中药水蛭品种考证及资源可持续利用发展探讨

该文通过系统地本草文献梳理与研究指出,传统中医使用的水蛭是生于水中,个头较小且能吸食人及牛马血的水蛭.具有这些特性的水蛭的品种有日本医蛭Hirudo nipponia Whitman、丽医蛭H.pulchra Song、南京牛蛭Poecilobdella nanjingensis sp.Nov.、菲牛蛭P.manillensis (Lesson)以及湖北牛蛭P.hubeiensis Yang 5个品种,与2010年版《中国药典》水蛭项下所规定的动物品种来源不完全一致.建议《中国药典》修改并补充水蛭的品种来源,保留原有日本医蛭H.nipponica Whitman,增补菲牛蛭P.manillensis (Lesson),暂时保留宽体金线蛭Whitmania pigra Whitman、尖细金线蛭W.acranulata Whitman,并进一步加强丽医蛭H.pulchra Song、南京牛蛭P.nanjingensis sp.Nov.以及湖北牛蛭P.hubeiensis Yang的化学成分和药理作用以及资源分布的研究,以待作为药用品种补充.     

三种水蛭的薄层色谱与电泳法鉴别

中国的水蛭近百种,与医药有关的有十几种。《中国药典》(1990年版)收载了三种:(1)蚂蟥(宽体金线蛭,Whitmania pigra Whitman):(2)水蛭(日本医蛭,Hirudo nipponica Whitman);(3)柳叶蚂蟥(尖细金线蛭,Whitmaninia acranulata Whitman)。其中宽体金线蛭和尖细金线蛭是非吸血水蛭,日本医蛭是吸血小蛭。关于它们的理化鉴别方法,文献上未见报道。本文研究了日本医蛭和菲牛蛭Poecilobdella javanica及宽体金线蛭的薄层层析(TLC)、电泳(SDS-PAGE)鉴别方法。     

生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性测定的研究

 目的 将生物检定技术应用于水蛭抗凝血活性的测定,探讨反映水蛭生物活性的质量控制方法。方法 采用肝素钠作为对照品,选择活化部分凝血酶时间值作为抗凝活性评价依据,对宽体金线蛭、日本医蛭、菲牛蛭、棒纹牛蛭的抗凝活性进行测定,测定结果分别用标准曲线法和生物检定统计法计算。结果 4种水蛭活性部分凝血酶时间法的量效关系曲线与肝素的量效关系曲线类似,突跃范围呈平行关系,上述特点符合生物检定的要求,以肝素钠作为标准品,采用生物检定技术活性部分凝血酶时间法测定水蛭等的抗凝活性是可行的。结论 活化部分凝血酶时间值可以全面反映水蛭的抗凝血作用,测定结果对临床使用更具指导意义。生物检定技术应用于中药质量评价,是对现有中药质量标准控制方法良好的补充。     

广东菲牛蛭生活水体的化学环境

蛭类俗称蚂蟥,是传统中药。《本草纲目》对水蛭的药理、疗效、使用方法作了较全面记载。现代药理实验表明水蛭注射液能使肿瘤细胞坏死、消失,对网状内皮细胞有增强作用。与非吸血蛭类比较,吸血的菲牛蛭唾液腺含有较丰富的抗血液凝固水蛭素,在医药学上有重要价值。有关吸血蛭类繁殖饲养研究,国内谭恩光(2002)曾报道广东菲牛蛭H irud inariam an illensis Lesson的生长和生殖,及吸血山蛭的生态分布、生长、摄食和生殖[1~3]。国外K eegan(1968)对东南亚的菲牛蛭生活习惯进行观察[4]。1992年Steiner从产自马尼拉的菲牛蛭中分离纯化新的水蛭素,…     

基于蛋白免疫印迹的水蛭抗凝活性成分研究

目的：建立Native-PAGE结合Western blot检测水蛭活性多肽与凝血酶相互作用产物的方法,探究水蛭有效抗凝成分。方法：本研究分别提取宽体金线蛭、日本医蛭两种水蛭虫体总蛋白及日本医蛭唾液蛋白,用凝血酶滴定法测定其抗凝血酶活性,Western blot检测凝血酶-活性多肽复合体。结果：研究发现两种水蛭Native-PAGE-WB均检测到凝血酶-活性多肽复合体,且SDS-PAGE-WB检测到复合体变性后产生凝血酶条带。结论：建立的Native-PAGE-WB法可有效检出水蛭活性多肽和凝血酶相互作用产物,且发现同水蛭素类似,宽体金线蛭活性抗凝多肽与凝血酶在体外也能形成稳定的蛋白复合体。     

中药菲牛蛭化学成分的分析

推牛蛭（Hirudinaria manillensis Lesson）系医蛭科，牛蛭属环节动物，别名为马尼拟医蛭，俗名金边蚂蟥，其资源在我国的广东、广西和海南十分丰富。菲牛蛭是水蛭的一种，水蛭是一味传统的中药，始载于《神农本草经》，     

菲牛蛭成分与急性毒性试验研究

目的:分析菲牛蛭中的氨基酸成分、有害物质含量与急性毒性,为评价菲牛蛭药材质量提供科学依据。方法:应用日立835-50型氨基酸自动分析仪、原子吸收分光光度法、CGC-ECD和CGC-NPD气相色谱法测定了菲牛蛭中含有的氨基酸成分、有害物质含量,并进行了菲牛蛭的初步急性毒性试验研究。结果:比较分析了宽体金线蛭、日本医蛭、欧洲医蛭、菲牛蛭四种水蛭的氨基酸含量结果,其差别不显著;菲牛蛭中重金属含量和有机氯以及有机磷农药残留量符合国家有关要求;菲牛蛭急性毒性试验结果表明其LD50大于10 g/kg,未见明显毒副作用。结论:菲牛蛭含有较高的氨基酸含量,而重金属和有机氯、有机磷农药残留量则较低,急性毒性试验LD50>10 g/kg,可考虑作为一种新药用资源而加以研究     

水蛭抗凝活性检测两种滴定方法比较

目的:比较药典标准凝血酶滴定法和白瓷板法对中药水蛭抗凝活性检测结果的影响。方法:分别采用《中国药典》中凝血酶滴定法和云南省《菲牛蛭冻干粉中药饮片炮制规范征求意见稿》中白瓷板法对水蛭抗凝活性进行多次平行滴定实验。结果:抗凝活性成分含量较高的菲牛蛭其药典法滴定结果重复性更稳定,白瓷板滴定法结果的重复性会随着单次进样量减少而趋于稳定;宽体金线蛭的抗凝活性结果在两种方法的对比检测下均较为稳定。结论:对于吸血水蛭品种抗凝活性的测量,建议保留原凝血酶滴定法;对于抗凝活性较低,实验中凝血酶溶液浓度较小的水蛭品种,两种滴定法均适用,也可同时应用互相验证。另在滴定操作中,将反应试管改换成玻璃液相进样瓶,且在滴定动作后将反应容器呈一定角度倾斜放置,有助于对反应终点进行判断,提高实验结果的准确性和稳定性。     

四种不同品种水蛭生物活性的研究与比较

目的:应用3种酶活性抑制方法测定四种不同品种水蛭的生物活性,为评价水蛭药材质量提供科学依据。方法:分别采用抗凝血酶、抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶3种检测方法,测定了宽体金线蛭、日本医蛭、欧洲医蛭、菲牛蛭样品的生物活性。结果:4种水蛭中,吸血水蛭具有更好的抗凝血酶活性;4种水蛭均具有较好的抗胰蛋白酶和抗糜蛋白酶生物活性。结论:3种酶活性抑制方法可作为水蛭类药材质量控制的依据。     

七种水蛭抗血小板聚集与抗凝血研究

七种水蛭体外抗血小板聚集与抗凝血实验研究结果表明，日本医蛭、菲牛蛭、湖北牛蛭在两方均有明显的作用。尖细金线蛭与宽体金线蛭的水煎提取物具有较强的抗血小板聚集作用，尖细金线蛭与光润金线蛭抗凝血作用较好，而宽体金线蛭、尖细金线蛭和光润金线蛭的超声提取物则表现促血小板聚集的作用。     

菲牛蛭规范化养殖标准操作规程(SOP)

目的:制定菲牛蛭规范化养殖标准操作规程(S0P)。方法:分别对菲牛蛭的养殖基地环境、养殖技术、病害防治、留种、采收加工、产品质量标准及监测等项目进行研究。结果:平均亩产菲牛蛭活体420.88 kg,平均每1 kg菲牛蛭鲜品含天然水蛭素43万AT-U,产品各项卫生及质量指标均符合国家有关的规定。结论:此S0P适用于广西地区的菲牛蛭养殖。     

水蛭的人工养殖

水蛭的人工养殖张秀学(安徽省肥东县杨圹乡黄李中药材栽培实验站231623)水蛭为水蛭科动物日本医蛭Hirudonip-poniaWhitman,宽体金线蛭Whitmaniapigra(Whitman),茶色蛭W.acranulata(Whitmaa),细齿金线蛭W.edentula(Whitman),别名蚂蟥、肉钻子,它以干燥全体入药,含有水蛭素和蛋白质,有抗凝固、破瘀血的功效,主治血栓病、血管病、青光眼、瘀血不通、无名肿毒、淋巴结核等症。由于国内外对水蛭的需求量较大,供需矛盾突出,近几年来已....     

水蛭抗凝抗血栓活性及其与品种、提取方法的关系

水蛭为环节动物门蛭纲动物,《中国药典》收载了水蛭科动物蚂蟥（宽体金线蛭,Whitmania pigra Whitman）、水蛭（日本医蛭,Hirudo nipponica Whitman）、柳叶蚂蟥（尖细金线蛭,Whitmania acranulata Whitman）三个品种。水蛭有破血、逐血、通经的功效,用于瘕瘕痞块,血瘀闭经,跌扑损伤。水蛭具有抗纤溶、抑制血小板活化、抗血栓、改善血液流变性、降晤和抗动脉粥样硬化等药理作用。本文着重综述水蛭的抗凝抗血栓活性,分析水蛭抗凝血活性与品种、提取方法的相关性。     

基于三代高通量测序技术的不同养殖环境下日本医蛭微生物多样性研究

目的：研究不同水源养殖的日本医蛭Hirudo nipponica Whitman肌肉、肠道组织样本的细菌群落结构,分析除氯自来水养殖的可行性及日本医蛭相关的重要有益微生物。方法：分别在地下水和除氯自来水的循环养殖系统中进行日本医蛭养殖,采用PacBio三代高通量测序技术对不同水源养殖水蛭的肌肉和肠道组织样品进行菌种初步分类鉴定及微生物群落组成分析。结果：与地下水养殖的水蛭相比,除氯自来水养殖的水蛭样本表现出更简单的微生物群落结构,且黏液菌属(Mucinivorans)、梭杆菌属(Fusobacterium)、拟杆菌属(Bacteroides)等有潜在致病风险的菌属相对丰度明显低于地下水养殖组。结论：采用除氯自来水开展水蛭养殖工作是可行的。与日本医蛭相关的共生菌(Aeromonas和Rikenella)及有益微生物在水蛭的生长发育过程中起着重要的作用,提示可以利用环境或饵料中的有益微生物来提高日本医蛭的产量。     

利用丝素固定化凝血酶分离纯化菲牛蛭中的水蛭素

目的:利用制备的丝素固定化凝血酶分离纯化菲牛蛭中的水蛭素。方法:以抗凝血酶活力(ATU)回收率为指标进行牛蛭素的固定化凝血酶萃取,通过正交实验优化萃取及反萃取条件。最后通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定实验样品的纯度。结果:菲牛蛭素A萃取的最佳条件为:水蛭素初始浓度9 ATU/mL,温度30℃,pH4.30,时间45 min;反萃取温度30℃,pH 7.4,时间30 min,ATU回收率55.73%。菲牛蛭素B萃取的最佳条件为:水蛭素初始浓度9 ATU/mL,温度30℃,p H 5.2,时间45 min;反萃取温度30℃,pH 7.2,时间30 min,ATU回收率23.96%。菲牛蛭素A、B实验样品PAGE图均只有1条带。结论:该文利用制备的丝素固定化凝血酶可以有效的应用于菲牛蛭素的分离纯化。     

中药水蛭各部位提取物对高分子葡聚糖所致大鼠血瘀模型的影响

中国将水蛭作为破血逐瘀药而用于血瘀症的治疗。本实验观察水蛭各部位治疗血瘀症的疗效和初步的作用机理。1　实验部分1.1　药品与试剂　水蛭 (宽体金线蛭、菲牛蛭 ,产地 :广东 )各部分提取物配制成一定浓度 ,备用。A .宽体金线蛭水煎液 (1g生药·mL-1) :取宽体金线蛭粗粉10 0g ,浸泡 30min后 ,常法水煎 3次 ,每次 1h ,过滤浓缩成每1mL相当于生药 1g ,备用。B .菲牛蛭水煎液 (1g生药·mL-1) :取菲牛蛭粗粉 10 0 g ,同上法制备。C .宽体金线蛭醇提液 (1g生药·mL-1) :取宽体金线蛭粗粉10 0 g ,用 95 %乙醇回流提取 3次 ,每次 1h ,过滤浓缩…     

菲牛蛭的含量测定方法改进及检测中的注意事项

改进菲牛蛭的水蛭素含量测定方法及总结检测中的注意事项,提高方法的重复性及准确度,更有效地控制菲牛蛭的质量。     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

识别真伪水蛭

水蛭又名蛭蝚、马鳖,为水蛭科动物日本医蛭、宽体金线蛭、茶色蛭等的全体。其中,日本医蛭的干燥品称“水蛭”;宽体金线蛭的干燥品称为“宽水蛭”;茶色蛭的干燥品称为“长条水蛭”。水蛭性平,味咸苦,有毒,入肝、膀胱经,具有破血、逐瘀、通经的功效,为破逐瘀血之要药,用于治疗癥瘕、积聚、蓄血、妇女经闭、干血成痨、跌扑损伤、目赤肿痛、眼生云翳等症。     

日本医蛭抗凝活性研究

目的:研究分析人工养殖条件下日本医蛭活体、干品的抗凝活性,为日本医蛭合理入药提供参考。方法:根据中国药典规定,采用凝血酶滴定法对不同处理的日本医蛭样品进行测试。结果:发现日本医蛭抗凝活性依次为超低温冻干品、鲜品、晒干品。结论:保证日本医蛭最佳抗凝活性的方法为超低温冻干。