不同因素及给药途径对水蛭制剂抗凝活性的影响

实验结果表明,pH、温度、有机溶剂以及不同的给药途径都将影响水蛭制剂的活性效价。为充分发挥水蛭活性物质作用,在制剂的制备工艺和给药途径上均要考虑其合理性。     

水蛭抗凝活性检测两种滴定方法比较

目的:比较药典标准凝血酶滴定法和白瓷板法对中药水蛭抗凝活性检测结果的影响。方法:分别采用《中国药典》中凝血酶滴定法和云南省《菲牛蛭冻干粉中药饮片炮制规范征求意见稿》中白瓷板法对水蛭抗凝活性进行多次平行滴定实验。结果:抗凝活性成分含量较高的菲牛蛭其药典法滴定结果重复性更稳定,白瓷板滴定法结果的重复性会随着单次进样量减少而趋于稳定;宽体金线蛭的抗凝活性结果在两种方法的对比检测下均较为稳定。结论:对于吸血水蛭品种抗凝活性的测量,建议保留原凝血酶滴定法;对于抗凝活性较低,实验中凝血酶溶液浓度较小的水蛭品种,两种滴定法均适用,也可同时应用互相验证。另在滴定操作中,将反应试管改换成玻璃液相进样瓶,且在滴定动作后将反应容器呈一定角度倾斜放置,有助于对反应终点进行判断,提高实验结果的准确性和稳定性。     

重组水蛭素体内抗凝活性的实验研究

目的：研究重组水蛭素的抗凝活性,为水蛭素新药开发提高实验依据,方法：家兔iv重组水蛭素前及后心脏采血,应用血凝仪测定凝血酶时间（TT）,凝血酶原时间（PT）,和活化的部分凝血活酶时间（APTT）,并考察其抗凝活性的量效和时效关系。结果：重组水蛭素能明显延长TT和APTT,且呈剂量依赖性,但在所试剂量范围内对PT无明显影响,其延长TT和APTT的作用随时间而下降,作用持续约60min,结论：重组水蛭 素具有明显抗凝作用,明显强于现有抗凝药肝素,且其作用强度与同剂量德国产基因重组水蛭素Refludan相同。     

水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。     

低温炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成及纤溶活性的影响

目的:研究低温炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成及其纤溶活性的影响。方法:水蛭的低温炮制采用液氮快速冷冻和冷冻干燥技术;传统炮制参照2005药典;不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组成的差异检测采用SDS-PAGE,定量分析采用Scion Image软件;不同炮制工艺水蛭的水溶性蛋白组分的纤溶活性鉴定采用纤维蛋白平板法,溶栓活性分析采用体外溶栓试验。结果:低温炮制工艺的水蛭水溶性蛋白组成比传统炮制工艺丰富,不仅SDS-PAGE蛋白条带的数量与浓度显著高于传统工艺,而且纤溶活性也显著高于传统炮制工艺。结论:不同炮制工艺对水蛭水溶性蛋白组成与溶栓活性有显著影响;在防止水蛭中蛋白质类活性成分的降解、变性与失活方面,低温炮制工艺优于传统炮制工艺。该工艺适用于以蛋白为主要活性成分的动物药研究。     

中药水蛭的活性成分及药理作用研究概况

从抗凝作用、抗血栓形成作用以及对心脑血管系统作用等方面对中药水蛭的药理作用进行了综述,并阐述其药理研究进展,为指导临床用药提供理论依据。     

水蛭不同工艺提取物抗凝与纤溶活性比较及酶解物组成分析

目的:比较水蛭不同提取工艺的抗凝溶栓作用;初步确定水蛭酶解产物的化学成分组成。方法:通过活化部分凝血活酶时间(APTT)试验及纤维蛋白平板试验,比较水蛭胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解、醇提、水煎提取物的体外抗凝与纤溶活性差异。采用Sephadex G-100凝胶柱色谱法对优选提取物进行进一步分离纯化,并采用MALDI-TOF-质谱法对其组成进行分析。结果:与生理盐水组比较,在相同的剂量下,水蛭胃蛋白酶酶解物可明显延长大鼠APTT,并具有较强的纤溶作用,其余几种提取物的作用不明显。胃蛋白酶酶解物经Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化的活性部位经MALDI-TOF-质谱法检测为分子量在700～3 200之间的一组寡肽。结论:胃蛋白酶酶解是水蛭较为理想的提取方法,其有效部位的组成为寡肽。     

低抗凝活性肝素修饰SOD的性质及抗炎活性

 用溴化氰活化低抗凝活性肝素对超氧化物歧化酶进行共价修饰制得修饰酶。经测定结合于酶蛋白上的低抗凝肝素的氨基己糖、己糖醛酸、硫醚基及抗凝效价均降低；修饰后超氧化物歧化酶活性降低；Cu、Zn部分丢失。对不同的炎症模型的抗炎试验表明，修饰酶具有较强的抗炎活性。     

水蛭素Ⅲ突变体HV3(RGD)的构建及其抗血小板聚集活性初步研究

目的：构建水蛭素Ⅲ(HV3)突变体HV3(RGD)，比较HV3(RGD)、HV3(RGDS)及HV3抗血小板聚集活性。方法：在已构建的HV3及HV3(RGDS)突变体的基础上，采用基因定点突变的方法构建水蛭素Ⅲ突变体HV3(RGD)，采用凝血酶滴定方法比较三者的抗凝血酶活性，采用血小板聚集法比较三者的抗ADP诱导的血小板聚集活性。结果：两种突变体的抗凝血酶活性未发生变化。HV3(RGDS)增加了抗ADP诱导的血小板聚集活性，而HV3(RGD)在本试验剂量下未表现出明显的抗ADP诱导的血小板聚集活性。结论：RGD和RGDS突变对HV3抗凝血酶活性没有影响．而RGDS序列中的Ser残基时HV3(RGDS)的抗ADP诱导的血小板聚集活性甚为关键．     

头穴脉冲磁针对脑梗塞患者血浆t-PA、PAI-I活性、D-dimer含量的影响

目的　运用自制的脉冲磁针治疗仪作用于头穴 ,治疗急性脑梗塞病人并探讨其治疗疾病的机理。方法　设立脉冲磁针组 30例 ,同时设立常规针刺组、静磁针组各 30例做对照组。测定 3组治疗前后血浆中组织型纤溶酶原激活物 (t- PA)、组织型纤溶酶原激活物抑制物 (PAI- )、D-二聚体 (D- dimer)的含量。结果与结论　脉冲磁针组与常规针刺组比较无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,两组与静磁针组比较均有显著差异 (P<0 .0 1)     

黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方含药血清对大鼠肾小球系膜细胞生长周期及凋亡的影响

目的:比较黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生长周期、凋亡的影响及凋亡的形态学观察。方法:应用流式细胞仪检测GMCs生长周期与凋亡;用瑞氏染色,显微镜观察凋亡细胞的形态。结果:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能使大量GMCs处于G0/G1期,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);均能提高GMCs凋亡率,水蛭、水蛭黄芪配方与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能阻止GMCs进入S期从而达到抑制增生的目的,且能提高GMCs的凋亡率,水蛭黄芪配方效果最优,水蛭次之。     

水蛭素活性因子对荷瘤鼠肝癌及Th1/Th2类细胞的影响

目的探讨水蛭素活性因子对肝癌实体瘤及Th1/Th2类细胞因子的作用机制,为临床用药提供理论依据。方法取小鼠48只,随机分为模型对照组、5-Fu组、水蛭素活性因子大剂量组、水蛭素活性因子小剂量组。接种H22肝癌瘤细胞,连续用药14 d,剥离肿块,比较各组肿瘤生长情况,并计算抑瘤率。取肝癌实体瘤组织标本,提取细胞总RNA进行Th1/Th2类细胞因子检测,紫外分光光度计测出光值。并进行反转录(RT)反应、聚合酶链反应(PCR)、电泳鉴定,定量分析,图像输入分析系统,进行表达强度分析。结果水蛭素活性因子对小鼠肝癌实体瘤具有明显的抑制作用,大剂量组和小剂量组抑制率分别为46%和43%。荷瘤鼠用药后,IL-2、IFN-γ细胞因子呈高表达,IL-4、IL-10细胞因子呈低表达。结论水蛭素活性因子能提高荷瘤鼠IL-2、IFN-γ细胞因子的抗癌水平,使机体由Th2类细胞向Th1类细胞逆转,增强了细胞的免疫应答能力。     

水蛭对肺纤维化大鼠的影响及机制探讨

目的:观察水蛭对肺纤维化大鼠PAI-1的作用,并探讨其机制及意义。方法:采用气管内注入博来霉素制作大鼠肺纤维化模型,成膜后随机分为两组,模型组(BM组)和水蛭组(HD组),另设鼠龄、体重相匹配的正常对照组(NC组)。28天后ELISA法测定血浆PAI-1含量,并测定其活性,同时检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量。结果:NC组PAI-1含量及活性明显低于其它各组,BM组PAI-1含量及活性高于HD。NC组、HD组HYP低于BM组。结论:水蛭可能通过减少凝血酶在肺内的表达,抑制PAI-1生成及活性,使u PA活性升高,减少纤维蛋白沉积,对肺纤维化大鼠肺组织具有保护作用。     

不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响

目的:研究炮制对水蛭体外溶栓活性的影响。方法:采用水提取法和仿生提取法对水蛭净制品、烫制品、酒制品进行提取,选用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原平板法,以平板上透明圈面积为指标进行纤溶活性测定;并建立体外血栓模型,通过血凝块的失重比进一步评价水蛭不同炮制品的溶栓活性。结果:水蛭在炮制前后均能在纤维蛋白平板上产生透明圈。采用水提取法时,烫制品和酒制品的溶圈面积减小,炮制后纤溶活性降低,活性顺序为:净制品酒制品烫制品。而采用仿生提取法时,显示烫制和酒制后水蛭纤溶活性升高,活性顺序为:烫制品酒制品净制品。体外血栓模型中,血凝块失重比结果与纤溶活性测定结果一致,采取水提取法时,炮制使溶栓活性降低,而采用仿生提取法时显示炮制使溶栓活性增加。结论:与水提取法比较,仿生提取法更符合水蛭经口服后在人体内的消化吸收过程,其结果更有说服力。传统炮制可增强水蛭溶栓活性。     

蚂蟥抗凝血活性成分的分离、纯化及检测

蚂蟥(Whitmania pigra Whitman),又称宽体金钱蛭,为水蛭科动物蚂蟥的干燥全体,其药性咸、苦,平,有小毒。归肝经。具有破血通经,逐瘀消之效,是中国药典(2005年版)收载的水蛭品种之一。除此之外,药典收载的水蛭品种还有水蛭(Hirudo nipponica Whitman)和柳叶蚂蟥(Whitmania ac-     

水蛭抗凝抗血栓活性及其与品种、提取方法的关系

水蛭为环节动物门蛭纲动物,《中国药典》收载了水蛭科动物蚂蟥（宽体金线蛭,Whitmania pigra Whitman）、水蛭（日本医蛭,Hirudo nipponica Whitman）、柳叶蚂蟥（尖细金线蛭,Whitmania acranulata Whitman）三个品种。水蛭有破血、逐血、通经的功效,用于瘕瘕痞块,血瘀闭经,跌扑损伤。水蛭具有抗纤溶、抑制血小板活化、抗血栓、改善血液流变性、降晤和抗动脉粥样硬化等药理作用。本文着重综述水蛭的抗凝抗血栓活性,分析水蛭抗凝血活性与品种、提取方法的相关性。     

水蛭对血清胆固醇,血液粘度及血栓形成的影响

本实验证明了水蛭有显著地降血清胆固醇作用,其效果与安妥明近同;有非常显著地降血粘度作用,效果优于脑心舒;有很强地抑制血小板聚集作用和抗血栓形成,效果优于阿斯匹林。     

水蛭注射液对急性脑梗死患者血液流变学、SOD的影响及临床疗效观察

目的 :观察水蛭注射液对急性脑梗死的治疗作用。方法 :1 75例患者分为两组 ,治疗组 90例用水蛭注射液 4ml加入 5 %葡萄糖注射液或生理盐水 2 5 0ml中静脉滴注 ,对照组 85例以低分子右旋糖酐 5 0 0ml静脉滴注。观察治疗前后血液流变学及血清超氧化物歧化酶 (SOD)指标的变化及临床疗效。结果 :总有效率治疗组 82 .2 2 % ,对照组 60 % ,两组有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;治疗组血液流变学异常增高值下降 ,与治疗前比较 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,全血粘度高切值、全血粘度低切值两组治疗后比较 ,有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ;治疗组血清SOD活性升高 ,与治疗前比较有非常显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :水蛭注射液可能通过改善血液流变学 ,增强SOD活性对急性脑梗死起治疗作用     

炮制对水蛭性状及成分溶出的影响

对水蛭生品、传统烫制品及新法制品进行了物理性状、溶出效果、蛋白质、氨基酸的定性、定量分析。     

水蛭和丹参对血管成形术后平滑肌细胞增殖影响的实验研究

目的：探讨腔内血管成形术（ＴＡ）后再狭窄的预防方法。方法：将６０支髂动脉（３０只家兔）随机分为３组（每组２０支髂动脉）：水蛭组、丹参组和对照组，造成实验性动脉粥样硬化狭窄并进行ＴＡ后，水蛭组每天饲喂２ｇ水蛭粉和普通饲料，丹参组每天饲喂２ｇ丹参粉和普通饲料，对照组每天只饲喂普通饲料，３０天后，进行血管造影和病理形态学检查。结果：（１）水蛭组髂动脉内膜厚度（４０．１±９．８μｍ）显著小于丹参组（４８．