血管内皮细胞生长因子水平及其基因多态性与2型糖尿病肾病的关系

研究表明,血管内皮细胞生长因子(VEGF)介导了糖尿病。肾病(DN)患者肾小球内皮细胞损伤和功能紊乱,VEGF基因突变会影响VEGF的水平。我们观察2型DN及2型糖尿病(DM)患者血浆VEGF水平与VEGF基因多态性的变化,并研究其与2型DN的关系。     

血管内皮生长因子和糖尿病肾病

糖尿病肾病时血管内皮生长因子 (VEGF)在肾脏局部、血浆和尿液中的发生变化。VEGF参与糖尿病肾病的发生与进展。抑制VEGF及其受体可能是一条新的糖尿病治疗途径。     

血管内皮生长因子及其受体与糖尿病肾病

糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）发病率逐年增加,在欧美国家已成为终末期肾病（end stage renal disease,ESRD）和透析的首要病因,预计在不久的将来,在中国DN会迅速超过肾小球肾炎而成为ESRD的第1位病因。DN病因复杂,有基因多态性、代谢紊乱、免疫紊乱、血流动力学异常、炎症等参与。     

ACE基因多态性与2型糖尿病肾病关系的研究

目的：明确血管紧张素Ｉ转换酶（ＡＣＥ）基因插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性与２型尿病及其肾病发生及进展的关系。方法：ＡＣＥ基因内含子１６的一个２８７ｂｐ的Ａｌｕ顺序Ｉ／Ｄ型为多态标志，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增基因片段，１％琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物。结果：（１）２２１例２例糖尿病与１００例正常对照组之间基因型分布无显著性差异；（２）２型糖尿病未合并肾病与合并肾病及肾功不全（ＲＦ）等各亚组之间基因型频率和等位基因频率无显著性差异。结论：ＡＣＥＩ／Ｄ多态性与２型糖尿病肾病和肾功能不全的发生无关。     

血管内皮生长因子及其受体对糖尿病肾病大鼠微血管病变的作用

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR2）在糖尿病肾病（DN）大鼠肾微血管病变发病中的作用。方法：将正常Wistar大鼠12只随机分为正常对照组、糖尿病肾病组。糖尿病肾病组用STZ诱导建立DN模型,大鼠自由进食、饮水。于第4周和第8周各组分别处死大鼠6只。测定血生化及24h尿蛋白定量,以正常肾小球为对照,采用特异性抗体和免疫组织化学方法,观察大鼠肾小球VEGF、VEGFR2、TM-1的分布及其强度变化,并结合肾脏病理进行分析。应用RT-PCR技术测定VEGF和VEGFR2mRNA的表达。结果：（1）糖尿病肾病组第4周,8周时,尿白蛋白排泄率,血糖,血脂升高,均高于正常对照组（P〈0.01）,肾组织光镜,出现早期糖尿病肾病典型的病理改变过程。（2）免疫组化显示糖尿病组4周、8周时肾脏VEGF、VEGFR2及TM-1表达均较正常对照组上调（P〈0.01）,VEGF与TM-1呈正相关（4周时r=0.947,P〈0.001;8周时r=0.923,P〈0.001）;RT-PCR检测结果显示糖尿病肾病组第8周时VEGF-mRNA和VEGFR2-mRNA表达均较正常对照组升高（P〈0.05）,第8周时VEGF-mRNA和VEGFR2-mRNA表达较第4周时增高（P〈0.05）。结论：糖尿病肾病大鼠肾小球VEGF、VEGFR2、TM-1表达增强,与糖尿病肾脏新生血管生成有关。     

汉族与维吾尔族尿石症患者血管内皮生长因子基因多态性研究

目的探讨不同种族之间血管内皮生长因子（VEGF）基因型频率的分布。方法应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性分析术（PCR—RFLP）、基因测序等技术检测汉族尿石症患者、健康人群以及维吾尔族尿石症患者和健康人群各200名的VEGF基因多态性,比较两组VEGF基因型和等位基因的分布频率。结果汉族尿石症患者中CC基因型占1．00％、CT基因型占80．50％、TT基因型占18．50％,而维吾尔族尿石症患者中CC基因型占1．50％、CT基因型占69．50％、TT基因型占29．00％。汉族健康者中CC基因型占0．00％、CT基因型占85．50％、TT基因型占14．50％,维吾尔族健康者中CC基因型占0．25％、CT基因型占85．50％、TT基因型占13．75％。两民族VEGF基因型的分布频率差异有显著性（P〈0．05）。结论汉族、维吾尔族尿石症患者VEGF基因多态性分布频率有差异。     

血管内皮生长因子与糖尿病及肾脏并发症

VEGF通过促进内皮细胞增殖、新生血管形成，增加血管通透性等，成为导致糖尿病肾病早期微量蛋白尿的主要原因，在糖尿病肾病的发生发展中起关键作用，本文就此作一综述。     

2型糖尿病肾病患者p22phox基因多态性的研究

目的研究NADPH氧化酶p22phox亚基基因多态性与中国上海汉族人群2型糖尿病肾病（DN）相关性。方法应用限制性片断长度多态性（RFLP）-PCR方法对105例健康对照组和194例2型糖尿病（DM）患者（其中71例DN）进行p22phox亚基C242T、A640G基因型检测。同时检测其身高、体重、血压、血脂、空腹血糖及胰岛素、HbAlc的水平。结果DN组CT＋TT基因型频率明显高于2型DM和对照组（26．76％比17．07％、3．81％，P=0．0002）；DN组T等位基因频率明显高于2型DM和对照组（22．54％比13．42％、2．86％，P=0．0001）；3组间AA基因型频率与A等位基因频率差异无统计学意义。多元回归分析显示，T242等位基因、收缩压、空腹血糖、HbAlc、β细胞功能指数（Homa-IS）是DN的危险因素。结论p22phox亚基T242等位基因变异可能是中国上海地区汉族人群DN的易感基因：而p22phox亚基A640G基因多态性与上述人群DN无相关性。T242等位基因、收缩压、空腹血糖、HbAlc、Homa-IS是DN的危险因素。     

血管内皮生长因子与糖尿病及肾脏并发症

VEGF通过促进内皮细胞增殖、新生血管形成 ,增加血管通透性等 ,成为导致糖尿病肾病早期微量蛋白尿的主要原因 ,在糖尿病肾病的发生发展中起关键作用 ,本文就此作一综述。     

2型糖尿病肾病与ApoE基因多态性的关系

随着糖尿病发病率的逐年上升及糖尿病患者寿命的延长,糖尿病肾病已成为糖尿病患者致死或致残的主要原因之一。因此,对糖尿病肾病的易感因素尤其是遗传易感性的研究变得尤为重要。我们采用PCR基因扩增技术探讨中国人ApoE基因多态性与2型糖尿病肾病的关系。一、材料和方法1.对象:非糖尿病对照组(ND),共82例。2型糖尿病组84例,可分为糖尿病肾病组(DN)56例和糖尿病非肾病组(NDN)28例。DN组又分为:(1)蛋白尿肾病亚组(DNⅠ)26例:2次测尿白蛋白排泄率≥20μg/min,或尿蛋白≥300mg/24h;(2)肾功能不全亚组(DNⅡ)30例:蛋白尿伴2次Scr≥110μmo…     

血管内皮细胞生长因子和内抑素失衡在2型糖尿病肾病中的作用

目的探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）和内抑素在2型糖尿病肾病（DN）中的作用。方法对30例2型糖尿病无肾病和30例2型DN患者，采用ELISA法检测血清中VEGF和内抑素的浓度变化进行了观察，30例健康成人作为正常对照，并结合临床进行了分析。结果2型糖尿病无肾病和2型DN患者血中VEGF和内抑素的表达与正常人相比均有明显差异（P〈0．05，P〈0．01），2型DN患者血中VEGF和内抑素浓度的增加与蛋白尿、肾功能及视网膜病变程度密切相关。而与高血压、高血脂及糖化血红蛋白水平之间无统计学意义。结论2型糖尿病无肾病和2型DN患者血中VEGF和内抑素的表达动态的逐渐增加，其增加与2型DN患者的蛋白尿形成、肾功能和糖尿病视网膜病变改变关系密切，VEGF和内抑素参与了2型DN患者血管增生的肾脏病变和功能紊乱发生的作用。     

糖尿病足动脉缺血患者骨骼肌血管内皮生长因子基因表达

目的　研究糖尿病患者缺血下肢肌肉组织内源性血管内皮生长因子 (VEGF)基因表达及其与糖尿病足发病机理的关系。　方法　将 2 4例患者 ,33条肢体分为 3组 :无下肢动脉缺血的糖尿病 (DM) 5例 ,10条肢体 ;无糖尿病的下肢动脉粥样硬化闭塞症 (ASO) 10例 ,13条肢体 ;糖尿病下肢动脉硬化闭塞症 (DLASO) 9例 ,10条肢体。对照组为正常志愿者 (NOR) 5例 ,10条肢体。通过肌肉穿刺获取小腿骨骼肌组织 ,采用RT PCR法测定肌肉组织中hVEGF16 5mRNA表达。　结果　DM组和NOR组小腿骨骼肌组织中hVEGF16 5mRNA无表达。DLASO组小腿骨骼肌组织有hVEGF16 5mRNA表达 (0 0 2 1± 0 0 13) μg ,但明显低于ASO组 (0 133± 0 0 2 4 ) μg ,(t=13 32P <0 0 1)。　 结论　DLASO组缺血下肢肌组织内源性VEGF基因表达水平明显低于ASO组 ,是糖尿病足部溃疡发生发展的重要内在原因。     

人血管内皮生长因子C基因真核表达载体的构建

目的：VEGF—C基因的真核表达载体，以便进一步研究VEGF—C基因在淋巴管生成中的作用。方法：根据人VEGF—C的cDNA序列，设计合成一对5’端分别含有EcoRI和BamH I酶切位点的特异性引物，运用RT—RCR方法扩塔人乳腺癌细胞MDA—MB－231中的VEGF—C cDNA(1.26kb)；回收PCR产物(1．28kb)，并将其连接至克隆载体pUMT—18中，重组的pUMT—18在大肠杆菌DH5α内扩增后，经质粒提取、EcoR I和BamH I酶切，筛选出阳性重组子，并进行基因测序鉴定；琼脂糖凝胶电泳回收含有VEGF—C cDNA全长的酶切片断(1．27kb)，然后在DNA连接酶作用下将其与真核表达载体pcDNA3．1（－)连接，重组质粒经EcoR I和BamH I酶切予以鉴定。结果：RT—PCR产物自有VEGF-C cDNA，基因测序显示重组的pUMT—18中自有正确的人VEGF—C cDNA全长序列，重组的pcDNA3．1(-)中含有人VEGF—C cDNA全长序列。结论：VEGP—C/pcDNA3．1(－)。     

血管内皮生长因子基因在原代培养大鼠肝细胞的转染表达

目的　研究血管内皮生长因子基因 (VEGF12 1)在原代培养大鼠肝细胞中转染表达。方法　构建 pIRES EYFP /VEGF12 1质粒 ,逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、WesternBlot和荧光显微镜观察VEGF基因在原代培养大鼠肝细胞中的转染表达。结果　pIRES EYFP/VEGF12 1质粒成功构建并转染原代培养大鼠肝细胞 ,RT PCR观察到 2 5 8bp的VEGF特异性条带 ,WesternBlot检测到相对分子质量 42× 10 3 的特异性条带 ,荧光显微镜观察到转染阳性肝细胞发出黄绿色荧光。结论　pIRES EYFP/VEGF12 1质粒在原代培养大鼠肝细胞转染并表达 ,为VEGF基因修饰肝细胞移植和基因治疗奠定基础。     

血管内皮生长因子基因治疗大鼠缺血皮瓣的实验研究

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)基因治疗对大鼠缺血皮瓣生存的影响。方法建立大鼠缺血皮瓣的动物模型 ,采用直接注射法转移 pcD2 /hVEGF12 1真核表达质粒于大鼠缺血皮瓣肉膜层 ,术后 7d ,应用苏木素 伊红 (HE)染色、单光子发射计算机断层摄影 (SPECT)及计算机图像分析软件等方法检测皮下血管密度、皮瓣血供和皮瓣成活率。结果　经VEGF基因治疗组的大鼠缺血皮瓣与对照组相比较具有皮下血管密度增加、血液供应增多和皮瓣成活率显著性增高 (P <0 .0 1)。结论　VEGF基因治疗能够诱导新血管形成、增加血流灌注 ,促进缺血皮瓣的生存。     

Vascular endothelial growth factor in chronic rat allograft nephropathy

BACKGROUND: Chronic allograft nephropathy (CAN) is a complex process of alloimmune responses and chronic inflammation leading to fibrosis and vasculopathy. We examined the biological role of proinflammatory vascular endothelial growth factor (VEGF) in a rat renal transplantation model of CAN. METHODS: Syngraft and allograft recipients were treated with a suboptimal dose of cyclosporine A which allows acute rejection and CAN to develop. Intragraft VEGF, VEGFR-1 and VEGFR-2 expressions were determined at 5, 14, 30 and 60 days. Protein tyrosine kinase inhibitor PTK787 was used to inhibit VEGFR activity. RESULTS: In nontransplanted kidneys and syngrafts, mild VEGF expression was observed in the glomeruli and tubuli. VEGFR-1 was detected in vascular structures and VEGFR-2 in glomeruli as well. In allografts, total intragraft VEGF expression and interstitial inflammatory cell VEGF expression were induced and correlated with the chronic allograft damage index (CADI) score. Total intragraft and interstitial inflammatory cell VEGFR-1 expression was induced and interstitial cell VEGFR-1 expression correlated with the CADI score. Blocking VEGF receptor signaling with PTK787 significantly reduced fibrosis and the CADI score, but did not affect early inflammation or VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2 expressions compared to vehicle treated group. CONCLUSIONS: Interstitial inflammatory cell VEGF and VEGFR-1 expressions are induced during the development of CAN. Increased VEGF activity may enhance the alloimmune induced inflammatory responses leading to fibrosis and CAN.     

基因组DNA和结缔组织生长因子基因启动子甲基化状态与2型糖尿病肾病的关系

目的 探讨糖尿病肾病(DN)患者基因组DNA及结缔组织生长因子(CTGF)启动子甲基化在DN发病中的作用.方法 根据1999年WHO糖尿病诊断标准,选取我院2型糖尿病患者90例及同期健康体检者30例,分为糖尿病组48例、DN组42例和健康对照组30例.提取各组受检者外周血白细胞DNA,应用高效液相色谱法检测基因组DNA整体甲基化水平;甲基化特异性PCR及测序方法检测CTGF启动子甲基化状态;用酶联免疫吸附法检测各组血清CTGF蛋白水平.结果 DN组基因组DNA甲基化水平为5.23％±0.09％,与糖尿病组(4.71％±0.03％)和健康对照组(4.37％±0.01％)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).DN组CTGF基因启动子甲基化水平为22.02％±12.90％,明显低于糖尿病组(49.18％±8.01％,P=0.019)及健康对照组(72.18％±19.30％,P=0.000),差异均有统计学意义.DN组血清CTGF蛋白水平为(193.44±11.9) mg/L,显著高于糖尿病组[(127.65±10.30) mg/L,P=0.031]及健康对照组[(95.84±5.1) mg/L,P=0.001].结论 DN患者CTGF启动子的甲基化程度明显低于糖尿病非肾病患者,而CTGF表达则高于非肾病患者,提示CTGF基因启动子的低甲基化可能参与DN的发生发展.     

脂质体介导血管内皮生长因子对不同时间断蒂大鼠随意型皮瓣的影响

目的 通过血管内皮生长因子基因对大鼠随意型皮瓣的转染,探讨基因治疗对不同时间断蒂的大鼠随意型皮瓣成活的影响.方法 以SD大鼠为实验模型制作背部随意型皮瓣,实验组注入脂质体包裹的PcDNAVEGF165(目的 基因组),对照组分别注入PcDNA(空白质粒组)和生理盐水(生理盐水组),于用药后1、3、5、7 d,每组每时相点分别随机选取10只断蒂,断蒂后7 d处死大鼠,观察下述指标:①皮瓣成活率.②皮瓣组织标本行常规HE染色检测平均微血管数目及内径.③行VEGF免疫组织化学染色检测VEGF表达情况.④取皮瓣组织标本在电镜下观察超微结构.结果 ①皮瓣成活率:1、3、5、7 d断蒂实验组皮瓣成活率分别为(45.45±12.24)%、(82.95±3.81)%、(85.00±3.38)%、(85.96±3.25)%.1 d断蒂实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),3、5、7 d断蒂各实验组明显高于相应对照组(P<0.05),3、5、7 d断蒂各实验组则随着断蒂时间的延迟差异无统计学意义(P>0.05).②平均微血管数目及内径:各实验组与相应对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).③各实验组VEGF染色深度明显高于对照组(P<0.05).④超微结构:实验组内有新生血管形成,内皮细胞内可见较多粗面内质网,线粒体等结构,组织内成纤维细胞增多,细胞合成代谢旺盛.结论 皮下注射脂质体介导VEGF基因可提高皮瓣成活率,促进早期断蒂,是一种简单,高效,经济,相对安全的基因治疗方法.     

pcDNA3.1(+)载体携带血管内皮生长因子治疗大鼠缺血皮瓣

目的 观察注射真核表达载体pcDNA3.1(+)携带血管内皮生长因子(VEGF)基因后对大鼠缺血皮瓣存活的影响.方法 构建重组质粒pcDNA3.1(+)-VEGF,将SD大鼠随机分成3组,每组10只.pcDNA3.1(+)-VEGF组:于背部皮肤皮下多点注射pcDNA3.1(+)-VEGF 30 μg/100μl;VEGF组:多点注射VEGF蛋白100 ng/100μl;生理盐水(NS)组:注射生理盐水100μl,注射2d后在其背部形成7 cm×3 cm的全厚随意型皮瓣,48 h后按原设计掀起皮瓣并原位缝合.术后10 d测量皮瓣的成活面积,计算成活面积百分比,并行免疫组织化学检测.结果 皮瓣成活面积百分比:pcDNA3.1(+)-VEGF组为(79.1±3.5)％,VEGF组为(62.2±2.7)％,NS组为(59.9±3.1)％,pcDNA3.1(+)-VEGF组皮瓣成活面积明显高于其他两组(P＜0.05).结论 皮下注射pcDNA3.1(+ )-VEGF可促进新生血管的形成,比单纯注射VEGF蛋白更能提高皮瓣的成活率.     

血管内皮生长因子定向转染诱导缺血心肌血管生成的研究

目的观察血管内皮生长因子（VEGF）质粒直接心肌注射对兔急性心肌缺血后侧支循环形成的影响。方法建立兔左冠状动脉结扎的急性心肌缺血模型，取缺血边缘区以先期构建的真核表达质粒pcDNA3／VEGF165和真核载体pcDNA3的DNA分别多点心肌注射，给药后2、4周取材分别行逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白浓度分析、苏木素-伊红（HE）染色、VEGF染色。结果治疗组VEGF165 mRNA含量较对照组明显增多；蛋白浓度分析转染后VEGF165显著增多，高峰出现于实验后2周；治疗组缺血心肌新生血管数目明显多于对照组。结论VEGF165外源性基因能在转染心肌细胞后成功表达，促进了缺血心肌血管新生和侧支循环形成。