周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性的影响

目的 探讨不同力值、不同时段体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞早期增殖活性及功能状态的影响。方法 分离培养大鼠髁突软骨细胞至第三代，利用四点弯曲细胞力学加栽仪进行体外周期性单轴压应力加裁，力值为2000和4000μ strain，时间0、15、30、60、120和240min；采用流式细胞计量术和MTT四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下增殖活性的变化。结果 2000μ strain周期性单轴压应力作用120min后，细胞增殖活性逐步增强，SPF增加（P〈0．001）；4000μstrain周期性单轴压应力作用60min后，髁突软骨细胞SPF出现了一明显下降，相反G2期细胞比例增高（P〈0．001）；120min后S期、G2细胞比例开始恢复，240minSPF增加（P〈0．001）。加力后1、2、3天，实验组细胞的增殖活性与对照组相比无统计学差异。结论 2000ttstrain周期性单轴压应力刺激能促进大鼠髁突软骨细胞增殖活性逐步增强；而4000μ strain周期性单轴压应力能引起细胞增殖活性早期发生变化，表现为先抑制后促进。两组细胞增殖活性变化均为暂时性、可恢复的。     

体外周期性单轴压应力作用下大鼠髁突软骨细胞肌动蛋白和中间丝波形蛋白的早期变化研究

目的探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞细胞骨架蛋白肌动蛋白（Actin）和中间丝波形蛋白（Vimentin）的早期影响。方法利用四点弯曲加力装置对第3代大鼠髁突软骨细胞进行周期性单轴压应力加载,力值为4 000 μstrain,时间为15、30、60、120、240 min。同时设有不加力的对照组。采用免疫荧光技术和Westernblot免疫印迹技术研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下Actin和Vimentin的早期动态变化。结果在4 000 μstrain压应力作用下,细胞骨架荧光逐渐下调,60 min表达最低,但120 min后细胞骨架的荧光表达逐渐恢复。Vimentin蛋白表达水平在30 min开始下降,Actin蛋白表达在60 min明显下调,几乎消失;但120 min后两种蛋白表达水平开始迅速回升。结论4 000 μstrain压应力刺激对大鼠髁突软骨细胞Actin、Vimentin蛋白的表达存在时间效应性,表现为先下调后反馈增强的趋势,提示细胞对力学刺激的反应存在“自我调控保护”的机制。     

周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞Stress70/GRP75的早期影响

目的:探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的早期动态变化影响。方法:利用四点弯曲细胞力学加载仪,对第3代大鼠髁突软骨细胞进行体外周期性单轴压应力加载,力值为4000μstrain,时间分别为0、15、30、60、120、240min;采用Western免疫印迹技术和图像分析技术,研究大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的动态变化,对结果进行单因素方差分析。结果:4000μstrain周期性单轴压应力作用下,大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的表达发生变化,0min条带灰度值为114.2±5.08;30min时降至最低,为86.1±5.09(P<0.001);60min后有所回升,至104.0±4.41(P<0.01),但仍表达下调;120min后表达开始增强,灰度值为134.5±3.74(P<0.001)。结论:4000μstrain压应力刺激,对大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75存在时间效应性,初期表达下调;随着应力加载时间延长,其表达反馈增强。     

体外周期性单轴压应力下髁突软骨细胞Raf激酶抑制蛋白(RKIP)的动态变化研究

目的:探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞的Raf激酶抑制蛋白(RKIP)及其mRNA变化的早期影响,以助于阐明力学引起细胞应答反应的分子机制。方法:利用四点弯曲细胞力学加载仪对第3代大鼠髁突软骨细胞进行体外周期性单轴压应力加载,力值为4000μstrain,时间为0、15、30、60、120、240min。采用实时荧光定量PCR技术和Western blot免疫印迹技术研究大鼠髁突软骨细胞在周期性单轴压应力作用下RKIP及其mRNA变化。结果:大鼠髁突软骨细胞RKIP mRNA和蛋白表达呈现几乎相反的趋势。RKIP mRNA的表达于30min上升(P<0.001),60min达到高峰后迅速回落,低于细胞的正常基态水平;而RKIP的蛋白表达30min开始下调(P<0.001),持续至120、240min时回升。结论:RKIP在髁突软骨细胞的早期力学应答机制中可能扮演着相当重要的作用,其蛋白和mRNA水平表达变化不同,转录水平的调控最终要影响蛋白水平的表达。     

周期性单轴压力对大鼠髁突软骨细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨在髁突软骨细胞受到周期性单轴压力后,结缔组织生长因子(connective tissuegrowth factor, CTGF)表达的影响,为正畸治疗中髁突软骨受力后的改建提供生物学依据。方法 选取1周龄SD大鼠,提取并培养髁突软骨细胞,免疫组化鉴定。利用四点弯曲细胞力学加载仪对第3代细胞进行力值为2000u strain、0.5Hz的体外周期性单轴压力加载,分别在加力0min、30min、60min和120min后继续培养24h,应用蛋白印迹法检测在不同加力时间CTGF蛋白表达的变化。应用SPSS18.0软件对数据进行统计学分析。结果 CTGF的相对蛋白量在加力0min、30min、60min和120min后,分别为0、1.59、2.34和3.16,随着加载时间的增加,表达呈逐渐上升趋势。且组间差异具有统计学意义(P<0.05) 结论 周期性单轴压力可刺激大鼠髁突软骨细胞CTGF的表达。     

体内压应力刺激下大鼠髁突软骨细胞的分离、体外培养以及差异蛋白质组学观察

目的：观察体内压应力刺激下大鼠髁突软骨细胞的生物学活性和蛋白质表达谱。方法：对大鼠进行III类矫形力应力加载2周,观察髁状突大体形态和组织形态学;体外培养实验鼠和对照鼠软骨细胞,计数细胞收获数和细胞存活率,检测总蛋白质组学水平上差异。结果：压力刺激后的大鼠髁突软骨明显变薄,表面无光泽,缺乏弹性,重量降低（P＜0．01）;力学刺激后髁突软骨细胞收获率和存活率均下降（P＜0．01）,形态更加狭长;蛋白质组学结果主要为应激蛋白上调,信号转导蛋白活化,细胞骨架蛋白和细胞增殖代谢相关蛋白的下降。结论：经体内力学加载后,体外分离培养的关节软骨细胞形态、生物学活性以及在蛋白质水平均发生了明显的变化。     

机械应力刺激对成牙骨质细胞骨桥蛋白表达影响的研究

目的研究机械应力刺激对成牙骨质细胞矿化相关基因骨桥蛋白（osteopontin,OPN）mRNA表达的影响。方法本研究设3个实验组和1个对照组,利用四点弯曲细胞力学加载装置,对体外培养的成牙骨质样细胞OCCM-30施加2 000μstrain张应力2、000μstrain压应力和4 000μstrain压应力,对照组不加力。分析加力3 h、6 h、12 h、24 h时成牙骨质样细胞OCCM-30 OPN mRNA表达差异,对数据进行统计学分析。结果和对照组相比,2 000μstrain压应力组和4 000μstrain压应力组在加力初期（3 h）OPN的mRNA表达增加,加力后期（24 h）其mRNA表达受到抑制,差异有统计学意义（P〈0.05）;2 000μstrain张应力组在加力3 h、6 h和对照组相比,OPN mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0.05）,加力12 h、24 h OPN mRNA的表达受到抑制,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论机械应力刺激可以调节成牙骨质细胞OPN mRNA的表达,可能由此影响牙根吸收和修复过程。     

口腔正畸学

体外培养人牙周膜成纤维细胞雌激素受体表达的实验研究；周期性单轴压应力下大鼠髁突软骨细胞早期应答机制的蛋白质组学初探；镍钛圆丝弯曲变形后的力学性能分析；磁力Twin-block矫治器对骨性Ⅱ类错[牙合]矫治效果的研究；种植钉与口外力作为正畸强支抗的临床比较研究     

大鼠髁突软骨细胞发育中差异蛋白的表达变化

目的：初步建立大鼠髁突软骨细胞发育过程中蛋白表达差异谱,寻找并鉴定其差异表达蛋白。方法：体外培养出生后1、7、14、28d共4组SD大鼠髁突软骨细胞,应用甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定软骨细胞。提取各组软骨细胞总蛋白．采用iTRAQ标记定量蛋白．2Dnano—HPLC和基质辅助激光解吸／电离串联飞行时间质谱（MALDI—TOF—TOF）技术动态、定量观察出生后大鼠髁突软骨细胞发育过程中差异蛋白的表达及其量变情况,所得数据用MASCOT软件处理,筛选样本之间有意义的差异蛋白,运用GO法进行蛋白分类。结果：共鉴定500种差异蛋白．其中137种具有可信度表达．包括15种高可信度表达,相对分子量在7806．24～608459．2．主要功能为参与各类代谢及发育过程、细胞骨架结构、信号转导,响应各类刺激、免疫应答以及细胞间联系及运输等。结论：本研究获得了目前较为全面的大鼠髁突软骨细胞发育中差异蛋白表达谱．并运用质谱技术成功鉴定了差异表达蛋白．为进一步研究髁突软骨细胞内蛋白功能及在颞下颌关节疾病中的改变与作用奠定基础。     

机械应力刺激对成牙骨质细胞骨涎蛋白mRNA表达影响的体外研究

目的研究机械应力刺激对成牙骨质细胞矿化相关基因骨涎蛋白（bone sialoprotein,BSP）mRNA表达的影响。方法利用四点弯曲细胞力学加载装置,以体外培养的成牙骨质样细胞OCCM-30为研究对象,运用实时荧光定量技术,比较2 000、4 000μstrain张应力和压应力加载组和不加力组OCCM-30在3 h、6 h、12 h、24 hBSP mRNA表达差异。结果和对照组相比,2 000、4 000μstrain的张应力和压应力在4个时间点均抑制OCCM-30 BSP mRNA的表达,且差异有统计学意义（F=5.614,P〈0.05）。结论成牙骨质细胞是力学敏感性细胞,机械应力刺激通过影响其BSP mRNA的表达,进而可能影响成牙骨质细胞在牙根吸收和修复中的作用。     

颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞雌激素受体β差异表达的研究

目的 探讨大鼠颞下颌关节骨关节病髁突软骨细胞雌激素受体β（ERβ）的差异表达。方法 25只SD大鼠随机分为实验组（15只）和对照组（10只）。实验组以去除左侧 部分关节盘的方法建立大鼠颞下颌关节骨关节病模型，术后3个月处死动物，取其髁突软骨细胞进行培养，采用免疫组化、逆转录聚合酶链反应、肽质量指纹谱（PMF）和Western blot等方法观察软骨细胞中ERβ蛋白和mRNA的表达。结果 PMF显示，ERβ是软骨细胞线粒体蛋白质组的成分，Western blot、逆转录聚合酶链反应和免疫组化结果显示，ERβ在实验组细胞和线粒体中表达水平较对照组降低（P<0.01）。结论 ERβ可能通过线粒体途径参与了颞下颌关节骨关节病的病理过程。     

不同静压力对新生SD大鼠髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨不同静压力对髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：对培养到第3代新生SD大鼠髁突软骨细胞加载0、12、24、36kPa静压力1h后立即收集样本，用流式细胞仪检测细胞凋亡与增殖指数的变化。结果：随着压力的增加（0、12、24、36kPa），除24kPa外，细胞增殖指数和凋亡指数在加力结束时（0h）均减少（P〈0．05），其中，细胞增殖指数在36kPa加力结束时减幅最大，细胞凋亡指数则在12kPa加力结束时减幅最大。结论：在0、12、24、36kPa力值范围内，软骨细胞增殖、凋亡与应力值存在一定的关系，但这并非是简单的线性关系。     

咬合干扰对大鼠髁突软骨细胞内质网应激及凋亡的影响

目的:探讨咬合干扰致大鼠髁突软骨退变过程中内质网应激及凋亡相关分子的表达情况。方法:30只8周龄SD大鼠,采用大鼠上颌第一磨牙粘接不良修复体造成咬合干扰大鼠模型,4、8、12周后取颞下颌关节,甲苯胺蓝染色、苏木精-伊红染色观察组织形态学变化,透射电镜观察超微结构,免疫组织化学染色检测GRP78、Caspase-12的表达情况。结果:实验组髁突软骨基质降解、细胞密度降低,内质网膨胀、断裂;GRP78阳性细胞率较对照组显著增多(P<0.05),Caspase-12阳性细胞率在8、12周时明显增加(P<0.05)。结论:咬合干扰后大鼠髁突软骨细胞发生内质网应激及内质网凋亡,可能是髁突软骨退变的重要机制之一。     

髁突软骨细胞受压力刺激前后的差异蛋白质电泳分析

目的:建立体外培养的髁突软骨细胞加载压力刺激前后双向电泳差异表达谱.方法:利用已建立的髁突软骨细胞的体外培养模型,抽提各组细胞总蛋白质,进行等电聚焦双向电泳,建立压力刺激前后髁突软骨细胞双向电泳差异表达谱.结果:加压组的体外培养的髁突软骨细胞蛋白质双向电泳表达谱与对照组的相比具有显著性的差异,主要表现为图谱斑点的增减以及部分斑点的染色面积和染色深浅发生了明显变化,本实验共发现了10个加压后差异表达蛋白点,其中3个在加压培养后表达消失,1个在加压培养后出现表达,4个在加压培养后表达减弱,有2个蛋白点呈进行性表达增强.结论:压力刺激髁突软骨细胞细胞会造成其表达差异性的蛋白质.     

不同加载频率拉应力对髁突软骨细胞增殖分化的影响

目的:探讨不同加载频率的拉应力对髁突软骨细胞增殖、分化的影响。方法:体外分离2周龄新西兰兔髁突软骨细胞,对细胞施加2 h/d,为期3 d的不同频率(0 Hz、0.1 Hz、0.5 Hz、1 Hz)的拉应力。采用CCK8检测细胞增殖水平,实时荧光定量RT-PCR检测Sox9、Runx2、VEGF的表达。结果:细胞增殖水平在静止性(0 Hz)组显著高于周期性加力(0.1~1 Hz)组和对照组;Sox9、Runx2、VEGF表达在0.5 Hz组和1 Hz组显著高于静止性(0 Hz)组和对照组。结论:不同加载频率拉应力对髁突软骨细胞增殖分化有差异性影响。     

静张应力对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节研究

目的　探讨静张应力环境对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法　将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在细胞膜式张应力施加装置上培养,检测不同血清浓度及持续不同的静张应力(5 kPa、10 kPa)在0~12 h内对髁突软骨细胞增殖活性的影响。结果　低血清培养基中,随培养时间的延长,硅胶膜上髁突软骨细胞的增殖活性受到抑制;短期(2h)的静张应力(5 kPa、10 kPa)对髁突软骨细胞细胞周期的调控影响不大;0~10 h内5 kPa静张应力组软骨细胞增殖指数随着张应力作用时间的延长不断上升,增殖指数峰值位于10 h处;0~8 h内10 kPa静张应力组软骨细胞增殖指数随着张应力作用时间的延长不断上升,增殖指数峰值位于8 h处;5 kPa静张应力组较10 kPa静张应力组对髁突软骨细胞具有更大的促增殖作用。结论　静张应力可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

机械压力对大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性影响的体外研究

目的:建立体外培养细胞加力装置,在细胞水平探讨机械力作用下大鼠髁突软骨细胞功能代谢的变化。方法:采用流式细胞术检测不同时段、不同力值的机械压力对体外培养的大鼠髁突软骨细胞增殖活性的影响。结果:在一定时间、0～2.03×10-4Pa(0～207g/cm2)力值范围内,随着机械压力的增大,受压的下颌髁突软骨细胞增殖活性增高,以持续压力作用6h最为明显;当持续压力作用于下颌髁突软骨细胞24h后,细胞增殖活性则出现下降。结论:在一定时间、一定力值范围内,随着机械压力的增大,受压的下颌髁突软骨细胞增殖活性有逐渐增高的趋势;当持续压力作用超过一定的范围,细胞增殖活性则出现下降趋势