鼠疫F1-V重组蛋白疫苗滴鼻免疫应答效果的研究

目的 以重组霍乱毒素B亚单位（rCT-B）为鼠疫F1-V重组蛋白的佐剂制备黏膜疫苗,观察小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答效果。方法以制备的鼠疫黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠4次免疫后,采用间接ELISA检测血清特异性抗F1-V的IgG和IgA抗体及抗体亚型分类,检测鼻咽喉、肺、小肠及阴道灌洗液中特异性抗F1-V的黏膜分泌型IgA;采用流式细胞术检测鼻相关淋巴组织淋巴细胞、脾淋巴细胞、肠系膜淋巴结及小肠PP结T淋巴细胞表型的变化。结果以rCT-B为佐剂的鼠疫F1-V重组蛋白黏膜疫苗滴鼻免疫后,能够诱导血清中IgG、IgA抗体比正常对照组显著升高（P〈0．01）,同时诱导鼻咽、肺、小肠和阴道内特异性黏膜抗体升高,尤其是肺和生殖道冲冼液内抗体升高极为显著（P〈0．01）。与单纯的F1-V组相比,不同剂量比例疫苗组都能诱导较高、较快的血清IgG、IgA和黏膜sIgA,其中1：2疫苗组能诱导更强的系统免疫和黏膜免疫,但是相比之下,5：1疫苗组是最合适的免疫剂量。结论rCT-B佐剂不仅能提高鼠疫F1-V黏膜疫苗的系统全身免疫应答,还能促进诱导呼吸道、消化道和生殖道等局部黏膜sIgA抗体,增强局部免疫应答,提示rCT-B佐剂能显著提高鼠疫感染的免疫应答作用,这为下一步疫苗的免疫保护评价奠定了基础。     

不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫效果的研究

目的 研究不同佐剂与鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原滴鼻免疫Balb/c小鼠,观察机体产生体液免疫和局部粘膜免疫反应的效果,为发展黏膜疫苗提供理论基础.方法 鼠疫F1-V融合重组蛋白抗原按比例分别与PorB(2类外膜蛋白)重组蛋白、蛋白体佐剂制备黏膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠3次,取尾静脉血,采用ELISA检测血清IgG及抗体亚型分类,并检测鼻咽、肺、小肠及阴道灌洗液sIsA;采用FAC检测脾淋巴细胞表型的变化.结果 PorB重组蛋白佐剂疫苗组和蛋白体佐剂疫苗组较无佐剂组体液免疫抗体水平高、蛋白体佐剂疫苗组好于PorB重组蛋白佐剂疫苗组,但无显著性差异.结论 PorB重组蛋白佐剂疫苗和蛋白体佐剂疫苗均能诱导较强的系统免疫和黏膜免疫应答,且PorB重组蛋白佐剂疫苗免疫效果可与蛋白体佐剂疫苗相媲美,可进一步论证是否可用PorB重组蛋白佐剂替代蛋白体佐剂,这为鼠疫粘膜疫苗的研制奠定了基础.     

高致病性人禽流感H5N1疫苗滴鼻免疫应答效果的初步研究

目的 通过高致病性人禽流感H5N1全病毒-MF59佐剂疫苗滴鼻免疫Balb/c小鼠,评价该疫苗所诱导的系统免疫与黏膜免疫应答效果.方法 以不同剂量抗原按比例与MF59佐剂配伍制成粘膜疫苗,滴鼻免疫Balb/c小鼠,二免2周采血检测血清IgG、IgM效价及血清中HAI(HA inhibitor)的中和抗体效价,同时收集鼻、肺灌洗液,检测其lgG和slgA抗体效价.结果 H5NI+MF59组血清抗体效价较H5NI组有显著升高(P＜0.01);在各剂量组中,随着剂量的增加抗体效价呈上升趋势.12μg腭后抗体效价呈下降趋势,以HSNI+MF59(12μg)组效价最高;肺鼻灌洗液中,均可检测到特异性分泌型IrA、IsG,其中特异性分泌型IgA效价略高于IgG;抗体亚型的分布以IgG1、IgG2b为主.结论 灭活高致病性禽流感全病毒H5N1在佐剂MF59作用下可诱导机体产生体液免疫应答,同时还可以在黏膜局部产生特异性分泌型IgA、IsG,为高致病人禽流感病毒I-15N1黏膜疫苗的研制奠定了基础.     

鼠疫组分疫苗诱导小鼠体液免疫应答研究

目的通过检测鼠疫组分疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答,对其免疫原性进行评价。方法将小鼠随机分成4个实验组,免疫后5周内眦采血,检测血清中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体;充分暴露气管,沿气管上端剪一楔形口,用PBS冲洗肺泡制备肺冲洗液,检测肺冲洗液中抗F1抗原和rv抗原IgG及IgA抗体。结果血清中可产生较高效价的抗F1抗原和rV抗原IgG抗体以及较低效价的抗F1抗原IgA抗体。肺冲洗液中可检测到抗F1抗原和rV抗原的IgG抗体,但无特异性IgA产生。结论鼠疫组分疫苗能诱导小鼠产生较强的血清抗体应答,肺冲洗液可检测到一定的IgG抗体,该疫苗有希望成为我国新一代鼠疫疫苗。     

鼠疫耶尔森菌重组质粒pVAX1/Fl-V的构建及其免疫效果的研究

目的获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组真核表达质粒pVAX1／F1-V，并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌Fl和V编码基因，分别与pGEM-T连接测序，构建pVAX1／F1-V融合重组质粒，转染Cos-7细胞，用Western blot方法鉴定目的蛋白的表达，重组质粒pVAXI／F1．V加GM．CSF佐剂免疫BALB／c小鼠，观察免疫效果，400个半数致死量（uk）强毒鼠疫菌皮下攻毒观察保护率。结果pVAX1／F1-V在Cos-7细胞中表达，免疫鼠体内产生特异性抗体，通过抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定表明所构建DNA疫苗以诱发TH1型免疫为主，攻毒保护率达60％。结论成功构建F1-V融合蛋白真核表达载体，具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力，对强毒鼠疫菌皮下攻毒有一定的保护效力，为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。     

重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位疫苗鼻腔免疫的实验研究

目的:探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果。方法:以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠。末次免疫7 d后,收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液,用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体。结果:rUreB鼻腔免疫后各实验组血清特异性IgG及各黏膜冲洗液中特异性IgA的水平均明显增高,与对照组相比较差异显著(P<0.01)。20μg剂量组与10μg剂量组相比较,仅血清特异性IgG水平增高,其它黏膜特异性IgA的水平未见增高。大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂效果较霍乱毒素B亚单位(CTB)强,卡泊波可增强鼻腔接种疫苗在胃黏膜洗液中的抗体应答水平。结论:CTB、LTB、卡泊波均可作为rUreB鼻腔黏膜接种的佐剂。HprUreB鼻黏膜接种,不仅可诱导血清特异性抗体反应,而且能引起多个黏膜部位的免疫应答,是一种方便、有效、廉价的免疫途径。     

空肠弯曲菌PEB1-LTB DNA疫苗构建及其对小鼠免疫保护性的研究

目的:研究粘膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)辅助的空肠弯曲菌(C.jejuni)外膜蛋白PEB1基因重组DNA疫苗诱导小鼠免疫应答水平。方法:构建pcDNA3.1(-)-PEB1-LTB真核重组表达载体,转染Hela细胞,Westernblot鉴定蛋白表达。滴鼻免疫BALB/c小鼠,末次免疫后2周,测定小鼠血清中IgG、IgA及气管、小肠粘膜冲洗液sIgA抗体;脾细胞培养上清中IFN-γ、IL-4水平。末次免疫后4周,采用空肠弯曲菌重复攻击的方式进行灌胃攻击,攻击后,根据动物疾病指数评价疫苗临床保护率。结果:构建的重组表达质粒能在Hela细胞内表达,重组蛋白。疫苗免疫小鼠后,不仅诱导了高水平血清IgG、IgA抗体,而且诱导了高水平粘膜sIgA抗体。其诱导的特异性免疫应答能有效保护免疫后小鼠免遭空肠弯曲菌的感染攻击。结论:构建的DNA疫苗经粘膜免疫能诱导小鼠产生较高水平的特异性免疫应答,能有效预防空肠弯曲菌感染。     

HIV-1CN54 DNA疫苗滴鼻免疫小鼠诱发系统和黏膜免疫应答

目的：探讨重组痘苗病毒rVVsyngp120或rVVmCN54gp120候选疫苗是否增强HIV-1CN54合成gp120基因(syngp120)DNA疫苗的免疫原性。方法：第0、7、14、21天用DNA疫苗滴鼻免疫小鼠,第28、35、42天再滴鼻接种rVVsyngp120或rVVmCN54gp120。体外测脾和肠系膜淋巴结(MLN)淋巴细胞增殖应答与CD8^ CTL应答。测血清和黏膜洗液特异的IgG和IgA,并测其是否中和实验室适应株HIV-1SF33。结果：单纯DNA免疫后,脾和MLN淋巴细胞在体外发生增殖应答和CTL应答,且测出血清特异的IgG和黏膜洗液特异的IgA。重组痘苗病毒末次免疫后第2周(第56天),发现rVVmCN54gp120增强MLN淋巴细胞增殖应答和CTL应答,脾CTL应答也增强。rVVsyngp120则增强MLN CTL应答。同时发现：2组重组痘苗病毒免疫的动物其血清中特异IgG抗体滴度均有所增高,但黏膜(粪便和阴道)洗液特异IgA抗体滴度却未增高,未测出血清特异IgA和黏膜洗液特异IgG。免疫血清可中和HIV-1SF33,而阴道洗液却不能。结论：单纯DNA疫苗滴鼻免疫可诱发较弱的系统和黏膜体液免疫与细胞免疫,但维持时间短。重组痘苗病毒主要增强局部黏膜的细胞免疫应答,且稍增强系统体液免疫应答,未增强黏膜的IgA应答。免疫血清有中和作用。     

不同免疫途径对chitosan-DNA疫苗诱导CVB3特异性免疫应答的影响及其意义

目的：确定新型chitosan-DNA疫苗的有效免疫途径。方法：将chitosan-pcDN3-VPI疫分别苗以肌注、口服、滴鼻3种免疫方式免疫Balb/c小鼠；以ELISA检测免疫小鼠血清中IgG、IgM、、IgA，评估其特异性体液免疫应答；以特异性淋巴细胞增殖反应和CTL活性反映其诱导细胞免疫；以5LD50致死剂量CVB3攻击免疫小鼠，评价不同免疫途径的免疫保护效果。结果：①在诱导CVB3特异性体液免疫方面：chitosan-pcDNA3-VPI疫苗肌注组诱生了高水平IgM和IgG，但未能诱生黏膜IgA；口服免疫组仅诱生低水平的黏膜IgA，未能诱生特异性IgM和IgG；滴鼻组可诱生低水平的I埘及高水平的IgG和黏膜IgA。②在诱导CVB3特异性细胞免疫方面：仅滴鼻组诱导了较高水平的淋巴细胞特异性增殖反应和CTL活性；口服组的淋巴细胞增殖活性和CTL活性稍弱；肌注组几乎不能诱导特异性细胞免疫应答。③免疫保护作用：滴鼻组可保护33．3％小鼠长期存活；口服组仅达到16．7％的保护率；肌注组无保护作用。结论：滴鼻免疫途径可能是chitosan-pcDNA3-VPI基因疫苗最合适的诱导全面免疫应答的免疫途径。     

口服鼠疫F1-V重组融合基因DNA活菌疫苗的构建及免疫原性研究

目的 构建携带鼠疫耶尔森菌F1-V融合基因的重组减毒沙门菌苗,口服免疫Balb/c小鼠检测其免疫原性,为口服鼠疫活载体DNA疫苗研究打下基础.方法 将F1-V融合基因克隆到真核表达载体asd-pVAX1,进一步依次将重组质粒转化减毒沙门菌X3730、X4550得到重组沙门菌X4550(asd-pVAX1/F1-V),提取重组质粒转染COS-7细胞并做免疫组化和Western-blot检测F1-V融合蛋白在细胞中的表达.以1×109CFU/只的剂量3次口服免疫Balb/c小鼠,ELISA方法检测血清中抗体水平.结果 构建的重组减毒沙门菌转染COS-7细胞后,免疫组化和Western-blot试验证明F1-V融合蛋白在细胞中得到了瞬时表达,ELISA检测到免疫小鼠血清有特异性抗体IgG产生.结论 构建的重组沙门菌能运送DNA疫苗到体内并成功释放质粒刺激机体产生特异性免疫应答,为口服鼠疫活载体DNA疫苗的黏膜免疫研究打下了基础.     

EHF疫苗不同途径免疫后血清及黏膜抗体应答情况

目的探讨EHF疫苗经不同剂量和途径免疫后血清IgG及黏膜IgA产生情况,以探讨合适的免疫剂量和接种途径。方法以不同剂量EHF双价灭活疫苗分别经皮下和灌胃免疫小鼠,共3次（第0、5、10天）,末次接种后5d收集血清和小肠冲洗液,用间接免疫荧光法（IFA）检测血清EHF IgG抗体和小肠冲洗液IgA抗体。结果皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,灌胃免疫未见抗体产生,1．4 TCID50的EHF疫苗剂量在皮下注射组血清IgG和小肠冲洗液IgA有100％阳性率。结论EHF疫苗皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,1．4 TCID50的剂量为较佳剂量。     

鼠疫菌重组质粒pcDNATE/F1-V的构建及其免疫效果的研究

目的 获得含有鼠疫F1和V抗原编码基因的重组质粒pcDNATE／E1-V,并测定其诱导特异性免疫应答的能力。方法PCR扩增鼠疫菌F1和V编码基因,分别与pGEM-T连接测序,构建pcDNATE／F1-V融合重组质粒,转染COS-7细胞,用Western blot方法鉴定目的蛋白的表达,重组质粒pcDNATE／E1-V加集落刺激因子(GM-CSF)免疫Balb／c小鼠,观察免疫效果。结果pcDNATE／F11-V在COS-7细胞中表达,免疫鼠体内产生特异性抗体,抗体亚型分析、细胞因子等指标的测定结果表明所构建DNA疫苗以诱发Th1型免疫为主。结论成功构建重组真核表达质粒pcDNATE／F1-V,其具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力,为鼠疫菌新型疫苗研制奠定了基础。     

暴露N端对趋化因子LTN黏膜佐剂作用的影响

我们前期构建了编码CVB3结构蛋白VP1的真核表达质粒(pVP1),通过滴鼻免疫诱导了一定水平的细胞和体液免疫应答。为了进一步增强其免疫效果,我们在该黏膜疫苗中引入新型黏膜佐剂LTN,发现当两种质粒共免疫时可显著增强pVP1诱导的CVB3特异性血清IgG和黏膜IgA水平,促进脾脏及黏膜局部IFN-γ+T细胞产生,显著减轻CVB3感染小鼠心肌病理损伤。随后我们对该疫苗体系进行了优化,使用双顺反子形式将编码VP1和LTN的基因构建在同一质粒上,通过滴鼻免疫小鼠后同样获得了免疫增强作用;当尝试将LTN N端融合至VP1蛋白,以该融合质粒pVP1-LTN滴鼻免疫小鼠后发现其增强免疫应答的能力显著下降;为排除融合蛋白空间构象改变及空间位阻对LTN佐剂功能的影响,我们在蛋白连接处引入柔性接头肽段(G4S)3,构建了融合质粒pVP1-IRES-LTN,发现该疫苗增强全身及黏膜局部特异性抗体细胞免疫应答的能力也非常有限,与pVP1-LTN相比并无明显差异,因此不能有效清除心肌病毒和减轻心肌损伤,提示融合蛋白的空间位阻或构像改变并非是影响LTN佐剂效应的关键因素,而暴露的LTN N端对其增强全身及黏膜局部免疫应答强度、提高心肌炎的免疫保护作用十分关键。     

汉坦病毒经不同途径黏膜免疫效果研究

目的 以大肠埃希菌不耐热肠毒素8亚单位为佐剂研究汉坦病毒经不同黏膜途径免疫的效果.方法 以乳糖为诱导剂,在大肠埃希菌表达不耐热肠毒素B亚单位(LTB),Ni2+亲和层析进行纯化.以灭活汉坦病毒84Fli株为疫苗,LTB为佐剂,分别采用滴鼻、口服、经阴道3种黏膜途径接种C57BL/6小鼠.ELISA检测血清中特异IgG和阴道冲洗液中特异IgA.结果 免疫印迹和神经节苷脂结合活性研究,证实了LTB的表达.经滴鼻、口服、阴道免疫,均可诱导分泌型IgA抗体和血清IgG抗体反应,不同途径接种组间差异无统计学意义.结论 以LTB为佐剂的灭活汉坦病毒通过3种黏膜途径均能产生抗汉坦病毒黏膜免疫和系统免疫应答.     

细胞因子IL-27和CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组蛋白疫苗免疫效果的影响

目的研究细胞因子佐剂IL-27单独或与CpG2216佐剂联合使用对呼吸道合胞病毒(RSV)重组蛋白疫苗免疫效果的影响。方法将编码IL-27的质粒(以下简称IL-27)单独或与CpG2216佐剂作为联合佐剂与G1F/M2共免疫Balb/c小鼠3次,每次免疫10 d后取血,分离血清,用间接ELISA法测定3次免疫后的血清IgG抗体效价以及末次IgG1、IgG2a抗体效价。第3次免疫后2周处死小鼠,取脾细胞,用LDH法检测CTL活性、ELISPOT法检测分泌IL-4和IFN-γ的淋巴细胞水平、流式细胞仪检测CD4~+、CD8~+的效应记忆和中央记忆T细胞。结果 ELISA结果表明:除PBS组外,各组均诱导了高水平的IgG抗体无显著性差异(P0.05),IgG2a、IgG1分别为Th1和Th2型抗体,IL-27+G1F/M2组、IL-27+CpG2216+G1F/M2组IgG2a和IgG1的比值明显高于其他组,说明IL-27作为佐剂对G1F/M2所诱导的体液免疫应答无增强作用但可以调节免疫应答的类型,使免疫应答更平衡;CTL杀伤实验显示:IL-27~+CpG2216+G1F/M2组的CTL杀伤活性显著高于其他各组(P0.05);ELISPOT结果显示:IL-27~+CpG2216+G1F/M2组中分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著高于其他组分泌IFN-γ的淋巴细胞数量,且各组分泌IFN-γ的淋巴细胞数量显著高于同组分泌IL-4的淋巴细胞数量(P0.05),即均诱导了Th1型优势应答;流式细胞仪检测结果说明IL-27+G1F/M2组和IL-27~+CpG2216+G1F/M2组均能诱导产生大量的CD44~+CD62L~+双阳性细胞。结论细胞因子佐剂IL-27和CpG2216佐剂联合使用可以增强吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答而且IL-27对Th1型优势应答具有调节作用。     

鼠疫耶尔森菌F1抗原的纯化方法改进及其免疫原性的评价

目的 建立从减毒鼠疫菌培养物中提取天然F1抗原的方法,评价F1抗原对鼠疫的免疫保护效果.方法 通过用玻璃珠裂解菌体替代有机溶剂的方法,结合饱和硫酸铵沉淀和凝胶过滤的方法从鼠疫菌培养物中纯化出天然F1抗原.将F1抗原吸附到25%氢氧化铝佐剂中,肌肉注射免疫BALB/c小鼠,于初次免疫后第18周皮下攻毒104 CFU活鼠疫菌141强毒株.结果 一次免疫的两个剂量组之间产生的抗体滴度差异无统计学意义,而加强免疫的两个剂量组中,F1-40 μg剂量组产生的抗体滴度明显高于F1-20μg剂量组.F1抗原免疫的小鼠全部存活,而且健康状况良好,对照组小鼠全部死亡.结论 本研究提供了一种简单、有效和便于大规模提取F1抗原的方法.提取的F1抗原具有较高的免疫原性,可作为鼠疫亚单位疫苗的重要抗原组分用于鼠疫亚单位疫苗的研制.     

甲型肝炎减毒活疫苗及灭活疫苗灌胃免疫小鼠后的抗体应答

目的 :测定甲肝减毒活疫苗及灭活疫苗灌胃免疫小鼠后的抗体应答效应。方法 :将活或灭活的甲肝疫苗加或不加明胶 ,经胃免疫小鼠 ,于末次免疫后 2w取血清及肠液 ,用间接ELISA法分别检测其中的特异性IgG和IgA抗体水平 ,并与空白及肌注组比较。结果 :实验组特异抗体水平明显高于肌注组 (P <0 0 1) ;加明胶组的免疫效果较不加者好 (IgG :P <0 0 0 1,IgA :P <0 0 5 )。结论 :甲肝活疫苗及灭活疫苗经消化道免疫小鼠后 ,均可诱导全身及局部的抗体应答 ;明胶有增强抗体产生的作用 ,可作为一种安全、廉价的粘膜佐剂被进一步开发与利用。     

分子佐剂FAI3通过滴鼻途径增强草原兔尾鼠ZP3DNA疫苗抗生育效果

目的:探讨纤维蛋白原/白蛋白/IgG受体3(FAI3)作为分子佐剂,通过滴鼻途径增强免疫反应以提高草原兔尾鼠ZP3 DNA疫苗的抗生育效果。方法:FAI是来自C群链球菌的一种多配基结合蛋白,它能同时结合纤维蛋白原、白蛋白和免疫球蛋白G,FAI的基因片段-fai3(415~702 bp)具有黏膜佐剂的功能。通过构建pcD-fai3重组质粒,用chitosan包裹质粒DNA不育疫苗pcD-Lzp3和质粒pcD-fai3,形成复合物的chi-(pcD-Lzp3+pcD-fai3),以及单独的chi-pcD-Lzp3和chi-pcD-fai3,三种chitosan包裹质粒,分别用这些质粒作为DNA疫苗,分别于第0、14、28、42天,通过滴鼻途径免疫小鼠。间接ELISA检测免疫小鼠血清中抗LZP3特异性IgG,IgG1和IgG2a,同时检测阴道洗液和粪便中的特异性IgA。结果:滴鼻共免疫chi-(pcD-Lzp3+pcD-fai3)诱导产生了高水平的血清IgG和黏膜sIgA,生育率和平均窝仔数显著降低。结论:fai3作为分子佐剂与DNA不育疫苗pcD-Lzp3滴鼻共免疫小鼠,能诱导免疫小鼠产生较强的体液免疫反应和黏膜免疫反应,增强DNA不育疫苗的抗生育效果。     

BALB/C小鼠对不同佐剂SARS灭活疫苗的早期免疫反应

目的：研究含不同佐剂的SARS灭活疫苗免疫小鼠后，小鼠的早期细胞免疫和体液免疫反应。方法：灭活的SAPS冠状病毒F69株分别与弗氏佐剂、氢氧化铝、CpG佐剂配伍，制备灭活疫苗。接种6周龄SPF’级BALB／C小鼠。定时采血，分析小鼠外周血中CD4^ 、CD8^ T细胞亚群动态变化，同时测定鼠血清中特异性IgG抗体及抗体的病毒中和活性。结果：由3种佐剂制备的SARS灭活疫苗免疫小鼠后，CD4^ 、CD8^ T细胞百分比升高或无明显改变，CD4／CD8比值无显著性改变。其中，弗氏佐剂疫苗免疫小鼠的CD4^ T细胞百分比升高较明显，且在一段时间内，维持在一个较高的水平；铝佐剂疫苗免疫小鼠后，未观察到明显T细胞亚群改变；而CoG佐剂疫苗免疫小鼠的CD8^ T细胞百分比改变较其它佐剂疫苗改变更明显。与此相异的是，3种疫苗均可诱导小鼠产生较高滴度特异性IgG抗体，并且所产生的抗体具有中和活性。在初免后第34天，3种佐剂组的IgG抗体滴度分别为1：12800、1：3200和1：1600，中和效价分别为1：2560、1：960和1：320。结论：SARS灭活疫苗接种小鼠后，可诱导较强的体液免疫反应，同时轻度上调CD4^ 、CD8^ T细胞活性，程度因佐剂而异。     

脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

目的研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。方法将构建的原核表达载体p ET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA(s IgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组。在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主。rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%。结论原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力。