我院临床分离的26株铜绿假单胞菌耐药性及其所产β-内酰胺酶的基因型分析

目的:了解我院临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性及其所产β-内酰胺酶的基因型。方法:采用VITEK32型全自动细菌鉴定仪对临床分离的26株铜绿假单胞菌进行细菌鉴定,采用琼脂扩散法检测其对16种常用抗菌药物的耐药性,采用聚合酶链反应法对其进行基因检测,靶基因为TEM、SHV、OXA、PER、VEB、GES、CTX-M-1等7种β-内酰胺酶基因,然后对检测的阳性产物进行测序,并对照GenBankDNA序列数据库确定基因类型。结果:26株细菌均鉴定为铜绿假单胞菌,耐药性分析结果表明其对其中12种常用抗菌药物有不同程度的耐药性,通过基因对照确定26株铜绿假单胞菌所产的β-内酰胺酶均为TEM-1型基因。结论:本组26株铜绿假单胞菌所产β-内酰胺酶可能主要为TEM-1型基因,具有多重耐药性。     

β—内酰胺酶研究进展

细菌主要是通过产生质粒介导的超广谱β-内酰胺酶,染色体介导的ClassC酶、增加广谱酶的产量及降低外膜的通透性等而对头孢他定、头孢噻肟等第三代头孢菌素耐药。其酶的种类繁多,特性各异。目前从临床产酶耐药菌中得到的TEM型酶已报道到TEM-68,SHV型酶到SHV-24,ClassC酶有AmpC酶和OXA酶等。随着β-内酰胺酶抑制剂与β-内酰胺类抗生素的联合应用,近年来又发现了耐抑制剂的β-内酰胺酶（inhibitor-resistant TEM β-lactamase）,简称IRT-β-内酰胺酶。它们是通过TEM型酶变异而使抑制剂的抑酶作用减弱。大多数耐抑制剂的β-内酰胺酶都是TEM-1和TEM-2的衍生酶。另外,有报道说,近年来抑制剂耐药的β-内酰胺酶在SHV型酶的家族也出现了。     

耐头孢哌酮对头孢哌酮/舒巴坦敏感的革兰阴性杆菌β-内酰胺酶分析

目的分析对头孢哌酮耐药但对头孢哌酮／舒巴坦敏感的革兰阴性杆菌β-内酰胺酶。方法用PCR方法扩增62株临床分离菌TEM型及SHV型β-内酰胺酶耐药基因并对从65株临床分离的革兰阴性杆菌及7株铜绿假单胞菌中分离提取的β-内酰胺酶进行等电点测定。结果62株临床分离菌PCR扩增结果表明，58．1％（36／62）对头孢哌酮耐药但对头孢哌酮／舒巴坦敏感的革兰阴性杆菌含有TEM型β-内酰胺酶；32．3％（20／62）含有SHV型β-内酰胺酶。65株临床分离的革兰阴性杆菌产生的β-内酰胺酶等电点的测定结果表明36．9％（24／65）的革兰阴性杆菌产生一种β-内酰胺酶，29．2％的革兰阴性杆菌产生2种β-内酰胺酶，13．8％的革兰阴性杆菌产生3种β-内酰胺酶，10．7％的革兰阴性杆菌产生4种β-内酰胺酶，6．1％的革兰阴性杆菌产生5种β-内酰胺酶。6株铜绿假单胞菌产生1种β-内酰胺酶，1株铜绿假单胞菌产生2种β-内酰胺酶。β-内酰胺酶的等电点介于4．95—9．36之间。72株临床分离菌共产生160种β-内酰胺酶。全部β-内酰胺酶能够水解头孢哌酮，而舒巴坦可以抑制酶的活性。β-内酰胺酶对头孢哌酮／舒巴坦（1：1）的水解率与头孢他啶相似，但低于对阿莫西林／克拉维酸（1：5）和哌啦西林／三唑巴坦（1：8）的水解率。包括7株铜绿假单胞菌在内的72株产生β-内酰胺酶的革兰阴性杆菌对头孢哌酮／舒巴坦敏感。结论大部分对头孢哌酮耐药但对头孢哌酮／舒巴坦敏感的革兰阴性杆菌产生TEM型β-内酰胺酶，舒巴坦可以增强头孢哌酮对包括铜绿假单胞菌在内的产酶革兰阴性杆菌的抗菌活性。     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性及耐药基因检测

目的:了解铜绿假单胞菌耐药性及β-内酰胺酶基因类型,指导临床合理用药。方法:琼脂稀释法测定12种抗生素对临床分离70株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度;筛选出20株多重耐药菌,三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的情况;用聚合酶链反应(PCR)法检测β-内酰胺酶基因并进行测序分析。结果:铜绿假单胞菌对亚胺培南、阿米卡星和环丙沙星的敏感率较高;6株菌产AmpC酶,2株菌产ESBLs;PCR检测出4株菌产TEM酶,经测序2株产TEM-1型,一株产TEM-29型,另一株产酶与TEM-29比较有1处氨基酸的改变,命名为TEM-147;未检出SHV、OXA、PER和VEB型β-内酰胺酶基因。结论:必须重视铜绿假单胞菌ESBLs的检测,对于该菌引起的感染采用碳青霉烯类、阿米卡星或环丙沙星治疗是较好的选择。     

广谱β-内酰胺酶TEM-141的克隆及特性研究

目的:对临床分离阴沟肠杆菌株EC002所产TEM型β-内酰胺酶进行克隆及原核表达,并了解其相关特性。方法:以琼脂二倍稀释法检测阴沟肠杆菌EC002的耐药情况,以双纸片法筛选及确证试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),以等电聚焦电泳(IEF)法测定酶的等电点(pI),以聚合酶链反应(PCR)扩增酶编码基因并将TEM型β-内酰胺酶基因进行原核表达及表型鉴定。结果:阴沟肠杆菌株EC002对所试多数β-内酰胺类抗菌药物耐药,ESBLs表型鉴定及质粒接合试验结果均为阳性。IEF显示该菌产2种pI分别为8.7及5.4的β-内酰胺酶,测序表明其为CTX-M-22及一种新的TEM亚型,其克隆菌株所表达酶的表型为非ESBLs。该酶的编码基因已被GenBank命名为TEM-141。结论:临床分离阴沟肠杆菌株EC002所产TEM-141为一种新型质粒介导的广谱β-内酰胺酶。     

3株含qnr基因肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的检测

目的了解临床分离含qnr基因,(质粒介导的喹酮类耐药基因)肺炎克雷伯菌中超广谱β-内酰胺酶的基因型别。方法琼脂稀释法测定3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌对β-内酰胺类、喹诺酮类抗菌药物的耐药性,NCCLS表型确证试验进行产ESBLs菌株的表型鉴定、采用TEM、SHV、CTX-M-1组、CTX-M-2组、CTX-M-13组、OXA-1组、OXA-2组、OXA-10组、PER-1、VEB-1β-内酰胺酶通用引物以及TEM、CTX-M-13组、OXA-1组全编码基因引物、I类整合酶基因引物进行PCR检测和DNA序列分析;同时对这些菌株进行PFGE检测。结果3株临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌均为产ESBLs菌株,ESBLs基因型别为CTX-M-14,其中2株细菌同时产生TEM-1型广谱β-内酰胺酶、1株同时产生TEM-1和OXA-30型广谱β-内酰胺酶,I类整合酶基因均为阳性;这些菌株对青霉素类、一代、二代、三代头孢菌素(头孢噻肟)以及多种喹诺酮类均显示耐药。3株菌株中有2株的PFGE谱型相同。结论临床分离含qnr基因肺炎克雷伯菌可同时产生CTX-M-14超广谱β-内酰胺酶,引起多重耐药,并存在克隆传播,临床应加强检测。     

中国部分地区铜绿假单胞菌β-内酰胺酶基因型研究

目的调查中国部分地区临床分离铜绿假单胞菌β-内酰胺酶（β-lactamases，BLAs）基因型分布。方法收集北京、浙江、江苏及湖北等地区5家医院临床分离的165株铜绿假单胞菌，PCR及测序方法检测10种BLAs。结果165株铜绿假单胞菌114株检出BLAs的基因，总检出率为69．10％，其中TEM、CARB、OXA、PER、VIM、IMP、GES、DHA型的检出率分别为41．21％、15．15％、13.94％、6．67％、5，45％、4．85％、4．85％和3．03％，未检出SHV型和VEB型BLAs的基因。19株（16．81％）同时产两种BIAs．的基因，12株（10．62％）同时产3种BLAs的基因。各地区BLAs的基因型有较大差别。结论中国部分地区铜绿假单胞菌携带BIAs的基因型主要是TEM型，部分菌株同时产两种及两种以上BLAs的基因；各地区BLAs的基因型有较大差别。     

儿科产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药基因型研究

目的对吉林市三级甲等医院儿科呼吸道感染标本分离的58株产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌进行耐药基因型研究。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增对产ESBLs大肠埃希菌的初筛确证实验得到的产ESBLs大肠埃希菌58株,进行耐药基因型研究。结果 58株产ESBLs大肠埃希菌中,β-内酰胺酶基因型分别为blaSHV2a(2/58),blaTEM-1(7/58),blaCTX-M-15(17/58)。结论吉林地区儿科呼吸系统感染住院儿童对β-内酰胺类抗菌药物的耐药机制主要是由于产生TEM-1型广谱β-内酰胺酶,SHV2a型和CTX-M-15型超广谱β-内酰胺酶。     

浙江省阴沟肠杆菌超广谱β-内酰胺酶基因型分布

目的　了解浙江省产超广谱 β-内酰胺酶 ( ESBL s)阴沟肠杆菌的基因型分型。方法　根据 Gen-Bank颁布的序列 ,设计 TEM、SHV、CTX- M- 1、CTX- M- 2、CTX- M- 8、CTX- M- 9、OXA- 2和 OXA- 10的通用引物 ,对 5 3株表型筛选为产 ESBL s的阴沟肠杆菌进行 PCR检测 ,并克隆测序。表型与基因型不符的菌株用改良的三维试验法进行检测。结果　结果显示 5 3株阴沟肠杆菌中 34株扩增到 SHV型、CTX- M- 1组、CTX-M- 9组 ESBL s基因型 ,最常见的基因型是 CTX- M型 ,共有 2 9株 ,占 5 4 .72 %。CTX- M- 1组以 CTX- M- 14最多见 ( 2 0株 ) ,其次为 CTX- M- 13( 3株 )和 CTX- M- 2 4 ( 3株 )。CTX- M- 9组均为 CTX- M- 2 2 ( 5株 )。SHV PCR扩增阳性有 6株 ,均为 SHV- 12。有 16株 TEM PCR扩增阳性 ,序列分析证实均为 TEM- 1型广谱酶 ,未发现TEM型 ESBL s。有 2株细菌同时产两种以上 ESBL s。结论　浙江省阴沟肠杆菌中 ESBL s基因型主要是CTX- M型。     

186株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶检测及药敏分析

目的:了解铜绿假单胞菌对抗生素的耐药情况,为临床治疗提供依据。方法:收集临床不同感染部位标本中分离到的186株铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶的检测及药敏测定结果分析。结果:186株铜绿假单胞菌对所测试的11种抗生素耐药5种以上的有72株,占38.7%,其中β-内酰胺酶阳性的60株,占32.4%,β-内酰胺酶阴性的有12株,占6.3%。结论:产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的耐药性更加严重,目前亚胺培南是治疗铜绿假单胞菌感染的首选药物,其次是丁胺卡那和头孢他啶。     

阴沟肠杆菌β内酰胺酶基因检测

目的 明确浙江湖州解放军第98医院临床分离的阴沟肠杆菌中β内酰胺酶基因存在状况.方法 采用ATB药敏试验板微量肉汤法测定临床分离的20株阴沟肠杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用聚合酶链反应技术检测质粒型AmpC MIR及DHA、TEM、SHV、CTX-M和OXA β内酰胺酶基因.结果 该20株菌对亚胺培南和美罗培南均敏感,头孢吡肟敏感率为40.0%,对其他β内酰胺类抗生素的耐药率在80.0%～100.0%之间.MIR、DHA和TEM基因的阳性株数（%）分别为17株（85.0%）、1株（5.0%）和14株（70.0%）,而SHV、CTX-M和OXA基因均阴性.结论 临床分离的阴沟肠杆菌中质粒型AmpC MIR及TEM型β内酰胺酶基因携带率很高,在阴沟肠杆菌中检出质粒型AmpC MIR基因为国内首次报道.     

亚胺培南耐药铜绿假单胞菌的金属β-内酰胺酶检测

目的:了解金属β-内酰胺酶在广州地区铜绿假单胞菌中的流行状况及其流行亚型,完善广州地区金属β-内酰胺酶的分子流行病学资料.方法:采用双纸片协同法和双纸片增效法对164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌筛选金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株,采用PCR检测5类金属β-内酰胺酶的编码基因(IMP家族、VIM家族、GIM-1、SPM-1和SIM-1),利用生物信息学的方法对检测到的金属β-内酰胺酶亚型进行比对分析并制作分子进化树.结果:164株亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌中筛选出22株金属β-内酰胺酶表型阳性的菌株,IMP阳性15株(9.1%),其中11株为IMP-9亚型,另外4株携带一个新的亚型,命名为IMP.25,VIMI阳性5株(3.0%),均为VIM-2亚型,未检测到GIM-1、SPM-1和SIM-1型金属β-内酰胺酶.结论:广州地区铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的基因型已经出现多型化的特征,同时存在IMP型和VIM型金属β-内酰胺酶的流行,本次研究发现了一个新的金属β-内酰胺酶亚型(IMP-25),为IMP家族金属p.内酰胺酶的多样性及其分子流行病学资料提供了新的信息.     

铜绿假单胞菌产TEM-29型ESBL基因的克隆及原核表达

目的研究临床分离铜绿假单胞菌Pa3-104产生的超广谱β-内酰胺酶的基因型，并对其进行原核表达，了解它的相关特性。方法对该临床菌株进行接合试验；采用PCR扩增TEM型β-内酰胺酶编码基因的片段，克隆入pUCm-T载体，在E.coliJM109中表达，双脱氧链终止法测定核苷酸序列，确定基因型；并将TEM型β-内酰胺酶全编码基因克隆入原核表达载体pBK-CMV中进行原核表达；用三维试验检测重组菌产β-内酰胺酶的表型，等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等电点（pI）。结果该临床菌株质粒接合试验为阳性；PCR扩增测序结果显示为TEM型，其基因片段含861个核苷酸，该TEM型β-内酰胺酶的编码基因与GenBank中大肠埃希菌产生的TEM-29的编码基因（Y17584）一致，等电聚焦电泳结果显示该酶的pI为5．4，三维试验证实为ESBL。结论在国内首次从临床分离铜绿假单胞菌中发现TEM-29型ESBL。     

马来西亚地区耐碳青霉烯铜绿假单胞菌产生的β—内酰胺酶IMP—7

铜绿假单胞菌是院内获得性感染的主要原因 ,广范的机会性感染不断增加 ,对抗生素的高度固有耐药性以及多药耐药的发展带来了严重的治疗问题。广谱β-内酰胺类如碳青霉烯是治疗铜绿假单胞菌感染的有效药物 ,亚洲、欧洲、加拿大均已有报道 ,但随着频繁使用导致了铜绿假单胞菌对碳青霉烯耐药的发展 ,耐药株产生了ＩＭＰ型金属 β -内酰胺酶 ,马来西亚药物中心报道对筛选的 5 0株耐碳青霉烯铜绿假单胞分离株的研究 ,并监测了金属 β -内酰胺酶的流行。由Ｓｅｎｄａ等的方法筛选ｂｌａＩＭＰ特异性引物的分离株 ,5 0株铜绿假单胞菌中仅有 1株 (Ｉ…     

93株铜绿假单胞菌β-内酰胺酶检出情况及药敏分析

目的：了解铜绿假单胞菌对多种抗生素的耐药情况。为临床对由铜绿假单胞菌引起的感染的治疗提供依据．方法：对从临床不同感染部位标本中分离到的93株铜绿假单胞菌进行β-内酰胺酶的检测及药敏测定。并对检测结果进行分析．结果：93株铜绿假单胞菌对所测试的11种抗生素耐5种以上的有36株。占38．7％。其中p内酰胺酶阳性的30株，占32．4％。β-内酰胺酶阴性的有6株。占6．3％。结论：产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌的耐药性更加严重。目前治疗铜绿假单胞菌的感染可首选亚胺培南。其次为阿米卡星和头孢他啶。     

阴沟肠杆菌产超广谱β—内酰胺酶情况及耐药性监测

超广谱β-内酰胺酶是一类对包括第三代头孢菌素及氨曲南在内的β-内酰胺类抗生素具有水解作用的酶，由质粒介导的大多数肠杆菌科细菌均可产生ESBLs，常见于大肠埃希氏菌和肺炎克雷白氏菌，亦可见于阴沟肠杆菌，弗劳地枸橼酸杆菌，大多源于TEM-1，TEM-2和SHV-1的突变。为了解我院阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶情况及耐药状     

临床耐头孢噻肟菌所产β-内酰胺酶的基因分析及活性

目的:分析临床耐头孢噻肟(CTX)菌株所产β-内酰胺酶的基因型,测定酶对头孢噻肟/舒巴坦(CTX/SBT,1∶1,2∶1,4∶1,8∶1)的水解率。方法:肉汤二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)。超声波破碎法提取酶粗提液,Nitrocefin显色法检测产β-内酰胺酶。PCR检测耐药酶基因,生物法测定β-内酰胺酶对CTX的相对水解率及抑酶保护率。结果:从临床耐药菌544株中筛出产β-内酰胺酶并耐CTX G-菌339株。其中,331株(肠杆菌科细菌327株和铜绿假单胞菌4株)产能水解CTX的β-内酰胺酶,酶的基因型主要为TEM或/和CTX-M型。所产TEM或/和CTX-M型酶24 h对CTX的相对水解率为100%。CTX/SBT(1∶1~8∶1)的抑酶保护率高于82%。其中,CTX/SBT(1∶1~2∶1)的抑酶保护率最高(>88%)。331株中的330株耐药菌(除1株铜绿假单胞菌外)对CTX/SBT(2∶1)的MIC90比CTX下降了2倍以上。结论:介导临床菌株耐CTX的β-内酰胺酶的基因型主要为TEM和CTX-M型,该酶水解CTX活性强,能被SBT有效抑制(有效配比范围为1∶1~8∶1)。     

铜绿假单胞菌感染耐药性及与β内酰胺酶的关系

目的研究本地区老年患者铜绿假单胞菌感染的分布特点及其耐药状况以及与产β-内酰胺酶的关系。方法采用K-B法测定亚胺培南等11种抗菌药物对182株铜绿假单胞菌及38株产β-内酰胺酶的铜绿单胞菌的体外抗菌活性。结果在临床分离的182株铜绿假单胞菌中,亚胺培南敏感性最高为85.71%,依次为头胞他啶(80.77%)、氨曲南(80.22%)、丁胺卡那(70.88%);在99株下呼吸道感染的铜绿假单胞菌中,亚胺培南的耐药率为24.24%,头孢他啶的耐药率为28.28%,明显高于其它部位;而在38株产β-内酰胺酶的铜绿假单胞菌中,耐药率最高的为哌拉西林(100%),其次为头孢唑啉(97.37%)和头孢噻肟(94.74%),明显高于非产酶株。结论铜绿假单胞菌感染中产β-内酰胺酶较为常见。产酶株铜绿假单胞菌的耐药性明显高于非产酶株铜绿假单胞菌的耐药性。其产生的β-内酰胺酶,是造成临床上铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因。     

肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶基因分型研究

目的调查广州地区下呼吸道感染肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的分离率及各种基因型的流行病学分布。方法收集广州地区13家医院2001-10～2002-12临床分离的肺炎克雷伯菌511株,采用美国临床实验室标准化委员会规定的ESBL表型筛选和确证试验确定ESBL的发生率、PCR扩增对产ESBL菌初步分型,然后对部分PCR扩增阳性产物测序,序列分析进一步确定基因型。结果肺炎克雷伯菌产ESBL分离率为40.1%。TEM型49株占21.9%,均为TEM-1型;CTX-M型59株占28.8%;SHV型96株占46.8%。结论SHV型是广州地区下呼吸道感染肺炎克雷伯菌产ESBL流行的常见基因型。     

质粒编码的金属β-内酰胺酶(IMP-6)与碳青霉烯(尤其是美罗培南)耐药性有关

碳青霉烯类抗生素对大多数 β-内酰胺酶稳定并对细菌外膜具有高渗透率 ,因此成为治疗革兰氏阴性菌感染的最强的抗菌药。此外 ,除铜绿假单胞菌外 ,亚胺培南、帕尼培南和美罗培南对革兰氏阴性菌的青霉素结合蛋白 (PBP) 2具有高亲和力。在铜绿假单胞菌中 ,亚胺培南和帕尼培南对 PBP2具有高亲和力 ,而美罗培南对 PBP3具有亲和力。然而 ,已有报道 ,一些临床分离菌由于产生金属β-内酰胺酶而对碳青霉烯类抗生素耐药。在日本临床分离的革兰氏阴性菌 (包括铜绿假单胞菌和粘质沙雷氏菌 )携带可转移的碳青霉烯耐药基因 bla IMP。金属 β-内酰胺酶…