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1.
目的克隆和分析嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)第2内转录间隔区(ITS2)序列,研究嗜人按蚊rDNA-ITS2序列的种属特异性及不同个体rDNA-ITS2序列的单核苷酸多态性(Single Nuclear Polymorphism,SNP)。方法用DNA提取试剂盒从嗜人按蚊中提取DNA摸板,利用蚊虫5.8s和28S序列的保守性设计特异引物进行聚合酶链反应以扩增嗜人按蚊rDNA-ITS2基因,扩增产物经回收纯化后连接到TA载体,经amp^+LB固体平板筛选的阳性克隆。经amp^+LB液体培养基培养后进行PCR鉴定、EcoRI酶切鉴定和序列分析。结果经PCR反应扩增出全长556bp的嗜人按蚊rDNA-ITS2基因。纯化后重组克隆经PCB鉴定可重现556bp的特异性条带,其酶切产物亦与目的基因PCR产物位置相同。嗜人按蚊6个克隆的同一性为99.6%,其rDNA-ITS2基因单核苷酸存在颠换和插入,在556的范围内有一个A→T,一个G→T的颠换;一个T的插入。结论嗜人按蚊rDNA-ITS2序列在种间高度保守,但不同个体间也存在一定的SNP多态性。 相似文献
2.
从贵州省独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到一株病毒 ,用抗DEN1 4型单克隆抗体经间接免疫荧光法和RT PCR产物酶切分型鉴定为DEN 2 ,并对其NS1和E基因RT PCR产物进行部分基因序列测定 ,与DEN 2NGC株比较 ,麻尾株的NS1基因区有 7个碱基发生点突变 ,E基因区有 1个碱基的插入 ,两个序列被GenBank收录 ,编号分别为AY2 774 0 2、AY2 782 2 6 ;麻尾分离株与其他 9株DEN 2型病毒进行系统发育关系的分析 ,结果显示与D2 - 4 3株系统进化关系最近 ;证明贵州省存在DEN感染的自然循环。 相似文献
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云南白纹伊蚊实验室种群的建立及生活史观察 总被引:1,自引:1,他引:1
1992年8月经驯化繁殖,成功地建立了云南株白纹伊蚊实验室种群,共顺利繁殖32个世代。对其中的9个代次进行了实验观察,它们的平均孵化率,蛹化率和羽化率依次为66.99%、87.54%和89.78%,经11—22d可完成一个世代的繁殖。所获数据对进一步了解该蚊的生长繁殖特性及防制提供了有用的参考资料。 相似文献
4.
目的 了解重庆市城区白纹伊蚊对常见杀虫剂的抗药性水平及白纹伊蚊解毒酶活性水平,为当地蚊虫防制提供参考。方法 分别在重庆市8个行政区采集白纹伊蚊,用幼虫浸渍法测定白纹伊蚊幼虫对溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、氯菊酯、双硫磷和残杀威5种杀虫剂的抗性水平,计算抗性倍数(RR)。用酶活性检测试剂盒测定各行政区白纹伊蚊解毒酶细胞色素P450(CYP450)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、羧酸酯酶(CarE)活性水平。结果 重庆市8个行政区白纹伊蚊对溴氰菊酯的RR为21.00~64.50,其中南岸区呈高抗水平,其余行政区均呈中抗水平;对高效氯氰菊酯的RR为8.00~17.25,其中沙坪坝区、北碚区、九龙坡区呈低抗水平,其余行政区均呈中抗水平;对氯菊酯的RR为7.83~30.83,其中沙坪坝区、北碚区、江北区呈低抗水平,其余行政区呈中抗水平;对双硫磷的RR为1.20~5.00,其中大渡口区呈低抗水平,其余行政区呈敏感水平;对残杀威的RR为1.58~2.26,均呈敏感水平。大部分行政区白纹伊蚊CYP450、GST、CarE活性高于敏感品系。结论 重庆市城区白纹伊蚊对溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和氯菊酯均产生一定程度... 相似文献
5.
目的 了解和掌握佛山市某镇白纹伊蚊的季节消长情况,为当地开展登革热防控工作提供依据.方法 用诱捕器进行4d为一周期的成蚁诱捕以及诱卵现场实验,并根据季节的诱捕结果估算白纹伊蚊的密度消长情况.结果 2008年秋季至2009年夏季,4次实验共捕获成蚊282只,包括白纹伊蚊161只;收集蚊卵5954个.实验结果显示四个季度之间蚊媒密度的差异具有统计学意义.其中,诱蚊诱卵指数(MOI)(X2=52.172,P<0.000),诱蚊指数(MI)(X2=47.664,P<0.000),诱卵指数(OI)(x2=44.525,P<0.000),诱蚊密度指数(MDI)(F=17.448,P<0.000),蚊卵密度指数(EDI)(F=13.454,P<0.000).结论 当地白纹伊蚊夏秋两季的阳性指数与密度指数均比冬春两季高且差异具有统计学意义.其中,夏末秋初是蚊媒密度的高峰.本次实验结果与传统监测指标所反映的密度变化趋势一致. 相似文献
6.
中华按蚊和嗜人按蚊rDNA内转录间隔2区序列差异 总被引:22,自引:1,他引:22
目的:比较中华按蚊和嗜人按蚊核糖体DNA(rDNA)内转录间隔2区(ITS2)序列差异。方法:通过对PCR扩增的rDNA ITS2片段进行克隆测序,每种蚊测定3个克隆片段序列,比较其差异。结果:中华按蚊和嗜人按蚊的rDNA ITS2序列长度分别为468和452bp,GC含量分别为44.87%和49.12%,两序列差异为28.8%。结论:rDNA ITS2序列差异可用于建立中华按蚊和嗜人按蚊的分子 相似文献
7.
目的:研究伏河眼蚤异常亚种Ophthalmopsylla volgensis extrema(Ioffet Scalon,1953)和长突眼蚤Oph-thalmopsylla kiritschenkoi(Wagner,1930)rDNA ITS2序列,为蚤类分子系统发育的研究提供基础资料。方法:PCR扩增两蚤种rDNA ITS2片段并测序,比较两者差异。结果:伏河眼蚤异常亚种rDNA ITS2序列长372 bp,长突眼蚤长380 bp;两蚤种间共有30处碱基不同,包括16处缺失/插入、4处转换、10处颠换,种内无差异。结论:rDNA ITS2序列可用作两蚤种鉴别的分子标记。 相似文献
8.
Objective This study aimed to analyze the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I (mtDNA-CO Ⅰ) gene in Aedes albopictus populations from Ji'nan and Ji'ning Cities in Shandong Province, in order to reveal the genetic differences and phylogenetic relationships among different subpopulations and to investigate the relationship between genetic diversity and geographical distribution of Aedes albopictus. Method In this study, Ae. Albopictus mosquitoes were collected from Licheng District in Ji'nan City and Rencheng District in Ji'ning City. The sequences of mtDNA-CO Ⅰ gene of Ae. albopictus populations was amplified by PCR, and the results were aligned and compared using the BLAST tool from NCBI. Data analysis was then conducted using the software of BioEdit 7.0, DnaSP v6 and PopART 1.7. Genetic diversity parameters for Aedes albopictus, and a haplotype network was constructed. Results Gene sequencing of the mtDNA-CO Ⅰ gene in Aedes albopictus populations from Ji'nan and Ji'ning cities in Shandong Province resulted in 86 and 84 gene fragments, respectively. BLAST comparison revealed five mutation sites in all the sequences, with a nucleotide diversity (Pi) of 0.000 97 and a G+C content of 33.4%, reflecting the characteristics of mitochondrial DNA. Compared to Ji'ning, the Ae. albopictus population in Ji'nan exhibited higher nucleotide diversity and haplotype diversity, as well as greater nucleotide differences, though these differences were not statistically significant. Furthermore, both cities had six haplotypes of Aedes albopictus, with three shared haplotypes and three unique haplotypes found only in the population of Ji'nan City. Population structure analysis revealed minimal nucleotide differences between Ae. albopictus populations of Ji'nan and Ji'ning. Conclusions The mtDNA-CO Ⅰ gene can be used as a molecular marker for species identification and for studying genetic diversity of Ae. albopictus populations, thereby providing support for more effective classification and control strategies. © 2023 Editorial Department of China Tropical Medicine. All rights reserved. 相似文献
9.
目的 了解海口市白纹伊蚊对溴氰菊酯和氯菊酯的抗药性,并检测其击倒抗性(kdr)基因突变型,阐明抗性表型与kdr基因突变的关系。 方法 在海口新埠岛、龙塘镇、石山镇、白沙门和花卉市场采集白纹伊蚊幼虫,应用浸渍法测定其对溴氰菊酯和氯菊酯杀虫剂的敏感性,以抗性倍数确定抗性级别。对应生物测定的样品扩增和分析白纹伊蚊的kdr基因部分片段,采用χ2检验比较抗性表型与kdr突变基因型的差异性。 结果 海口白纹伊蚊花卉市场和白沙门群体对溴氰菊酯和氯菊酯均产生抗性,花卉市场群体对溴氰菊酯的抗性倍数高达436.36,为高度抗性。龙塘镇和石山镇群体对氯菊酯均为敏感,对溴氰菊酯的抗性为低度(9.09)或中度(18.18)。新埠岛群体对溴氰菊酯和氯菊酯均为敏感。在对应检测的317只白纹伊蚊的kdr基因中,发现1 534位点存在点突变,检测到2种突变等位基因(TGC/C、TCC/S)。5种基因型和频率分别为野生型TTC/TTC(62.15%)、野生/突变型杂合子TTC/TGC(0.63%)和TTC/TCC(16.09%)、突变型纯合子TCC/TCC(20.82%)以及突变型杂合子TGC/TCC(0.32%)。χ2检验结果显示,接触菊酯类杀虫剂后敏感表型与抗性表型个体中,kdr基因型间的差异有统计学意义(P <0.05),在抗性表型群体中的kdr突变型基因型的频率(42.94%)大于敏感表型个体(31.97%)。 结论 海口市白纹伊蚊多个群体对溴氰菊酯和氯菊酯同时存在抗性,抗性表型与kdr突变基因型密切相关。本研究首次记录了kdr新的等位基因TCC/S。 相似文献
10.
目的探讨5种新出现的奴卡菌种16S~23S rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)DNA基因序列的多态性,筛查特异的奴卡菌种逆向线点杂交(reverse line blot,RLB)探针。方法对6例奴卡菌标本进行ITS基因扩增、克隆、测序,设计奴卡菌种特异探针及ITS间区rDNA基因特异的探针,进行以PCR为基础的RLB(PCR/RLB)杂交试验,不同的RLB型进行ITS基因测序分析,以鉴别不同的奴卡菌种及种内分型。结果发现2个Nocardia beijingensis菌株ITS间区有8个基因序列型,4个RLB型;N.thailandica有4个基因序列型及RLB型;N.blacklockiae有5个基因序列型,3个RLB型,其中N-bla RLBⅢ型与所有Nbla-ITS探针杂交没有信号;N.elegans有5个基因序列型,3个RLB型;N.vinacea有5个基因序列型,2个RLB型。结论通过PCR/RLB试验,准确的ITS基因测序认识了新出现的菌种,即N.beijingensis,N.blacklockiae,N.elegans,N.thailandica及N.vinacea。同时建立了可以大量筛查奴卡菌种的PCR/RLB方法,以进行快速临床诊断及流行病学研究。 相似文献
11.
目的应用简并引物RT.PCR和RACE方法获取白纹伊蚊Rh类糖蛋白(Aedes albopictus rhesuslike glycoprotein,AaRh)基因的全长cDNA。方法根据冈比亚按蚊、埃及伊蚊等亲缘关系较近物种的Rh类糖蛋白同源性分析结果,在氨基酸高度保守区域184/343和219/337氨基酸位点设计2对简并引物,以白纹伊蚊雌蚊总RNA为模板,应用巢式RT—PCR扩增AaRh的基因片段。根据获得的AaRh基因部分序列,设计2对特异性引物AaRhGSP1、GSP2和AaRhGSP3、GSP4,应用5’RACE和3’RACE分别扩增AaRh基因的5’端和3’端cDNA片段,然后拼接出全长cDNA序列。通过在线生物信息学分析(NCBI和Expasy),对目的基因序列进行生物信息学分析。结果应用2对简并引物进行巢式RT-PCR.获得379bpAaRh基因片段。应用5’RACE和3’RACE方法,分别获得AaRh基因5’端1008bp、3’端822bpcDNA序列,根据两个片段的首/尾共同序列拼接为1717bp的基因片段。该核苷酸序列经BLASTn分析显示,与埃及伊蚊Rh蛋白的一致性高达95%,鉴定其为白纹伊蚊Rh类糖蛋白基因。AaRh基因具有完整的开放阅读框,其ORF从第128位到1516位含1389bp,编码462个氨基酸。Expasy在线生物信息学程序分析显示,白纹伊蚊Rh类糖蛋白是一个整合膜蛋白,跨膜11次,58aa.446aa具有铵离子通道的结构功能域;理论等电点(pI)5.37,分子量49775.10Mr,laa-26aa可能为分泌信号肽序列;含有4个潜在的天冬酰胺糖基化位点和17个线性抗原决定簇,翻译后可能进行糖基化修饰,提示其为糖蛋白。结论成功获取AaRh基因的全长cDNA,生物信息学分析结果为AaRh蛋白的生物学特性和功能研究奠定了基础。 相似文献
12.
目的克隆鉴定白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7,并对其表达谱和功能进行分析。方法提取成蚊总RNA,采用RT - PCR技
术扩增白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,并检测OR7在不同虫期和不同组织器官中的表达谱;将OR7基因克隆于
真核表达载体pME18s中,转染HEK293细胞,利用钙成像技术初步分析其对气味分子刺激的钙调功能。结果成功克隆出白纹
伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,经测序得知其编码区序列长度为1395 bp;表达谱分析显示,其在蚊幼虫、蛹、成蚊中
都有表达,且在雌蚊嗅器中表达显著。钙成像结果显示OR7对气味分子刺激后的钙离子通道有一定的调节功能。结论克隆出
白纹伊蚊的嗅觉受体基因OR7 ,初步分析显示其在雌蚊中显著表达,并具有对气味分子的识别功能。
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术扩增白纹伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,并检测OR7在不同虫期和不同组织器官中的表达谱;将OR7基因克隆于
真核表达载体pME18s中,转染HEK293细胞,利用钙成像技术初步分析其对气味分子刺激的钙调功能。结果成功克隆出白纹
伊蚊嗅觉受体基因OR7的全长编码基因,经测序得知其编码区序列长度为1395 bp;表达谱分析显示,其在蚊幼虫、蛹、成蚊中
都有表达,且在雌蚊嗅器中表达显著。钙成像结果显示OR7对气味分子刺激后的钙离子通道有一定的调节功能。结论克隆出
白纹伊蚊的嗅觉受体基因OR7 ,初步分析显示其在雌蚊中显著表达,并具有对气味分子的识别功能。
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目的调查白纹伊蚊(Aedes albopictus)北方边界及密度,了解登革热传播危险程度及白纹伊蚊孳生习性,为制定防制措施提供科学依据;方法7-9月依据《全国埃及伊蚊、白纹伊蚊分布边界专项调查方案》,对县内城市居民区、农村居民区、旅游景区、养殖耕种区、特殊场所等五种生态环境分别以诱蚊诱卵器、诱蚊灯、容器法及吸蚊器、人工捕捉方法进行调查监测;结果涉县境内的北纬36°17′至36°55′,东经113°26′至114°之间存在白纹伊蚊,这是涉县首次发现白纹伊蚊,且布雷图指数、容器指数均超过20%;结论涉县及周边区域未来对登革热等蚊媒传染病防控形势严峻,同时对白蚊伊蚊河北省分布情况确定提供重要依据,也对河北省相关蚊媒传染病防控有着警示的作用。 相似文献
16.
Weijie Wang Xiaobang Hu Donghui Zhang Jianhua Jiao Yan Sun Lei M Changliang Zhu 《南京医科大学学报(自然科学版)》2007,21(2):63-67
Objective: To obtain the complete β-actin gene from Aedes albopictus. Methods: Total RNA was extracted from C6/36 cells. Degenerate primers were designed based on the β-actin sequences of An. gambiae, Ae. aegypti, Cx. pipiens pallens and D.melanogaster. By RT-PCR, the product was amplified, purified, cloned into the pGT vector and sequenced. The β-actin sequence was aligned and phylogenetically analyzed by the BLAST program and the CLUSTAL W program. Results: A sequence of 1132 bp including an open reading frame of 1131 bp was obtained (GenBank DQ657949). The deduced protein had 376 amino acids.Aligned to SWISS-PROT, it exhibited a high level of identity with β-actins from Anopheles, Drosophila and Culex at the amino acid sequence level. Phylogenetic analysis indicated that Ae. albopictus β-actin was much more homologous with invertebrate β-actin than with vertebrate β-actin. Conclusion: The gene may be used as the internal control in the experiments of Ae. albopictus. 相似文献
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白纹伊蚊是我国登革热的重要传播媒介,常见的监测方法分为成蚊监测和幼虫监测,控制方法多样。白纹伊蚊的监测方法有人诱法、诱蚊诱卵器法、诱蚊灯法、人帐法、诱蚊磁法和BG–Sentinel trap等,而白纹伊蚊的防控方法主要以生态环境治理为主,结合物理防治、化学防治、生物防治等方法。本文根据监测和控制的对象和需求不同,对不同的监测以及控制方法进行分析比较,并对近年来发展起来的新技术新方法进行介绍和展望,为制定科学合理的病媒生物监测方案和蚊虫控制措施提供依据。 相似文献
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用离心法收集羽化后24h内尚未取食的雌蚊血淋巴、吸正常鸡血届第4d和第11d的雌蚊血淋巴、吸受染疟原虫鸡血后第4d和第11d的雌蚊血淋巴,用日立835-50型氨基酸自动分析仪进行游离氨基酸的测定,并对结果做统计学分析。分析结果表明,所有雌蚊吸血后第4d血淋巴中18种游离氨基酸总量同羽化时相比下降,第11d有所回升,但仍低于羽化时的水平。吸正常鸡血后第4d,16种氨基酸含量降低,2种氨基酸含量增加;到第11d,同第4d相比,氨基酸含量有3种降低,15种增加。吸受染鸡疟原虫鸡血后第4d,14种氨基酸含量降低,4种氨基酸含量增加,到第11d,同第4d相比,氨基酸含量有7种降低,11种增加。 相似文献
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目的了解沃尔巴克氏体介导的抗病原体特性能否干扰流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)复制,探讨沃尔巴克氏体对库蚊传播的JEV复制的调控作用。方法通过实时荧光定量PCR和RNA原位杂交检测Aa23白纹伊蚊细胞(天然感染沃尔巴克氏体)和阴性对照Aa23T白纹伊蚊细胞(以四环素处理清除沃尔巴克氏体感染),定量分析沃尔巴克氏体的生长浓度;通过病毒蚀斑滴定检测Aa23细胞(天然感染沃尔巴克氏体细胞系)和阴性对照Aa23T细胞(不含沃尔巴克氏体的细胞系)在感染JEV(P3株)后第1天至第8天的病毒复制滴度和细胞病变效应。结果实时荧光定量PCR和RNA原位杂交分析结果表明,Aa23T细胞中沃尔巴克氏体感染呈阴性,Aa23细胞中沃尔巴克氏体的WSP基因拷贝数和靶向沃尔巴克氏体16S rDNA的荧光信号强度随细胞生长时间增长而增高;蚀斑滴定实验结果显示,携带沃尔巴克氏体的细胞系(Aa23)感染JEV后出现细胞病变的时间明显延迟,Aa23细胞中病毒复制滴度(106 PFU/mL)与对照细胞病毒复制滴度(108 PFU/mL)相比明显降低。结论沃尔巴克氏体明显延迟JEV对细胞的致病变作用,减少JEV复制。本研究证明了沃尔巴克氏体对以库蚊为主要传播媒介的JEV具有抑制作用,揭示了沃尔巴克氏体具有抗库蚊传播病毒的潜力,特别是对利用基于沃尔巴克氏体的蚊媒控制技术防控JEV的传播提供了重要的基础数据和理论依据。 相似文献
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Dengue virus (DEN), a single-stranded RNA virus of the family Flaviviridae, is transmitted from one infected person or animal to another by the mosquitos Aedes albopictus and Aedes aegypti. There are four serotypes of the dengue virus (serotypes 1 -4). The virus is responsible for dengue fever (DF), dengue hemorrhagic fever (DHF) and dengue shock syndrome (DSS). In the recent years, the incidence rate of DF/DHF has been increasing around the world, particularly in tropical and subtropical zones. Dengue is the most significant arthropod-borne viral disease affecting public health. 相似文献