TNFα诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡的时间效应

目的探索肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律．方法用细胞体外培养方法，以ＴＮＦα１×１０８Ｕ／Ｌ作用人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞０ｈ～４８ｈ，经ＨＥ染色和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色，光镜观察细胞的形态改变并计算凋亡百分率；ＤＮＡ抽提、琼脂糖凝胶电泳，检测ＤＮＡ断裂情况．结果随作用时间由０，１２，２４，３６延长到４８ｈ，Ｌｏｖｏ细胞渐出现明显的凋亡形态学改变，凋亡百分率分别为２０４％，６５９％，２３８９％，６０４７％，９２６６％（Ｐ＜００１）；作用４８ｈ，ＤＮＡ电泳出现梯形条带．结论ＴＮＦα能够诱导人大肠癌Ｌｏｖｏ细胞凋亡，并存在时间效应．     

IFN－γ联合rhTNF－α抑制白血病细胞c－myc原癌基因的表达

将干扰素（ＩＦＮ－ｒ）和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）与人白血病细胞株及急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）病人原代白血病细胞体外液相共育，用细胞，总ＲＮＡ样品与￣（３２）Ｐ标记的ｃ－ｍｙｃＤＮＡ探针打点杂交，我们观察了ＩＦＮ－ｒ联合ＴＮＦ－α作用ＨＬ－６０细胞，ＴＮＦ作用病人原代白血病细胞对其ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的影响。结果发现：１００Ｕ／ｍｌ和５００Ｕ／ｍｌ的ＩＦＮ－ｒ可明显促进５０Ｕ／ｍｌＴＮＦ－α对ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ表达的抑制作用；８例ｃ－ｍｙｃ高表达的ＡＭＬ病人，经５０Ｕ／ｍｌＴＮＦ作用后，其ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ水平发生显著性减低。结果证明了ＩＦＮ－ｒ具有协同ＴＮＦ－α抑制ＨＬ－６０白血病细胞ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的作用，ＴＮＦ－α对白血病细胞株及病人原代白血病细胞ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ水平均有明显的抑制效应。     

肿瘤坏死因子—α诱导体外培养大鼠肝细胞凋亡的作用

目的 了解肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）对体外培养大鼠肝细胞凋亡的作用。方法 在半乳糖胺（ＧａＩＮ）或放线菌素Ｄ（ＡｃｔＤ）致敏情况下，加入ＴＮＦ－α，通过光镜、电镜及ＤＮＡ电泳等方法，观察ＴＮＦ－α对体外培养肝细胞凋亡的作用。结果 在大鼠注射ＧａｌＮ后分离肝细胞加入ＴＮＦ－α，ＡＬＴ上升，电镜下可见细胞坏死及凋亡；给正常鼠肝细胞ＡｃｔＤ加入ＴＮＦ－α，光镜下出现典型凋亡细胞，ＤＮＡ电泳出现凋亡的     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探索肿瘤坏死因子α(TNF_α)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNF_α不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechsl 33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检则DNA断裂情况。结果TNFal×10~5μ/ml作用12-48h和J×10~4-1 x10~5μ/ml作用48h.Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h.DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论TNF_α能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与效果效应。     

TNFα诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡的时间效应

目的 探索肿瘤坏死因子(TNF)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细跑体外培养方法，以TNFα10万U/ml作用人大肠癌Lovo细胞12-48小时，经HE染色和Hoechst33258荧光染色．光镜观察细胞的形态改变；DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳，检测DNA断裂情况。结果随作用时阃延长，Lovo细胞渐出现明显的凋亡形态学改变；作用48小时．DNA电泳出现梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡，井存在时间效应。     

TNFα诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡的时间效应

目的探索肿瘤坏死因子(TNF)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以 TNFα 10万 U/ml 作用人大肠癌 Lovo 细胞12-48小时,经 HE 染色和 Hoechst33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA 抽提、琼脂糖凝胶电泳,检测 DNA 断裂情况。结果随作用时间延长,Lovo细胞渐出现明显的凋亡形态学改变:作用48小时,DNA 电泳出现梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌 Lovo细胞凋亡,并存在时间效应。     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探索肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNFα不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechst33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检测DNA断裂情况。结果:TNFα1×10~5μ/ml作用12—48h和1×10~4—1×10~5μ/ml作用48h,Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h,DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与剂量效应。     

内毒素／肿瘤坏死因子所致肝细胞损害机制的体外研究

为了解内毒素（ＬＰＳ）／肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）所致肝细胞损害的机制，以乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）及噻唑蓝染色（ＭＴＴ）为细胞毒性指标，利用Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝细胞进行了ＬＰＳ及其介质ＴＮＦ等的肝细胞损害机制研究。结果发现：ＬＰＳ、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１、ＩＬ－６等对肝细胞ＬＤＨ漏出及ＭＴＴ无显著影响（Ｐ＞０．０５），仅在ＬＰＳ、ＬＰＳ／ＴＮＦ－α加入肝细胞－Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞混合培养组后有所变化；经ＧａｌＮ／ＬＰＳ体内作用后分离的Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞与正常肝细胞混合培养，加入ＬＰＳ、ＴＮＦ及ＬＰＳ／ＴＮＦ－α均可致ＬＤＨ漏出显著增高（Ｐ＜０．０ｌ），多粘菌素Ｂ及抗－ＴＮＦ能分别完全和部分阻断此效应；经ＬＰＳ或ＴＮＦ－α体内作用后抽取的大鼠血清，加入培养肝细胞可致ＬＤＨ漏出显著增高（Ｐ＜０．０１）与ＭＴＴ显著降低（Ｐ＜０．０５），经５６℃灭活后此细胞毒性作用完全消失。上述结果提示，ＬＰＳ及其介质ＴＮＦ无肝细胞直接毒性作用，而经其活化的Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞可能引起一系列瀑布效应，导致肝细胞损害。     

人衰老成纤维细胞凋亡的可诱导性

目的 研究体外培养的人成纤维细胞衰老时可诱发凋亡的能力。方法 用于酸钠和去血清两种方法诱导人衰老和年轻或纤维细胞生存曲线、细胞形态和超微结构、ＤＮＡ断裂电科 、流式细胞仪分析凋亡等手段检测凋亡的发生情况。结果 ５０ｍｍｏｌ／Ｌ的丁酸钠诱导年轻细胞４８ｈ即发生凋亡,而老细胞耐９６ｈ,去血清诱导年轻细胞１５ｄ左右发生凋亡,而衰老细胞此时未出现凋亡现象。结论 人老成纤维细胞可凋亡的能力明显低于年轻细胞。     

5—FU,TNF和干扰素联合诱导结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的　观察联合应用５ＦＵ、天然人体肿瘤坏死因子α（ｎＨｕ ＴＮＦα） 和天然人体干扰素α（ｎＨｕ ＩＦＮα）诱导ＲＰＭＩ４７８８ 人体结肠癌细胞凋亡。方法　应用ＢＭ１／ＪＩＭＲＯ抗ＬｅＹ 小鼠ＩｇＭ 单克隆抗体（ＢＭ１ Ｍａｂ） ,以免疫组织化学方法进行检测。结果　与对照组相比,应用５ＦＵ、ｎＨｕ ＴＮＦα或／和ｎＨｕＩＦＮα处理２４ ～４８ｈ 后,ＢＭ１ Ｍａｂ 染色阳性细胞数明显增多,且具有时间依存性和剂量敏感性。结论　联合应用５ＦＵ、ｎＨｕ ＴＮＦα和ｎＨｕ ＩＦＮα具有协同诱导ＲＰＭＩ４７８８ 肿瘤细胞凋亡的作用。     

肿瘤坏死因子α对肝星状细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的研究肿瘤坏死因子（ＴＮＦ α）对肝星状细胞（ ＨＳＣ）结缔组织生长因子（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ, ＣＴＧＦ）表达的影响。方法用链霉蛋白酶、胶原酶原位灌注, Ｎｙｃｏｄｅｎｚ一步密度梯度离心法分离正常大鼠 ＨＳＣ,并用 ＴＮＦ α,转化生长因子β １（ＴＧＦ β１）处理细胞;应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ—ＰＣＲ）技术分别观察不同培养时期的ＨＳＣ中的ＣＴＧＦ的表达。结果 ＴＮＦα, ＴＧＦβ１均诱导ＨＳＣ的ＣＴＧＦ表达; １０μｇ／Ｌ浓度的 ＴＮＦα作用 ６ｈ,没有观察到 ＨＳＣ表达 ＣＴＧＦ;作用 ２４ ｈ后,检测到有 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ的表达。 ＴＧＦ β１在 １μｇ／Ｌ浓度作用 ６ｈ后,即可诱导 ＨＳＣ的 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达。结论 ＴＮＦ α可诱导 ＨＳＣ的 ＣＴＧＦ ｍＲＮＡ表达,可能是其参与早期肝纤维化形成的作用机理之一。     

细胞因子对树突状细胞抗肝癌作用的影响

目的研究人血树突状细胞（ＤＣ）和细胞因子ＴＮＦ,ＧＭＣＳＦ或ＩＦＮγ联合ＤＣ对淋巴因子和ＰＨＡ激活的杀伤细胞（ＬＰＡＫ细胞）体外杀伤人肝癌细胞株ＢＥＬ７４０２的影响．方法实验分为Ｌ组（ＬＰＡＫ）,Ｄ组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ）,Ｔ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５０００ｋＵ／Ｌ）,Ｔ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＴＮＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ５００ｋＵ／Ｌ）,Ｇ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＧＭ－ＣＳＦ１００ｋＵ／Ｌ）,Ｉ１组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ５００ｋＵ／Ｌ）和Ｉ２组（ＬＰＡＫ＋ＤＣ＋ＩＦＮγ１００ｋＵ／Ｌ）．每组效靶细胞比分别采用５∶１和１０∶１两种．培养４８ｈ后用中性红比色法检测细胞毒活性．结果Ｌ,Ｄ,Ｔ２和Ｔ１组的细胞毒活性依次增强,各组间差异有显著性（Ｐ＜００１）．Ｇ１和Ｇ２组均高于Ｄ组（Ｐ＜００１）,但Ｇ１,Ｇ２组间差异无显著性．Ｉ１,Ｉ２组与Ｄ组相比,也无显著性差异．随效靶比增加,各组细胞毒活性均相应增强．结论ＤＣ能增强ＬＰＡＫ细胞对肝癌细胞ＢＥＬ７４０２的细胞毒活性;ＴＮＦ或ＧＭＣＳＦ与ＤＣ联用,两者有协同作用;但与ＩＦＮγ联用,则无进一步增强作用     

脂质体人肿瘤坏死因子α基因体外转导人肝癌细胞基因表达的研究

目的研究人ＴＮＦα治疗基因在人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞株表达的情况。方法采用ＤＮＡ介导基因转移技术中的脂质体介导法，将从人肝癌浸润性单个核细胞中提取构建的ｐＳＶＫ３－ＴＮＦαｃＤＮＡ以阳离子脂质体为中介转导人肝癌ＳＭＭＣ７７２１细胞。结果及结论细胞上清液中的ＴＮＦα在转导后１２小时开始升高，６０～８４小时达到峰值，２４～９６小时维持一较高的平台状水平，１０８小时开始回落，至１２０小时降至正常水平。空载体转导组与阴性对照组均未测到增高的ＴＮＦα。同时发现ｐＳＶＫ３－ＴＮＦα与阳离子脂质体不同结合比例影响ＴＮＦα基因的表达。     

肺结核患者血肿瘤坏死因子—α和羟脯氨酸含量的临床评价

目的评价肺结核患者血肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）和羟脯氨酸（ＨＹＰ）含量的临床意义。方法用ＥＬＩＳＡ法和紫外分光光度法分别测定了２８例进展期肺结核患者和１７名正常人的血浆ＴＮＦ－α和血清ＨＹＰ含量。结果进展期肺结核患者血ＴＮＦ－α（１９２．８５±３７．１４ｎｇ／Ｌ）和ＨＹＰ（４．９６±１．１３ｍｇ／Ｌ）显著高于正常人（均Ｐ＜０．００１，分别为８９．３６±２３．１８ｎｇ／Ｌ和１．６４±０．３３ｍｇ／Ｌ）。抗结核治疗３月后，分别降为１１２．５０±４４．９３ｎｇ／Ｌ和２．１７±０．３９ｍｇ／Ｌ。ＴＮＦ－α与ＨＹＰ呈正的直线相关关系（ｒ＝０．５１３２，Ｐ＜０．００１）。结论ＴＮＦ－α与ＨＹＰ在肺组织损伤的进展期肺结核患者血中升高，而肺结核由进展期向好转期转化时，患者血中二者均有所下降。     

重型乙型肝炎肝组织Fas/Fas配体表达与肝细胞凋亡的研究

近年证明，肝细胞凋亡参与乙型和丙型肝炎的发病机制，介导肝细胞凋亡的效应细胞主要是细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ），引发凋亡的途径主要是穿孔素／颗粒酶Ｂ、Ｆａｓ／Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）和肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）受体／ＴＮＦα系统［１］；但肝细胞凋亡在重型肝炎病变中的状况研究较少。本研究旨在探讨Ｆａｓ／ＦａｓＬ介导肝细胞凋亡在重型乙型肝炎发病机制中的作用。一、资料与方法研究对象为我科近年收治的病人，试验组为重型乙型肝炎病人２４例，男２１例，女３例，年龄２１～５５岁；对照组为慢性乙型肝炎病人５５例，男４…     

肿瘤坏死因子-α诱导肝细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用

目的 研究肿瘤坏死因子－α（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ－α,ＴＮＦ－α）诱导肝细胞凋亡细胞凋亡在暴发性肝衰竭中的作用机制。方法 分别注射脂多糖（ｌｉｐｏｐ ｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ,ＬＰＳ）和ＴＮＦ－α于Ｄ－氨基半乳糖（Ｄ－ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ,ＧａｌＮ）致敏的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记（ｉｎ ｓｉｔｅ ｅｎｄ ｌａｂｅ     

顺铂诱导人胃癌SGC-7901细胞

目的探讨顺铂对胃癌（ＳＧＣ７９０１）细胞凋亡的诱导作用，以揭示顺铂治疗胃癌的作用机制．方法选用不同剂量顺铂与人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１共同孵育不同时间后，应用光镜、电镜进行细胞形态学观察；细胞ＤＮＡ经特异性荧光染色后，用流式细胞仪分析细胞周期变化．结果细胞经顺铂处理后浓缩、深染、致密的染色质沿核膜下凝集、有凋亡小体形成．细胞周期分析Ｇ１期峰前出现典型的细胞凋亡峰，以２５ｍｇ／Ｌ顺铂作用２４ｈ，５０ｍｇ／Ｌ作用１６ｈ为例，定量分析凋亡细胞发生率分别为９３％和１４９％．结论顺铂可通过诱导人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１发生细胞凋亡达到消灭肿瘤细胞的目的．     

人肝癌细胞与LAK细胞凋亡的超微结构比较

目的比较观察人肝癌细胞株ＢＥＬ７４０２细胞与ＬＡＫ细胞体外凋亡的超微结构．方法将ＢＥＬ７４０２细胞、人血树突状细胞和人ＬＡＫ细胞（淋巴因子和ＰＨＡ激活的杀伤细胞）共同置于含１００ｍＬ／Ｌ新生牛血清的１６４０培养液内，在３７℃，５０ｍＬ／Ｌ，ＣＯ２，饱湿条件下培养６ｈ．另将ＬＡＫ细胞单独置于含有环磷酰胺的上述培养液内，在同样条件下培养６ｈ．收集沉淀细胞制备电镜样本．细胞经２５ｇ／Ｌ戊二醛和２０ｇ／Ｌ锇酸双固定，ＰＤＡＰ包埋，超薄切片，常规染色，透射电镜观察．结果凋亡的ＢＥＬ７４０２细胞与ＬＡＫ细胞，其细胞核染色质浓缩、边集，核碎裂，离散的碎片外包以双层膜，一些线粒体也变得致密．然而，在有些凋亡的ＢＥＬ７４０２细胞内，可见浓缩的细胞碎片向细胞外出芽隆起，形成膜包的凋亡小体；其线粒体和粗面内质网的变化也较为复杂．结论凋亡的ＢＥＬ７４０２细胞与ＬＡＫ细胞均具有凋亡细胞的基本特征，但是两种凋亡细胞具体的形态表现不尽一致．表明细胞内的主要细胞器主动参与了凋亡过程．     

雷抑素对大鼠移植肝Kupffer细胞的影响

目的探讨肝移植术前应用雷抑素对大鼠肝Ｋｕｐｆｅｒ细胞的影响方法以ＳＤ大鼠为供受体建立原位肝移植模型．受体移植术前３ｄ连续口服１％羧甲基纤维素１ｍｌ／ｄ（对照组）或雷抑素１０ｍｇ／ｋｇ·ｄ（用药组）．分别于术后１，２，３，２４ｈ采血并取肝组织，检测血清ＴＮＦ，ＡＬＴ及肝ＭＤＡ水平，观察肝超微结构及大鼠１周存活率变化．结果对照组移植术后３ｈ血清ＴＮＦ（５３ｋＵ／Ｌ±０４１ｋＵ／Ｌ），肝ＭＤＡ（４８４６ｎｍｏｌ／ｇ±２３６ｎｍｏｌ／ｇ）显著增加，ＴＮＦ表达呈强阳性；而且药组ＴＮＦ（０９ｋＵ／Ｌ±０１１ｋＵ／Ｌ）肝ＭＤＡ（３６１８ｎｍｏｌ／ｇ±１５４ｎｍｏｌ／ｇ）无明显变化，ＴＮＦ表达阴性，两者相差显著Ｐ＜００１）．电镜检查，对照组肝Ｋｕｐｆｅｒ细胞呈活化表现，而用药组肝Ｋｕｐｆｅｒ细胞呈非活化状态．对照及用药组术后１周存活率分别为０％和６０％．结论术前应用雷抑素可抑制移植肝ＴＮＦ和Ｏ２的产生，抑制Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞活化，以减轻肝冷缺血再灌注损伤．     

IFN—γ联合rhTNF—α抑制白血病细胞c—myc原癌基因的表达

将干扰素和肿瘤坏死因子与人白血病细胞株及急性髓细胞白血病病人原代白血病细胞体外液相共育，用细胞总ＲＮＡ样品与＾３２Ｐ标记的ｃ－ｍｙｃＤＮＡ探针打点杂交，我们观察了ＩＦＮ－γ联合ＴＮＦ－α作用ＨＬ－６０细胞，ＴＮＦ作用病人原代白血病细胞对基ｃ－ｍｙｃ癌基因表达的影响。结果发现：１００Ｕ／ｍｌ和５００Ｕ／ｍｌ的ＩＦＮ－γ可明显促进５０Ｕ／ｍｌＴＮＦ－α对ＨＬ－６０细胞ｃ－ｍｙｃ表达的抑制作用；８例ｃ－