华支睾吸虫LAP2基因的生物信息学分析及克隆表达、组织定位

目的利用生物信息学方法分析华支睾吸虫LAP2全长基因的结构和功能,并将该基因克隆至原核表达载体进行表达、纯化,为进一步研究LAP2功能奠定基础。方法利用生物信息学相关软件,分析华支睾吸虫LAP2基因及其蛋白的结构、生物学和免疫学功能特征。针对LAP2的EST序列的编码区设计引物,从华支睾吸虫囊蚴cDNA质粒中扩增目的基因,克隆到原核表达质粒pET-28a（＋）中,经PCR、双酶切及DNA测序鉴定的阳性克隆诱导目的蛋白表达、亲和层析纯化、免疫印迹鉴定及组化定位。结果华支睾吸虫LAP2基因全长为1761bp,其编码序列长度为1662bp,编码553个氨基酸,理论分子量是59696.5Da,与人的该基因氨基酸序列相似性为26.7%,一致性仅为15.4%。该基因在大肠杆菌中可被高效表达,纯化的重组蛋白能被感染华支睾吸虫的大鼠血清识别,免疫组化结果表明该重组蛋白定位于华支睾吸虫成虫的肠支及表膜。结论华支睾吸虫LAP2在大肠杆菌中呈高效的可溶性表达,具有良好的抗原活性,可能为华支睾吸虫成虫分泌排泄抗原的组份之一。     

日本血吸虫TGF-β受体Ⅰ基因胞外段的克隆与表达

目的获得日本血吸虫TGF-β受体I胞外段（SjTβRIout）的序列,行原核克隆和表达,并分析其蛋白的免疫学功能。方法应用cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends,RACE）方法获得SjTβRI基因cDNA部分序列,用RT-PCR方法扩增SjTβRI胞外段（SjTβRIout）基因,构建pET28a（＋）重组原核表达载体,并测序鉴定。将质粒转入大肠埃希菌,IPTG诱导表达,并使用Ni离子亲和层析并透析处理获得纯化重组蛋白。使用纯化蛋白与弗氏佐剂共同免疫SD大鼠获得抗血清,使用ELISA方法检测血清中SjTβRIout特异抗体IgG含量。结果成功构建SjTβRIout原核表达载体。测序鉴定显示SjTβRIout包含399bp,编码133个氨基酸,并且与曼氏血吸虫TGF-β受体I的同源性较高。重组蛋白经SDS-PAGE分析,显示其相对分子质量约为20000,与目的基因编码蛋白的预测分子量相符。经重组蛋白免疫的SD大鼠产生高效价（〉1：100000000）的抗原特异性IgG抗体。结论首次获得pET28a（＋）-SjTβRIout的重组蛋白,并且证明其具有良好的免疫原性。     

大鼠钙结合蛋白S100A9基因克隆、表达及纯化研究

目的构建大鼠钙结合蛋白S100A9的原核表达质粒并获得纯化重组蛋白。方法根据大鼠S100A9基因mRNA序列,设计PCR引物,常规扩增后重组连入原核表达载体pET32a,并进行序列测定。利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和不同温度诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定结果,并亲和层析纯化重组蛋白。结果 PCR扩增获得的条带与预期的DNA表达片段大小一致,克隆构建了pET-32a-S100A9原核表达载体,测序结果与预期完全一致,经亲和层析纯化获得毫克级纯化重组蛋白,并发现该蛋白在21℃有比较强的表达。结论为进一步探讨S100A9蛋白生物学功能奠定基础。     

2型猪链球菌中国强毒株znuA基因的原核表达及免疫学活性分析

目的克隆2型猪链球菌高亲和力锌吸收蛋白(High-affinity zinc uptake system protein,ZnuA)编码基因并进行原核表达,研究ZnuA蛋白的免疫学活性。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因znuA,构建重组表达质粒pET32a::znuA,转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;Western blot检测ZnuA蛋白的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA检测多抗血清效价。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;Western blot结果表明ZnuA蛋白具有良好的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的多抗血清。结论在原核系统中成功地表达了znuA基因编码的蛋白,且ZnuA重组蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究znuA基因在猪链球菌致病过程中的作用以及猪链球菌疫苗的开发奠定了基础。     

ctB和ureⅠ双基因融合表达及其免疫特性分析

目的：构建霍乱毒素B亚单位（CtB）和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白（UreⅠ）融合的原核表达质粒pET32a（＋）ctB/ure Ⅰ,并初步研究融合蛋白Ct B/Ure Ⅰ的表达特性和免疫特性.方法：PCR从pUC18 ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a（＋）/ureⅠ的ureⅠ基因5＇端插入ctB基因,构建ctB和ure Ⅰ双基因原核表达质粒pET32a（＋）ctB/ure Ⅰ,转该质粒于E.coli BL-21（DE3）,经酶切和序列分析鉴定工程菌.IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-Pro Analizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠.用Western blot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性.结果：工程菌含完整的ctB和ure Ⅰ基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%.在22℃,1 mmol/L IPTG诱导4 h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%.Western blot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体.结论：成功构建了能表达CtB/Ure Ⅰ蛋白的大肠杆菌表达菌株.对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和Ure Ⅰ的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础.     

EGFRvIII/PEP-3 cDNA与HBcAg重组基因原核表达载体的构建、表达与免疫分析

目的:构建EGFRvIII与HBcAg重组基因的原核表达质粒,进行原核表达、纯化,观察表达蛋白的免疫原性和抗原性。方法:通过双酶切从pGEM-TEasy/PEP-3载体获得编码EGFRvIII突变区的cDNA片段,插入去除了主要免疫优势区的重组质粒pGEMEX/HBcAg中,获得重组质粒pGEMEX/c-PEP-3-c,将重组基因亚克隆于原核表达载体pET28a( )中,通过IPTG诱导蛋白表达,利用Ni2 -NTA亲和层析法对融合蛋白进行纯化;用融合蛋白常规免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测小鼠血清中抗体的滴度。结果:经酶切鉴定、序列测定证实融合基因已插入pET28a( )载体中,融合基因序列与设计序列完全一致。原核表达后表达量占沉淀全菌蛋白的56%,纯化产物占总蛋白的92%,浓度约8g/L。BALB/c小鼠经4次免疫后,其血清中中和抗体的滴度可达1∶16000,第6次免疫后血清中中和抗体的滴度达到1∶2.56×105,抗PEP-3抗体滴度达到1∶1.28×105,抗HBcAg抗体滴度小于1∶4×103。结论:融合基因PEP-3-HBcAg在大肠杆菌中可获得高效表达,表达的融合蛋白可以诱导小鼠产生高滴度和高特异性中和抗体,从而为高表达EGFRvIII恶性肿瘤基因工程疫苗的研究奠定基础。     

SARS-CoV N蛋白的原核表达及其免疫原性研究

为了研究SARS-CoV病毒N蛋白基因的原核表达及其免疫原性,为进一步的研究奠定基础,我们以PCR方法在全病毒基因组文库中获得全长N基因,分别克隆到pcDNA3和pET32a载体中获得重组质粒pcDNA3-N和pET32a-N。以亲和层析方法分离纯化pET32a-N转化的BL21细菌裂解液中的重组N融合蛋白,并以ELISA方法检测pcDNA3-N质粒基因免疫小鼠诱导后血清中的特异性抗体。结果pET32a-N转化BL21细菌后可检测到重组SARS-CoVN融合蛋白表达并分离纯化,pcDNA3-N基因免疫能够诱导产生N特异的体液免疫应答。研究的结果表明,SARS-CoVN蛋白可以在原核细胞中有效表达并有良好免疫原性,可以为进一步的功能研究和血清学诊断提供条件。     

HCV复合多表位抗原基因的克隆表达及其免疫学特性分析

目的构建丙型肝病炎病毒（HCV）截短C基因和多表位基因重组原核表达质粒,表达纯化融合蛋白,分析其免疫原性和抗原性。方法PCR方法扩增核心区羧基端部分缺失的基因片段Ct;合成HCVE2区模拟表位与NS3～NS57个表位基因Em;分别将Ct、Em克隆人原核表达质粒pQE30,筛选阳性重组质粒pQE30-CtEm,转化E．coli M15,IPTG诱导融合蛋白表达,薄层扫描分析表达蛋白;可溶性分析后用Ni^2＋-NTA凝胶亲和层析柱纯化、透析并浓缩融合蛋白;Westernblot分析纯化蛋白的特异性和抗原性;纯蛋白免疫小鼠后分析其免疫原性。结果成功构建了HCV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pQE30-CtEm,目的基因可高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,Ni^2＋-NTA纯化可获得目的蛋白,纯化蛋白具有良好的抗原性和免疫原性。结论HCV复合多表位抗原基因融合蛋白可高效表达并得到纯化,该融合蛋白可作为HCV诊断抗原,也为丙型肝炎新型疫苗的研究提供了靶抗原。     

人NYD-SP28基因原核表达及其多克隆抗体的制备

目的:构建人NYD-SP28基因原核表达载体,表达其原核蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生中的作用。方法:以原始质粒为模板,用PCR法扩增人的NYD-SP28基因开放阅读框全长,将其克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-NYD-SP28。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导原核蛋白的表达,纯化蛋白以免疫小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体的滴度。结果:成功构建了用于原核蛋白表达的重组质粒,并在BL21菌中表达NYD-SP28原核蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到NYD-SP28原核蛋白。用纯化的NYD-SP28蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度达到1/10万。结论:成功构建人NYD-SP28原核表达载体,并获得了高纯度的NYD-SP28蛋白及鼠抗NYD-SP28多克隆抗体,为进一步研究NYD-SP28的功能奠定了基础。     

嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

目的扩增编码Ⅳ型菌毛蛋白的嗜肺军团菌pilE基因,构建重组质粒pET32a（＋）-pilE并在原核系统中表达．纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE．为进一步探讨Ⅳ型菌毛蛋白的作用及其作为军团病的诊断抗原提供实验基础。方法采用聚合酶链式反应（PCR）从嗜肺军团菌扩增得到pilE基因,构建重组质粒pET32a（＋）-pilE,转化大肠杆菌BL21（DE3）并用聚合酶链式反应、限制性酶切分析、序列分析鉴定后,IPTG诱导表达PIIJE蛋白,用硫酸十二烷酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、Western印迹鉴定。使用HisTrap^TM HP亲和层析柱纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。结果扩增出430bp的pilE基因;构建了重组质粒pET32a（＋）-pilE;表达并纯化出35700Mr的目标蛋白。结论成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的原核重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达。成功纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。     

重组大鼠肝再生增强因子原核表达载体构建及多克隆抗体制备

背景:国外有1篇文献报道了肝再生增强因子在中枢神经系统内的分布与表达。由于关于重组大鼠肝再生增强因子蛋白多克隆抗体制备、鉴定及原核表达载体如何构建的相关文献较少,国内对于其在中枢神经系统的研究目前未见报道。目的:利用大肠杆菌BL21表达大鼠肝再生增强因子融合蛋白,并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:提取SD大鼠海马组织RNA,构建原核表达重组质粒pET28a-ALR并转化到宿主菌BL21中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收,4次免疫日本大耳白兔后,心脏取血,吸取血清作为多克隆抗体,以ELISA测定抗体血清效价,Western-blotting检测抗体的特异性和亲和性。观察:①原核表达重组质粒pET28a-ALR构建。②pET28a-ALR重组体酶切鉴定。③ELISA及Western-blotting检测结果。结果与结论:双酶切电泳检测结果显示得到了预期条带,其大小分别为5.3kb和0.4kb,经核苷酸序列分析证明成功构建了pET28a-ALR原核表达载体。成功获得分子质量约为19ku纯化的融合蛋白。ELISA测定显示多克隆抗体效价可达到1∶2000,说明抗体与纯化的重组肝再生增强因子蛋白具有良好的反应性,有较高的效价,可满足实验的要求。通过Western-blotting检测证明该抗体可以特异性识别肝再生增强因子蛋白。实验成功地利用原核表达体系表达了肝再生增强因子融合蛋白,并制备、纯化了抗肝再生增强因子蛋白的多克隆抗体,经鉴定能够满足针对肝再生增强因子免疫印迹检测的实验要求。     

北京地区人偏肺病毒核蛋白基因的原核表达及抗原活性分析

目的用大肠杆菌表达获得人偏肺病毒主要结构蛋白N蛋白，为下一步的深入研究奠定基础。方法从重组质粒pUCm-N1816中PCR扩增获得N基因，用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET30a（＋）中，得到重组表达质粒pE130a-N1816，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPIG诱导培养。SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白的表达和抗原性。结果经双酶切和测序证明1．2kb N1816。基因正确插入pET30a中，并具有正确的读码框架，得到预期的pET30a-N1816重组原核表达质粒。37℃，1mmol／L IFIG诱导培养6h后产生大量带6个组氨酸标记的重组N蛋白，主要以包涵体形式存在，占细胞总蛋白的20％左右。N蛋白粗提物经Co^2＋亲和层析获得较理想纯化。Western blot结果显示，体外所表达的蛋白能和特异性抗血清及人血清反应。结论本研究成功构建了重组pET30a-N1816原核表达质粒，N蛋白获得了高效表达，并且具有特异抗原活性，可用于人偏肺病毒的深入研究。     

ctB和ure I双基因融合表达及其免疫特性分析

目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a( )ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a( )/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a( )ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。     

人BRDT-NY多克隆抗体的制备及其在消化道肿瘤中的表达检测

目的:构建人BRDT-NY原核表达载体,表达人BRDT-NY原核蛋白,制备其多克隆抗体,检测其在消化道肿瘤中的表达。方法:以质粒pTriplEx2-BRDT-NY为模板,用PCR法扩增人的BRDT-NY基因。将其克隆到原核表达质粒pET28a+中,构建重组质粒pET28a+-BRDT-NY。将该重组质粒转化BL21菌,以IPTG诱导原核蛋白的表达。应用纯化的原核蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,ELISA测定滴度,并用免疫组织化学法分析该蛋白在消化道肿瘤组织中的表达。结果:成功构建了用于原核蛋白表达的重组质粒,在BL21菌中表达BRDT-NY重组蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到人BRDT-NY蛋白。用纯化的BRDT-NY蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度均能达到1/10万。免疫组织化学染色显示BRDT-NY蛋白在消化道肿瘤中有较高的表达率。结论:该抗体的制备为进一步研究BRDT-NY在消化道肿瘤中的发病机制奠定了基础。     

尘螨变应原Der f 6 / pET32a( +) 重组质粒构建、表达、纯化及其产物血清 IgE 结合率

目的:获得尘螨变应原第6 组分Der f 6 原核表达产物并检测其与尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体IgE 结合率。方法:酶切质粒pET28a(+)-Der f 6 获得目的基因Der f 6,将其与pET32a(+)载体连接成质粒pET32a (+)-Der f 6,转化BL21细菌后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Ni+离子亲和层析柱纯化表达产物,用十二烷基磺酸钠鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫印迹实验(Western blot)和蛋白质串联质谱(MALDI-TOF/ TOF)鉴定纯化产物。以纯化获得的产物为包被抗原建立间接ELISA 法检测尘螨过敏性哮喘患儿血清抗体反应情况。结果:成功构建了原核表达质粒pET32a (+)-Der f6,将该质粒转化E.coli BL21 诱导表达,亲和层析纯化后,SDS-PAGE 显示获得目的蛋白,Western blot 验证其能够与载体的组氨酸标签结合,质谱鉴定其Der f 6 结构一致。以此产物为包被抗原建立间接ELISA 检测尘螨过敏性哮喘患儿血清,阳性率为41.3% (19/46)。结论:成功构建了原核表达质粒pET32a (+)-Der f 6,亲和纯化获得的目的蛋白具有良好的反应原性。     

呼吸道合胞病毒NS1基因原核表达及其免疫原性分析

目的：原核表达呼吸道合胞病毒（RSV）非结构NSl蛋白,并对其免疫特性进行研究。方法采用PCR技术获得NS1基因,将其插入pET41a（＋）载体上,导人大肠杆菌后诱导表达;利用GST亲和层析柱对诱导表达的NS1蛋白进行纯化,免疫动物制备抗体,Westernblot法鉴定抗体的特异性。结果重组质粒经酶切鉴定和DNA序列测序完全正确．经IPTG诱导后融合蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中得到高效表达．表达产物经超声破碎和GST亲和层析纯化获得重组蛋白,分子量约42000Mr,以抗NS1蛋白的多克隆抗体为一抗进行Westernblot检测,结果只有RSV感染细胞的样品在15000Mr处有特异性带显示,其他病毒感染的细胞和阴性对照没有相应条带。结论NSl基因得到高效表达,免疫制备得到的抗体与RSV感染细胞有特异性反应,与其他常见呼吸道病毒感染细胞无交叉免疫反应。     

人BTLA分子胞外区的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

目的:表达并纯化重组人BTLA(hBTLA)分子胞外区,制备和鉴定兔抗hBTLA多克隆抗体,为进一步实验研究奠定基础。方法:采用特异性引物扩增hBTLA胞外功能区DNA,经酶切、连接构建原核表达载体pET28a-hBTLA。将构建的重组表达质粒转化入E.coliBL21(DE3)菌株,采用IPTG诱导表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析蛋白纯度。将纯化的目的蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,并对抗体进行纯化、效价测定及特异性鉴定。结果:序列测定证实构建的pET28a-hBTLA重组表达载体含有hBTLA编码序列,其序列比对分析与GenBank中公布序列一致,质粒在E.coli中诱导表达相对分子质量(Mr)为15720的目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析纯化后的目的蛋白达到电泳纯。双向琼脂扩散法检测抗体效价为1∶16,ELISA法检测抗体效价为1∶20 000,Western blot分析显示抗体能特异性结合重组hBTLA蛋白。结论:成功构建了hBTLA蛋白的原核表达载体,获得高纯度的融合蛋白,制备高效价、高特异性的多克隆抗体。     

小鼠精子Sp17与IL-5融合蛋白的构建、表达及其免疫原性鉴定

目的 构建和表达小鼠精子蛋白Sp17与白介素5(IL-5)融合蛋白,并对其进行纯化和免疫原性鉴定.方法 采用PCR技术从质粒pGEM-1-IL-5中扩增IL-5基因片段,将其克隆至pET/Sp17原核表达载体中与Sp17基因融合,构建重组质粒pET/Sp17-IL-5,经酶切鉴定后转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni2+-NTA Agarose 纯化,SDS-PAGE检测、N端测序及Western blot;重组蛋白Sp17.IL-5免疫小鼠后ELISA检测小鼠血清特异性抗体.结果 成功构建小鼠精子蛋白Sp17与IL-5融合蛋白的高效表达质粒pET/Sp17-IL-5,重组工程菌pET-28a(+)-sp17-IL-5/BL21经IPTG诱导目的蛋白表达率约28%,PAGE初步测定目的蛋白相对分子量(Mr)约39 000,纯化后蛋白纯度达91%,免疫后小鼠血清中检测到特异性抗体.结论 Sp17-IL-5蛋白经基因克隆获得了较高的表达量,并初步显示了较好的免疫活性,为新型Sp17避孕疫苗的研制奠定基础.     

华支睾吸虫成虫RPEF基因产物及其抗RPEF多克隆抗体的制备

目的 体外制备华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因产物及抗RPEF多克隆抗体.方法 亲和纯化试剂盒纯化表达蛋白pGEX-4T-1-RPEF,凝血酶酶切表达蛋白制备重组蛋白RPEF,将重组蛋白RPEF免疫小鼠,制备多克隆抗血清,检测抗体滴度和抗血清特异性.结果 体外制备的RPEF蛋白经SDS电泳呈单一条带;酶联免疫吸附结果显示,免疫过程抗体滴度呈连续上升趋势;免疫印迹结果显示,小鼠抗血清具有抗RPEF特异性.结论 获得较专一的华支睾吸虫RPEF蛋白和RPEF抗血清.     

华支睾吸虫成虫RPEF基因产物及其抗RPEF多克隆抗体的制备

目的 体外制备华支睾吸虫成虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(RPEF)基因产物及抗RPEF多克隆抗体.方法 亲和纯化试剂盒纯化表达蛋白pGEX-4T-1-RPEF,凝血酶酶切表达蛋白制备重组蛋白RPEF,将重组蛋白RPEF免疫小鼠,制备多克隆抗血清,检测抗体滴度和抗血清特异性.结果 体外制备的RPEF蛋白经SDS电泳呈单一条带;酶联免疫吸附结果显示,免疫过程抗体滴度呈连续上升趋势;免疫印迹结果显示,小鼠抗血清具有抗RPEF特异性.结论 获得较专一的华支睾吸虫RPEF蛋白和RPEF抗血清.