桂皮醛对成骨细胞的增殖及成骨功能的影响

牙周炎和种植体周围炎是牙菌斑引起的发生在牙周支持组织上的慢性感染性炎症,通常可导致牙周组织结构破坏,引起牙和种植体松动脱落.课题组前期研究发现中药肉桂能杀灭牙周可疑致病茵并具有良好的抗炎作用.目的:桂皮醛对成骨细胞的增殖及成骨功能是否具有影响.方法:采用MTT法,测定五种浓度的药物对成骨细胞生长的抑制率,同时,通过对碱性磷酸酶活力、钙含量的测定、茜素红染色显示矿化结节等实验方法考察不同浓度的药物组对成骨细胞功能的影响.结果:1.低浓度的桂皮醛提取液8ms/L,16mg/L组同空白组相对照,其细胞增值水平较高,而在高浓度如128mg/L,64mg/L,32mg/L的稀释比时,成骨细胞的增值则出现一定程度的减弱.2.桂皮醛提取液在稀释比为8mg/L、16mg/L时,与对照组相比,成骨细胞的ALP活性及钙含量有显著增加,成骨细胞的矿化结节数有少量的增加(P相似文献   

桂皮醛对成骨细胞成骨功能及BMP-2mRNA表达的影响

目的:探讨不同浓度桂皮醛液(cinnamaldehyde,CA)对成骨细胞成骨功能及BMP-2表达的影响.方法:以0(对照组)、10、20、40、80、160、320 μg/mL的CA作用于小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14(MC3T3-E1 subelone 14,MC3T3),MTT法检测在CA作用1、3、5d后的增殖情况,分别在3、5、7d检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,以观察6种浓度的CA对成骨细胞成骨功能的影响;荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测BMP-2 mRNA在低浓度组(10、20 μg/ml)CA作用1、3、5d后的表达.采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析.结果:MTT显示,10、20 μg/mL的CA作用于MC3T3后,与空白对照组相比,吸光度值稍有下降但差异不显著(P＞0.05),ALP活性显著提高;RT-qPCR结果显示,10、20 μg/mL的CA促进BMP-2 mRNA的表达(P＜0.05),40、80、160、320 μg/mL的CA可抑制成骨细胞增殖、ALP活性及BMP-2 mRNA的表达(P＜0.05),随着浓度升高,抑制作用更明显.结论:低浓度CA可提高成骨细胞的ALP活性,促进成骨和BMP-2 mRNA表达,其机制可能是通过上调BMP-2基因表达.     

桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞抑制作用的体外研究

目的体外研究中药桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用。方法以3种人口腔鳞状细胞癌细胞株为研究对象,采用噻唑蓝(MTT)比色法观察桂皮醛不同质量浓度、不同作用时间下对各细胞株增殖的影响。应用SPSS 16.0软件对数据进行方差分析。结果与空白对照组相比,256、128、64、32 mg.L-1质量浓度组的桂皮醛对人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖表现出明显抑制作用,且抑制作用随着药物质量浓度的升高而加强,呈现明显的剂量-效应关系。药物作用时间24 h时,作用质量浓度16 mg.L-1时,对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株抑瘤率达到58.33%;作用质量浓度为32 mg.L-1时对KB细胞及人颊黏膜鳞状细胞癌BCaCD885细胞株的抑制率分别为66.08%、76.61%,其抑制率随着药物作用时间的延长而增加。结论桂皮醛对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的抑制作用与质量浓度和作用时间有关,中、高浓度的桂皮醛对3种人口腔鳞状细胞癌细胞增殖均具有明显的抑制作用,在一定程度上肯定了桂皮醛的抗肿瘤作用。     

桂皮醛溶液对牙周炎大鼠龈沟液白细胞介素-1β水平的影响

目的探讨桂皮醛溶液用于大鼠牙周炎局部药物治疗的效果。方法通过丝线结扎双侧上颌第二磨牙和喂饲高糖水建立大鼠实验性牙周炎动物模型。实验动物随机分成1个对照组和3个实验组（T1、T2、T3组）,每组5只。将生理盐水和32、64、128mg/L的桂皮醛溶液分别作为对照组和T1、T2、T3组的牙周冲洗用药,在第1、4、7天对各组大鼠行牙周炎的局部药物治疗。用滤纸条取治疗前（基线期）和治疗后第14天大鼠患牙龈沟液,检测龈沟液量并用酶联免疫吸附法检测白细胞介素（interleukin,IL）-1β浓度。结果牙周局部药物治疗前,4组龈沟液量的差异无统计学意义（F=2.766,P〉0.05）,4组龈沟液IL-1β水平的差异（F=0.250,P〉0.05）无统计学意义。治疗后14d,对照组、T1、T2、T3组龈沟液量分别为（0.496±0.061）、（0.417±0.079）、（0.428±0.109）、（0.308±0.047）μL;龈沟液中IL-1β水平分别为（20.894±5.202）、（20.468±3.199）、（17.770±4.024）、（14.432±5.955）pg/L。同治疗前相比,治疗后各组龈沟液量减少和龈沟液中IL-1β水平降低均有统计学意义,其中T3组降低最为明显（t=18.939,P=0.000;t=6.661,P=0.000）。治疗前后龈沟液量差值在各实验组和对照组之间的差异均有统计学意义;各实验组间两两比较,治疗前后龈沟液量差值在T1组和T2组之间的差异无统计学意义,在T3组和T1组（P=0.001）、T3组和T2组（P=0.015）之间的差异有统计学意义。治疗前后IL-1β水平差值在各组间两两比较的差异均无统计学意义,但差值在T3组与对照组之间的差异最大（P=0.070）。结论浓度为32、64、128mg/L的桂皮醛溶液对大鼠实验性牙周炎均有缓解作用;128mg/L是否为最佳适用浓度尚有待进一步研究证实。     

新型钛合金阳极氧化后对成骨细胞增殖、分化的影响

目的研究新型医用钛合金Ti-24Nb-4Zr-7.9Sn(TNZS)经过阳极氧化(AD)技术处理后对成骨细胞增殖和分化的影响。方法将人成骨样MG63细胞接种于Ti6Al4V、TNZS、AD-TNZS表面,采用MTT法检测成骨细胞的增殖情况,考马斯亮蓝G250染色法检测细胞总蛋白质含量,对硝基苯磷酸盐法检测碱性磷酸酶(ALP)活性。结果人成骨样MG63细胞在Ti6Al4V、TNZS以及AD-TNZS表面均能良好生长,细胞增殖率、细胞总蛋白含量未见明显差异(P>0.05);但培养至4、7d时,AD-TNZS组细胞ALP活性明显高于其他组(P<0.05)。结论阳极氧化处理的TNZS钛合金可促进成骨细胞的分化。     

桂皮醛对大鼠根尖周炎根管中内毒素水平影响的定量研究

目的探讨桂皮醛对大鼠根尖周炎根管中内毒素水平的影响, 为桂皮醛作为根管消毒药提供实验依据。方法用75只Wistar大鼠建立根尖周炎模型,随机分为3组,分别为桂皮醛组、甲醛甲酚组、生理盐水组,每组25只。封药前后分别用显色基质鲎试剂法测内毒素的含量。结果根管中内毒素含量结果显示,桂皮醛和甲醛甲酚组明显下降（P<0.05）,但两组差异无统计学意义（P>0.05）,生理盐水组无明显变化（P>0.05）。结论桂皮醛能有效地降低感染根管中内毒素的含量。     

尼古丁对人成骨细胞生物学性能的影响

目的研究不同浓度尼古丁对人成骨细胞（MG63）生物学性能的影响。方法用含1×10-4 mol·L-1、1×10-3 mol·L-1尼古丁的DMEM高糖培养基体外培养MG63细胞,分别于第3、5、7、10、14天采用MTT比色法检测MG63细胞的增殖力;用PNPP偶氮法测定细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性;用逆转录聚合酶链式反应检测细胞Ⅰ型胶原（COL1）与骨钙素（OCN）基因的表达。结果对照组和1×10-4 mol·L-1尼古丁组ALP的表达在第10天出现峰值。对照组和1×10-4 mol·L-1尼古丁组COL1的表达在第10天出现峰值,1×10-3 mol·L-1尼古丁组COL1的表达在第10天降至最低,在第14天升高。对照组中OCN的表达在第10天达到峰值,1×10-4 mol·L-1尼古丁组OCN的表达持续增高,1×10-3 mol·L-1尼古丁组OCN的表达无明显变化。与对照组相比,尼古丁组对细胞增殖起抑制作用;并降低了细胞ALP活性;对COL1、OCN的基因表达有抑制作用。结论尼古丁通过抑制成骨细胞的ALP活性和COL1的分泌而抑制成骨细胞分化。     

富血小板血浆对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响

目的研究富血小板血浆（PRP）对人成骨样细胞MG63增殖能力的影响,探讨PRP的生物学功能。方法采集健康志愿者的静脉血,两次离心法制备PRP,氯化钙加人凝血酶激活后离心提取PRP萃取液。碱性磷酸酶（ALP）染色检测不同体积分数PRP（0、1%、2%、3%）对MG63分化活性的影响,碘化丙啶（PI）荧光染色观察PRP作用下MG63细胞形态的变化,免疫细胞化学检测PRP对MG63表达转化生长因子-β（TGF-β）的影响,扫描电子显微镜（SEM）观察PRP对MG63在人工骨材料表面生长情况的影响,CCK-8法检测PRP对MG63增殖活性的影响,流式细胞术（FCM）检测经PRP培养后不同时间MG63的细胞周期,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测PRP作用下MG63中Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）mRNA的表达量。结果ALP检测见3%PRP组ALP阳性细胞染色最深,并随体积分数的增加染色强度增加,且PRP组细胞均出现不同程度的脱片现象。PI荧光染色见PRP组细胞核荧光染色较对照组增强。免疫细胞化学检测见3%PRP组TGF-β表达量最高（P＜0.05）。SEM观察：PRP组材料表面MG63密集,生长状态良好。CCK-8法测定细胞增殖活性,显示4.8%PRP组吸光度A450 nm值高于对照组（P＜0.05）。FCM检测表明：PRP组第2天S期细胞百分比高于对照组（P＜0.05）;第10天PRP组G0/G1期细胞百分比高于对照组（P＜0.05）;除第6天外,PRP组G2/M期细胞百分比均高于对照组。RT-PCR结果表明：PRP组MG63的Col-ⅠmRNA表达量较对照组明显上调。结论适宜体积分数的PRP对MG63的增殖、迁移和相关蛋白、基因的表达有促进作用,PRP具有统一、协调细胞生物学行为的作用。     

中药桂皮醛体外抑菌和抗炎活性的研究

目的 检测桂皮醛的体外抗菌及抗炎活性.方法 采用美国临床实验室标准化委员会推荐的液体稀释法将P.gingivali ATCC33277、A.viscosus ATCC15987、F.nucleatum ATCC10593、S.mutans ATCC25175等4种标准菌株配成1×108菌落形成单位/mL和1×106菌落形成单位/mL的细菌悬液,分别检测桂皮醛对其的抑菌浓度.通过大鼠双侧耳廓二甲苯致炎建立肿胀模型,进行桂皮醛对肿胀抑制的体外抗炎活性实验,观察比较大鼠双侧耳廓肿胀抑制厚度以及肿胀抑制率.结果 ①桂皮醛对P.gingivalis及F.nucleatum的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度均为32 μgmL-1,对A.viscosus和S.mutans的抑菌浓度分别是64 μgmL-1和128 μgmL-1.②与对照组相比, 24 h、 48 h后桂皮醛对大鼠耳廓的肿胀抑制率分别为73.77%、 68.42%.结论 桂皮醛对口腔标准致病菌有抑菌活性,有体外抗炎活性.     

促矿化液对大鼠成骨细胞增殖分化的影响

目的比较大鼠成骨细胞在矿化条件与非矿化条件下增殖和分化的过程,评价促矿化液对其生理功能的影响,明确促矿化液加入细胞培养环境的适宜时间。方法取SD大鼠头盖骨做成骨细胞原代培养,将增殖稳定后的第4代细胞分别在矿化条件和非矿化条件下培养,检测其形态、碱性磷酸酶活性、细胞周期等。结果大鼠成骨细胞增殖基本稳定后促矿化液组与无促矿化液组细胞分裂增殖指数相似,但前者碱性磷酸酶活性明显较高且持久。结论成骨细胞增殖基本稳定后加入促矿化液对细胞增殖无影响,但可明显促进细胞矿化功能,是加入促矿化液诱导细胞矿化功能的较好时机。     

Effect of cerium chloride application on fibroblast and osteoblast proliferation and differentiation

ObjectiveThis study investigated effects of cerium-chloride on fibroblast and osteoblast differentiation and proliferation.MethodsMC3T3-E1 cells were plated for an alkaline phosphatase (ALP) activity test. On day 3, CeCl₃-solutions (1, 5 or 10, w/v%) were added. After 10 s, the solutions were aspirated and washed to remove residual CeCl₃. On day 6 ALP activity was determined. Cell activity and proliferation was assessed by thiazolyl blue tetrazolium dye reduction assay (MTT-test) also 3 days after exposure to the CeCl₃-solutions. Calcium deposition by preosteoblastic cells was determined 4 weeks after the exposure of the cells by alizarin red staining. Furthermore, in all experiments the influence of adding rhBMP-2 was tested. Statistical analysis was performed by repeated-measures ANOVA using the post hoc Fisher least significant difference (LSD) test. Statistical significance was set at p < 0.05.ResultsExposure to a Ce-solution of 1% or higher reduced ALP activity significantly. The addition of rhBMP-2 was able to elevate ALP activity above control level. MTT-test showed a significant decrease in cellular activity by 5% Ce or higher. The addition of rhBMP-2 had no positive effect. For human foreskin fibroblasts, exposure to even 10% Ce yielded a significant increase in cellular activity. Ce reduced calcium deposition to a level of below 50% of the control. The addition of rhBMP-2 restored mineral deposition to control levels for all Ce concentrations.ConclusionCeCl₃ had a stimulating effect on fibroblasts but a depressing influence on osteoblasts. However, adding rhBMP-2 could compensate the latter influence.     

半导体激光(GaAlAs)对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的检测半导体激光(GaAlAs)照射对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,探讨半导体激光促进种植体骨结合及治疗种植体周围炎的作用.方法体外培养SD大鼠成骨细胞,分为7组,A组,连续激光200mW,照射lmin;B组,连续激光20mW,照射2min;C组,脉冲激光200mW,照射lmin;D组,脉冲激光200mW,照射2min;E组,连续激光300mW,照射lmin;F组,连续激光300mW,照射2min;G组,不予激光照射作为对照.用四唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测ALP活性,用细胞免疫实验检测细胞外基质中羟脯氨酸浓度,观察细胞胶原蛋白的合成分泌.结果激光照射组与对照组比较,成骨细胞的增殖能力无显著性变化;羟脯氨酸浓度显著升高,除F组外,照射时间2min组(B、D)均较相应能量的lmin组(A、C)升高更为明显(P＜0.05);除F组外,实验组细胞ALP活性均显著增加(P＜0.05),各实验组之间无明显差异(P＞0.05).结论适当能量和时间条件下,半导体激光照射可以促进大鼠成骨细胞的分化成熟,对细胞增殖功能无明显影响.     

Emdogain promotes osteoblast proliferation and differentiation and stimulates osteoprotegerin expression

PURPOSE: The purpose of this study was to investigate the effects of EMD on the growth and differentiation of osteoblastic cells (MC3T3-E1) and on the expression of osteoprotegerin (OPG), a key cytokine that inhibits osteoclastogenesis and osteoclast function. STUDY DESIGN: MC3T3-E1 cells were treated with 100 microg/mL EMD in serum-free medium for 1, 2, 3, 5, and 7 days, or in 2% fetal bovine serum (FBS) for 3 weeks. Cells incubated without EMD served as negative control. At the end of each incubation period, cell numbers were counted and total cellular mRNA was extracted. Northern blot analysis and RT-PCR were performed to determine the mRNA levels of core binding factor alpha (Cbfa1), collagen alpha1 (I), bone sialoprotein (BSP), osteocalcin (OC), insulin-like growth factor I (IGF-I), and OPG. Alkaline phosphatase (ALP) activity was also determined and compared between treatment and control groups. RESULTS: A marked increase in cell numbers was observed in EMD-treated groups from day 2 to day 7 (P < .01). mRNA expression of collagen alpha1 (I), BSP, OC, OPG, and IGF-I were up-regulated in cells treated with EMD. ALP activity was significantly increased by EMD treatment after 3-week culture under differentiating conditions (P < .05). The expression of Cbfa1 was not affected by EMD treatment from day 1 to day 5; the levels were elevated after culturing for 3 weeks in EMD-treated cells. CONCLUSIONS: EMD promotes both proliferation and differentiation of MC3T3-E1 cells and indirectly inhibits osteoclastogenesis and osteoclast function by stimulating the expression of OPG.     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖对小鼠成骨细胞增殖和分化的抑制作用

目的 观察牙髓卟啉单胞菌(Porphyromonas endodontalis,Pe)脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对成骨细胞MC3T3-E1增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和白细胞介素(IL)-6分泌情况的影响,探讨Pe-LPS在成骨细胞增殖与分化过程...     

Effects of fluoride-modified titanium surfaces on osteoblast proliferation and gene expression

PURPOSE: The objective of this study was to test the hypothesis that fluoride-modified titanium surfaces would enhance osteoblast differentiation. Osteoblast growth on a moderately rough etched fluoride-modified titanium surface (alteration in cellular differentiation) was compared to osteoblast growth on the same surface grit-blasted with titanium dioxide. The potential role of nanometer-level alterations on cell shape and subsequent differentiation was then compared. MATERIALS AND METHODS: Human embryonic palatal mesenchymal (HEPM) cultures were incubated on the respective surfaces for 1, 3, and 7 days, followed by analysis for cell proliferation, alkaline phosphatase (ALP) -specific activity, and mRNA steady-state expression for bone-related genes (ALP, type I collagen, osteocalcin, bone sialoprotein [BSP] II, Cbfa1, and osterix) by real-time polymerase chain reaction (PCR). RESULTS: The different surfaces did not alter the mRNA expression for ALP, type I collagen, osterix, osteocalcin, or BSP II. However, Cbfa1 expression on the fluoride-modified titanium surface was significantly higher (P < .001) at 1 week. The number of cells on this surface was 20% lower than the number of cells on the surface TiO2-blasted with 25-microm particles but not significantly different from the number of cells on the surface TiO2-blasted with 125-microm particles. Cells grown on all the titanium surfaces expressed similar levels of ALP activity. CONCLUSIONS: The results indicated that a fluoride-modified surface topography, in synergy with surface roughness, may have a greater influence on the level of expression of Cbfa1 (a key regulator for osteogenesis) than the unmodified titanium surfaces studied.     

LMK-235对牙周膜细胞成骨和成牙本质分化的影响

目的：探讨Ⅱa类组蛋白去乙酰化酶抑制剂LMK?235对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）早期成骨和成牙本质分化的影响。方法通过酶消化法获得hPDLCs,分别用浓度为0、50、100、250、500 nmol/L的LMK?235处理第三代hPDLCs 3 d。MTT法检测hPDLCs的增殖,同时qRT?PCR检测成骨及成牙本质相关因子Runx2、ALP及DMP?1 mRNA的表达水平。结果 MTT结果显示100 nmol/L的LMK?235对hPDLCs增殖具有促进作用。qRT?PCR结果表明100 nmol/L处理组Runx2 mRNA的表达水平为对照组的1.77倍（P＜0.05）;而ALP mRNA的表达水平在实验组均高于对照组（P＜0.05）,同时100 nmol/L处理组表达量最高;DMP?1 mRNA的表达水平在50 nmol/L及100 nmol/L组较对照组升高（P＜0.05）。结论浓度为100 nmol/L的Ⅱa类组蛋白去乙酰化酶抑制剂LMK?235促进hPDLCs增殖,并通过上调Runx2、ALP、DMP?1等成骨及成牙本质相关因子mRNA表达来促进hPDLCs早期成骨及成牙本质分化。