犬颅脑枪弹伤后神经细胞凋亡及bcl-2的表达

目的研究犬脑枪弹伤后神经细胞凋亡机制及bcl-2的变化规律.方法建立犬颅脑枪弹伤模型,制备不同时期、不同部位脑组织切片.采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡以及用免疫组织化学方法检测bcl-2的动态变化.结果对照组犬脑偶见神经细胞凋亡,神经细胞中有微弱bcl-2的表达,枪弹伤后凋亡神经细胞及bcl-2于2 h开始增加,24 h达高峰,48 h开始下降.不同区域表达不完全一致.各观测点神经细胞与bcl-2表达呈负相关.结论犬脑枪弹伤后神经细胞bcl-2的表达增强,在不同时期、不同部位具有时空规律性.神经细胞的凋亡与凋亡保护基因的调节有关.     

活化素A对MPP^＋所诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的观察重组人活化素A(rhAcT)对MPP+所诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法将MMP+或活化素A,L-deprenyl加入体外培养的PC12细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力的变化;用免疫细胞化学法和RT-PCR评价细胞的酪氨酸羟化酶和bcl-2蛋白及mRNA含量的变化,用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化,比较各组的差异.结果预先给予rhAcT和L-deprenyl的两组细胞活力明显高于MPP+损害组,酪氨酸羟化酶和bcl-2的蛋白及mRNA表达强于损害组,同时两组的凋亡细胞明显减少,rhAcT和L-deprenyl两组间无显著差异.结论rhAcT和L-deprenyl通过上调bcl-2的表达,抑制凋亡的发生,而对MMP+所诱导的PC12细胞的损伤具有保护作用.     

创伤性脑损伤急性期高血糖对葡萄糖转运蛋白1表达的影响

目的探讨大鼠创伤性脑损伤急性期高血糖对皮层葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter1,GLUT-1)表达的影响。方法成年雄性SD大鼠180只,随机分成正常对照组,创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)组,胰岛素治疗组,分别测定各组伤前伤后血糖值,采用RT-PCR法和Western-blot法测定各组伤侧及健侧皮层GLUT-1基因和蛋白的表达,应用TUNEL法测定各组伤侧及健侧皮层凋亡细胞数。结果TBI组伤后血糖明显升高,伤侧皮层GLUT-1表达明显减少,凋亡细胞数明显增多;胰岛素治疗组血糖变化不明显(P0.05),伤后12h,24h,48h,72hGLUT-1表达明显多于TBI组(P均0.01),凋亡细胞数明显少于TBI组(P均0.01);各组健侧皮层GLUT-1表达和凋亡细胞数未见明显变化(P0.05)。结论TBI急性期高血糖可增加伤后脑细胞凋亡,其机制可能与TBI急性期高血糖下调GLUT-1表达有关。     

丙戊酸通过调控S100B蛋白表达对癫痫幼鼠模型的认知功能及NMDAR1水平的影响

目的 探讨丙戊酸通过调控S100B蛋白表达对癫痫幼鼠模型的认知功能及N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR)1水平的影响。方法 50只幼鼠按随机数字表分为对照组、模型组、丙戊酸组、喷他脒(Pentamidine)组及丙戊酸+Pentamidine组，每组各10只；除对照组外，其余各组幼鼠均建立癫痫模型，建模后丙戊酸组灌胃1 mg/kg丙戊酸，Pentamidine组注射5 mg/kg的Pentamidine及丙戊酸+Pentamidine组灌胃1 mg/kg丙戊酸和尾部注射5 mg/kg的Pentamidine;水迷宫实验检测认知功能；尼氏染色观察海马组织形态；末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP尾端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL)法检测海马组织神经细胞凋亡率；免疫组化染色检测海马组织NMDAR1阳性细胞率；免疫印记检测海马组织中S100钙结合蛋白B(S100 calcium-binding pro...     

虾青素对小鼠蛛网膜下腔出血早期脑损伤的保护机制的研究

目的研究虾青素对小鼠蛛网膜下腔出血(SAH)早期脑损伤的保护机制。方法 ICR雄性小鼠采用随机数字法随机分为四组:蛛网膜下腔出血组、假手术组、蛛网膜下腔出血+溶剂组(DMSO)、蛛网膜下腔出血+虾青素组。通过建立小鼠视交叉注血方法建立蛛网膜下腔出血模型,于手术后24 h记录神经功能评分,并应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)、western blot法检测脑组织中的NOX2蛋白含量、ELISA法检测TNF-a/IL-1β水平,干湿法检测脑组织中含水量。结果与对照组相比,SAH后小鼠神经功能损伤评分加重,脑水肿加重,脑组织中的NOX2蛋白及脑组织中凋亡阳性细胞数也显著增多,TNF-a/IL-1β值明显升高;应用虾青素干预以后,小鼠神经功能改善,脑组织凋亡阳性细胞明显减少。同时,虾青素能够降低SAH后小鼠脑组织中NOX2蛋白,TNF-a/IL-1β水平值也明显降低。结论虾青素对s AH后早期脑损伤(EBI)具有保护作用,其作用机制可能与其抗氧化性有关。     

褪黑素对癫(癎)大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸蛋白酶-3表达的影响

目的观察褪黑素（Mel）对癫癇大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸蛋白酶（caspase）-3表达的影响。方法采用匹罗卡品（Pilo）制作大鼠癫癇持续状态（SE）模型,随机分为Pilo组、Mel组和对照组,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）染色和免疫组化技术检测大鼠海马神经元凋亡数和caspase-3的表达,并与对照组比较。结果SE后6h,Pilo组开始出现少量TUNEL阳性细胞;SE后72h,达到高峰;SE后7d,TUNEL阳性细胞开始减少。SE后6h,Pilo组大鼠海马caspase-3阳性细胞数增多,主要集中于CA1和CA3区;SE后48h,达到高峰;SE后72h,阳性细胞数开始减少;SE后7d,caspase-3表达基本恢复正常。Mel组各时间点大鼠海马TUNEL阳性细胞数和caspase-3表达均明显低于Pilo组大鼠（均P〈0.01）。结论Mel可减少癫癇大鼠海马神经元凋亡,抑制caspase-3的表达,起到神经保护作用。     

壳寡糖对Hela细胞cyclin D1、bcl-xl和bcl-2 mRNA表达的影响

背景：研究表明壳寡糖具有抗肿瘤作用,但壳寡糖对cyclin D1、bcl-2和bcl-xl影响机制尚不清楚。 目的：观察壳寡糖抑制Hela细胞生长的作用,以及对细胞内cyclin D1、bcl-xl和 bcl-2 mRNA表达的影响。 方法：壳寡糖(0.1,0.5,1,2,5 g/L)刺激Hela细胞后,CCK8实验检测其对细胞生长的影响;运用实时荧光定量PCR方法在分子水平检测cyclin D1、bcl-xl和 bcl-2 mRNA在细胞中的表达情况。 结果与结论：壳寡糖可抑制Hela细胞的生长;随着壳寡糖的质量浓度由0.1 g/L增加至2 g/L,壳寡糖抑制cyclin D1,bcl-2,bcl-xl基因表达的作用也逐渐增强,在2 g/L时作用最强,但质量浓度过高时(5 g/L)抑制作用反而有所减弱。结果表明壳寡糖的抗肿瘤作用可能通过两方面进行：一方面壳寡糖可以抑制与细胞周期有关的cyclin D1 mRNA表达以抑制肿瘤细胞的增殖;另一方面壳寡糖可以抑制抗凋亡蛋白Bcl-2 和bcl-xl mRNA的表达以促进肿瘤细胞的凋亡;且对前者的作用强于后者。 关键词：荧光定量PCR;壳寡糖;Hela细胞;细胞周期蛋白 D1;bcl-xl;bcl-2 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.03.012     

人参总皂苷对大鼠脑外伤后神经细胞凋亡的影响

目的 研究人参总皂苷对脑外伤大鼠神经细胞凋亡的影响,探讨其抑制创伤性脑损伤(TBI)后继发性损伤的作用机制.方法 采用改良的Feeney自由落体法建立脑外伤模型,将Sprague-Dawley大鼠54只按照随机数字表法分为假手术组、脑外伤组、人参总皂苷治疗组(治疗组),每组18只.模型建立后24h处死大鼠,采用干湿重法测量脑水含量,光镜下观察尼氏染色海马细胞形态,凋亡细胞原位末端标记法(TUNEL)和免疫组织化学方法观察大脑皮质、海马神经细胞凋亡及凋亡基因bax、bcl-2、caspase-3的蛋白表达情况.结果 与脑外伤组比较,人参总皂苷治疗后的治疗组脑含水量明显减低,损伤侧海马病理学改变明显减轻,神经细胞凋亡减少,bcl-2的表达增高,bax、caspase-3的表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 人参总皂苷可以减轻脑外伤后继发性损伤,其机制可能是升高bcl-2的表达,抑制bax、caspase-3的表达,从而阻滞TBI后神经细胞凋亡.     

线粒体分裂抑制剂在大鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制

目的 探讨线粒体分裂抑制剂(Mdivi-1)在大鼠脑缺血再灌注损伤线粒体凋亡过程中的保护作用及其机制. 方法 按随机数字表法将成年健康雄性Wistar大鼠60只分为假手术组、模型组和Mdivi-1预处理组,每组各20只,其中模型组和Mdivi-1预处理组大鼠采用线栓法经左侧颈外-颈内动脉插线建立脑缺血再灌注损伤模型,并于脑缺血前15 min预先尾静脉给予等容量二甲基亚砜和Mdivi-1(1.2 mg/kg).再灌注24 h后应用TUNEL法观察各组大鼠脑组织神经细胞凋亡情况,SABC免疫组化染色检测细胞色素C(CytC)阳性细胞表达,Western blotting检测CytC蛋白表达,RT-PCR检测CytC mRNA表达. 结果 与假手术组比较,模型组神经细胞凋亡率、Cyt C阳性细胞率、Cyt C蛋白及mRNA表达水平(4.16％±0.25％vs 45.49％±0.77％；4.22％±0.20％vs55.12％±1.47％;0.395±0.002 vs 0.932±0.001;0.467±0.003 vs 0.789±0.009)显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).应用Mdivi-1预处理后神经细胞凋亡率、CytC阳性细胞率、CytC蛋白及mRNA表达水平(30.76％±0.51％; 35.07％± 1.42％; 0.594±0.002；0.523±0.004)较模型组明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Mdivi-1通过阻断线粒体-Cyt C途径从而抑制细胞凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤.     

促红细胞生成素对颅脑损伤后大鼠脑组织中XIAP和Smae／DIABLO表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素（r—HuEPO）对颅脑损伤后大鼠脑组织中抗凋亡因子X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和促凋亡因子第二个线粒体衍生的半胱氨酸蛋白酶激活剂（Smac／DIABLO）表达的影响,并探讨二者在r-HuEPO抗凋亡中的作用。方法采用自由落体法建立大鼠颅脑损伤模型,在伤后不同时间点用末端标记原位细胞凋亡检测法（TUNEL法）检测细胞凋亡,用免疫组织化学法检测XIAP和Smac／DIABLO表达的变化。结果与假手术组相比,颅脑损伤后打击周边区的细胞凋亡数显著增加沪〈0．01）,XIAP和Smac／DIABLO表达水平明显升高（P〈0．05）;与对照组相比,r—HuEPO治疗组XIAP的表达在2—72h时间点明显升高（P〈0．05）,Smac／DIABLO的表达和细胞凋亡数在6h至7d时间点显著下降（尸〈0．05）。结论r—HuEPO可能通过促进XIAP的表达和抑制Smac／DIABLO的表达减少颅脑损伤后的细胞凋亡,发挥脑保护作用。     

脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Akt，bcl-2，Bax和caspase3表达的影响

目的研究脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Akt、bcl-2、Bax、caspase3表达的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞再灌注动物模型,将雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、脑缺血再灌注模型组（MCAO）、脑脉泰大剂量组（MCAO＋脑脉泰2．24g／kg）、脑脉泰中剂量组（MCAO＋脑脉泰1．12g／kg）、脑脉泰小剂量组（MCAO＋脑脉泰0．56g／kg）,每组10只大鼠。脑脉泰组在MCAO前5天开始灌胃给药,连续5d。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和Akt、bcl-2、Bax和caspase3表达。结果脑脉泰大剂量组和中剂量组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少（P〈0．01）,Akt、bcl-2表达显著增加,caspase3和Bax表达减少,与MCAO模型组比较,有显著性差异（分别为P〈0．05和P〈0．01）。结论脑脉泰对脑缺血／再灌注损伤有保护作用,其保护作用与促进Akt和bcl-2的表达,抑制Bax和caspasse3的表达有关。     

黄体酮对创伤性脑损伤大鼠神经细胞凋亡的影响

目的 观察黄体酮对脑外伤后神经细胞凋亡的影响,探讨其对脑外伤(TBI)继发性脑损伤是否存在保护作用.方法 雄性Wistar 大鼠随机分为无脑损伤的假手术(sham)组、脑损伤(TBI)组、脑损伤后注射黄体酮治疗(P-TBI)组及注射二甲基亚砜(DMSO)溶剂(D-TBI)组,每大组24 只,再分1 d、3 d、5 d 和7 d 四个小组,每小组6 只.采用Freeney 法造成鼠脑挫裂伤模型,在伤后四个不同时相点用TUNEL 染色法分别检测四组大鼠脑组织中神经细胞凋亡情况.结果 创伤性脑损伤后凋亡细胞数量在TBI 第1 d 明显增加,TBI后第7 d 神经细胞凋亡达到高峰.伤后注射黄体酮治疗组神经细胞凋亡指数明显下降(P ＜0.05).结论 大鼠TBI 后周围脑组织神经细胞凋亡在伤后持续增加,注射黄体酮能抑制细胞凋亡,对脑组织有一定保护作用.     

PI3K/Akt通路在创伤性脑损伤中的表达及抗凋亡作用

目的 研究创伤性脑损伤(TBI)后脑组织中Akt 蛋白磷酸化激活情况及其在神经细胞凋亡中的作用.方法 24 只雄性Wistar 大鼠,采用自由落体颅脑损伤模型随机分成假手术组、外伤后1 h、3 h、6 h、12 h、1 d、3 d、7 d 组.于相应时间点处死后行蛋白免疫印迹法(western blot)检测磷酸化A...     

脑创伤后bcl—2蛋白的神经保护作用

目的 探讨液压脑损伤后凋亡抑制基因bcl—2的变化规律及bcl—2基因在创伤性脑损伤后细胞凋亡中的作用。方法 应用免疫组化观察大鼠中型液压脑损伤伤前及伤后6h、12h、1d、3d、7dbcl—2蛋白表达情况,应用TUNEIL和电镜观察伤后细胞死亡的形态。结果 免疫反应阳性细胞主要位于伤侧大脑半球皮质、皮层下白质、海马CAl、CA3及齿状回的神经元和神经胶质细胞,以海马CA3区最为显。在高倍镜下,表达Bcl—2蛋白的神经细胞胞核形态正常,很少见到凋亡或坏死的形态特征。伤后早期(6h),打击侧海马CA3区Bcl—2蛋白表达显下降;Bcl—2早期改变出现在伤后6h,比细胞凋亡提前表现;伤后l—3h,Bcl—2的表达下降相对缓慢。结论 bcl—2蛋白在抑制脑创伤后细胞凋亡中起重要作用,bcl—2可能是一种可诱导的神经保护因子。     

自由基清除剂预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响

目的探讨自由基清除剂依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及其相关蛋白Bcl-2、Bax、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、依达拉奉预处理组,每组15只。采用线栓法制作大鼠缺血2h再灌注24h模型。预处理组大鼠建模前12h腹腔注射依达拉奉(3mg/kg),对照组给予等容量生理盐水。再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax、HSP70蛋白表达,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记法检测凋亡细胞。结果依达拉奉预处理组和对照组大鼠缺血周围脑组织中凋亡细胞和Bcl-2、Bax及HSP70阳性细胞数比假手术组均明显增加(P<0.01);与对照组比较,其凋亡细胞和Bax阳性细胞数均明显减少(P<0.01),而Bcl-2和HSP70阳性细胞数明显增加(P<0.01)。结论细胞凋亡在缺血再灌注损伤中起着重要作用;依达拉奉可能通过上调Bcl-2、HSP70蛋白表达、下调Bax蛋白表达减轻大鼠脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤耐受性,从而起到神经保护作用。     

促红细胞生成素对颅脑创伤后炎性反应和细胞凋亡的影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠创伤性脑损伤后(TBI)脑组织核因子NF-κB的表达、下游炎性因子水平及皮层神经细胞凋亡的调控作用.方法 72只Wistar大鼠随机分成对照组、TBI组、TBI+rhEPO组,后两组再分为脑损伤后1 d、3 d、7 d亚组,应用EMSA法检测挫伤灶周围脑组织NF-κB结合活性、ELISA法检测炎性因子TNF-α、IL-6水平、干湿比重法检测脑组织水含量、TUNEL法检测皮层神经细胞凋亡.结果 TBI后脑组织中NF-κB结合活性、炎性因子水平持续升高;伤后脑水肿明显;TUNEL阳性细胞显著增多.给予rhEPO治疗后,脑组织NF-κB结合活性、TNF-α、IL-6水平、伤侧脑组织水肿程度及神经细胞凋亡均比TBI组降低(P＜O.01).结论 rhEPO能够抑制TBI后脑组织NF-κB的结合活性、降低下游炎性因子的表达和脑水肿程度、减少神经细胞凋亡,明显减轻继发性脑损害.

Abstract：

Objective To investigate the role of rhEPO in regulating expression of nuclear factor -kappaB (NF - κB) , proinflammatory cytokines and neural apoptosis in the injured brain following traumatic brain injury. Methods A total of 72 Wistar rats were randomly divided into control group, trauma group and rhEPO treatment group. TBI group and rhEPO group sacrificed at days 1, 3 and 7 post injury respectively. Activity of NF - κB in the brain tissues were detected by using EMSA and levels of TNF - αand IL - 6 by ELISA. The water content of the injured brain was measured by dry - wet weight method. Furthermore, apoptosis in the cortical contusion was estimated by TUNEL method. Result The result showed a persistent up - regulation of NF - κB binding activity, expression of TNF -α,IL -6 in the area surrounding the injuried brain and significant brain edema. The TUNEL positive cells significantly increased. The level of NF - κB binding activity and inflammatory factors expression, the water content of the injury brain and apoptosis can be significantly decreased by administration of rhEPO ( P ＜ 0.01). Conclusion rhEPO administration can inhibit the binding activity of the NF - κB, down - regulate the expression of the inflammatory factors, alleviate the brain edema and apoptosis and decrease the secondary brain injury after TBI.     

葛根素对血管性痴呆大鼠行为学及额叶细胞凋亡的影响

目的研究葛根素对血管性痴呆（vD）大鼠行为学及额叶细胞凋亡的影响。方法采用大鼠双侧颈总动脉（CCA）永久性阻断法（2一VO）建立VD大鼠模型,大鼠随机分为假手术组、2-2VO组和葛根素组,各组大鼠又分为4、8周2个时间点。用暗回避反应法测定学习记忆能力,并应用免疫组织化学法、原位末端标记法检测大鼠额叶bcl-2蛋白表达水平及凋亡细胞数。结果2-2VO组和葛根素组大鼠潜伏期明显缩短,但与22VO组比较葛根素大鼠潜伏期均显著延长。2-2VO组和葛根素组大鼠额叶bcl-2的表达水平及凋亡细胞数均较假手术组明显增高,葛根素组bcl-2的表达水平较2-2VO组明显增高,而凋亡细胞数较2-2VO组明显减少。结论葛根素可通过上调bcl-2基因表达而抑制细胞凋亡,改善VD大鼠的学习记忆能力。     

超短波治疗对急性闭合性颅脑损伤大鼠脑NMDAR1及GAP-43表达的影响

目的探讨超短波治疗对急性闭合性颅脑损伤后神经保护及神经可塑性的影响。方法将54只成年大鼠随机分为超短波治疗组、对照组和正常组,治疗组和对照组又分为伤后1、3、7和14d组,每组6只动物。采用自由落体撞击法制作大鼠急性闭合性颅脑损伤模型。以无热量超短波照射大鼠脑部,用免疫组化方法测定各组大鼠脑N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)和生长相关蛋白(GAP-43)的表达。结果与对照组比较,超短波治疗组NMDAR1免疫阳性细胞数在伤后1d时明显降低(P0.05),伤后3、7、14d时则明显升高(P0.05);GAP-43免疫阳性细胞数在伤后1d时与对照组无明显差异(P0.05),在伤后3、7、14d时则明显升高(P0.05)。结论本研究提示,颅脑损伤后适时的超短波治疗对损伤的脑组织有保护作用,这种保护可能是通过其调节MMDAR1和GAP-43的表达来实现的。