雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞c-myc和血小板源性生长因子的mRNA的影响

目的 :观察雷公藤红素对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)中原癌基因 (c myc)和血小板源性生长因子 (PDGF)的mRNA表达水平的影响。方法 :分别将所培养的第 5～ 1 0代VSMC同步化培养 2 4h后 ,加入 2 0 %胎牛血清 (FCS)和不同剂量的雷公藤红素 (0 1、0 2和0 3mg/L) ,共同孵育 6h和 1 2h后 ,分别提取VSMC胞浆总RNA ,通过地高辛标记探针 ,采用斑点杂交方法检测c myc和PDGF的mRNA表达。 结果 :经雷公藤红素作用后 ,VSMC的c myc和PDGF的mRNA表达较对照组明显降低 ,c mycmRNA表达水平的降低具有一定的药物剂量依赖性关系。结论 :雷公藤红素可能是通过抑制VSMC的c myc和PDGF的mRNA的表达 ,而引起抑制VSMC的过度增殖。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞表达血小板源生长因子的影响

目的 探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)中血小板源生长因子(PDGF)表达的影响.方法 培养大鼠主动脉VSMC,以 10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组 ,AngⅡ刺激前分别应用不同浓度川芎嗪预处理做为高、中、低剂量组,以正常的VSMC为对照组,测定VSMC增殖活度,免疫细胞化学法检测培养24h时VSMC PDGF-B的表达.结果 AngⅡ组VSMC增殖活度与 PDGF-B表达显著高于对照组(P<0.01).与AngⅡ组比较,川芎嗪中、高剂量组VSMC增殖活度明显降低(P<0.05或P<0.01)、PDGF-B表达水平均显著低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01).结论 川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMC增殖有显著抑制作用,其机制与抑制PDGF-B介导的信号转导有关.     

雷公藤红素对血管平滑肌细胞内游离Ca2+和H+浓度的影响

目的；观察雷公藤红素对血管平滑肌细胞内游离Ｃａ＾２＋和Ｈ＾＋浓度的影响。方法：采用荧光染色法，参激光扫描焦显微镜动态研究了不同浓度的胎牛血清对单个血管平滑肌内游离Ｃａ＾２＋和Ｈ＾＋浓度变化的影响效应。结果：３０％胎牛血清可以引起细胞内一快速的，持续的游离Ｃａ＾２＋浓度升高，而３０％胎牛血清加０．３ｍｇ／Ｌ雷公藤红素则可以产生抑制细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度升高的效应；     

卡托普利对肝纤维化大鼠转化生长因子β1及血小板源性生长因子-BB的影响

目的观察卡托普利抗大鼠肝纤维化的疗效。方法60只Wistar大鼠随机平均分为3组:正常组、模型组和治疗组。四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型,治疗组于造模第4周开始予以卡托普利。免疫组化法检测大鼠肝组织中转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB);肝组织HE染色检测病理改变。结果与模型组大鼠比较,治疗组TGFβ1与PDGF-BB在肝组织表达明显降低;卡托普利治疗后肝小叶均趋于正常,纤维间隔明显变薄。结论卡托普利能有效地减轻肝纤维化大鼠的肝脏损伤及纤维化程度,其机制可能与直接或间接抑制TGFβ1与PDGF-BB生成有关。     

止喘胶囊对哮喘大鼠气道重建转化生长因子β1和血小板源性生长因子蛋白及其mRNA表达的影响

目的探讨止喘胶囊对哮喘大鼠肺组织TGF-β1、PDGF-B蛋白及其mRNA表达的影响。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、止喘胶囊组、地塞米松组、止喘胶囊加地塞米松组五组,每组8只。通过腹腔注射卵蛋白、右腿肌注氢氧化铝致敏及反复雾化吸入不同浓度(1%、2%、3%)卵蛋白溶液建立哮喘气道重建动物模型。在哮喘激发4周后检测肺组织TGF-β1、PDGF-B蛋白及其mRNA表达。计量资料用ANOVA进行分析。结果哮喘模型组大鼠气道上皮TGF-β1、PDGF-B蛋白以及mRNA表达显著高于正常对照组大鼠(P<0.01);止喘胶囊组、止喘胶囊加地塞米松组和地塞米松组大鼠TGF-β1、TGF-β1mRNA表达显著低于哮喘模型组大鼠(P<0.01或P<0.05)。结论止喘胶囊通过减少气道上皮TGF-β1、PDGF-BmRNA表达从而减轻气道炎症及气道重建,降低气道高反应性,从而发挥固本防喘作用。     

雷公藤红素对大鼠脑缺血后血管新生和神经保护作用的机制研究

目的观察雷公藤红素(CSL)在脑缺血后对血管新生的作用及CSL在脑缺血后的神经保护作用。方法将80只SD大鼠随机分入24 h和7 d两大组,分别再分为假手术组,试剂对照组,低剂量CSL组(0.5 mg/kg)、中剂量组(2 mg/kg)、高剂量组(5 mg/kg),每组8只大鼠。除假手术组仅进行手术而不造成缺血状态外,其余各组均建立大鼠大脑中动脉闭塞模型。在缺血90 min再灌注30 min首次灌胃给药,每日一次给予相应剂量的CSL。对大鼠行为学进行评估,脑组织切片染色综合评价大鼠脑缺血再灌注损伤程度,检测脑组织炎症因子IL-1β的含量,观察细胞凋亡率的改变,采用免疫组化染色观察大脑皮层微血管密度改变,ELISA法检测VEGF和MMP-9的含量。结果 (1)与对应假手术组比较,各干预组各指标差异均有统计学意义(P0.05)。(2)神经功能评分、梗死体积、细胞凋亡率和VEGF、MMP-9水平:与试剂对照组同时点比较,CSL中、高剂量组差异有统计学意义(P0.05);CSL中、高剂量组同时点比较差异有统计学意义(P0.05)。(3)CD31:与试剂对照组同时点比较,CLS中、高剂量组CD31阳性率减少(P0.05);CLS中、高剂量组24 h与CLS中、高剂量组7 d比较,CD31阳性率差异有统计学意义(P0.05)。(4)IL-1β:7 d干预时与试剂对照组比较,CSL低、中、高剂量组差异均有统计学意义(P0.05);在24 h和7 d干预时,CSL高、中、低剂量组组间差异均有统计学意义(P0.05)。结论一定剂量范围内,CSL在脑缺血再灌注急性期存在两种相反的作用,即通过抗炎和抗细胞凋亡产生神经保护作用和抑制血管新生作用,并且其抑制血管新生的作用随着时间的推移可能更加显著。在脑缺血急性期,CSL抑制炎性因子,减轻细胞凋亡的作用是占有主导地位的,这并不受其抑制血管新生作用的影响。     

雷公藤红素对培养的动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:动脉血管平滑肌细胞(VSMC)过度增殖是动脉粥样硬化及冠脉成形术(PTCA)后再狭窄形成的主要原因,为了探讨雷公藤红素预防再狭窄形成的可能,本研究观察了雷公藤红素对培养的大鼠胸主动脉 VSMC 增殖的影响。方法:采用大鼠传代培养的 VSMC(4～7代),将雷公藤红素(0.05～0.40mg/L)加入细胞培养基中,24h 和48h 后用中性红细胞染色法测定细胞总蛋白的方法做细胞计数并测定氚-胸腺嘧啶脱氧核苷(~3H-TdR)掺入的放射性强度每分计数(cpm)值,求各组均值及标准差,采用 q 检验做统计学处理。结果:各药物剂量组的雷公藤均可抑制 VSMC 增殖及对~3H-TdR 的掺入并呈药物剂量依赖性关系,与对照组比较P<0.05或 P<0.01。结论:雷公藤红素能够抑制大鼠 VSMC 的增殖,为该药物可能用于以VSMC 增殖为主的冠心病和再狭窄的形成提供了实验依据。     

局部注射血小板源性生长因子对大鼠跟腱末端病组织结构的影响

目的:观察血小板源性生长因子对末端病末端组织结构的影响,为血小板源性生长因子治疗末端病提供实验基础和理论依据.方法:对筛选后的大鼠随机分成3组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)组,其中Ⅰ组为血小板源性生长因子注射组,Ⅱ组为生理盐水注射组,Ⅲ组为对照组.将Ⅰ、Ⅱ组大鼠放入电刺激跳跃造模装置里,通交流电4次·min-1,通电电压由小逐步加大,直到大鼠出现有效跳跃为止,共持续20 min,休息10 min,再持续20 min.每天训练1次,每周6次,周日休息,持续4周.实验过程中常规纯鼠料喂养.每周分别对血小板源性生长因子组和生理盐水组大鼠跟腱部位注射0.2 mL血小板源性生长因子和生理盐水,其注射时间均为大鼠休息日,对照组不做任何处理,造模4周后处死大鼠,进行取材,组织切片制作,HE染色.显微镜下观察每个样本跟腱末端、纤维软骨区、跟骨区、腱骨界面、腱围共5个区域病理变化.结果:血小板源性生长因子注射组大鼠跟腱末端区发生了轻微的病理性变化.生理盐水注射组大鼠跟腱末端区发生了明显的病理性变化.对照组大鼠跟腱末端区未发生明显的病理性变化.结论:注射血小板源性生长因子可以不同程度的有效地预防大鼠跟腱末端病的发生.     

冠心舒通胶囊含药血清对AGEs诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨冠心舒通胶囊含药血清对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法:分别以0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊内容物对大鼠灌胃给药28d制备冠心舒通胶囊含药血清;以各剂量含药血清单独或联合体外制备的AGE-牛血清白蛋白(AGE-BSA)处理原代培养大鼠VSMCs,MTT法检测各处理组细胞增殖水平、RT-PCR检测细胞血小板源性生长因子-B(PDGF-B)mRNA表达水平、酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清PDGF-B浓度。结果:40mg/L终浓度AGE-BSA显著增强VSMCs增殖水平(P<0.05),0.5g/kg、1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清对正常VSMCs生长未见显著影响(P>0.05),但显著抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖(P<0.05),作用具有明显的剂量依赖性。AGE-BSA诱导VSMCs PDGF-B表达与分泌显著增强(P<0.05),1g/kg、2g/kg剂量冠心舒通胶囊含药血清可有效抑制AGE-BSA这一作用(P<0.05),0.5g/kg剂量血清对AGE-BSA这一作用则未见明显影响(P>0.05)。结论:冠心舒通胶囊可剂量依赖性抑制AGEs诱导的VSMCs增殖,作用机制与抑制AGE诱导的PDGF-B表达与分泌有关。     

软脉灵药物血清抑制PDGF诱导的平滑肌细胞迁移研究

目的观察软脉灵药物血清对血小板源性生长因子（PDGF）诱导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移的影响。方法采用体外组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞;应用灌胃法制备SD大鼠的软脉灵药物血清;应用改良Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验;用FITC-鬼笔环肽标记F—actin,并在激光共聚焦显微镜下观察PDGF诱导的VSMCs骨架形态的变化。结果含软脉灵药物血清可显著抑制PDGF—BB诱导的VSMCs迁移,呈现一定的浓度依赖性,10％药物浓度时抑制作用最明显,抑制率为61．42％（P〈0．01）。PDGF（10ng／mL）刺激后细胞即发生伸展,应力纤维增多,可见伪足形成;加入含软脉灵药物血清后可见到伪足及张力纤维减少,而且随着软脉灵浓度的升高,可见到伪足及张力纤维显著减少。结论软脉灵药物血清能显著抑制PDGF—BB诱导的VSMCs迁移和应力纤维形成。     

化痰祛瘀方对兔动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨化痰祛瘀方对免动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法将30只新西兰兔随机分为正常组、模型组、氟伐他汀对照组及化痰祛瘀组。正常组6只,其余每组各8只。通过高脂饲料配合腹主动脉内膜剥脱术建立免动脉内膜损伤模型。取腹主动脉下段,电镜观察血管平滑肌细胞形态;应用逆转录取聚合酶链式反应（RT—PCR）法测定原癌基因c-myc和血小板源性生长因子-BB（PDGF）水平;免疫组化法测定胰岛素样生长因子-1（IGF-1）水平。结果模型组PDGF、c—myc、IGF-1均显著高于正常组（P〈0．01）;氟伐他汀对照组、化痰祛瘀组与模型组相比较PDGF、C—myc、IGF-1显著下降（P〈0．05）。结论动脉损伤后可致PDGF、C—myc、IGF—1表达增加,提示PDGF、c—myc、IGF-1表达增加在动脉损伤后平滑肌细胞增殖中起一定作用。化痰祛瘀方能使动脉损伤后PDGF、c—myc、IGF-1表达减少,对动脉损伤后平滑肌细胞增殖有一定抑制作用。     

淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生和平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究淫羊藿苷对大鼠颈动脉损伤后新生内膜增生和平滑肌细胞凋亡的影响。方法:大鼠44只随机分为正常对照组8只,淫羊藿苷60 mg.kg-1组、淫羊藿苷120 mg.kg-1组和模型组各12只。后3组建立鼠颈动脉球囊损伤术后狭窄模型,淫羊藿苷组术前6 d开始ig至实验结束;模型组以等体积生理盐水ig。术后14 d和28 d分批处死动物。取各组动物颈动脉损伤段,常规制片,HE染色,采用计算机图像分析系统测量内膜面积和中膜面积,并计算新生内膜/中膜面积比(I/M);采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法(TUNEL)检测平滑肌细胞凋亡。结果:给药两组术后14,28 d,损伤部位血管内膜、中膜面积明显小于模型组,差异非常显著(P0.01);球囊损伤后14,28 d,各手术组新生内膜区均出现明显的凋亡细胞,其中淫羊藿苷组较模型组细胞凋亡率显著增高(P0.01),结论:淫羊藿苷可能通过促进平滑肌细胞的凋亡而减轻球囊损伤后新生内膜的增生。     

中药抑制生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖的研究进展

本文总结了近年来直接抑制某些生长因子诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）增殖,或者利用电镜、免疫组化、印迹法及原位杂交方法直接测量增殖VSMC中生长因子的mRNA或其受体的表达,观察中药及复方对生长因子诱导的VSMC增殖抑制作用的研究。     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的改进大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）的培莽方法。方法采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果镜下培养细胞呈典型的“谷-峰状”生长,免疫组化染色显示胞浆内α—actin阳性表达。结论拳法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

芦荟大黄素对球囊动脉血管损伤后体外培养的平滑肌细胞c-myc基因表达的影响

目的：探讨芦荟大黄素抑制平滑肌细胞增殖的作用机制。方法：用3F Fogarty球囊拉栓导管对纯种日本大耳白兔腹主动脉进行球囊内皮剥脱损伤，48h后取出腹主动脉中膜进行原代平滑肌细胞培养，细胞同步于G0/G1期后，实验组加芦荟大黄素20ug/ml，对照组加等体积的细胞培养液，3h后分别用Northern杂交法，Western杂交法和免疫细胞化学技术检测两组动物平滑肌细胞c-myc基因mRNA和蛋白表达产物的变化。结果：与对照组比较，实验组平滑肌细胞c-myc mRNA和蛋白水平的表达变化差异均无显著性。结论：芦荟大黄素对平滑肌细胞的增殖抑制作用可能不是通过影响c-myc基因的表达实现的，而是通过其他途径。     

miR-145抑制VSMC增殖的作用及其相关信号通路研究

目的探讨miR-145对PDGF—BB诱导的大鼠原代血管平滑肌细胞（VSMC）的作用及丝裂原激活的蛋白激酶（MAPK）信号转导途径的作用。方法体外培养大鼠原代VSMC,再将细胞分为空白对照组、miR—NC组、PDGF—BB＋miR-145组及PDGF—BB组。CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;实时RT—PCR方法检测PCNA、c—Jun及SM22a的表达水平;Western印迹方法检测ERK1／2和P—ERK1／2的表达、JNK和P—JNK的表达以及p38MAPK和P—p38MAPK的表达。结果miR-145过表达后能够抑制PDGF诱导的大鼠原代VSMC增殖,并下调VsMc增殖相关基因PCNA、c—Jun的表达、上调分化相关基因SM22a的表达;PDGF—BB诱导VSMC后,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显上调,而转染miR-145慢病毒后再加PDGF刺激,ERK、JNK、p38MAPK的磷酸化水平均明显下调。结论miR-145能够抑制去分化型VSMC中的MAPK信号通路,进而抑制VSMC的增殖。