻咽癌组织中的表达并探讨其临床意义。方法：采用免疫组织化学三步法检测38例鼻咽癌患者癌组织及其相应存在的癌旁组织的Rad52蛋白的表达,并比较其表达结果,分析癌组织中Rad52的表达与患者的临床资料（如性别、年龄、临床分期等）的关系。结果：鼻咽癌组织与癌旁黏膜的Rad52蛋白表达相比差异有统计学意义（P〈0.05）。Spearman等级相关分析显示,癌组织中Rad52蛋白表达情况与患者的临床分期呈负相关性（P〈0.05）,而与患者的性别、年龄、复发率、淋巴结转移率等无显著相关性（P〉0.05）;生存分析显示,Rad52蛋白的高表达对患者的生存时间有显著影响（P〈0.05）。结论：Rad52蛋白对鼻咽癌患者的治疗效果及预后评估有重要意义。     

反义细胞角蛋白13基因对人鼻咽癌HNE1细胞移植瘤放疗敏感性的影响

目的　观察反义细胞角蛋白13（cytokeratin 13,CK13）基因对鼻咽癌人嗜中性细胞弹性蛋白酶1（human neutrophil elastase,HNE1）细胞移植瘤放疗敏感性的影响。方法　将HNE1细胞株分为A组（未经处理）、B组（转染慢病毒空载体）,C组（转染慢病毒反义CK13a）和D组（转染慢病毒反义CK13b）共4组建立相应动物模型,放疗后采用流式细胞仪、免疫组化、PCR、Tunel法及Westernblotting检测。结果　细胞周期检测发现转染慢病毒质粒的C组和D组在放疗后与对照组比较G2/M期阻滞时间显著延长;免疫组化结果显示C组和D组移植瘤中CK13表达下降;Tunel法检测细胞凋亡坏死率发现C组和D组细胞凋亡率明显降低;Western blotting检测发现caspase-3凋亡标志物下降。PCR检测发现CDC25mRNA水平明显降低。结论　反义CK13基因通过调控细胞周期和凋亡可降低鼻咽癌HNE1移植瘤的放疗敏感性,并与caspase-3凋亡途径和CDC25信号通路相关。     

杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性与鼻咽癌的关联性

目的探索杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性与鼻咽癌(NPC)发生的关联性。方法采用聚合酶链反应(PCR)/系列特异性引物(SSP)方法,对比43例广东籍汉族鼻咽癌患者和53例籍贯种族都匹配的正常对照KIR 基因位点的多态性。结果共检出目前已知的16个KIR基因,在检测的全部个体中,3DL3、3DL2及2DL4出现频率均为100%。广东籍鼻咽癌病例组中 2DL2、2DS1、2DS3、2DS4的基因频率比正常对照组显著升高（P值分别为0.035、0.002、0.007、0.001),而其他各KIR 基因频率差异无统计学意义。结论2DL2,2DS1、2DS3、2DS4基因频率升高可能与NPC发病相关。