雷帕霉素诱导自噬抑制大鼠尿道损伤后纤维化的作用机制研究

目的 探究雷帕霉素(Rapa)对大鼠尿道狭窄形成和成纤维细胞的影响及其作用机制。方法 构建大鼠尿道狭窄模型(SD雄性大鼠,体质量250～300 g),采用随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和Rapa组,每组10只。术后14 d取大鼠尿道组织,行HE染色观察尿道组织形态学变化,Masson染色检测胶原变化;免疫组化法观察α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。将HLF-1细胞分为对照组,Rapa组和3-甲基腺嘌呤(3-MA)+Rapa组。应用transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞的周期和凋亡情况,Western blotting检测LC3的表达。结果 HE染色发现Rapa组大鼠尿道组织狭窄程度较阳性对照组明显减轻,Masson及免疫组化染色结果显示,阳性对照组和Rapa组大鼠损伤尿道组织中胶原和α-SMA表达均较阴性对照组大鼠增加,但Rapa组胶原和α-SMA表达显著低于阳性对照组。与对照组相比,Rapa组HLF-1细胞迁移、侵袭能力逐渐减弱,呈剂量依赖关系(均P<0.05),而加入3-MA干预后,Rapa对HLF-1迁移、侵袭和能力的抑制作用减弱(均P...     

RhoC-siRNA联合Rapamycin抑制人肝癌细胞Bel7402 VEGF表达

目的 检测RhoC-siRNA联合Rapamycin(Rapa)抑制人肝癌细胞Bel7402 VEGF表达.方法 实验以人肝癌细胞Bel7402为研究对象,分别设空白对照组、溶媒组、Rapa组、阴性对照组、阴性对照联合Rapa组、RhoC-siRNA组、RhoC-siRNA联合Rapa组,按不同实验组分别应用RhoC-siRNA、Rapa或RhoC-siRNA联合Rapa,采用RT-PCR和Western blot方法检测各实验组细胞VEGF的表达.结果 转染RhoC-siRNA 组细胞VEGF mRNA表达的抑制率为55.7%,应用Rapa组细胞VEGF mRNA表达的抑制率为17.3%,二者联合应用对VEGF mRNA表达的抑制率比单纯转染RhoC-siRNA和单纯应用Rapamycin抑制率分别提高20.3%和58.2%;转染RhoC-siRNA组细胞VEGF 蛋白表达的抑制率为53.5%(P＜0.01),应用Rapa组细胞VEGF 蛋白表达的抑制率为15.7%(P＜0.05),二者联合应用对VEGF蛋白表达的抑制率比单纯转染RhoC-siRNA和单纯应用Rapa抑制率分别提高18.4%和55.4%(P＜0.01).结论 沉默RhoC基因联合抑制mTOR蛋白,可增强对肝癌细胞Bel7402 VEGF表达的抑制,为肝癌的生物学治疗提供重要的实验依据.     

雷帕霉素对莱菔硫烷诱导人结肠癌细胞UGT1A同工酶及CYP3A4表达的调控

目的 以人结肠癌Caco-2细胞为模型,观察雷帕霉素 (Rapa) 对莱菔硫烷 (SFN) 诱导葡萄糖醛酸转移酶(UGT) 1A1、UGT1A8、 UGT1A10及细胞色素P450 (CYP) 3A4的调控,探讨Rapa对SFN化学预防效应的影响。方法 实验分为对照组、10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组。透射电镜观察细胞超微结构,Western blotting法测定微管相关蛋白1轻链3 (LC3) 和核因子E2 P45相关因子2 (Nrf2) 的表达,实时荧光定量PCR法测定UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10及CYP3A4 mRNA的表达,免疫荧光法观察Nrf2的核内转位。结果 透射电镜观察到10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组细胞中自噬体及自噬溶酶体的形成;与对照组相比,25μmol/L SFN组、25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组可诱导LC3-II蛋白及UGT1A1、UGT1A8、UGT1A10 mRNA的表达增加,诱导Nrf2蛋白的表达及核内转位增强,且25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组的作用更显著;而10nmol/L Rapa组、25μmol/L SFN组和25μmol/L SFN+10nmol/L Rapa组中,CYP3A4 mRNA的表达均受到抑制。结论 Rapa可协同增强SFN对Caco-2细胞自噬效应的诱导;Rapa可能通过上调Nrf2信号通路,使SFN诱导 UGT1A1、UGT1A8和UGT1A10表达增加,进而增强SFN的化学预防效应,同时未影响SFN对CYP3A4转录抑制效应。     

Inactivation of mammalian target of rapamycin (mTOR) by rapamycin in a murine model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury

Background  The mammalian target of rapamycin (mTOR) pathway, a key cellular signaling pathway associated with various cellular functions, has distinct roles in the inflammatory process. In this study, the mTOR inhibitor rapamycin (Rapa) was used to test whether inhibition of mTOR activation attenuates lipopolysaccharide (LPS)-induced acute lung injury (ALI) in a murine model.

Methods  Mice pretreated with Rapa or vehicle were given LPS intratracheally. Local cell numbers and inflammatory cytokines present in the bronchoalveolar lavage fluid (BAL), wet-to-dry weight ratio, histopathology of the lungs, and survival were evaluated.

Results  The phosphorylation of S6, a major downstream target of mTOR, had a 3-fold increase in lung tissue after LPS stimulation, but the increase was blocked by Rapa. Rapa reduced the levels of TNF-α (LPS vs. LPS + Rapa, (1672.74±193.73) vs. (539.17±140.48) pg/ml, respectively; P <0.01) and IL-6 (LPS vs. LPS + Rapa: (7790.88±1170.54) vs. (1968.57±474.62) pg/ml, respectively; P <0.01) in the BAL fluid. However, Rapa had limited effects on the overall severity of ALI, as determined by the wet-to-dry weight ratio of the lungs, number of neutrophils in the BAL fluid, and changes in histopathology. In addition, Rapa failed to reduce mortality in the LPS-induced ALI model.

Conclusions  We confirmed that mTOR was activated during LPS-induced ALI and strongly inhibited by Rapa. Although Rapa reduced the levels of the mediators of inflammation, the overall severity and survival of the ALI murine model were unchanged.

     

Toll样受体4抑制剂联合雷帕霉素对小鼠移植心脏存活的影响

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)抑制剂TAK-242对小鼠心脏移植后移植物存活的影响.方法 采用小鼠腹部异位心脏移植模型,供者为BALB/C小鼠,受者为C57BL/6小鼠.受者分为4组:对照组、雷帕霉素(Rapa)组、TAK-242组及Rapa+TAK-242组,术后移植后观察移植物存活情况;部分受者于术后7 d或15 d获取移植心脏用于组织病理学检测.结果 TAK组移植心脏平均生存时间稍延长但未达到统计学意义[(8.2±0.2)d vs(7.6±0.2)d,P=0.086].Rapa+TAK-242组移植心脏平均生存时间较对照组显著延长[(56.1±3.7)d vs(7.6±0.2)d,P<0.001],并且优于Rapa组[(56.1±3.7)d vs(19.2±1.5)d,P<0.001].组织病理学结果 提示Rapa+TAK-242组移植物排斥反应最轻,组织中CD11c阳性树突状细胞减少,CD3阳性淋巴细胞浸润减少,C4d沉积减轻.结论 TAK联合Rapa能够减少移植心脏组织内炎症细胞浸润,减轻排斥反应,延长移植心脏存活.     

雷帕霉素协同去甲氧柔红霉素诱导人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡的作用

目的:探讨去甲氧柔红霉素( idarubicin,IDA)联合雷帕霉素(rapamycin,Rapa)抗人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL) Jurkat细胞株的效应及机制.方法:应用CCK-8法分析两药联用对细胞增殖的影响;Isobologram法分析两药联合作用的性质;电镜形态学观察和Annexin V/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫印迹法检测凋亡相关基因Caspase3、PARP、Caspase8、Caspase9及Akt、p-Akt、P85S6K、p-P85S6K、P70S6K、p-P7OS6K、ERK1/2、p-ERK1/2等蛋白质水平表达.结果:CCK-8法示IDA联合Rapa能明显降低IDA的半数抑制浓度(50% inhibition concentration,IC50)值.Isobologram法示两药联合指数小于1.免疫印迹法示两药联用组较IDA单用组更能激活Caspase3和底物PARP,Caspase8和Caspase9在两药联用组均呈现明显激活.IDA联用Rapa后能使mTOR 信号通路上游的Akt及下游的P85S6K、P70S6K分子磷酸化水平明显降低,并能协同下调ERK的磷酸化水平.结论:Rapa和IDA对Jurkat细胞的生长抑制具有协同作用,两药联用时细胞凋亡增加,且通过线粒体和细胞膜双途径增强凋亡效应.其协同机制可能与Rapa逆转IDA引起的Akt/mTOR信号通路激活,并抑制ERK信号活化有关.     

RNAi沉默STAT3基因联合mTOR抑制剂rapamycin诱导BEL-7402肝癌细胞凋亡

目的：探讨PI3K/AKT/mTOR和JAK/STAT3 2条信号转导途径共同作用对肝癌细胞凋亡的影响,为肝癌基因治疗提供依据。方法：选取对数生长期BEL-7402细胞,随机分为对照组、mTOR抑制剂rapamycin(Rapa)组、阴性质粒组、阴性质粒+ Rapa组、STAT3-siRNA质粒组和STAT3-siRNA 质粒+Rapa组,应用LipofectamineTM 2000转染试剂将含有目的基因的质粒转染BEL-7402细胞,同时应用rapamycin,分别采用流式细胞术和Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡率和形态学的变化,JC-1 荧光染色观察线粒体膜电位(ΔΨm)变化,Western blotting法检测活性caspase-3蛋白表达水平。结果：STAT3-siRNA+Rapa组细胞凋亡率为60.22%±0.87%,明显高于其他各组(P<0.05),且细胞ΔΨm明显降低(27.28%±1.82%,P<0.05);Hoechst33258荧光染色检测,见STAT3-siRNA有大量细胞出现细胞核聚集、边缘化和核
碎裂等典型细胞凋亡形态;Western blotting检测,STAT3-siRNA+Rapa组活性caspase-3蛋白表达水平明显高于其他各组（P<0.05）。结论：RNAi沉默BEL-7402肝癌细胞STAT3基因联合rapamycin可促进BEL-7402肝癌细胞的凋亡,二者具有明显的协同作用。     

Pharmacokinetics of rapamycin-eluting stents in miniswine coronary model

Background The results of clinical trials of rapamycin-eluting stents reduce restenosis have been quite promising. The main purpose of this study was to characterize the in vivo pharmacokinetics of high dose rapamycin (Rapa)-eluting stents in a miniswine coronary model.Methods Ten miniswines underwent placement of 18 high dose Rapa-eluting stents in the left anterior descending and right coronary arteries. At the planned times of the 1.5th, 12th, 24th hour, 3th, 7th and 28th day, the animals (n=1, 1, 2, 2, 2, and 2, respectively) were euthanized after completion of coronary angiography. Blood samples were obtained at 0, 10, 20, 30 minutes; 1, 2, 6, 24 hours; and 3, 7, 28 days to determine systemic Rapa levels. Rapa levels in whole blood, arterial wall, heart, renal and liver tissues were determined by high-performance liquid chromatography/mass spectroscopy.Results Peak whole blood concentration (Cmax), time to peak concentration (tmax), elimination half-life (t1/2β), area under the curve (AUC), and apparent systemic clearance (Cl/F) were (10.91±1.28) ng/ml, (2.0±0.2) hours, (7.25±0.63) hours, (1.15±0.11) ng·h·ml（-1）, and (180±12) ml·h（-1）·kg（-1）, respectively. More than 95% Rapa detected is localized in the coronary artery surrounding the stent and heart.Conclusion Stent-based delivery of Rapa via a copolymer stent is feasible and safe. This strategy holds promise for the prevention of stent restenosis.     

雷帕霉素防治慢性移植肾肾病的新进展

慢性移植肾肾病（CAN）为肾移植术后移植肾功能丧失的重要原因。环孢素（CsA）等神经碱钙蛋白抑制剂（CI）肾毒性为其中的重要因素之一。雷帕霉素（Rapa）为一种新型免疫抑制剂，与CI相比，具有全新的免疫抑制机制，可产生明确的抗增殖特性，而无肾毒性，对CAN的防治和肾移植术后患者的预后具有重要作用。该文就Rapa防治CAN的研究新进展作一综述。     

雷帕霉素对脑缺血再灌注损伤保护效应的研究

目的：采用双侧颈总动脉阻断的方法制作全脑缺血再灌注动物模型,研究雷帕霉素（Rapamycin,Rapa）对大鼠脑缺血再灌注损伤是否有保护效应。方法：用双侧颈总动脉阻断法制作脑缺血模型,缺血前侧脑室给予Rapa,缺血20 min,再灌24 h后固定,取脑,做连续冠状冰冻切片,焦油紫染色,光镜下观察拍照,无偏差计数,比较假手术组（SO组）、治疗对照组（TC组）、Rapa治疗组（RI组）的细胞密度。结果：①与SO组比较,TC组前额皮层及颞叶皮层的分子层细胞均明显减少（P<0.05）。②与TC组比较,缺血前12 h给予Rapa组的颞叶分子层细胞明显增多（P<0.05）。③与TC组比较,缺血前30 min给予Rapa组和缺血前12 h给予Rapa组的前额分子层细胞均增多,但缺血前12 h给予Rapa组的增加更明显（P<0.05）。结论：Rapa对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护效应,且这一保护效应和给药时间密切相关。     

肾移植术后不同免疫抑制剂首剂治疗剂量对独肾模型大鼠睾丸发育及精子质量的影响

目的观察肾移植术后不同免疫抑制剂的首剂治疗剂量对独肾模型大鼠睾丸发育及精子质量的影响。方法按公式将肾移植术后患者的环孢素A(cyclosporin A,CsA)、他克莫司(tacrolimus,FK506)和雷帕霉素(rapamycin,Rapa)的首剂治疗剂量换算为大鼠的用药剂量。构建大鼠独肾模型,将建模成功的32只大鼠随机分为4组,分别为对照组、CsA[25 mg/(kg.d)]组、FK506[0.8 mg/(kg.d)]组和Rapa[0.2 mg/(kg.d)]组,每组8只。胃饲8周后处死大鼠,称取睾丸重量,并计算睾丸脏器系数;制作睾丸组织匀浆悬液,精子计数,观察精子活率及畸形率;HE染色观察每组睾丸病理改变。结果 CsA组大鼠的双侧睾丸重量[(2.63±0.57)g]明显少于其他各组大鼠(P<0.05);CsA组及Rapa组大鼠睾丸脏器系数、精子数量、精子活率低于对照组及FK506组(P<0.05);各实验组精子畸形率高于对照组(P<0.05),其中CsA组最为明显(P<0.001);镜下观察:各实验组均有不同程度的病理学改变,表现为曲细精管管腔缩小、稀疏、生精细胞层数减少、腔内精子减少、部分曲精小管出现空泡样变,间质细胞萎缩、水肿、出血等。其中CsA组病理改变最为明显,FK506组曲细精管结构基本完整,仅部分分布稍稀疏,Rapa组大鼠部分曲细精管萎缩。结论肾移植术后不同免疫抑制剂的首剂治疗剂量对大鼠睾丸发育及精子质量均有不同程度的影响;与CsA和Rapa相比,FK506引起的睾丸和精子病变最为轻微。     

环孢素A转换为雷帕霉素对大鼠移植肾功能和组织学的作用

目的：研究并比较环孢素A（CsA）转换为雷帕霉素（Rapa）与CsA持续使用对大鼠移植肾的长期作用。方法：建立大鼠慢性移植肾肾痛模型并分组：CsA转换为Rapa组（第1组,n=10）、CsA持续使用组（第2组,n=10）、CsA撤离组（第3组,n=8）和控制对照组（第4组,n=8）予以安慰剂至第24周。另6只Lewis→Lewis同系移植作为同系移植组（T组）。每4周查24h尿蛋白定量,24周时处死动物,获取移植肾标本行组织学和免疫组化研究并检测转换生长因子B1和血小板源性生长因子A链的表达。结果：对比控制对照组（第4组）,CsA和Rapa的使用（第1,2,3组）均显著地降低了尿蛋白的排泄量;CsA转换为Rapa（第1组）较CsA的持续使用（第2组）进一步降低了尿蛋白的排泄,在第24周差异有统计学意义（P=0．006）。CsA和Rapa的使用（第1,2,3组）大体保护移植肾组织学破坏;而对比CsA持续使用或撤离（第2、3组）,CsA转换为Rapa（第1组）则进一步地降低了移植肾组织学Banff评分、显著地减少了肾组织中浸润的炎性细胞数、TGF—β1和α-SMA的染色强度以及转换生长因子β1和血小板源性生长因子A链的mRNA的表达量。结论：CsA转换为Rapa减少了移植肾远期尿蛋白的排泄,减缓远期移植肾组织学的损害并下调了纤维相关基因的表达,可能改善临床移植肾的远期成功率。     

IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白降低软骨细胞的自噬功能

目的 探究肌醇依赖性激酶1α（IRE1α）通过调控内质网钙稳态蛋白（CHERP）影响软骨细胞自噬功能的相关机制。方法 衣霉素（TM）处理人软骨细胞C28/I2,Western blot检测不同时间点的内质网应激和自噬相关蛋白指标。4μ8c、雷帕霉素（Rapa）处理C28/I2（分为：NC组、4μ8c组、Rapa组、4μ8c+Rapa组）,Western blot检测自噬相关蛋白指标。分别从软骨组织特异性ERN1基因敲除小鼠（ERN1 CKO）和对照小鼠（Control）软骨组织分离原代软骨细胞,qPCR检测ERN1及自噬相关蛋白ATG5、ATG7的mRNA 水平,Western blot 检测 IRE1α/p- IRE1α、CHERP 表达水平,流式细胞术检测胞内钙离子含量。巴佛洛霉素 A1 （Bafilomycin A1）处理原代软骨细胞（分为Control组、Control+Bafilomycin A1组、ERN1 CKO组、ERN1 CKO+Bafilomycin A1 组）,Western blot检测LC3Ⅱ、LC3Ⅰ的表达。自噬双荧光病毒在Rapa处理下检测自噬流（分为Control+Rapa组、ERN1 CKO+Rapa组）。C28/I2中过表达CHERP与IRE1α,免疫荧光检测自噬水平。结果 TM处理C28/I2细胞后,内质网应激相关标志蛋白表达上调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P<0.05）,p62表达下调（P<0.05）。相较对照组,Rapa上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（P<0.001）,4μ8c+Rapa组相较Rapa组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P<0.05）。相较于对照组,原代软骨细胞中敲除ERN1/IRE1α后,ERN1（P<0.01）、ATG5（P<0.001）、ATG7（P<0.001）mRNA水平显著下调。IRE1α/p-IRE1α蛋白表达缺失或显著下调（P<0.01）,CHERP蛋白表达上调（P<0.05）,胞内钙离子含量显著上升（P<0.001）。巴佛洛霉素 A1 处理原代软骨细胞后,Control+Bafilomycin A1 组较Control组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P<0.01）,ERN1 CKO+Bafilomycin A1组较ERN1 CKO组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上调（P<0.05）、较Control+Bafilomycin A1组的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值下降（P<0.05）。自噬双荧光病毒处理后,ERN1 CKO+Rapa组较Control+Rapa组未淬灭LC3-GFP荧光增强（P<0.05）。C28/I2细胞中过表达CHERP降低LC3荧光强度,过表达IRE1α增强LC3荧光表达并能部分挽救CHERP导致的荧光降低情况。结论 IRE1α缺陷通过上调内质网钙稳态蛋白,升高胞内钙离子含量,进一步导致软骨细胞的自噬功能受损。     

他克莫司和雷帕霉素对肝癌肝移植术后患者的疗效比较

目的探讨免疫抑制剂他克莫司和雷帕霉素对肝癌肝移植术后受者治疗预后的比较。方法将22例肝癌肝移植术后患者随机分为两组：FK506组11例：术后采用FK506＋MMF＋Pred方案;Rapa组11例：术后4周内采用FK506＋MMF＋Pred方案,4周后改用Rapa＋MMF＋Pred方案。比较两组患者术后的肿瘤复发情况、死亡（因肿瘤因素）、排斥反应、感染发生率及肝、肾功能等情况。结果 FK506组患者与Rapa组患者在术后急性排斥反应、感染发生率、同时期的谷丙转氨酶（ALT）浓度方面差异无统计学意义（P〉0.05）;两组患者在术后肿瘤复发率、死亡率、血肌酐（CREA）浓度方面差异有统计学意义（P〈0.05）,Rapa组患者比FK506组患者术后疗效更好。结论雷帕霉素能明显改善肝癌肝移植术后患者的预后,并无肾功能损害,且不增加排斥反应的发生率,为肝癌肝移植术后的治疗提供了一种新的选择。     

氙气后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤起保护作用：基于下调mTOR通路和抑制内质网应激介导的神经元凋亡

目的 基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路和内质网应激（ERS）-凋亡通路探讨氙气后处理治疗大鼠脊髓缺血再灌注损伤（SCIRI）的作用机制。方法 将50只雄性SD大鼠随机分为5组：假手术组（Sham组）,脊髓缺血再灌注组（I/R组）,氙气后处理组（Xe组）,脊髓缺血再灌注+雷帕霉素组（I/R+Rapa组）,氙气后处理+雷帕霉素组（Xe+Rapa组）（10 只/组）。通过夹闭腹主动脉85 min,再灌注4 h建立大鼠SCIRI模型。手术前3 d,I/R+Rapa组和Xe+Rapa组的大鼠每天予以腹腔注射雷帕霉素（Rapa, 4 mg/kg）,其余3组大鼠注射等体积的溶剂。缺血再灌注后1 h时,Xe组和Xe+Rapa组的大鼠经呼吸机吸入50%氙气+50%氧气混合气1 h。其余3组的大鼠予以50% 氮气+50%氧气混合气1 h。于再灌注4 h观察记录大鼠后肢运动功能后收集标本,进行HE染色、尼氏染色计数正常神经元数量,Western blot和RT-PCR方法分别检测脊髓组织中内质网应激通路［葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、激活转录因子6（ATF6）、肌醇需要酶1α（IRE1α）、RNA依赖的蛋白激酶样ER激酶（PERK）］、mTOR通路（mTOR和磷酸化mTOR（p-mTOR））以及凋亡信号（Bax、Bcl-2和Caspase-3）蛋白和mRNA表达。结果 与 Sham组相比,其余各组大鼠后肢运动功能评分显著降低（P<0.01）,正常神经元数量减少;I/R组的GRP78、ATF6、IRE1α、PERK mRNA含量和蛋白水平明显升高（P<0.05或0.01）,p-mTOR/mTOR比值、Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3 mRNA含量和蛋白水平显著升高（P<0.01）。与I/R组相比,Xe组的GRP78、ATF6、IRE1α、PERK mRNA含量和蛋白水平明显降低（P<0.01）,p-mTOR/ mTOR比值、Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3 mRNA含量和蛋白水平显著下降（P<0.05或0.01）;I/R+Rapa组的GRP78、ATF6 mRNA含量和蛋白水平明显降低（P<0.01）,p-mTOR/mTOR蛋白的比值、Bax/Bcl-2 mRNA的比值及Caspase-3含量和蛋白水平显著下降（P<0.01）。与Xe组相比,I/R+Rapa组和Xe+Rapa组的BBB评分和Tarlov评分明显降低（P<0.01）;Xe+Rapa组Caspase-3蛋白表达和Bax/Bcl-2 mRNA的比值显著见下降（P<0.05或0.01）。结论 氙气后处理通过抑制内质网应激和神经元凋亡对大鼠脊髓缺血再灌注损伤起保护作用,而mTOR通路部分介导了氙气后处理的脊髓保护作用。     

达格列净通过mTOR自噬信号通路改善糖尿病肾病大鼠足细胞损伤

目的 探讨达格列净对糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法 46只Wistar雄性大鼠以随机数字表法分为对照组(NC组,n=10)和造模组(n=36)。成功构建DN模型的30只造模组大鼠随机分为模型组(DN组)、达格列净组(Dapa组)、达格列净+雷帕霉素组(Dapa+Rapa组),每组10只。各组大鼠均给药干预12周,1次/d。采用血糖仪检测大鼠空腹血糖(FBG)。全自动生化分析仪测定大鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白(UP)。HE染色观察大鼠肾组织病理形态学。透射电子显微镜观察大鼠肾脏足细胞变化。Western blot法检测足细胞标志蛋白(nephrin、podocin)、自噬蛋白(Beclin-1、LC3Ⅱ、P62)及mTOR信号通路相关蛋白(mTOR、p-mTOR)表达。结果 与NC组比较,DN组大鼠肾小球体积增大,肾小管上皮细胞空泡变性,存在大量炎性细胞浸润;足细胞足突融合,排列紊乱,可见明显线粒体嵴断裂或空泡化。与DN组比较,Dapa组和Dapa+Rapa组大鼠肾脏病理损伤明显减轻;足细胞...     

新型免疫抑制剂FTY720作用机制浅析

2-氨基-[2-（4-辛基苯基）乙基]-1，3-丙二醇盐酸盐（简称为FTY720）是一种来源于冬虫夏草的新型免疫抑制剂。从结构上不同于环孢素A（CsA）、他克莫司（FK506）以及雷帕霉素（Rapa）等，与其他免疫抑制剂相比，该药具有免疫抑制效果明显，毒副作用低等特点，有望成为新一代的免疫抑制剂。     

雷帕霉素对异种单向混合淋巴细胞培养的免疫抑制作用

目的 :观察新型免疫抑制剂雷帕霉素 (Rapa mycin ,RPM)对异种单向混合淋巴细胞培养 (one wayXMLC)的免疫抑制作用。方法 :①无菌采集小鼠脾淋巴细胞 ,经丝裂毒素处理 ,作刺激细胞 ;②取健康成人外周血淋巴细胞(hPBL) ,作反应细胞 ;③异种单向混合淋巴细胞培养 ;④实验分对照组 (不用药 )、RPM组 ,实验组 (用药组 )又分不同药物浓度组。结果 :①小鼠脾淋巴细胞明显刺激人外周血淋巴细胞 (hPBL)增殖 ,3H TdR掺入值 (cpm)显著增高 (P <0 .0 5 ) ;CD4 、CD8、IgG、IgM细胞含量明显升高 ,有显著差异 (P <0 .0 5 )。②各实验组的cpm值下降 ,RPM的IC50 (5 0 %有效抑制浓度 )≈ 1.5nmol L。测定各实验组的CD4 ,CD8,IgG ,IgM细胞含量下降 ,药物的IC50 与上相似。结论 :①人→小鼠单向混合淋巴细胞培养 ,具有明显细胞增殖反应。②RPM对异种单向混合淋巴细胞培养具有明显的免疫抑制效果 ,其作用呈剂量依赖性。     

硬膜外腔注射咪唑安定用于术后镇痛

硬膜外腔注射吗啡镇痛具有恶心、呕吐,皮肤瘙痒,尿潴留等不良反应发生率高的缺点。咪唑安定是新一代苯二氮(艹卓)类(BZ)药物,1992年Nishiyama等报道,咪唑安定鞘内或硬膜外腔注射具有明显的节段性镇痛作用。国内1994年唐承纯报道咪唑安定硬膜外腔注射用于术后     

间断性热暴露导致自发性高血压大鼠的胸主动脉损伤：基于激活AMPK/mTOR/ULK1通路

目的 探讨不同热暴露方式对自发性高血压大鼠胸主动脉血管损伤的影响及其机制。方法 选用自发性高血压大鼠（SHR）,构建热暴露大鼠模型,分为对照组SHR-CN(n=9,饲养在24℃室温下),间断性热暴露组SHR-8(n=9,每天接受任意连续8 h热暴露,其余时间饲养在与对照组相同的条件下)和持续性热暴露组SHR-24(n=9,持续暴露在32℃高温下)。进行自噬和通路干预的SHRs,分别于热暴露前30 min腹腔注射自噬激活剂Rapa,抑制剂3-MA和AMPK抑制剂Compound C(CC)。。通过苏木素-伊红染色（HE）观察大鼠胸主动脉形态的变化;利用Western blot和免疫荧光（IF）分别检测高血压大鼠胸主动脉自噬相关因子Beclin1、LC3B和p62的表达情况;利用TUNEL检测高血压大鼠胸主动脉凋亡的情况,Western blot检测Caspase-3,Bax和Bcl-2的表达情况;用自噬的激活剂和抑制剂干预高血压大鼠后,检测自噬和凋亡相关因子的表达情况;免疫组化（IHC）检测通路相关因子的表达情况,大鼠腹腔注射AMPK抑制剂Compound C(CC)后,进一步观察通路及...