疏肝活血方合药血清对大鼠骨髓源性内皮祖细胞血管新生相关基因表达的影响

目的：观察疏肝活血方含药血清对大鼠骨髓来源的内皮祖细胞（EPCs）血管新生相关基因VEGF、HGF和HIF-1α表达的影响。方法：从大鼠骨髓中获取单个核细胞,体外培养1周后,采用免疫荧光细胞化学和激光共聚焦显微镜鉴定,于培养体系中加入疏肝活血方及其拆方的含药血清,培养24h,Real—TimePCR方法检测EPCs中VEGF、HGF和HIF-1α的mRNA表达。结果：贴壁细胞培养诱导后具有内皮细胞的形态学和免疫学特征,Real—TimePCR检测结果发现,疏肝活血方含药血清能明显提高EPCs中VEGF、HGF、HIF—1α的mRNA表达量,与对照相比差异具有显著意义（P〈0．01）。结论：疏肝活血方能促进EPCs中血管新生相关基因VEGF、HGF和HIF-1α的表达,是该方促血管新生的机制之一。     

健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞生物学功能的影响

目的:探讨健脾补肾活血方对大鼠骨髓源内皮祖细胞增殖、迁移及黏附的影响。方法:体外分离培养大鼠骨髓源内皮祖细胞,设空白对照组、健脾补肾活血方低剂量组(0.35 g/ml)、健脾补肾活血方中剂量组(0.65 g/ml)、健脾补肾活血方高剂量组(1.0 g/ml)。药物干预24 h后,MTT法检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移能力,黏附实验检测细胞黏附能力。结果:与空白对照组比较,不同浓度的健脾补肾活血方以剂量依赖方式显著提高大鼠骨髓源内皮祖细胞的增殖水平,促进细胞迁移,增强细胞的黏附能力,且健脾补肾活血方高剂量组对细胞增殖、迁移及黏附的影响最大。结论:健脾补肾活血方能促进大鼠骨髓源内皮祖细胞的增殖、迁移及黏附功能,具有恢复细胞生物学功能的作用。     

补肾活血方含药血清对弱精子症精子运动能力的影响

目的研究体外添加补肾活血方含药血清对弱精子症精子运动能力的影响。方法将弱精子症患者精子与补肾活血方含药血清共培养,应用精子运动CASA分析观察补肾活血方对精子运动能力的影响。结果与含药血清共培养后,运动精子率,前向性运动精子率、平均路径运动速度、曲线运动速度、精子头部侧摆幅度和鞭毛摆动频率均显著提高。结论体外添加补肾活血方含药血清能提高精子运动能力。     

健脾补肾活血方含药血清调控PI3K/Akt信号通路影响大鼠内皮祖细胞功能的机制

目的 探讨健脾补肾活血方含药血清影响大鼠骨髓源内皮祖细胞（EPCs）增殖、迁移、成管功能的机制,以期为该方治疗缺血性脑血管病提供理论依据。方法 SD大鼠12只,随机分为两组：中药组和对照组,每组6只。分别给予每毫升含生药为3.25 g健脾补肾活血方颗粒药液和CMC-Na溶液灌胃,采集血清,组内混合,保存备用。SD大鼠2只,取骨髓EPCs,并培养、鉴定。将EPCs随机分为8组：空白组（KB）,低、中、高浓度含药血清组（Lx、Mx、Hx）,PI3K抑制剂组（PI）,低、中、高浓度含药血清+PI3K抑制剂组（Lp、Mp、Hp）。分别给予同等体积的对照组混合血清,10%、20%、40%浓度中药组混合含药血清,30μmol·L-1浓度LY294002,10%、20%、40%浓度中药组混合含药血清+30μmol·L-1浓度LY294002。Western blot、CCK8、Tranwell、体外成血管试剂盒分别检测各组EPCs p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K的相对蛋白表达量、增殖、迁移、成管能力。结果 与空白组（KB）比较,健脾补肾活血方低、中、高浓度含药血清组（Lx、Mx、Hx）E...     

疏肝活血方促进缺血肢体血管新生及调节相关基因表达的研究

目的:探讨疏肝活血方对肢体缺血后代偿性血管新生及相关基因表达的调节作用。方法:BALB/c裸鼠120只,随机分为疏肝活血方组、疏肝方组、活血方组、模型对照组和正常对照组,股动脉结扎法建立裸鼠肢体缺血模型,分别于术后1、2、3、4周观察各组裸鼠肢体缺血状态的改变,应用苏木素-伊红(HE)染色和CD34免疫组化染色观察肌肉组织一般形态学及微血管数的改变,应用Western蛋白质印迹检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子(VEGF)基因在肌肉组织中的表达。结果:与模型对照组相比,疏肝活血方能明显改善裸鼠肢体的缺血状态。术后2-4周,疏肝活血方组裸鼠缺血肢体肌肉中的微血管数(MVC)明显高于模型对照组(P<0.01),缺血肢体肌肉中HIF-1α、HGF和VEGF的蛋白质表达明显强于其它各组(P<0.05)。结论:疏肝活血方具有明显的促血管生成作用,能够明显上调血管新生相关基因HIF-1α、HGF和VEGF的蛋白质表达水平。     

疏肝活血方药对实验性动脉粥样硬化血清钙离子及环核苷酸浓度的影响

采用胆固醇饲喂日本大耳白家兔3个月，以造成主动脉粥样硬化病变模型，在建立动物模型的同时，给予疏肝活血复方中药，待实验结束时，取血测试，观察该中药对血钙浓度，血浆环核苷酸浓度的影响，结果显示，该中药可明显降低Ca2＋浓度，升高环磷酸腺苷（cAMP）／环磷酸鸟苷（cGMP）比值。提示疏肝活血方对动脉粥样硬化（As）的防治起到积极作用。     

疏肝健脾活血方含药血清对肝纤维化模型大鼠肝窦内皮细胞失窗孔化的影响

目的探讨疏肝健脾活血方治疗肝纤维化的可能作用机制。方法 10只SD大鼠以10 ml/kg疏肝健脾方浓缩液(浓度2. 7 g/ml)灌胃,每日1次,连续3天后制备含药血清。中药血清设5%、10%、15%、20%、25%共5个浓度,采用MTT法筛选实验药物浓度。采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射建立肝纤维化大鼠模型后分离肝纤维化肝窦内皮细胞(SEC),同时集正常大鼠肝星状细胞(HSC)和SEC。实验分为正常组、模型组、DAPT组、NF组、中药组、中药加DAPT组、中药加NF组,共7组。各组均加入HSC,正常组加入正常大鼠SEC,其余组加入肝纤维化大鼠SEC,常规培养24 h。吸出上清液,DAPT组、中药加DAPT组加入0. 2μmol/L DAPT (Notch通路阻断剂),NF组、中药加NF组加入1 gsu/ml rh NF-κB (Notch通路激动剂)。前4组加入含10%FBS DMEM/12培养基,后3组加入含预筛选浓度中药血清、10%FBS DMEM/12培养基,培养72 h后MTT法检测各组HSC活力,Western Blot法检测SEC中CD31、vWF蛋白表达情况。结果筛选出10%浓度的中药血清对细胞增殖有抑制作用。与正常组比较,造模2、4、8周模型组HSC活力上升,造模4、8周CD31蛋白表达升高(P <0. 05或P <0. 01);与模型组比较,NF组HSC活力上升,DAPT组和中药组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达下降(P <0. 05或P <0. 01);与NF组比较,中药加NF组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达下降(P <0. 05或P <0. 01);与DAPT组比较,中药加DAPT组HSC活力、CD31、vWF蛋白表达均下降(P <0. 05或P <0. 01)。结论疏肝健脾活血方可通过干预Notch通路,抑制HSC活力及SEC失窗孔化,可能是其治疗肝纤维化的作用机制之一。     

疏肝活血法对老龄动脉硬化模型大鼠血管内皮功能的影响

目的 证实疏肝活血法对老龄动脉粥样硬化模型大鼠血管内皮功能保护及改善动脉粥样硬化作用.方法 将40只雄性老龄wistar大鼠分为空白组、模型组、疏肝活血方低剂量和高剂量组4组,疏肝活血方低、高剂量组每日灌服药液0.75 g/kg、1.5 g/kg,14周后检测内皮素(ET)、血栓素(TXB2)、前列腺素(PGI2)、一氧化氮(NO)及血脂,取主动脉进行组织学观察.结果 模型组大鼠内皮功能失调、脂质代谢紊乱、主动脉粥样硬化程度严重,疏肝活血方高、低剂量组均可升高实验大鼠PGI2及NO,降低TXB2水平(P＜0.05或P＜0.01),降低三酰甘油(TC)、总胆固醇(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P＜0.05或P＜0.01);高剂量升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平(P＜0.05),减少主动脉血管中膜钙盐沉积,减少泡沫细胞和平滑肌细胞增生.结论 疏肝活血方能改善模型大鼠的内皮功能,改善脂质代谢紊乱,减轻大鼠动脉粥样硬化斑块病变程度,并存在量效关系.     

血府逐瘀汤诱导内皮祖细胞对心肌缺血模型大鼠缺血区血管新生的影响

目的 观察血府逐瘀汤诱导内皮祖细胞(EPCs)对心肌缺血模型大鼠缺血区血管新生的影响,探讨其作用机制.方法 采用结扎冠状动脉左前降支方法 制备急性心肌缺血模型.实验大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、他汀组和血府逐瘀汤低、中、高剂量组.造模后将荧光标记的EPCs尾静脉注射植入模型大鼠体内,成模后灌胃给药,给药第3日和...     

芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞数量及其功能的影响

目的观察芪红合剂含药血清对人外周血内皮祖细胞（EPCs）数量及其功能的影响。方法采用血清药理学方法,制备成芪红合剂低、中、高剂量含药血清及空白血清。用密度梯度离心法分离获得单个核细胞,培养7 d后,经激光共聚焦显微镜、流式细胞仪鉴定为正在分化的EPCs;收集贴壁细胞,分别用含低、中、高剂量芪红合剂含药血清及空白血清的条件培养液培养12 h、24h、48 h后,倒置相差显微镜下观察EPCs生长情况。分别采用细胞计数法、黏附能力测定实验观察EPCs的数量和黏附能力。结果与对照组比较,芪红合剂含药血清能增加EPCs的数量,且能改善EPCs黏附能力,并且其影响呈一定的剂量相关性、时间依赖性。低剂量芪红合剂组较中、高剂量组作用明显（P〈0.05）,且在同一剂量组中,芪红合剂含药血清对EPCs数量和黏附功能的影响随时间推移逐渐增强,于72 h达到高峰作用（P〈0.05）。结论芪红合剂能促进体外培养人外周血EPCs的数量和黏附功能。     

清肝活血方和拆方对脂多糖介导库普弗细胞活化的调控作用研究

目的探讨脂多糖(LPS)介导库普弗细胞(KC)活化的功能变化及清肝活血方和拆方对其调节作用。方法原代分离KC,筛选LPS最适剂量和最佳作用时间;制备清肝活血方及其拆方含药血清,以ELISA、Westernblot方法检测清肝活血方及其拆方含药血清对LPS激活KC表达TNF-α、ERK1/2和激活蛋白1(AP-1)的影响。结果正常培养的KC在加入LPS后,TNF-α蛋白在2h开始明显增加,6h到达峰值;1mg/L刺激分泌到达峰值,P-ERK表达明显增加。清肝方通过抑制P-ERK来调节核因子AP-1的表达;活血方下调P-ERK,抑制效应产物TNF-α的表达;清肝活血方可以抑制P-ERK,抑制核因子AP-1的表达。结论清肝活血方及其拆方含药血清通过影响ERK信号通路,抑制效应因子TNF-α的产生,从而起到保护肝细胞的作用。     

补肾解毒活血法与益气补血法对骨髓抑制小鼠造血功能影响的比较研究

目的:比较补肾解毒活血法与益气补血法对环磷酰胺(CTX)所致骨髓抑制小鼠造血功能的影响及其作用机制的不同特点.方法:昆明种小鼠80只,随机分为4组,正常对照组、模型组、补肾解毒活血组(20.55 g·kg -1·d-1)和益气补血组(17.47 g·kg-1·d-1).采用CTX 100 mg·kg-1 ip,连续3d,制成骨髓抑制小鼠模型.各组于造模完成后次日开始ig连续10d.分别于造模前及造模后1,3,5,7,10,14 d动态检测外周血象;于末次给药次日后进行骨髓有核细胞计数(BMNC)及粒-单核系集落形成单位( CFU-GM)、红系集落形成单位(CFU-E)、和红系爆式集落形成单位(BFU-E)集落计数.结果:补肾解毒活血方和益气补血方均可明显升高模型小鼠的WBC,PLT,BMNC,可促进造血祖细胞(HPC)增殖,CFU-GM,CFU-E,BFU-E集落数均显著高于模型组(P＜0.01);补肾解毒活血方对血小板的恢复优于益气补血方.结论:补肾解毒活血方和益气补血方均可促进骨髓造血祖细胞集落生成,具有减轻和改善化疗后骨髓抑制的效果,而前者尤可减轻血小板减少、促进其恢复;其作用机制可能在骨髓细胞分化过程或造血微环境等途径上有不同.     

解毒益气活血方抑制血管生成的实验研究

目的:探讨解毒益气活血方对体外血管形成的抑制作用。方法:采用MTT法观察解毒益气活血方对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖的影响。结果:解毒益气活血方在10%～20%浓度范围内,具有抑制血管内皮增殖作用(内皮存活率在63.8%～58.5%),且均与对照组有显著差异。结论:解毒益气活血方(10%～20%)在体外具有抑制血管增殖作用。     

大鼠血管内皮祖细胞培养及鉴定

目的探索骨髓来源的血管内皮祖细胞的分离培养方法,为缺血性疾病治疗找到新的移植细胞来源。方法采集SD雄性大鼠骨髓细胞,用梯度密度离心法分离单核个细胞,种植于提前包埋了纤维连接蛋白的培养皿中培养,将血管内皮生长因子（VEGF）、重组纤维细胞生长因子（bFGF）和重组上皮生长因子（EGF）作为诱导剂,将72h后贴壁细胞（A组）和非贴壁细胞（B组）分别培养,观察细胞形态的变化以及数量变化,取A组在第14天,应用免疫组化和免疫荧光技术鉴定内皮祖细胞系列标志。结果A组细胞经过体外诱导后大量扩增,在28d时仍有强大扩增的活力,呈铺路石样,而B组细胞短期内可以大量增殖,呈长索样,之后逐渐变少;在细胞迁移实验中,A组细胞可以相互融合形成血管结构,而B组细胞之间则不能融合,随着时间推移,逐渐凋亡;A组经过CD34免疫荧光、CD133、FLK-1免疫组化鉴定呈阳性,并能特异性吸附FITC-UEA-和内吞DIL-Ac-LDL。结论自体骨髓细胞通过贴壁换液后可以分离培养出内皮祖细胞,取贴壁细胞经过体外诱导后大量扩增,并通过表面标记物鉴定可以确认为内皮祖细胞,而非贴壁细胞不能大量增殖,故将贴壁分离方法来筛选内皮祖细胞,此方法简易,并能满足细胞移植的需要,因而,在移植治疗脑缺血引起的内皮损伤应该有较好的临床应用前景。     

舒肝健脾活血方对脾切断流术后门静脉血栓形成相关因子的

目的:观察舒肝健脾活血方对脾切断流术后门静脉血栓形成(PVT)相关因子的影响。方法:选取门静脉高压症行脾切断流术患者105例,随机分为研究组53例与对照组52例。2组均从术后第3天起应用阿司匹林治疗,研究组于术前3天开始给予舒肝健脾活血方。2组疗程均为术后14 d。观察比较围手术期不同时间点(术前、术后3、7、14 d) P-选择素、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)水平及抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性。结果:术后3、7 d,2组P-选择素水平均较前一时间点升高(P<0.05),术后14 d,2组P-选择素水平较术后7 d降低(P<0.05);且术后7、14 d时,研究组P-选择素水平明显低于对照组(P<0.05)。术后3、7 d,2组MMP-9水平均较前一时间点升高(P<0.05),术后14 d,2组MMP-9水平较术后7 d降低(P<0.05);且术后7、14 d,研究组MMP-9水平明显低于对照组(P<0.05)。术后3、7、14 d,2组AT-Ⅲ水平均较术前降低(P<0.05),而研究组术后各时间点AT-Ⅲ水平均明显高于对照组(P<0...     

益气活血方动员骨髓干细胞对心肌IRI大鼠血管新生的影响

目的:研究益气活血方对心肌缺血再灌注损伤(IRI)鼠心肌细胞CD34+和血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白表达的影响,以探讨其对骨髓干细胞动员作用及血管新生作用机制。方法:大鼠120只,随机分为假手术组,IRI组;rh EPO动员组;益气活血方组;联合动员组,每组24只,制备心肌IRI模型后,各组再随机分为7d,14 d,28 d三个时间段亚组,每组8只。采用免疫组化法检测各组CD34+及VEGF蛋白表达。结果:与模型组比较,rh EPO动员组和益气活血方组CD34+蛋白表达和VEGF蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P﹤0.05,P﹤0.01);与rh EPO动员组和益气活血方组比较,联合动员组CD34+蛋白表达和VEGF蛋白表达明显升高,差异具有统计学意义(P﹤0.05,P﹤0.01)。结论:益气活血方具有动员骨髓干细胞作用,益气活血方联合动员剂对骨髓干细胞动员和血管新生具有增强促进作用。     

补肾活血方调节在位内膜蛋白质表达 治疗子宫内膜异位症不孕机制研究

目的: 比较观察子宫内膜异位症(endometriosis,Ems)相关不孕患者与正常育龄期妇女在位子宫内膜的蛋白质表达差异及中药补肾活血方对其调节作用。方法: 提取正常育龄期妇女、EMs不孕患者服用补肾活血方治疗3个月前后的分泌中期子宫内膜各4例,利用差速离心和密度梯度离心方法来提取纯化内膜蛋白质,采用荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)标记、分离蛋白质,Decyder差异分析软件进行分析、识别差异表达蛋白质,并应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)得到相应差异蛋白的肽质量指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果: 分析得到35个差异蛋白点,质谱鉴定出28种差异蛋白。结论: 分析预测Ems不孕发生的5种可能机制,涉及10种蛋白;补肾活血方作用于26种蛋白从4种可能机制修复Ems不孕患者在位内膜缺陷。     

舒肝活血化痰方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清瘦素、胰岛素抵抗指数的影响

目的探讨舒肝活血化痰方对非酒精脂肪性肝炎大鼠胰岛素抵抗(IR)的作用。方法采用高脂饮食复制高脂血症脂肪性肝炎大鼠模型,用舒肝活血化痰方治疗,以东宝肝泰作对照,观察其对模型大鼠肝功能、血脂、肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、血清瘦素(LEP)和胰岛素抵抗指数(FIRI)的影响。结果舒肝活血化痰方显著改善肝功能(P<0.01或P<0.05),降低血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),同时升高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量(P<0.01或P<0.05),并有显著降低肝组织Hyp含量(P<0.05)及血清LEP、FIRI(P<0.01或P<0.05)的作用。结论舒肝活血化痰方可能通过改善LEP及FIRI,抑制肝脏的脂肪贮积、减轻肝损伤和阻止脂肪性肝纤维化的发生发展。