环氧合酶抑制剂NS-398增强放射诱导的肝癌细胞凋亡

目的：探讨环氧合酶-2（COX-2）选择性抑制剂NS-398对放射诱导的人肝癌细胞HepG2凋亡的影响及可能作用机制。 方法:应用MTT 法检测NS-398对细胞的抑制率;透射电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术(FCM)定量检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测凋亡相关基因bcl-2、bax及caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bc1-2、Bax蛋白表达;比色法分析caspase-3酶活性变化。 结果:NS-398对HepG2细胞的生长抑制作用呈时间与剂量依赖性;电镜下处理组细胞呈现典型的凋亡形态学变化,NS-398显著增加放射诱导的细胞凋亡,上调bax mRNA、Bax蛋白及caspase-3mRNA 表达,并增强caspase-3酶活性,而Bcl-2 表达无明显变化（P>0.05）。 结论:NS-398能增加放射诱导的HepG2细胞凋亡,其机制可能与上调Bax、 caspase-3表达,上升Bax／Bcl-2比例,激活线粒体凋亡通路,活化caspase-3,最终诱导细胞凋亡相关。     

NF-κB与COX-2的正相互作用诱导子宫颈癌细胞生长及抗凋亡

目的探讨NF—κB和COX-2通路之间的相互作用对人子宫颈癌细胞株（Hela细胞）的生长及细胞凋亡的影响。方法应用细胞计数盒（CCK-8）检测细胞存活率;Hoechst33258核染色检测凋亡细胞的形态及数量的改变：Westernblot法检测Caspase-3、NF-κB和COX-2蛋白的表达。结果应用NF．KB抑制剂（PDTC）或COX-2抑制剂（NS-398）处理Hela细胞36h能明显地抑制细胞存活率,PDTC或NS-398处理Hela细胞24h能明显地促进Caspase-3表达,并增加凋亡细胞数量。PDTC处理Hela细胞能显著地抑制COX-2表达,另方面,NS-398处理Hela细胞能抑制NF-κB的表达。结论NF-κB和COX-2通路之间的正相互作用诱导Hela细胞生长及抑制细胞凋亡。     

NS-398对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨选择性环氧合酶II(COX-2)抑制剂NS-398对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法: 应用MTT法研究不同浓度NS-398对HepG2细胞增殖的影响,DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,竞争性RT-PCR检测环氧合酶II COX-2 mRNA及抑凋亡基因bcl-2 mRNA表达的改变。结果: NS-398呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,细胞周期分析表明随着浓度增大S期细胞明显减少,有G₀/G₁期细胞累积现象,并伴有Bcl-2 mRNA表达的下调,而对COX-2 mRNA表达改变无明显影响,且COX-2表达改变与NS-398引起的HepG2细胞的增殖和凋亡均无相关性(相关系数分别为:r=0.056,P>0.05和r=0.119,P>0.05)。结论: NS-398能明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,与细胞G₀/G₁期阻滞以及bcl-2基因表达下调有关,而非依赖于抑制COX-2基因的表达。     

NS-398对肝癌SMMC-7721细胞血管生成影响的体内体外实验研究

目的 探讨NS-398对肝细胞癌MVD值、VEGF、MMP-9表达的影响。方法 采用RT-PCR和流式细胞术检测肝癌SMMC-7721细胞VEGF、MMP-9表达。采用免疫组化法检测裸鼠移植瘤MVD，ELISA法测定血清中PGE2水平。结果 在体外，NS-398可以呈剂量和时间依赖性显著抑制SMMC-7721细胞的VEGF、MMP-9 mRNA和蛋白表达；在体内，可显著降低裸鼠移植瘤MVD、VEGF、MMP-9基因和蛋白表达(P<0.001)，并能降低裸鼠血清中PGE2 水平(P<0.001)。结论 COX-2与肝细胞癌血管生成密切相关，NS-398可通过下调VEGF和MMP-9的表达而抑制肝细胞癌血管生成。     

龙牙楤木多糖诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡机制研究

目的:探讨龙牙楤木多糖(AEPS)对体外培养人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:荧光显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术(FCM)检测SMMC-7721细胞的凋亡率;Western blot检测不同浓度AEPS作用36小时凋亡蛋白survivin、caspase-3及bcl-2的表达情况。结果:与对照组比较,AEPS不同浓度剂量组Hoechst33258/PI荧光染色出现典型的凋亡形态学改变;FCM检测表明SMMC-7721细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组(P0.01),且呈时间剂量依赖性;Western blot显示与对照组相比,各实验组AEPS可显著下调SMMC-7721细胞survivin和bcl-2的表达(P0.01),而caspase-3的表达显著增加(P0.01)。结论:AEPS能明显诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡,其机制可能与改变凋亡相关基因survivin、caspase-3及bcl-2的表达有关。     

热休克蛋白70在人食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达与定位变化

目的 探讨姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用,热休克蛋白70(HSP70)在肿瘤细胞凋亡过程中在核基质上的变化及其与凋亡调控相关蛋白的关系.方法 用细胞计数和流式细胞仪检测姜黄素对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,以光学显微镜和透射电镜观察姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡前后的细胞结构变化,琼脂糖凝胶电泳观察人食管癌EC9706细胞凋亡前后的DNA结构变化.双向凝胶电泳和质谱鉴定分析HSP70在核基质中的存在与变化;并以Western blotting进行确证;激光扫描共焦显微镜观察HSP70在EC9706细胞凋亡过程中的定位及其与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系.结果 姜黄素能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖并诱导人食管癌EC9706细胞凋亡,双向凝胶电泳、质谱鉴定和结果 发现并证实,HSP70在姜黄素处理前后的EC9706细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.激光扫描共焦显微镜观察结果 显示,HSP70在EC9706细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.结论 姜黄素对人食管癌EC9706细胞具有显著的凋亡诱导作用;HSP70作为一种新发现的核基质蛋白,在姜黄素诱导人食管癌EC9706凋亡过程中的表达与分布发生了显著变化.HSP70与凋亡相关基因的关系对EC9706细胞凋亡具有重要影响.     

顺铂增强食管癌相关基因2蛋白对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

 摘要：目的:探讨食管癌相关基因2（esophageal cancer-related gene 2,ECRG2）蛋白联合顺铂（cisplatin, DDP）化疗对人食管癌EC9706细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用MTT法分别检测单用ECRG2蛋白和ECRG2蛋白联合顺铂对EC9706细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色法检测二者对EC9706细胞凋亡的影响;Western blotting检测二者对EC9706细胞中p53蛋白表达的影响。结果:MTT结果显示,ECRG2蛋白可抑制EC9706细胞增殖,ECRG2蛋白和DDP联用后抑制细胞增殖作用增强,且在一定浓度范围内呈时间、剂量依赖关系。Hoechst 33258染色显示,ECRG2蛋白和DDP联合作用24 h后EC9706细胞凋亡数目多于单用ECRG2蛋白。Western blotting结果提示ECRG2蛋白和DDP联合用药较单用ECRG2蛋白明显上调p53蛋白的表达。结论: DDP 可增强ECRG2蛋白对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,其增强诱导EC9706细胞凋亡的机制可能与上调p53蛋白的表达有关。     

选择性环氧合酶-2抑制剂对结肠癌细胞的生长抑制作用及机制探讨

目的：研究NS-398（一种选择性环氧合酶-2抑制剂）对结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用并探讨其机制。 方法： 通过MTT法检测细胞的增殖情况，通过流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期，通过RT-PCR检测bcl-2 mRNA和bax mRNA表达，通过共聚焦激光扫描显微镜观察细胞骨架成分F-actin的变化。 结果： NS-398对结肠癌HT-29细胞生长的抑制具有时间和剂量依赖性。流式细胞术结果显示NS-398可剂量依赖地诱导HT-29细胞凋亡，使其停滞于G0/G1期。经不同浓度的NS-398处理72 h后，bcl-2 mRNA 在HT-29细胞的表达降低，bcl-2／bax比值降低。细胞骨架成分F-actin主要分布在HT-29细胞核周围，呈环状结构，NS-398作用后细胞核周围的环状结构消失。 结论： NS-398可显著抑制结肠癌细胞的体外生长并诱导其凋亡，这与下调bcl-2／bax比值以及细胞骨架的破坏有关。     

子宫内膜癌hCG异位自分泌的意义及对COX-2的调节作用

目的：探讨hCG对JEC子宫内膜癌细胞中COX-2表达的调节，以期进一步阐明恶性肿瘤hCG异位自分泌的意义。方法：放射免疫定量检测JEC子宫内膜癌细胞株β-hCG的自分泌；MTT实验检测hCG对JEC细胞活性的影响和hCG增加选择性COX-2抑制剂NS398对JEC细胞的抑制作用；Western blotting分析hCG对JEC细胞COX-2蛋白表达的影响。结果：JEC子宫内膜癌细胞株存在β-hCG的自分泌；hCG可增加JEC细胞的活性，上调COX-2蛋白的表达，增加选择性COX-2抑制剂NS398对JEC细胞的抑制作用。结论：JEC细胞hCG的异位自分泌，有促进自身生长的作用，也是返祖、去分化的一种表现，上调COX-2蛋白的表达可能是其作用机制之一。     

抑制免疫抑制因子COX-2 对视网膜神经节细胞凋亡的影响及 p38MAPK 信号的调控作用

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对H_2O_2诱导的视网膜神经节RGC-5细胞活力和凋亡及p38MAPK信号通路的调控作用。方法:200、300、400、600、800μmol/L的H_2O_2刺激视网膜神经节RGC-5细胞建立H_2O_2损伤模型,根据半数抑制浓度选择H_2O_2的浓度; COX-2抑制剂NS-398处理H_2O_2诱导的RGC-5细胞7 h,SB203580作为p38MAPK信号通路抑制剂,通过MTT法及流式细胞术分别检测细胞的活力和凋亡率; Western blot检测细胞增殖核抗原(PCNA)、p53、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、p-p38的蛋白表达。结果:不同浓度的H_2O_2均可抑制RGC-5细胞活力,且随H_2O_2浓度升高细胞活力降低,由于400μmol/L的H_2O_2可抑制一半的细胞活力,选择作为研究对象;与空白对照组比较,H_2O_2组细胞活力及PCNA蛋白表达均显著降低,细胞凋亡率及p53和p-p38的蛋白表达均显著升高,与H_2O_2组比较,H_2O_2+NS-398组细胞活力及PCNA蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率及p53和p-p38的蛋白表达均显著降低(P0. 05);与H_2O_2+NS-398组比较,H_2O_2+NS-398+SB203580组细胞活力及PCNA蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率及p53和p-p38的蛋白表达均显著降低(P0. 05)。结论:抑制免疫抑制因子COX-2表达可通过调控p38MAPK信号通路提高视网膜神经节细胞活力和抑制细胞凋亡。     

Inhibition of cyclooxygenase-2 suppresses the invasiveness of oral squamous cell carcinoma cell lines via down-regulation of matrix metalloproteinase-2 production and activation

Increased cyclooxygenase (COX-2) expression in tumors is known to be correlated with tumor invasion, angiogenesis, resistance to apoptosis, and suppression of host immunity. We previously reported that the invasiveness of human oral squamous cell carcinoma (OSCC) cell lines NA and HSC-4 was suppressed by treatment with either NS-398, a selective COX-2 inhibitor, or COX-2 antisense oligonucleotide (AS). In the present study, to explore the effects of COX-2 inhibition on the interaction between cancer cells and fibroblasts, we examined the effects of these anti-COX-2 reagents on the expression of matrix metalloproteinases (MMPs) in fibroblast cell lines WI-38 and MRC-5. Western blotting and enzyme-linked immunosorbent assay revealed that NS-398 and COX-2 AS down-regulated the expression and secretion of MMP-2 and the tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-2 (TIMP-2) in human fibroblast cell lines. Furthermore, invasion activity of OSCC cells was down-regulated by the addition of culture supernatant from fibroblasts treated with anti-COX-2 reagents in a Matrigel^® invasion assay. These results suggest that selective COX-2 inhibition suppresses the invasion activity of OSCC cells via down-regulation of an MMP-2-activating mechanism involving TIMP-2 and production of the MMP-2 protein by an interaction between cancer cells and stromal fibroblasts. Genetic or pharmacological inhibition of COX-2 may therefore be a beneficial strategy in the treatment of OSCC.     

Effects of Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs on Helicobacter pylori-Infected Gastric Mucosae of Mice: Apoptosis, Cell Proliferation, and Inflammatory Activity

Helicobacter pylori and nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are two well-known important causative factors of gastric damage. While H. pylori increases apoptosis and the proliferation of gastric epithelial cells and is an important factor in peptic ulcer and gastric cancer, NSAIDs induce cell apoptosis and have antineoplastic effects. We investigated the effects of NSAIDs (a nonselective cyclooxygenase [COX] inhibitor [indomethacin] and a selective COX-2 inhibitor [NS-398]) on the apoptosis and proliferation of gastric epithelial cells and gastric inflammation in H. pylori-infected mice. C57BL/6 mice were sacrificed 8 weeks after H. pylori SS1 inoculation. Indomethacin (2 mg/kg) or NS-398 (10 mg/kg) was administered subcutaneously once daily for 10 days before sacrifice. The following were assessed: gastric inflammatory activity, gastric COX protein expression by Western blotting; gastric prostaglandin E(2) levels by enzyme immunoassay, apoptosis by terminal deoxynucleotidyltransferase-mediated dUTP nick end labeling, and cell proliferation by Ki67 immunostaining. Compared to the controls, H. pylori infection and/or NSAID treatment increased COX-1 and COX-2 protein expression. Gastric prostaglandin E(2) levels, apoptotic index, cell proliferation index, neutrophil activity, and the degree of chronic inflammation were all increased by H. pylori infection, and these effects were significantly decreased by indomethacin treatment. However, NS-398 treatment after H. pylori infection did not induce a significant reduction, although it did result in a tendency to decrease. These results show that NSAIDs can reverse the increased apoptosis and proliferation of epithelial cells and inflammatory activity in the stomachs of H. pylori-infected mice and that, like COX-2 activation, COX-1 induction contributes to the change of gastric mucosal cell turnover and inflammation induced by H. pylori infection.     

Inhibition of cyclooxygenase-2 and activation of peroxisome proliferator-activated receptor-gamma synergistically induces apoptosis and inhibits growth of human breast cancer cells

Cyclooxygenase-2 (COX-2) expression and peroxisome proliferator-activated receptor-gamma (PPARgamma) inactivation are linked to increased risk of human breast cancer. This study examines the effect of simultaneous targeting of COX-2 and PPARgamma on the proliferation of human breast cancer cells and on the expression of Bcl-2, BAX, and caspases-3 and -9, modulators of apoptotic cell death. Treatment of MDA-MB-231 breast cancer cells with NS-398 (a COX-2 inhibitor) or ciglitazone (CGZ, a PPARgamma-ligand) significantly inhibited cell proliferation and markedly increased apoptotic rates. These effects were accompanied by upregulation of BAX and caspases-3 and -9 mRNA expression and downregulation of Bcl-2. Compared to the influence of separate treatments, simultaneous treatment with NS-398 and CGZ synergistically inhibited cell proliferation and induced apoptotic cell death. In conclusion, combinational targeting of COX-2 and PPARgamma can inhibit the growth of human breast cancer cells and induce apoptosis to an extent more suprior to that produced by targeting each molecule alone. COX-2 and PPARgamma can be promising molecular targets for combinational chemoprevention or treatment of breast cancer.     

反义RNA抑制肝癌细胞株端粒酶活性与p16、p21表达的关系

目的：观察反义端粒酶ＲＮＡ对ＳＭＭＣ７２２１细胞的作用,并检测ｐ１６、ｐ２１的表达情况,探讨端粒酶在肝癌发生过程中的可能作用及反义端粒酶ＲＮＡ在肝癌治疗中的意义。方法：经脂质体介导的方法将ｐＢＢＳ２１２－ｈＴＲ（反义端粒酶ＲＮＡ真核表达载体）导入ＳＭＭＣ７７２１细胞中,细胞克隆转移扩大培养后,采用流式细胞仪、ＴＲＡＰ－ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ、电镜、免疫组化技术结合图像分析,在检测ＳＭＭＣ７７２１／ｐＢ     

NS398体外对子宫内膜癌细胞的影响

目的探讨环氧合酶抑制剂NS-398对子宫内膜癌的作用机制。方法采用形态学,MTT,DNA梯度降解试验,原位末端标记及流式细胞仪等方法,对NS-398在子宫内膜癌细胞系Ishikawa中的作用进行体外研究。结果NS-398对Ishikawa细胞产生明显的生长抑制作用,且表现为浓度和剂量依赖性;原位末端标记、流式细胞仪显示NS-398诱导了Ishikawa细胞凋亡。结论NS-398对Ishikawa细胞具有显著的体外生长抑制及凋亡诱导作用。     

BPH-1通过分泌前列腺素E2促进前列腺间质细胞芳香化酶的表达

目的：研究前列腺上皮细胞旁分泌对间质细胞芳香化酶表达的影响。方法：用前列腺上皮细胞系（BPH-1, LNCap, DU145, PC3）条件培养液（CM）处理间质细胞，用RT-qPCR和Western blotting检测芳香化酶表达水平。用RT-qPCR和ELISA检测上皮细胞系环氧合酶2（COX-2）的表达及其CM前列腺素E2(PGE2)浓度。用添加COX-2特异性抑制剂NS-398的培养液培养BPH-1，检测其CM和PGE2对间质细胞芳香化酶表达影响。结果：良性前列腺增生上皮细胞系BPH-1 CM能促进间质细胞芳香化酶mRNA和蛋白的表达，而前列腺癌细胞系PC3、DU-145和LNCap对芳香化酶的表达没有影响。BPH-1 COX-2 mRNA表达水平和PGE2分泌水平远高于其它癌细胞系。添加NS-398培养BPH-1的CM，其PGE2浓度明显降低。PGE2可明显诱导间质细胞芳香化酶的表达。结论：BPH-1通过分泌PGE2促进前列腺间质细胞芳香化酶的表达。