Bcl—XL在白血病多药耐药细胞株HL60／VCR中的表达及意义

0引自BCI－X。是新近被证实的bCI－2基因家族成员之一，其结构和功能与bC人2相似，可抑制细胞凋亡D‘．关于它与多药耐药（MDR）关系的研究越来越受到重视［’j．我们采用SABC免疫组化和Westernblot方法检测敏感细胞HL60和耐药细胞HI．60／VCR的Bcl－XL表达，以初步探讨Bcl－X。与白血病MDR形成的关系．回方法1．l细胞林和试剂HL60敏感细胞株为上海细胞生物所提供；HL60／VCR耐药细胞株来源于美国纽约MemorialSloan－Kett，ringCancerCenter，在含200pg／L长春花碱（VCR）的RPMI1640培养液中传代，无VCR培养液培养2Wb…     

脂质体介al,4—GalT反义寡核苷酸对人脑胶质瘤细胞系SWO—38的作用

目的：研究α1,4半乳糖糖基转移酶（αl,4Gal T）基因反义寡核 （antisense oligonucleotide,ASO)对脑胶质瘤细胞系SWO－38细胞的增值与凋亡的影响和与Fas表达的关系。方法：采用脂质体介导的基因转染方法将αl,4Gal T基因ASO转入SWO－38细胞中。应用RT－PCR检测对αl,4Gal TmRNA表达的影响，克隆形成试验检测对细胞增值的作用，流式细胞术（FCM）和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的发生，FACS地亡相关蛋白Fas表达的变化。结果；脂质体介导的ASO转染后，经RT－PCR检测证实αl,4Gal TmRNA基因的表达下降；克隆形成试验显示细胞生长明显受到抑制（P＜0．01）；DNA电泳图像呈凋亡;FCM,地入αl,4Gal T基因ASO的SWO－38细胞的凋亡明显增加（P＜0．01）；Fas蛋白表达水平明显下降（P＜0．01）。结论：αl,4Gal T基因ASO可诱导脑胶质瘤细胞系SWO－38细胞凋亡发生，其机制可能与fas基因调控有关。     

RNAi沉默Sox2表达对结直肠癌细胞5-氟尿嘧啶的增敏作用

［摘要］目的: 研究Sox2与5 氟尿嘧啶（5 FU）诱导人结肠癌细胞（SW620）化疗敏感性及耐药家族基因表达的关系，探讨结直肠癌细胞化疗耐受的机制。方法: 经慢病毒包装干扰质粒Sox2沉默SW620细胞后，采用蛋白质印迹法、实时荧光定量PCR和免疫荧光技术检测干扰前后细胞内Sox2的表达变化，CCK8法检测细胞对5 FU敏感性的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率，并检测ABC耐药家族基因的表达情况。结果： 靶向Sox2干扰后，Sox2 mRNA及蛋白表达下调，Sox2的阳性表达率显著减少；干扰Sox2后SW620细胞对5 FU敏感性高于对照组细胞，IC50值明显下降，细胞之间差异有统计学意义（P<0.05）；Sox2干扰后细胞凋亡率明显高于对照组，ABC耐药家族基因的表达水平明显下降。结论： 靶向干扰Sox2后有效地抑制了Sox2在SW620细胞中的表达，Sox2干扰后显著提高了SW620细胞对5 FU的敏感性，降低了ABC耐药基因的表达，为寻求新的基因靶向治疗提供了可能。     

耐药肿瘤细胞β-1整合素表达及对细胞凋亡的影响研究

目的：探讨耐药肿瘤粘附分子β－1整合素的表达以及其对细胞凋亡的影响。并寻找逆转耐药的途径。方法：采用人肺腺癌细胞株A549及耐阿霉素细胞株A549－ADR，免疫组化方法检测耐药细胞β－1整合素的表达；TUNEL法检测其对细胞凋亡的影响。结果：耐药细胞β－1整合素表达水平高于敏感细胞（P＜0．01）；敏感细胞及耐药细胞FN后其凋亡率较未结合FN细胞明显降低（P＜0．01）；用抗β－1整合素抗体阻断与FN结合耐药细胞株β－1整合素，其凋亡率与未阻断β－1整合素，但与FN结合的耐药株相比，有显著差异（P＜0．001）。结论：耐药肿瘤细胞β－1整合素表达增加，成为耐药表型；其机制主要通过抑制细胞凋亡产生耐药；阻断其作用可以逆转肿瘤耐药。     

抗bcl-2核酶在HL-60细胞中的表达及促进其凋亡的研究

抗ｂｃｌ－２核酶在ＨＬ－６０细胞中的表达及促进其凋亡的研究［赵永同，王剑波，朱峰ｅｔａｌ．中华血液学杂志，１９９６；１７（１２）：６１９～６２２］为消除白血病细胞中ｂｃｌ－２基因对细胞凋亡的抑制作用，开辟白血病基因治疗的途径．将合成的针对ｂｃｌ－２ｍ...     

乙型肝炎病毒X蛋白表达及其对HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨HBV X蛋白表达对转染x基因HepG2细胞的影响。方法构建真核表达质粒pCDNA3．1（＋）／x，磷酸钙沉淀法转染到人肝癌细胞株HepG2；Western—blot检测X蛋白表达；流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率；MTT法测定细胞活力。结果磷酸钙沉淀法能有效的导入X基因且Western—blot能检测到X蛋白表达；MTT法、流式细胞术结果显示X蛋白表达组细胞活力受抑制（P≤0．01），凋亡率增加（P≤0．01）。结论HBV感染及其相关慢性肝病中，X蛋白的表达可能与肝细胞凋亡，炎症活性相关。     

酪氨酸羟化酶基因工程细胞植入大鼠纹状体的研究

将酪氨酸羟化酶（ＴＨ）基因转染至成纤维细胞［１］和成肌细胞［２］，然后，植入帕金森病（ＰＤ）模型鼠纹状体内，均取得不同程度的疗效。为此，我们将ＴＨ基因转染至大鼠肌母细胞株，并将其移植于正常大鼠纹状体内，观察ＴＨ基因的表达情况，为ＰＤ的ＴＨ基因治疗奠定基础。一、材料和方法１．ＴＨ基因的获得及表达质粒的构建：质粒ｐＢｌｕｅ－ｓｃｒｉｐｔ－ＴＨ由美国华盛顿大学Ｏ’Ｍａｌｌｅｙ博士赠送。逆转录病毒载体ｐＬＮＣＸ为美国ＦｒｅｄＨｕｃｈｉｎｓｏｎ癌症研究中心Ａ．Ｄ．Ｍｉｌｌｅｒ博士赠送。ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐ…     

去唾液酸粘蛋白—多聚(L)-赖氨酸—HLA-B7 真核表达质粒复合物的合成

去唾液酸粘蛋白—多聚（Ｌ）－赖氨酸—ＨＬＡ－Ｂ７真核表达质粒复合物的合成①杨洁②聂咏梅罗超权杨英浩（中山医科大学生化教研室；广州，５１００８９）主题词蛋白水解产物／生物合成中图号Ｄ１２．７７６受体介导的内吞作用转导外源基因进入靶细胞［１］，是目前所知...     

何杰金氏病中抗细胞凋亡基因bcl－2翻译产物的定位

何杰金氏病中抗细胞凋亡基因ｂｃｌ－２翻译产物的定位｜｜［陈协群，王文亮，黄高升等，中华医学杂志，１９９４；７４（１０）：６１８～６２０］作者采用高敏感多重ＰＡＰ免疫细胞化学技术，研究抗细胞凋亡基因ｂｃｌ－２在淋巴结何杰金氏病（霍奇金病）中的表达与分布...     

Bc1-2重组干扰质粒促进多药耐药Acc-3／CDDP细胞凋亡实验研究

目的：探讨表达重组干扰质粒沉默Bc1-2基因后对多药耐药Acc-3／CDDP细胞凋亡的影响。方法：按siRNA设计原则构建针对Bc1-2基因表达重组RNA干扰质粒，脂质体转染多药耐药Acc-3／CDDP细胞后分别行MTT试验、电子显微镜检查、AO／EB荧光染色法检测，观察不同条件处理后各组细胞的凋亡情况有无差别。结果：MTT试验见随着时间的延长，基因干扰组的OD值进行性降低，降低幅度在转染48h时最大，至72h时曲线明显较前变缓。电子显微镜检查结果显示，基因干扰组从转染后24-72h出现进行性加重的细胞凋亡改变，各期凋亡细胞清晰典型。荧光染色法检测细胞凋亡结果显示，基因干扰组能明显促进ACC-3／CDDP细胞凋亡（P〈0.05）。结论：表达重组干扰质粒能有效地沉默多药耐药Acc-3／CDDP细胞中Bc1-2基因表达，促进细胞凋亡。     

转导Caspase-1基因对人胃癌细胞药物敏感性的影响

许多研究表明,化学药物对敏感肿瘤细胞有促凋亡作用［１,２］。胃癌的发生发展与肿瘤细胞凋亡受抑有关,而且胃癌细胞对化疗药物的敏感性差。Ｃａｓｐａｓｅ－１基因是哺乳动物细胞促凋亡基因,转染该基因可使肿瘤细胞的增殖受抑,但对化疗药物的敏感性如何尚未见报道。为全面了解转导Ｃａｓｐａｓｅ－１基因后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,本实验观察了４种化疗药物对转染Ｃａｓｐａｓｅ－１基因的胃癌细胞的杀伤作用。１　材料和方法１．１　质粒、逆转录病毒载体构建及转染胃癌细胞株　人Ｃａｓｐａｓｅ－１－ｐＧＥＭ－１质粒由美国Ｔ…     

IL-24基因联合电离辐射对前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响

目的：探讨人白细胞介素24（IL-24）基因联合X射线对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响，为IL-24基因联合电离辐射治疗肿瘤奠定实验基础。方法：检测电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为假照射组及2、4、6、8、12和18 Gy X射线照射组；检测IL-24目的基因的表达分为对照组（0.01 mol•L^-1PBS）、空载体组［pcDNA3.1(+)载体］和IL-24基因组；检测IL-24基因联合电离辐射对PC-3细胞凋亡的影响分为对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组（6 Gy）、空载体联合照射组以及IL-24基因联合照射组。碱裂解法提取纯化质粒DNA，用PEI转染质粒DNA至PC-3细胞中，目的基因表达的检测采用RT-PCR法。Annexin V-FITC和PI双染后，采用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果：与假照组比较，2和4 Gy X射线照射48 h后PC-3细胞凋亡百分率无明显变化，6 Gy X射线照射后细胞凋亡百分率开始明显升高（P<0.01），且细胞凋亡百分率随剂量增大而增加，约是假照组的1.6～3.0 倍。PC-3细胞中对照组和空载体组均未观察到IL-24基因的表达，而IL-24基因组则可见IL-24基因的表达；以上3组均有GAPDH基因的表达。IL-24基因联合照射组与对照组、空载体组、IL-24基因组、单纯照射组和空载体联合照射组比较，早期凋亡细胞数均有上升趋势，除单纯照射组外，与其他组比较差异均有显著性（P<0.05）；晚期凋亡和坏死细胞数也均有上升趋势，其中与对照组、单纯照射组和空载体联合照射组比较显著升高（P<0.05或P<0.001）；凋亡和坏死的总细胞数均有上升趋势，除IL-24基因组外，与其他组比较差异有显著性（P<0.05或P<0.01）。结论：IL-24基因联合电离辐射能够有效诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡。      

FasL基因转染Hela细胞体外诱导淋巴细胞凋亡的作用

目的 应用FasL基因转染具有上皮细胞特性的Hela细胞，探讨FasL基因的表达对诱导同种异体淋巴细胞凋亡的作用，为解决同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥问题提供一条研究途径。方法 PLNCX2-FasL质粒转化大肠杆菌，抽提纯化的PLNCX2-FasL质粒用限制性内切酶xho Ⅰ，Not Ⅰ酶切，琼脂糖凝胶电泳得到755bp大小的目的条带。紫外灯下切割回收目的条带并抽提纯化得到FasL基因，用xhoⅠ，Not Ⅰ酶切PCDNA3．1质粒载体并在相同位点插入FasL基因，T4酶连接，构建PCDNA3．1-FasL重组质粒。脂质体转染法将PCDNA3．1-FasL基因转染Hela细胞，G418筛选；经过免疫细胞化学法，RT-PCR鉴定后，进行单项淋巴细胞混合试验，检测FasL基因对诱导淋巴细胞凋亡的作用。结果 表达FasL基因的Hela细胞的淋巴细胞刺激指数较对照组转染空白质粒的Hela细胞下调，仅达到对照组刺激指数的17．0l％。结论 FasL基因转染上皮细胞可诱导淋巴细胞凋亡，为研究避免同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥提供了一种可行的方法和设想。     

锌指蛋白A20基因抑制缺氧诱导内皮细胞CD54的表达

 ［目的］探讨外源性锌指蛋白基因A20对缺氧诱导内皮细胞黏附分子CD54表达的影响。［方法］①培养原代人脐静脉内皮细胞，将细胞分组建立缺氧模型；②采用DOTAP脂质体介导pcDNA3.1EHA20质粒转染培养的内皮细胞,筛选抗G418的阳性克隆,经免疫荧光鉴定A20基因的表达；③采用免疫组化和原位杂交检测内皮细胞CD54的表达。［结果］A20基因在经G418筛选后的内皮细胞中得到高效表达。缺氧能诱导人内皮细胞CD54高表达，外源性A20基因能抑制75%以上由缺氧诱导的内皮细胞CD54表达,两者间相差明显(P＜0.05)。［结论］外源性A20基因能够显著抑制缺氧诱导的内皮细胞活化,有效抑制CD54的表达，可能在内皮细胞缺氧损伤中具有保护作用。     

豆根管食通口服液对人食管癌细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：观察中药复方制剂——豆根管食通口服液对体外培养的食管癌Eca－109细胞的增殖抑制、诱导凋亡作用及对凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法：随机取Eca－109细胞分为三组：实验组、阳性对照组和空白对照组，采用MTT分析法测定不同浓度的豆根管食通口服液对Eca－109细胞增殖的抑制作用；通过倒置显微镜、HE染色观察凋亡细胞；采用免疫组织化学法测定Eca－109细胞内Bcl－2和Bax蛋白的表达。结果：MTT结果显示。豆根管食通口服液对Eca－109细胞的增殖有明显的抑制作用。倒置显微镜、光学显微镜下可发现药物作用组出现细胞核固缩、核碎裂等。免疫组织化学结果显示药物作用组bcl—2蛋白表达降低，bax蛋白表达增高（P〈0．01）。结论：豆根管食通口服液对人食管癌Eca－109细胞系有抗增殖及诱导凋亡作用，其分子机制可能是下调bcl－2基因表达．上调bax基因表达。     

乙肝病毒X基因的转染及表达对HL-7702肝细胞凋亡的影响

目的 探讨乙肝病毒(HBV)X基因及其蛋白产物HBxAg对肝细胞HL-7702凋亡的影响，阐释HBVX基因及产物在包括肝细胞癌(HCC)的HBV感染相关疾病中的作用。方法 用分子克隆方法构建HBVX基因重组质粒pcDNA3-X，并用脂质体转染法将其导入肝细胞HL-7702中，G418选择培养，RT-PCR鉴定以构建稳定表达HBVX基因的肝细胞株HL-7702／HBx．以转染空质粒pcDNA3的HL-7702(HL-7702／pcDNA3)和未转染的HL-7702作对照，用流式细胞分析，TUNEI．技术和电镜来分析细胞凋亡情况。用pcDNA3-X瞬时转染肝细胞HL-7702，在转染后24．48，72．96，120h，分别抽提RNA后用RT-PCR法对HBVX基因表达进行半定量检测，并对不同时段的转染细胞行流式细胞分析探讨肝细胞凋亡的状况。结果 重组质粒pcDNA3-X转染后经G418筛选，肝细胞株HL-7702／HBx经RT-PCR鉴定证实有稳定表达HBVX基因；流式细胞、TUNEL技术显示HL-7702／HBx细胞凋亡明显高于HL-7702／pcDNA3和HL-7702．电镜报告HL-7702／HBx细胞出现凋亡现象．有凋亡小体，对照组未发现；瞬时转染RT-PCR显示转染后72hHBVX基因表达量最高，流式细胞仪分析发现肝细胞凋亡于72h达到最高值，之后随着X基因表达量下降，肝细胞凋亡减少。结论 HBVX基因及其蛋白产物X蛋白有促进HL-7702肝细胞凋亡的作用．二者间存在着量效关系．即X基因表达越高，肝细胞凋亡越明显。HBxAg通过调控肝细胞凋亡在肝细胞的恶性转化中起重要作用。     

人成骨肉瘤组织中bcl-2,bax和c-fos基因表达及意义

引言肿瘤细胞凋亡的失控与肿瘤组织的生长关系密切．近年来,关于肿瘤细胞凋亡基因的异常表达与肿瘤细胞凋亡关系的研究已为肿瘤分子生物学研究的热点．bclZ和bax是一对调控细胞凋亡的重要基因．研究发现bclZ和bax间的比率关系决定细胞的凋亡状态［’‘．fos基因是从两种小鼠的反转录病毒FBJ和FBR中得到的,两者都能诱发成骨肉瘤‘’‘．我们旨在了解Bcl－2,Bax和c－Fos蛋白在人成骨肉瘤细胞中的表达情况,以进一步探讨它们在成骨肉瘤发生、发展中的作用．l材料和方法1．1标本来源及处理我们所用组织标本均为我科手术标本,福尔马林固…     

核糖体蛋白S29与人肝癌细胞Bel－7402耐5－氟尿嘧啶的关系

目的：探讨核糖体蛋白S29（ RPS29）与人肝癌细胞Bel－7402耐5－氟尿嘧啶（5－FU ）的关系。方法采用大剂量冲击法和逐渐增加剂量法构建人肝癌Bel－7402／5－FU耐药细胞系；用荧光定量PCR和West－ern blot检测RPS29基因和蛋白在敏感和耐药细胞中的表达；用siRNA干涉耐药细胞的RPS29，CCK－8法检测细胞存活率变化。用肝癌HepG2／5－FU耐药细胞株验证阻断RPS29表达与5－FU耐药的关系。结果 Bel－7402／5－FU耐药细胞对5－FU的IC50为62μmol／L，耐药指数为22．7。 RPS29基因和蛋白在耐药细胞中高表达，分别为敏感细胞的（2．21±0．19）倍和（1．79±0．28）倍（P＜0．01）。干涉RPS29后，耐药细胞在一系列浓度梯度的5－FU作用下存活率分别比对照组下降（15．1±6．5）％、（24．3±4．2）％、（19．2±5．1）％、（16．3±6．8）％（ P ＜0．05）。干涉RPS29表达后，肝癌HepG2／5－FU耐药细胞株在一系列浓度梯度的5－FU作用下存活率分别比对照组下降（8．4±1．2）％、（13．0±2．3）％、（17．1±3．1）％和（12．2±1．5）％（P＜0．05）。结论 RPS29基因和蛋白均在Bel－7402／5－FU耐药细胞高表达；低表达RPS29可提高Bel－7402／5－FU耐药细胞对5－FU的敏感性。低表达RPS29可提高Hep G2／5－FU耐药细胞对5－FU的敏感性。 RPS29与肝癌细胞对5－FU的耐药性有关。     

利用RNAi技术抑制Bcl 2基因表达增强肺腺癌A549细胞放射敏感性

目的利用RNAi技术抑制Bcl 2基因的表达,观察其对肺腺癌A549细胞凋亡和放射敏感性变化的影响。方法构建Bcl 2基因的干扰质粒pBcl 2 siRNA,稳定转染人肺腺癌A549细胞,同时设立转染无意义链组、空载体组和未转染组。采用Real time RT PCR和Western blot方法, 观察Bcl 2基因在mRNA和蛋白水平表达的变化。采用流式细胞术和克隆形成方法,检测RNA干扰对A549细胞放射敏感性的影响。结果成功构建bcl 2 siRNA质粒,转染A549细胞,获得稳定转染细胞株A549/Bcl2 Ins;Bcl 2mRNA、 Bcl 2蛋白表达明显降低;A549/Bcl2 Ins凋亡率［（10.11±0.92）%］明显高于对照组,6Gy X线照射后凋亡率［（28.81±1.10）%］明显高于对照组及未照射组;A549/Bcl2 Ins的D0和Dq值分别为1.399和1.298,明显低于转染无意义序列细胞株A549/Bcl2 Neg(1.695和2.480)、转染空载体细胞株A549/SD (1.706和2.227)和空白对照细胞A549(1.816和2.777)。结论RNAi技术可以有效抑制肺腺癌A549细胞Bcl 2基因的表达,增强A549细胞对X线的放射敏感性。     

反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡，ｂｃｌ－２在ＨＬ－６０细胞凋亡的调节中起重要作用