槲皮素对糖尿病肾病大鼠的肾小球周期素激酶抑制剂P27水平的影响

目的:探讨槲皮素对糖尿病肾病的影响及该影响与肾小球周期素激酶抑制剂P27的关系。方法:腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病(DM)模型,分别以生理盐水或槲皮素(100 mg·kg1·d-1)灌胃8周。蛋白印迹(Western杂交)法测定肾小球裂解液P27蛋白水平,ELISA法测定肾小球裂解液细胞外基质(ECM)蛋白(Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白)和尿白蛋白。结果:DM 8周大鼠肾小球P27水平增高,ECM蛋白水平增加,尿白蛋白排泄增多,肾质量/体质量比值增高。槲皮素灌胃8周显著降低DM大鼠。肾小球P27水平(10.6±3.1 vs 18.5±4.3,P<0.01)和ECM蛋白水平,减少尿白蛋白排泄[(17.62±3.02)vs(39.62±3.68)μg/24 h,P<0.01],降低DM大鼠肾质量/体质量比值(11.35±1.76 vs 14.87±2.02,P<0.01)。槲皮素不改变DM大鼠血糖水平。结论:槲皮素可能通过降低肾小球P27水平改善糖尿病肾病症状。     

系膜增生性肾炎大鼠肾小球周期素激酶抑制剂P27的变化及意义

目的:探讨周期素激酶抑制剂P27在系膜增生性肾炎模型Thy1肾炎大鼠系膜细胞(MC)增生中的作用.方法:利用抗胸腺细胞抗体制成Thy1肾炎模型,Western印迹法测定肾小球裂解液P27蛋白水平, RT-PCR方法测定肾小球P27 mRNA,ELISA方法测定肾小球裂解液细胞外基质(ECM)蛋白(纤维连接蛋白及Ⅳ型胶原).结果:Thy1肾炎第1天P27水平即有明显下降,第3天(MC增生最为明显)P27水平最低,第5天(MC增生开始消散)P27水平有所回升,提示P27水平与MC增生程度有关;Thy1肾炎第3天肾小球P27 mRNA与正常对照组比较无明显差别;而Thy1肾炎大鼠肾小球纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原均升高(P<0.01),在第3天达峰值,第5天略有回降,但仍显著高于正常对照组(P<0.01).结论:P27水平下降可能在Thy1肾炎MC增生中起重要作用.     

槲皮素降低肾小球周期素激酶抑制剂p27水平改善糖尿病肾病

目的　探讨槲皮素改善糖尿病肾病与肾小球周期素激酶抑制剂 p2 7的关系。 方法　腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病 (DM )模型 ,分为DM +Qu组 ( 6只 )及DM组 ( 6只 ) ,分别给予槲皮素 10 0mg·kg-1·d-1及同体积的生理盐水灌胃 8周 ;对照组 (正常大鼠 6只 )予等体积生理盐水灌胃 8周。采用蛋白印迹 (Western杂交 )方法测定肾小球裂解液 p2 7蛋白水平 ,采用ELISA方法测定肾小球裂解液细胞外基质 (ECM )蛋白 (Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白 )和尿白蛋白。结果　DM组大鼠肾小球 p2 7水平为 18.5± 4.3 ,尿白蛋白排泄为 ( 3 9.62± 3 .68) μg/ 2 4h ,肾重 /体重比例为 ( 14.87± 2 .0 2 )× 10 -3,均较其他 2组明显增加 ,ECM蛋白水平也较其他 2组明显增加。与DM组相比 ,DM +Qu组肾小球 p2 7水平 ( 10 .6± 3 .1)、ECM蛋白水平、尿白蛋白排泄 [( 17.62± 3 .0 2 ) μg/ 2 4h]及大鼠肾重 /体重比例 [( 11.3 5± 1.76)× 10 -3]均明显降低 (P <0 .0 1) ;DM +Qu组的血糖水平无明显改变。结论　槲皮素可能通过降低肾小球 p2 7水平改善糖尿病肾病     

周期素激酶抑制剂p21和糖尿病肾病

肾脏肥大是糖尿病肾病（Diabetic nephropathy，DN）早期的主要表现之一。包括肾小球和肾小管的肥大，其调控最终发生在细胞周期水平上。p21是已知的具有最广泛激酶抑制活性的细胞周期负调控蛋白，与早期DN肾脏肥大密切相关。直接影响DN的发生、发展。对此深入研究为DN的防治提供新的启示。     

α-酮酸配伍低蛋白饮食对糖尿病大鼠肾脏肥大的影响及其与肾小球周期素激酶抑制剂P27的关系

目的　探讨α 酮酸配伍低蛋白饮食对糖尿病大鼠肾脏肥大的影响及其与肾小球周期素激酶抑制剂 p2 7的关系。 方法　腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病 (DM )模型 ,分别予正常蛋白 (蛋白占饲料重量的 10 % ,NPD组 )、低蛋白 (蛋白占饲料重量的 5 % ,LPD组 )、α 酮酸 +低蛋白 (蛋白占饲料重量的 5 % ,其中α 酮酸提供1%的蛋白 ,LPD +α KA组 )饮食治疗 8周。蛋白印迹 (Western杂交 )方法测定肾小球裂解液p2 7蛋白水平 ,ELISA方法测定肾小球裂解液细胞外基质 (ECM )蛋白 (Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白 )和尿白蛋白 ,采用图像分析系统测定肾小球面积。结果　各组DM大鼠肾小球 p2 7水平及ECM蛋白水平均增高 ,尿白蛋白排泄增多 ,肾重 /体重比例增高 ,肾小球面积增大 ,但LPD组及LPD +α KA组大鼠的变化较NPD组轻。LPD +α KA组肾小球p2 7水平 (8.6± 2 .3)较LPD组 (11.1± 3.6 )显著降低 (P <0 .0 1) ,ECM蛋白水平进一步下降 ,尿白蛋白排泄减少更明显 (P <0 .0 1) ,DM大鼠肾重 /体重比例下降更显著 (P <0 .0 5 ) ,肾小球面积进一步减少 (P <0 .0 5 )。DM大鼠肾小球 p2 7水平与肾重 /体重比例呈直线相关。LPD组、LPD +α KA组和NPD组间的血糖水平及血白蛋白水平差异无显著性。结论　α 酮酸配伍低蛋白饮食可能通过降低肾     

低蛋白饮食对糖尿病肾病大鼠肾脏肥大的影响及其机制探讨

目的:探讨低蛋白饮食对糖尿病肾病大鼠肾脏肥大的影响及其与肾小球周期素激酶抑制剂P27的关系.方法:腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病(DM)模型,分别予正常蛋白(NPD组,n=6)、低蛋白(LPD组,n=6)饮食8周,同时对正常大鼠(正常对照组,n=6)予正常蛋白饮食8周.蛋白印迹方法测定肾小球裂解液P27蛋白水平,ELISA方法测定肾小球裂解液细胞外基质(ECM)蛋白(Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白)和尿白蛋白,氧化酶法测定血糖,溴甲酚绿法测定血白蛋白,采用图像分析系统测定肾小球面积.结果:与正常对照组相比,NPD组和LPD组大鼠肾小球P27水平及ECM蛋白水平均增高,尿白蛋白排泄增多,肾质量/体质量比例增高,肾小球面积增大.同NPD组相比,LPD组大鼠肾小球P27水平降低[(11.1±3.6) vs (19.6±5.1),P<0.01],纤维连接蛋白水平[(9.8±2.9) vs (17.1±3.9)pg/mg, P<0.01]及Ⅳ型胶原水平[(99.6±23.5) vs (150.6±47.1)pg/mg, P<0.01]下降,尿白蛋白排泄减少[(18.13±3.23) vs (40.18±3.79) μg/24 h,P<0.01],大鼠肾质量/体质量比例下降[(12.03±1.85) vs (15.62±2.13),P<0.01],肾小球面积减少[(721±75) vs (815±97)μm2,P<0.01].DM大鼠肾小球P27水平与肾质量/体质量比例呈直线相关.正常对照组、LPD组和NPD组间大鼠血糖水平及血白蛋白水平无明显差别.结论:LPD可能通过降低肾小球P27水平抑制DM肾脏肥大,从而改善糖尿病肾病.     

大黄素抑制系膜细胞增生与周期素激酶抑制剂p27的关系

目的:探讨周期素激酶抑制剂p27在大黄素抑制肾系膜细胞(mesangial cell,MC)增生中的作用.方法:蛋白印迹(western 杂交)方法测定MC裂解液p27蛋白水平,3H胸腺嘧啶核苷(3HTdR)测定MC增生的情况,观察不同浓度大黄素(50 mg/L、100 mg/L )对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激的MC中p27水平及增生程度的影响. 结果: TNF-α (20万U/L)使无血清培养24 h的MC中p27水平降低,同时使3HTdR掺入增加;大黄素提高TNF-α刺激的 MC中p27水平,同时使3HTdR掺入减少.大黄素的上述作用随剂量的增大而增强. 结论: 大黄素可能通过提高p27水平抑制 TNF-α诱导的MC增生.     

依那普利及氯沙坦对糖尿病大鼠肾脏周期素激酶抑制剂p27kip1蛋白表达的影响

目的：研究应用依那普利和氯沙坦治疗后糖尿病大鼠肾脏p27^kipl蛋白表达的变化，探讨糖尿病肾病的发病机制。方法：实验大鼠分4组：正常对照组（A组）、糖尿病大鼠组（B组）、糖尿病大鼠应用依那普利治疗组（C组）和氯沙坦治疗组（D组）、B、C和D组腹腔一次性注射链脲佐菌素复制糖尿病模型，于4周内留取血液和肾脏标本，应用免疫组织化学方法检测肾脏组织中p27^kipl蛋白的表达，放射免疫方法检测肾脏和血浆中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的水平。结果：B组大鼠肾小球固有细胞p27^kipl水平在第1周升高（P＜0．05），至4周时仍维持较高水平，肾小管细胞中p27^kipl表达无显著差异；肾重／体重比值和肾小球面积在该组大鼠第1周起即明显上升；肾脏AngⅡ水平亦呈显著性增加。依那普利和氯沙坦治疗组上述指标明显下降。结论：周期素激酶抑制剂p27^kipl可能参与糖尿病肾病肥大的病理过程，它与内源性AngⅡ水平密切相关，提示降低p27^kipl表达可能是ACEI及ATla延缓肾脏疾病进展的作用机制。     

高糖通过血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1通路促进人系膜细胞合成纤连蛋白

目的研究血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1(SGK1)在高糖诱导人肾小球系膜细胞(HMC)产生纤连蛋白(FN)中的作用,探讨SGK1在糖尿病肾病(DN)肾小球硬化中的作用机制。方法将带有SGK1显性激活型突变体质粒(PIRES2EGFPS422DSGK1mutant,SD)瞬时转染HMC;同时,设空质粒(PIRES2EGFP,FP)转染组和未转染组(NT)为对照。分别用正常糖(NG,5.5mmol/LD葡萄糖)和高糖(HG,25mmol/LD葡萄糖)刺激8h后,采用RTPCR方法和Western印迹方法来观察SGK1和FN的mRNA及蛋白的表达。结果高糖环境下,转染SD的HMC与转染FP、NT组比较,其SGK1mRNA表达显著性增高(0.704vs0.497,0.491,P<0.01),SGK1蛋白过度活化(1178497vs193875,195597,P<0.01),其FNmRNA和蛋白的表达显著性的增加(0.749vs0.463,0.475,P<0.01;659550vs342354,340428,P<0.01)。结论在糖尿病肾病中,高糖可以通过SGK1介导的信号通路来诱导人肾小球系膜细胞增加合成FN,这种新发现的信号通路,表明SGK1可能参入糖尿病肾病肾小球纤维化的发生。     

氨基胍对糖基化终产物干预后人肾系膜细胞fractalkine表达的影响

目的观察氨基胍(AG)对体外制备的糖基化终产物(AGEs)诱导的人肾系膜细胞(HRMC)趋化因子fractalkine表达的影响。方法分别给予无血清的DMEM培养基、牛血清清蛋白(BSA)、糖基化终产物-牛血清清蛋白(AGE-BSA)干预HRMC,以及不同浓度AG与AGE-BSA共同干预HRMC 24 h;采用RT-PCR和Western-blot法分别检测HRMC fractalkine mRNA和蛋白表达。结果与DMEM、BSA组相比,AGE-BSA明显升高HRMC frac-talkine mRNA和蛋白表达(P<0.05),AG以浓度依赖的方式下调HRMC fractalkine mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论 AG可能通过拮抗AGEs对fractalkine表达的增加作用而发挥其肾脏保护作用。     

细胞周期调节负控蛋白P27在肾小球系膜细胞增殖中的调控作用

目的探讨lL-13,ET-1,甲基强的松龙及肝素钠对肾小球系膜细胞膜表达细胞周期负控p27的变化.方法不同浓度IL-13(10ng/ml,100ng/ml),ET-1(10-7mol/L),甲基强的松龙0.5μg/ml,肝素钠100mg/L和200mg/L,作用于培养的系膜细胞.流式细胞仪检测p27表达水平.结果IL-13 10 ng/ml组和100ng/ml浓度组p27表达为(46.74±3.25)和(23.8±2.56),与对照组比较有明显差异(P＜0.001,P＜0.05),两浓度组之间有显著差异(P＜0.01).ET-1刺激14h和18h后p27的表达分别为(14.76±1.49)和(12.18±1.30),与对照组比较均有明显差异(P＜0.05,P＜0.05).甲基强的松龙48h及72 h p27表达为(9.9±1.01)和(9.12±0.93),与对照组比较明显降低,P＜0.001.肝素钠100mg/L和200 mg/L浓度p27的表达分别为(26.94±1.23)和(28.04±0.99),较对照组明显升高(P＜0.05),不同浓度组间比较无明显差异.结论肾小球系膜细胞受不同因素作用后细胞周期调节负控蛋白p27表达水平不同.p27在调节系膜细胞增殖过程中起重要作用.     

儿童急性淋巴细胞白血病P21WAF1、P27KIP1蛋白表达及其临床意义

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P21WAF1、P27KIP1在儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的表达情况及意义.方法:采用免疫细胞化学S-P染色法测定骨髓单个核细胞P21WAF1、P27KIP1表达情况,分别观察阳性率及阳性细胞积分.结果:P21WAF1、P27KIP1阳性率及在阳性病例中的阳性细胞积分均低于对照组(P＜0.05),随访部分病例,经诱导化疗达到完全缓解后,两种蛋白有阳转或表达增强现象,治疗前后两种蛋白阳性率及阳性细胞积分均有显著性差异(P＜0.05).结论:P21WAF1、P27KIP1在儿童急性淋巴细胞白血病表达减低,可作为其化疗疗效的分子学指标.     

Expressions of cyclin E, cyclin dependent kinase 2 and p57~(KIP2) in human gastric cancer

Ｔｈｅｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｈａｖｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｍａｒｋｅｄｌｙｓｉｎｃｅｔｈｅ 1930’ｓ 1　Ａｌｔｈｏｕｇｈｔｈｉｓｄｅｃｒｅａｓｅｈａｓｏｃｃｕｒｒｅｄｗｏｒｌｄｗｉｄｅ ,ｔｈｅｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙｏｆｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒａｒｅｓｔｉｌｌｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎＪａｐａｎ ,Ｃｈｉｎａ ,Ｃｈｉｌｅ ,ａｎｄＩｒｅｌａｎｄ Ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｉｓｓｔｉｌｌｔｈｅｌｅａｄｉｎｇｃａｕｓｅｏｆｃ…     

Expressions of cyclin E, cyclin dependent kinase 2 and p57KIP2 in human astric cancer

Objective To investigate the expressions of cyclin E, cyclin dependent kinase 2（CDK-2）a nd cyclin-dependent kinase inhibitor p57 (KIP2) in human gastric cancer, and to evaluate the relationships between protein levels and clinicopathological pa rameters. Methods Western blot was used to measure the expressions of cyclin E, CDK-2 and p57 (KIP2) proteins in the surgically resected gastric carcinoma, adjacent normal mu cosa and metastatic lymph nodes from 36 patients. Results Cyclin E and CDK-2 protein levels were higher in gastric cancer tissues in comp arison with normal tissues ( P &lt;0. 05).Overexpression of cyclin E was correl ated with lymph node involvement, poor histological grade and serosa invasion ( P &lt;0. 05).Overexpression of CDK-2 was correlated with lymph nodes involvem ent ( P &lt;0. 05).No statistically significant difference between cyclin E and CDK-2 expression was found when samples were stratified according to tumor siz e ( P &gt;0. 05).Expression of cyclin E and CDK-2 showed a positive linear cor relation( r =0. 451,P =0. 01).Protein levels of p57 (KIP2) were lower in gastric cancer tissues than in the normal mucosa ( P &lt;0. 05).Decreased expr ession of p57 (KIP2) was correlated with lymph node involvement ( P &lt;0. 05) .No statistically significant difference in p57 (KIP2) expression was found when sample were stratified according to tumor size, histological grade or sero sa invasion ( P &gt;0. 05).In metastatic lymph nodes, expression of cyclin E wa s increased and the expression of p57 (KIP2) decreased. Conclusion Overexpressions of cyclin E, CDK-2 and downregulated expression of p57KIP2 may play important roles in tumorigenesis and metastatic potential of gastric cancer.     

蟾蜍灵调控系膜细胞增殖与细胞周期激酶抑制剂p21的关系

目的: 观察蟾蜍灵对大鼠系膜细胞(mesangial cell,MC) p21表达的影响,探讨其调控系膜细胞增殖的机制?方法:MTT法观察不同浓度蟾蜍灵(0.01?0.04?0.08?0.16 μmol/L)对PDGF-BB(20 ng/ml)诱导的MC 增殖的影响;流式细胞术测定MC细胞周期的变化;RT-PCR法测定p21基因表达的改变;Western blot法测定p21蛋白水平变化?结果:PDGF-BB刺激MC12 h后,加入不同浓度蟾蜍灵干预24 h,蟾蜍灵从0.04 μmol/L至0.16 μmol/L的呈浓度依赖抑制PDGF-BB诱导的MC增殖(P < 0.05)?0.08 μmol/L蟾蜍灵干预24 h后,可使PDGF-BB诱导的MC G0/G1期细胞比例升高,使S期细胞比例下降,且上调P21mRNA和蛋白水平的表达(P < 0.05)?0.08 μmol/L蟾蜍灵对正常系膜细胞无明显影响(P > 0.0.5)?结论:蟾蜍灵可能通过上调细胞周期激酶抑制剂p21的表达来抑制PDGF-BB诱导的MC的增殖?