原发性高血压病程早期外周血单核细胞的预激活状态

目的:观察病程早期原发性高血压患者外周血单核细胞黏附活性及分泌活性,分析此时期单核细胞是否处于预激活状态。方法:①选择2003-01/2004-10华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科门诊就诊原发性高血压患者30例。男16例,女14例;病程6～56个月。均为高血压Ⅰ～Ⅱ级,且对检测项目知情同意。选择同期本院血压正常的健康体检者30人为对照组,男女各15人;平均年龄(45±8)岁。均对检测项目知情同意。②分离出纳入对象静脉外周血单核细胞,培养后,调整细胞数至4×107L-1,接种到24孔培养板上。每份标本设3孔,分别为基础分泌孔、血管紧张素Ⅱ刺激孔(加入血管紧张素Ⅱ1×10-8mol/L)、氯沙坦预处理孔(在1×10-8mol/L血管紧张素Ⅱ刺激前先将外周血单核细胞与氯沙坦共同孵育30min)。③培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长至对数增长期后,每孔加入100μL外周血单核细胞悬液,37℃下分别孵育2,4h,经显微镜-计算机图像分析系统计数黏附细胞。高倍镜下每孔计数40个视野,取其平均值。④采用双抗体夹心酶链免疫吸附法,严格按照试剂盒说明测定外周血单核细胞培养上清肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β及白细胞介素6水平。⑤采用反转录聚合酶链反应检测外周血单核细胞细胞因子基因表达。⑥组间计量资料差异性比较采用t检验。结果:原发性高血压患者30例和健康体检者30人均进入结果分析。①孵育2和4h,外周血单核细胞与内皮细胞黏附数:高血压组在基础状态下均与对照组相当(P>0.05);血管紧张素Ⅱ刺激后两组均升高,且高血压组明显多于对照组(t=2.445,5.656,P<0.05,0.01);氯沙坦预处理后两组又降至同一水平(P>0.05)。②外周血单核细胞培养上清肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β及白细胞介素6水平:基础状态时,两组均较低,且差异不明显;经血管紧张素Ⅱ刺激后,高血压组明显高于对照组(t=2.537～6.984,P<0.05～0.01);氯沙坦预处理后两组均有不同程度降低,组间差异不明显。③外周血单核肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β及白细胞介素6mRNA表达:在基础条件下两组处于同一水平;血管紧张素Ⅱ刺激后高血压组明显高于对照组(t=2.381～3.974,P<0.05～0.01);氯沙坦预处理后两组均减低,但差异不明显。结论:病程早期原发性高血压患者外周血单核细胞处于预激活状态。     

原发性高血压患者外周血单核细胞组织因子的活性表达

我们的研究旨在观察原发性高血压患者外周血单核细胞组织因子 (TF)的活性、表达及依那普利干预后的变化 ,以进一步从细胞水平了解高血压患者单核细胞的促凝活性及依那普利抗血栓的机制。对象和方法1　对象　高血压病组 :1～ 2级原发性高血压患者 2 5例 ,男13例 ,女 12例 ,年龄 (5 1.8± 7.2 )岁 (40～ 6 5岁 )。高血压的诊断按 1998年WHO ISH标准 ,排除继发性高血压、糖尿病 ,无服用血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)及血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ )受体拮抗剂病史。正常对照组 :2 2名 ,男 12名 ,女10名 ,年龄 (5 2 .6± 5 .8)岁 (44～ 6 2岁 )…     

外周血单核细胞激活效应在原发性高血压患者丹参酮干预过程中的反应

背景:外周血单核细胞预激活是动脉粥样硬化形成的重要早期事件和促进因素之一,丹参酮是从传统中药丹参中提取的一种脂溶性成分,具有确切的抗动脉粥样硬化作用。目的:通过检测外周血单核细胞的黏附活性与分泌活性,分析原发性高血压患者病程早期是否存在外周血单核细胞预激活,并探讨丹参酮对体外培养条件下外周血单核细胞激活的抑制作用。设计:病例对照分析。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科与中医药研究室。对象:选取2003-01/2004-10华中科技大学同济医学院附属同济医院心血管内科收治的未经治疗或已停用降压药物2周以上的原发性高血压患者30例,男16例,女14例;平均年龄(44.6±7.4)岁;体质量指数(26.2±4.5)kg/m2;平均病程(38.5±16.9)个月;对本实验均知情同意。根据1999年WHO/ISH的高血压诊断标准,均为高血压Ⅰ～Ⅱ级。排除继发性高血压、器质性心脏病、高脂血症、糖尿病、肝肾功能障碍、感染等临床情况以及高血压所致的心、脑、肾、血管等靶器官损害。另选择30例血压正常的健康体检者作为正常对照组。人脐静脉内皮细胞(武汉大学物种保存中心);丹参酮注射液(雅安三九药业有限公司,批号020724)。方法:①入选者均抽取静脉血4.0～5.0mL,采用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法和塑料吸附法分离单个核细胞,37℃孵育40～60min后收集贴壁细胞即为外周血单核细胞。瑞氏染色后镜下观察细胞形态符合单核细胞特征,锥虫蓝拒染试验测定活细胞数>95%。将新鲜分离的外周血单核细胞重悬,按4×107 L-1接种到24孔培养板上,每份标本设3孔:第1孔为基础分泌孔,第2孔为血管紧张素Ⅱ刺激孔,第3孔为丹参酮预处理孔。在血管紧张素Ⅱ刺激前先将外周血单核细胞与丹参酮共同孵育30min。血管紧张素Ⅱ、丹参酮终浓度分别为1×10-8mol/L和1×10-8g/L,外周血单核细胞终浓度为2×107 L-1。37℃下置于体积分数为0.05的CO2培养箱内24h,分别收集培养上清和细胞成分。②制备外周血单核细胞悬液,密度调整至2.5×109 L-1。在24孔培养板上用含体积分数为0.1小牛血清的M199培养基培养人脐静脉内皮细胞,待细胞生长至对数增长期后,铺板汇成单层,每孔加入100μL外周血单核细胞悬液,37℃下分别孵育2,4h,去除未黏附细胞,戊二醛固定后计数黏附细胞,高倍镜下每孔计数40个视野,取其平均值。③采用双抗体夹心ELISA法和反转录-聚合酶链技术检测外周血单核细胞培养上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的浓度及其mRNA的表达水平。主要观察指标:①外周血单核细胞黏附活性的变化。②外周血单核细胞培养上清中细胞因子浓度及其mRNA的表达。结果:①孵育2,4h时外周血单核细胞与内皮细胞的黏附数,在基础状态下高血压组和正常对照组基本相似(t=1.153～1.577,P均>0.05);血管紧张素Ⅱ刺激后高血压组明显多于正常对照组(t=3.842～4.536,P均<0.01);丹参酮预处理后两组又降至同一水平(t=0.855～1.702,P均>0.05)。②基础状态时,两组培养上清中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的浓度均较低(t=0.981～1.829,P均>0.05);血管紧张素Ⅱ刺激后,高血压组各细胞因子浓度均明显高于正常对照组(t=2.442～5.075,P<0.01,0.01,0.05);丹参酮预处理后两组各细胞因子浓度均有不同程度降低,但差异无显著性意义(t=1.227～1.940,P均>0.05)。两组外周血单核细胞中各细胞因子mRNA的表达与浓度变化基本相似。结论:①基础状态下原发性高血压患者外周血单核细胞与内皮细胞的黏附数及各炎性细胞因子浓度和mRNA表达处于正常人群水平,经血管紧张素Ⅱ刺激后显著升高,提示原发性高血压患者病程早期外周血单核细胞处于预激活状态。②丹参酮干预可使原发性高血压患者外周血单核细胞的黏附活性与分泌活性降至正常水平,证明丹参酮能够抑制预激活的外周血单核细胞进一步激活,一定程度上可防止动脉粥样硬化的发生。     

原发性胆汁性胆管炎患者外周血单核细胞极化分析

目的探讨原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者外周血单核细胞极化情况及其临床意义。方法收集PBC患者33例和健康人对照28例。用流式细胞术检测外周血单核细胞M1和M2比例及M2/M1比值,并在PBC患者与健康人对照间以及早期和晚期PBC患者之间进行比较。结果 PBC患者外周血单核细胞M2比例明显高于健康人对照(P=0.001),而M1比例及M2/M1比值在疾病组和健康人对照组之间差异无统计学意义(P0.05)。早期PBC患者外周血单核细胞M1比例明显高于中晚期PBC患者(P0.001),M2比例和M2/M1比值则明显低于中晚期患者(P0.001)。在PBC患者中,外周血单核细胞M1比例与碱性磷酸酶(ALP)和总胆汁酸(TBA)水平间相关性有统计学意义(rs=0.565、-0.394,P0.05),与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、直接胆红素(D-Bil)和,γ-谷氨酰基转移酶(GGT)之间无相关性; M2只与ALP呈正相关,相关性有统计学意义(rs=0.588,P0.001); M2/M1比值与ALP、D-Bil、GGT及TBA间相关性均有统计学意义(P0.05)。结论 PBC发生发展过程中,单核巨噬细胞的极化状态动态变化,早期炎症阶段主要向M1极化,中晚期纤维化、硬化阶段主要向M2极化。     

外周血采集单核细胞的护理

恶性肿瘤对人类健康的严重危害日益受到人们的关注,世界各国均对该类疾病的防治作了大量卓有成效的工作,取得了显著的进展。在癌症治疗学中,生物疗法是继手术疗法、放疗和化疗之后的一种很有前途的新疗法,尤其是近十余年来,随着肿瘤分子生物学研究的不断深入,昔日的不治之症正逐渐成为可防可治的疾病,攻克癌症将为期不远[1]。肿瘤生物治疗的一个分枝过继性免疫治疗是将病人自体或异体的抗瘤细胞过继输入体内的一种疗法,患者自体的抗瘤细胞往往抗瘤能力较差,需要在体外进行扩增和强化而达到一定的数量和一定的抗瘤活性,再回输到病人体内达到…     

外周血单核细胞及其亚群数量在吉兰-巴雷综合征 病程中的变化及临床意义

目的：分析吉兰-巴雷综合征（GBS）患者的外周血单核细胞及其亚群数量在病程不同阶段的变化规律及其临床意义。方法：收集118例GBS首次发病患者,给予正规GBS治疗并随访18个月,根据随访期GBS的复发及再次入院治疗情况,最终分组为急性期组118例,缓解期组36例,复发期组6例次;健康志愿者96例纳入对照组。每次入院时,均进行休斯功能分级量表评分（HFGS）及医学研究理事会量表（MRC）评分;采集外周血进行血常规检验及流式细胞术分析;分析各组外周血单核细胞亚群变化及其与MRC总和评分相关性。结果：急性期组及复发期组单核细胞计数高于对照组（均P<0.05）。急性期组和复发期组外周血经典型单核细胞（c-Mo）较其他2组明显增加（均P<0.05）;对照组和缓解期组,外周血非经典型单核细胞（n-Mo）较其他2组明显增加（均P<0.05）。在急性期组,c-Mo数量与MRC总和评分呈负相关（P<0.05）。结论：外周血单核细胞及其亚群在GBS病程不同阶段具有特征性的变化,其中c-Mo升高与疾病严重程度呈正相关性。     

对称动态动脉硬化指数对原发性高血压患者早期肾功能损害的预测

目的：探讨对称动态动脉硬化指数（S-AASI）对原发性高血压患者早期肾功能损害的预测价值。方法：选择原发性高血压患者300例,测量患者的动态血压参数并计算S-AASI,检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）/肌酐（NAG/Cr）,化验血清肌酐并计算Ccr。根据S-AASI的四分位数将受试者分为A、B、C、D 4组。比较4组患者各参数的差别,并行S-AASI与尿NAG/Cr等参数的多元相关回归分析。结果：①4组的年龄随S-AASI水平的增高依次增高（P〈0.05）。A、B组高血压病程差异无统计学意义（P〉0.05）,B、C、D组高血压病程依次延长,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。②4组之间的血清肌酐比较差异无统计学意义（P〉0.05）,但4组尿NAG/Cr及微量蛋白尿阳性率均依次增高,而Ccr依次降低,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。③多元线性回归分析显示S-AASI与尿NAG/Cr（β=0.470,P〈0.001）、Ccr（β=-0.322,P〈0.05）具有相关性。尿NAG/Cr每增加1 IU/g,S-AASI相应增加0.005;Ccr每降低1 ml/（min.1.73 m2）,S-AASI相应增加0.003。结论：S-AASI可作为高血压早期肾功能损害的预测指标。     

肥胖与高血压并早期动脉粥样硬化临床分析

目的观察肥胖儿童高血压,动脉粥样硬化前期的临床特点。方法对38例患有高血压的肥胖儿童进行血脂测定,并通过B超测量外周血管(肱动脉)反应性血管内径变化。结果38例肥胖儿童中18例为临界高血压(占47.4%),10例为高血压(占2.6%),25例血脂在临界高值(占65.8%),13例为高血脂(占34.2%),反应性充血前后肱动脉内径扩张百分比平均9.21%。结论儿童高血压与体重、身高及体重指数呈正相关,同时肥胖儿童存在动脉粥样硬化前期的血管病变。     

高血压患者外周血单核细胞分泌TNF-α、IL-6水平及洛伐他汀干预研究

目的观察原发性高血压患者外周血单核细胞(PBMC)肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)分泌水平及洛伐他汀干预后TNF-α、IL-6分泌水平的变化。方法原发性高血压患者(观察组)86例,健康对照组82例,体外培养PBMC,酶联免疫吸附双抗体夹心法检测培养上清液PBMC的自发分泌、脂多糖(LPS)刺激分泌、洛伐他汀干预LPS刺激分泌TNF-α、IL-6水平,并与正常对照组比较。结果①观察组PBMC分泌TNF-α、IL-6水平高于对照组(P<0.001)。②LPS刺激后两组TNF-α、IL-6均较自发分泌时明显升高(P<0.001),与正常对照组相比,观察组LPS刺激PBMC分泌TNF-α、IL-6增加(P<0.001)。③洛伐他汀干预后,两组均明显较LPS刺激和自发分泌时的TNF-α、IL-6降低(P<0.001)。结论炎症可能参与原发性高血压的发生发展,洛伐他汀可以减轻其炎症反应。     

原发性高血压及糖尿病患者动脉硬化指数检测的意义

目的：比较单纯高血压与合并高脂血症和冠心病、脑血管疾病高血压患者及单纯糖尿病与糖尿病伴高血压患者问动脉硬化指数差异，并与健康者进行比较，同时分析影响动脉硬化指数的因素。方法：①选择2004-04／2004—09解放军总医院门诊内科患者226例。按照患者的诊断结果将其分为5组：单纯高血压组51例（男25例，女26例），高血压伴高脂血症组53例（男23例，女30例），高血压伴冠心病和／或脑血管病组53例（男22例，女31例），单纯糖尿病组21例（男14例，女7例），糖尿病伴高血压组48例（男27例，女21例）。选择同期本院健康体检者50人为健康对照组（男34例，女16例）。均对检测项目知情同意。②采用Cardio Vision MS2000动脉硬化测量仪在上午8：00／11：00检测受试对象的动脉硬化指数、血压、脉压和心率。受试者安静休息5～10min，坐位取右上臂测量，由指定的专业人员操作，测量3次，取其平均值作为最后的测定结果。并测量受试对象的身高、体质量，记录一般情况。（3）所有参数经正态性检验，动脉硬化指数不符合正态分布，余参数均为正态性分布。动脉硬化指数经倒数转换，即动脉硬化指数的倒数，转变为正态分布。采用t检验进行组间比较，Pearson相关系数进行相关分析。结果：单纯高血压患者51例，高血压伴高血脂症患者53例，高血压伴冠心病和／或脑血管病患者53例，单纯糖尿病患者21例，糖尿病伴高血压患者48例，健康体检者50人均进入结果分析。①高血压伴冠心病和／或脑血管病组和糖尿病伴高血压组患者的动脉硬化指数明显高于健康对照组（P〈0．01）。高血压组、高血压伴高脂血症组以及糖尿病组的动脉硬化指数与健康对照组比较，差异不明显（P〉0．05）。②动脉硬化指数的倒数与年龄、收缩压和脉压呈显著负相关（r=-0，534，-0，544，-0．768，P〈0．01）；与舒张压呈显著正相关（r=0.185，P〈0．01），与体质量指数和心率无明显相关性（r=-0.011，0，088，P〉0.05）。结论：①动脉硬化指数越高，高血压患者合并冠心病、脑血管疾病的可能性越大。②糖尿病合并高血压可明显促进动脉硬化的发展。（3）年龄、收缩压、脉压、舒张压大小与动脉硬化指数有关。     

Valsartan reduces interleukin-1beta secretion by peripheral blood mononuclear cells in patients with essential hypertension

BACKGROUND: Chronic low-grade inflammation response may contribute to the pathology of essential hypertension. Angiotensin II (Ang II) may be partly responsible for this process. Our early studies showed that individuals with essential hypertension had increased interleukin-1beta (IL-1beta) secretion by peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). In this study, we investigated whether treatment with valsartan, an angiotensin receptor blocker, lowered IL-1beta secretion by PBMCs in patients with essential hypertension. METHODS: Twenty-four patients with essential hypertension were randomized to treatment with valsartan (80 mg/day, group B) or matching routine therapy group (group A) for 2 weeks. PBMCs were isolated by gradient centrifugation. IL-1beta concentrations in supernatant from PBMCs were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: Compared with routine therapy group, patients treated with valsartan had decreased secretion of IL-1beta in PBMCs after stimulated by lipopolysaccharide (2857+/-643 vs. 2146+/-508 pg/ml, P<0.05). CONCLUSIONS: We suggest a direct anti-inflammatory effect of valsartan and a pro-inflammatory effect of Ang II in patients with essential hypertension.     

肿瘤和高血压患者外周血单个核细胞端粒酶表达及临床意义初探

目的　探讨肿瘤和高血压患者外周血单个核细胞端粒酶活性表达。方法　端粒重复序列扩增 微孔板杂交法测定6 2例肿瘤和高血压患者及 38例正常对照组外周血单个核细胞端粒酶表达。结果　肿瘤组和高血压组外周血单个核细胞端粒酶活性比对照组明显增高 (P <0 .0 1)。结论　检测外周血单个核细胞端粒酶的活性 ,发现外周血单个核细胞端粒酶的活性与肿瘤、高血压有关。因而检测外周血单个核细胞端粒酶活性 ,对肿瘤、高血压的诊断、治疗有一定临床价值。     

Blood redistribution between peripheral areas in patients with stage II essential hypertension during treatment with anapriline

Impedance plethysmography was used to examine 38 patients (27 men and 11 women) with stage II essential hypertension according to the WHO classification. The patients' age ranged from 31 to 60 years (6.3 +/- 1.08 on the average), with the disease lasting from 1 to 16 years. It has been established that administration of propranolol at the daily dose of 120 to 160 mg for 10 to 12 days produces a varying effect on the cardiac output (CO) and peripheral blood supply depending on their initial magnitudes. In the majority of patients with the hyper- and eukinetic versions, the CO and peripheral blood supply decrease in all the areas examined (in the abdominal cavity, leg, finger and head) whereas in patients with the hypokinetic version, they rise. The relatively normal regional blood supply drops whereas in the majority of patients it increases provided it was at a lower level before. Blood redistribution ameliorates the blood supply to the areas marked by a low initial level but makes it worse in the areas with a relatively normal magnitude. The peripheral blood supply gets deteriorated in the majority of patients. In contract to the arterial blood supply, the specific blood volume that primarily characterizes the amount of the venous blood in the given area undergoes redistribution in the peripheral areas in the majority of propranolol-treated patients with all the types of hemodynamics. The pattern of its alterations in the chest and, in the majority of patients, in the abdominal cavity is always related to the initial level.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)     

自体外周血单个核细胞血管腔内途径移植治疗下肢缺血性疾病的研究

目的评价动员后自体外周血单个核细胞(PBMNCs)经血管腔内途径移植治疗下肢缺血性疾病的临床疗效及影响因素。方法确诊严重的动脉硬化闭塞症(ASO)患者38例、糖尿病足(DMF)65例和血栓闭塞性脉管炎(TAO)2例,分别给予粒细胞集落刺激因子(G-CSF)300μg肌肉注射,每日2次。第3天时采集和分离PBMNCs,配成单个核细胞混悬液。经皮微球囊扩张狭窄动脉,同时将分离的PBMNCs通过导管腔内注入缺血部位。观察12个月,进行各项指标综合评估。结果PBMNCs移植后,患肢冷感、间歇性跛行等临床症状不同程度好转。跛行距离由入院时的(24.0±14.8)m逐渐提高到12个月时的(642.0±224.1)m,表现为持续延长(P<0.01)。溃疡于移植后1~3个月逐渐愈合。踝肱指数(ABI)短期明显提升,由入院时的0.60±0.07提高到1个月的0.84±0.11,12个月时略有下降,为0.70±0.07,但仍高于入院时的水平。移植前后未出现任何并发症和不良反应。结论采用动员后的PBMNCs经血管腔内途径移植治疗下肢缺血性疾病,方法简单、安全、有效,值得进一步深入研究。     

红细胞在外周血单个核细胞活化过程中对细胞因子分泌的影响

目的 通过检测外周血单个核细胞（PBMC）培养液中细胞因子IFN-γ、TNF—α、IL-1β的浓度，观察和分析红细胞在抗CD3单克隆抗体（CD3McAb）诱导PBMC活化过程中对细胞因子分泌的影响，为临床在分离PBMC进行自体淋巴细胞免疫治疗的应用过程中取舍红细胞数量多少为宜提供实验依据。方法 获取健康成年人PBMC，采用人工方法加入不同数量的红细胞，模拟在制备PBMC过程中残余的红细胞数量，然后根据红细胞数量与PBMC中细胞数量之比的不同组成3个不同的实验组（RBC／PBMc=2：1、10：1、50：13组），同时附设单独PBMC为对照组。利用CD3McAb分别对以上4组细胞进行激活，然后检测各组细胞培养液中细胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-1β的含量。结果 随着红细胞加入数量的增加，细胞培养液中各细胞因子的浓度有不同程度的上升，具有统计学意义，并且与加入的红细胞数量呈正相关关系。结论当RBC／PBMC≤50：1时，红细胞在CD3McAb诱导PBMC活化过程中对细胞因子IFN-γ，TNF—α、IL-1β的分泌具有一定的促进作用。     

Interleukin-2 production in peripheral blood mononuclear cells of patients with gastrointestinal tumors

Peripheral blood mononuclear cells of patients with different tumors of the gastrointestinal tract (esophagus, stomach, colon, rectum), with Crohn's disease and healthy controls were analyzed for their capacity to produce mitogen induced interleukin-2 (I1-2). Tumor patients could be divided into two groups, one group exhibiting a nearly normal and a second group showing a significantly decreased production of I1-2. Most of the patients with a carcinoma of the colon were found in the low-producer group. Patients with Crohn's disease did not significantly differ from the relevant controls. Tumor patients with proven metastasis produced less I1-2 as compared to those with localized disease although the differences are not significant. When I1-2 containing supernatants of patients with tumors were additionally analyzed for the presence of prostaglandin E2, an inverse relationship could be demonstrated. Supernatants showing a suppressed activity of I1-2 exhibited increased amounts of PGE2, indicating a modulation of I1-2 production by prostaglandin E2.     

外周血单个核细胞来源树突状细胞分泌细胞因子在过敏性紫癜急性期的变化

目的:观察外周血单个核细胞来源的树突状细胞分泌白细胞介素水平在过敏性紫癜急性期的变化,分析其与Th亚群平衡的相关性。方法:实验于2006-10/2007-12在青岛大学医学院附属医院儿科研究所完成。①实验对象:取急性期过敏性紫癜患儿外周静脉血28份作为过敏性紫癜组,平均年龄7.53岁;以门诊体检的健康同龄儿童外周静脉血18份作为对照组。儿童家属均知情同意。②实验方法:采血2.0～3.0mL/份,肝素抗凝,离心移取血浆1mL冻存备测。采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞,调整细胞悬液浓度为2×109L-1,接种于24孔板向树突状细胞进行诱导培养。每孔加入含终浓度1000u/mL重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、500u/mL重组人白细胞介素4的RPMI-1640完全培养液1mL,隔日添加1/2首次浓度的上述两种细胞因子,半量换液。培养至第6天,每孔加入重组人肿瘤坏死因子α至终浓度200u/mL。③实验评估:倒置显微镜观察树突状细胞的生长情况,以流式细胞仪检测成熟树突状细胞特异性表面分子CD83的表达率。采用ELISA法检测血浆干扰素γ、白细胞介素4的水平及培养上清中的白细胞介素10,12,18水平。结果:①树突状细胞体外诱导培养过程的形态学观察:外周血单个核细胞贴壁3h后获得黏附细胞,加入细胞因子24h后可见悬浮细胞增多,并呈细胞聚集现象,培养至第8天可见到大量具有毛刺状或根须状突起的悬浮细胞,即为树突状细胞。②树突状细胞的表型鉴定:过敏性紫癜组及对照组树突状细胞表面分子CD83均呈高表达,表达率分别为(69.29±16.20)%,(69.26±18.77)%。③Th亚群变化:与对照组比较,过敏性紫癜组白细胞介素4水平明显升高(t’=5.09,P<0.01),干扰素γ、干扰素γ/白细胞介素4水平均明显降低(t=4.26,P<0.01;t’=7.98,P<0.01)。④树突状细胞分泌细胞因子的水平:与对照组比较,过敏性紫癜组树突状细胞白细胞介素12水平明显降低(t=2.53,P<0.05),白细胞介素10,18水平均明显升高(t=2.07,P<0.05;t=2.10,P<0.05)。⑤树突状细胞分泌细胞因子水平与Th亚群平衡相关性分析:两组树突状细胞分泌白细胞介素12水平均与干扰素γ水平呈显著正相关(r=0.56～0.62,P均<0.01),与干扰素γ/白细胞介素4值呈正相关(r=0.51～0.52,P<0.01或0.05)。两组白细胞介素10,18水平均与白细胞介素4水平呈显著正相关(r=0.85～0.68,P均<0.01),与干扰素γ/白细胞介素4值呈负相关(r=-0.75～-0.49,P<0.01或0.05)。结论:过敏性紫癜患儿分泌白细胞介素12水平不足,而分泌白细胞介素10,18水平升高,提示过敏性紫癜患儿存在树突状细胞功能紊乱,且与Th1/Th2失衡关系密切。     

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞蛋白组学的初步研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）外周血单个核细胞（PBMC）蛋白质组的变化。方法分别提取14例SLE患者及9例健康献血者的PBMC，采用双向电泳技术分离全蛋白质组，对部分差异的蛋白质点进行离子阱高效液相色谱／质谱分析，测定其肽质量指纹图谱，与互联网蛋白质数据库的数据进行比对。结果获得了较好的双向电泳图像，图像分析显示：1例SLE患者、4例健康献血者PBMC蛋白匹配点为1084个，其中SLE患者高表达及特异表达蛋白点为71个及17个，健康献血者高表达及特异表达蛋白点为45个及20个，与所有实验2-DE图谱逐个比对后，对表达差异重复性高的30个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析，经数据库检索后，鉴定出2个胞浆蛋白质酪氨酸转运核糖核酸合成酶（tyrosyl—tRNA synthetase）和斑联蛋白（zyxin）在SLE患者的PBMC中低表达。结论SLE患者PBMC蛋白组学研究可能为深入研究其发病机制、建立新的诊断指标提供一个良好的平台。