环氧合酶-2选择性抑制剂NS-398抑制肿瘤细胞的作用机制

目的:探讨COX-2选择性抑制剂NS-398对肿瘤细胞抑制的作用机制。方法:选择持续表达COX-2的人食管癌细胞株EC9706和不表达COX-2的肝癌细胞株SMMC7721作为研究对象，采用［3H］-TdR掺入法检测不同浓度（10、20、50、100 μmol/L）NS-398和作用24 h、48 h、72 h对细胞的增殖抑制效应；流式细胞术（FCM）及DNA片段分析法检测NS-398诱导的细胞凋亡情况；免疫细胞化学方法检测NS-398作用后细胞内survivin表达变化。结果:经不同浓度的NS-398处理，EC9706及SMMC7721的［3H］-TdR掺入量均明显少于空白对照组（P<0.05或P<0.01），具有时间和剂量-效应关系。FCM检测发现EC9706在G1期前出现亚倍体凋亡峰，细胞凋亡率达(45.23±1.08)%，并出现典型的细胞凋亡梯带；而SMMC7721无凋亡峰出现，细胞凋亡率为(3.05±0.15)%，两组比较有显著性差异（P<0.01）。经100 μmol/L NS398作用24 h后，EC9706细胞内survivin表达与未经NS-398作用的EC9706细胞表达明显减少，而SMMC7721表达无变化。结论:NS398通过不同作用机制对肿瘤细胞发挥抑制作用，对COX-2表达阳性的肿瘤细胞具有诱导凋亡作用，与抑制survivin表达有关，而对无表达COX-2的肿瘤细胞无诱导凋亡作用。     

18β-甘草次酸哌嗪衍生物A30抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖北大核心CSCD

目的研究18β-甘草次酸(18β-GA)哌嗪衍生物A30抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的机制。方法实验分为对照组、18β-GA组、A30组,采用MTT法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测SMMC-7721细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测胱天蛋白酶8(caspase-8)和Bcl2蛋白水平。结果 (2~128)μg/m L A30均可抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈剂量依赖性。18β-GA和A30均可诱导SMMC-7721细胞凋亡,并且A30处理细胞的凋亡率显著高于18β-GA组。与对照组相比,18β-GA和A30组的G2/M期细胞显著增加,caspase-8蛋白水平均显著升高,而Bcl2水平均显著降低。结论 A30能抑制SMMC-7721细胞增殖,抑制效果强于18β-GA,与降低细胞Bcl2水平和增加caspase-8水平有关。     

外源性三磷酸腺苷对人食管癌Eca-109和肝癌SMMC-7721细胞增殖和周期的影响

目的研究三磷酸腺苷(ATP)对于人食管鳞癌Eca-109细胞系和人肝癌SMMC-7721细胞系的抗增殖作用和作用机制。方法用MTT法测定肿瘤细胞的增殖,AO/EB双荧光染色法观察细胞形态学的改变,流式细胞仪定量检测细胞增殖周期、凋亡率及凋亡相关蛋白的改变。结果ATP在0.01~0.3mmol/L浓度范围内,可不同程度地抑制Eca-109和SMMC-7721细胞的增殖。细胞分别经0.3mmol/L的ATP处理72h后,少量SMMC-7721细胞形态出现了凋亡特征,而Eca-109细胞无明显凋亡特征;ATP0.03、0.1和0.3mmol/L分别处理细胞72h后,两株细胞的凋亡率及凋亡相关蛋白均无显著变化。ATP0.3mmol/L可使Eca-109细胞的G0/G1细胞数目显著增多,S期细胞显著减少,增殖指数显著降低。结论ATP通过增加G0/G1期细胞和减少S期细胞,抗食管癌Eca-109细胞增殖,此作用与诱导细胞凋亡无关。而ATP对肝癌SMMC-7721细胞的抗增殖作用与周期无关。     

蛇床子素通过上调抑癌基因PTEN 抑制肝癌细胞HepG2 增殖并促进细胞凋亡

目的:探究蛇床子素对肝癌细胞Hep G2增殖及凋亡的作用及作用机制。方法:用不同浓度蛇床子素处理肝癌细胞,CCK8检测细胞活性,流式检测细胞凋亡,Western blot检测细胞增殖、凋亡标记蛋白及PTEN的表达;同时用PTEN抑制剂bp V(HOpic)处理细胞,CCK8和流式再次检测细胞增殖及凋亡情况。结果:100μmol/L蛇床子素作用4 d和5 d能明显降低细胞增殖倍数(P0. 05),150μmol/L蛇床子素作用3 d、4 d和5 d也可显著降低细胞增殖倍数(P0. 05,P0. 01),并且蛇床子素(100μmol/L,150μmol/L)还能显著抑制细胞增殖标记蛋白Ki67和PCNA的表达,并体现量效关系(P0. 05,P0. 01);同时,蛇床子素(100μmol/L,150μmol/L)能明显促进肝癌细胞凋亡及凋亡标记蛋白Bax表达,降低Bcl-2蛋白表达水平(P0. 05,P0. 01);此外,蛇床子素(100μmol/L,150μmol/L)还能显著促进抑癌基因PTEN的表达(P0. 05,P0. 01);bp V(HOpic)能明显减弱蛇床子素对肝癌细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用(P0. 05)。结论:蛇床子素能通过上调PTEN表达抑制肝癌细胞Hep G2增殖、促进肝癌细胞凋亡。     

辛二酰苯胺异羟肟酸通过内质网应激凋亡通路诱导HepG2细胞凋亡

目的:探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对人肝癌细胞株HepG2增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法:分别给予不同浓度的SAHA处理HepG2细胞48 h,采用实时无标记细胞分析法检测细胞增殖情况;Western blot法检测组蛋白H3K9和H3K27的乙酰化水平,以及葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)和p-PERK蛋白水平的变化;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与对照组相比,0.1和1μmol/L SAHA处理48 h对HepG2细胞增殖无明显抑制作用,6和12μmol/L SAHA组HepG2细胞增殖率明显下降(P0.05);Western blot检测发现,与对照组比较,不同浓度的SAHA处理细胞48 h后,ac H3K9和ac H3K27表达水平明显升高,GRP78蛋白表达显著上调,PERK蛋白表达显著下调,而p-PERK的蛋白水平显著增加(P0.05);流式细胞术检测发现,随着SAHA浓度的增高,HepG2细胞的凋亡逐渐增加。结论:SAHA可上调HepG2细胞中组蛋白H3K9和H3K27的乙酰化修饰水平,并通过激活内质网应激相关凋亡通路来诱导HepG2细胞发生凋亡。     

全反式维甲酸对小鼠肝癌细胞Hepa1-6增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的探讨不同浓度的全反式维甲酸(ATRA)对小鼠肝癌细胞Hepa1-6体外增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及肝癌细胞间质标志蛋白和miR200家族的表达情况。方法以Hepa1-6小鼠肝癌细胞为研究对象,给予0、0.1、1.0和10.0μmol/L终浓度的ATRA处理,结晶紫染色检测细胞增殖,锥虫蓝拒染实验计数活细胞。Hoechst检测细胞凋亡,划痕实验检测迁徙能力,Transwell实验检测侵袭能力,荧光定量PCR(real-time PCR)法检测间质标志蛋白N-cadherin、sail和vimentin和0和10μmol/L ATRA处理后的miR200家族的mRNA表达。结果 ATRA处理后Hepa1-6细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显下降(P0.05),凋亡率增高(P0.05),间质标志蛋白N-cadherin、sail和vimentin的表达明显下调(P0.05),ATRA的浓度越高,这些作用越明显。10μmol/L ATRA处理后miRNA200a-3p,200c-3p,141-3p显著上调。结论 ATRA呈浓度依赖性促进肿瘤细胞Hepa1-6凋亡,抑制其增殖、迁移及侵袭能力,这可能与ATRA上调microRNA200家族,抑制细胞的间质表型有关。     

VEGFsiRNA对肝癌SMMC 7721细胞株VEGF表达和增殖的抑制作用

目的：探讨VEGFsiRNA对肝癌SMMC 7721细胞株VEGF表达和增殖的抑制作用。 方法： 采用siRNA设计法则并用计算机辅助设计9条VEGFsiRNA序列，长度为19个核苷酸；体外构建9条VEGFsiRNA序列，通过脂质体介导转入肝癌SMMC 7721细胞株，培养72 h，采用CCK8试验分析VEGFsiRNA（25nmol/L）对细胞增殖的抑制效果，用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平，流式细胞仪检测细胞周期的改变。 结果： VEGFsiRNA1-VEGFsiRNA 9序列对肝癌细胞的增殖有明显抑制作用，与脂质体对照组和空白对照组相比均有显著差异（P<0.05）；其中，VEGFsiRNA 2、VEGFsiRNA 4、VEGFsiRNA 6、VEGFsiRNA 7、VEGFsiRNA 8、VEGFsiRNA 9对细胞增殖的抑制效果均强于反义寡核苷酸组。VEGFsiRNA1- VEGFsiRNA 9序列均能下调肝癌细胞VEGF蛋白的表达水平，以VEGFsiRNA 7和VEGFsiRNA2的效果最强，抑制率分别为52.65%和50.43%。VEGFsiRNA将肝癌细胞阻滞在S期，但未引起细胞凋亡现象。 结论： 成功地设计和合成VEGFsiRNA。后者能有效地抑制肝癌细胞的增殖，降低VEGF蛋白的表达量。     

泛素偶联酶UBE2C／UbcH10荧光蛋白表达载体的构建及肝癌细胞中的表达

目的构建人泛素偶联酶UBE2C／UbcH10荧光蛋白真核表达载体,并转染肝癌细胞,筛选建立稳定转染细胞株。方法从构建好的pMD19-T／UbcH10载体中PCR扩增UbcH10基因,PCR产物双酶切后克隆入pEGIZP—N1真核表达载体中,构建真核表达载体pEGFP—N1／UbcH10,进行双酶切和测序鉴定。将构建好的真核表达载体pEGFP—N1／UbcH10和空载体pEGFP—N1利用脂质体Lip2000^TM分别转染进入肝癌细胞SMMC7721中,建立肝癌细胞SMMC7721的G418细胞死亡曲线,选择G418的筛选浓度,经G418结合荧光显微镜观察筛选稳定转染细胞。将筛选获得的肝癌细胞进行有限稀释法单克隆化,收集单个细胞克隆扩大培养备用。结果经双酶切和测序鉴定,带有荧光蛋白标记的真核表达载体pEGFP—N1／UbcH10构建成功,经脂质体介导真核表达载体pEGFP—N1／UbcH10和空载体pEGFP-N1成功转入肝癌细胞SMMC7721中,经800μg／mL G418筛选并进行单克隆化获得稳定转染的细胞株SMMC7721-pEGFP—N1和SMMC7721-pEGFP-N1／UbcH10,阳性转化率达到94％以上。结论人泛素偶联酶UBE2C／UbcH10稳定高表达肝癌细胞株的建立,为该蛋白在肝癌发生发展过程中的具体作用机制的研究奠定了基础。     

舒尼替尼对胃癌细胞BGC-823增殖的影响及机制

探索舒尼替尼对胃癌细胞BGC-823增殖的影响及机制。不同浓度舒尼替尼处理BGC-823细胞24、48、72、96 h后,MTT法检测细胞增殖,得出药物的半数抑制浓度为0.592 8μmol/L。筛选出比较接近半数致死量的3个药物浓度0.25、0.50、1.00μmol/L作用细胞48 h后,细胞核染色检测细胞凋亡;免疫荧光染色法检测Notch-1的表达及细胞凋亡水平;蛋白质免疫印迹检测Notch-1、caspase-3、caspase-9蛋白表达水平。MTT检测结果显示,舒尼替尼在浓度0.156 25～10μmol/L时可显著抑制BGC-823细胞增殖,且具有时间和剂量依赖性。细胞核染色结果显示,不同浓度的舒尼替尼处理BGC-823细胞48 h后随浓度的增加,细胞凋亡数量显著增多。蛋白质免疫印迹结果显示,不同浓度舒尼替尼作用48 h后,Notch-1蛋白的表达水平随浓度的增加而降低,caspase-3、caspase-9表达水平随浓度的增加而升高。舒尼替尼通过抑制Notch-1的信号通路活性,进而抑制BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-155在中介素促进肝癌细胞增殖中的作用

目的 MicroRNAs(miRNAs)在恶性肿瘤发生发展过程中起到重要作用,小分子多肽中介素(Intermedin,IMD)可促进肝癌细胞的增殖活性。本文探讨了miR-155在中介素促进肝癌细胞增殖中的作用。方法以CCK-8检测试剂盒检测SMMC7721肝癌细胞增殖,实时定量PCR方法检测增殖细胞核抗原PCNA和miR-155的表达。结果与中介素可以呈时间和剂量依赖关系诱导肝癌SMMC7721细胞的增殖,同时可显著上调miR-155mRNA表达水平;而阻断miR-155可在一定程度上抑制由中介素诱导的SMMC7721细胞增殖。结论中介素促肝癌细胞增殖作用可能与上调miR-155表达相关。     

RNAi沉默Beclin 1基因对维生素K3损伤人肝癌细胞SMMC-7721的影响

目的： 探讨应用RNAi技术沉默Beclin 1基因对维生素 (vitamin K3,Vit K3)引起的人肝癌SMMC-7721细胞损伤的影响。方法: 应用真核细胞转染技术将Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人肝癌SMMC-7721细胞,同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照。于48 h后收集细胞,分别提取细胞总RNA及总蛋白,通过RT-PCR和Western blotting检测Beclin 1基因表达。应用40 μmol/L Vit K3作用Beclin 1-siRNA细胞株,Hoechst 33342染色检测细胞凋亡率。结果: 与对照组相比,siRNA重组质粒明显降低Beclin 1 mRNA水平,抑制其蛋白表达。40 μmol/L Vit K3作用人肝癌SMMC-7721细胞Beclin 1 mRNA表达明显高于对照组,细胞凋亡率增加(P<0.01）;而Beclin 1-siRNA细胞株,Beclin 1 mRNA表达显著低于对照组,与40 μmol/L Vit K3作用组相比细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论: Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1转染人肝癌SMMC-7721细胞后,可有效抑制Beclin-1 mRNA和蛋白的表达,抑制Vit K3引起的Beclin 1依赖性细胞自噬信号通路的激活,促进细胞凋亡。     

土荆皮乙酸促进喉癌细胞系HEp-2凋亡

目的本文观察土荆皮乙酸(PAB)对人喉表皮样癌细胞系2(HEp-2)的增殖和凋亡的影响。方法细胞分组及处理:以0、0.5、1、2、4、8和16μmol/L的PAB分别处理细胞24、48和72 h;MTT法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot和qPCR检测细胞Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白及mRNA表达;免疫组化检测细胞PARP和c-PARP蛋白的表达。结果 PAB呈时间-浓度依赖性抑制HEp-2增殖。与对照组比较,4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞凋亡率均显著升高(P<0.01);4和8μmol/L PAB组HEp-2细胞的Bcl-2和PARP表达均显著下降(P<0.05);Bax、caspase-3和c-PARP的表达均显著升高(P<0.05)。结论 PAB可激活线粒体凋亡途径,诱导HEp-2细胞凋亡。     

Caspase-3抑制剂抑制长春碱诱导的人乳腺癌细胞凋亡及IκΒ-α降解

目的： 本实验通过阻断caspase-3途径,观察长春碱诱导的肿瘤细胞凋亡及胞浆内IκΒ-α蛋白降解的影响,以探索长春碱诱导肿瘤细胞凋亡的信号转导途径。方法: 用二甲基亚砜对照、100 μmol/L caspase-3抑制剂(DEVD-CHO)预处理乳腺癌Bcap37细胞3 h后,加入不同浓度的长春碱,以MTT法检测肿瘤细胞增殖能力,以细胞DNA片段分析及PI染色法检测肿瘤细胞凋亡,以蛋白免疫印迹法检测pro-caspase-3和IκΒ-α蛋白的变化。结果: 蛋白免疫印迹法证实长春碱可诱导pro-caspase-3蛋白的降解。经MTT法、DNA凋亡梯状条带法及流式细胞仪PI染色法证实,DEVD-CHO能减弱由长春碱所诱导的肿瘤细胞凋亡。两组的IC50分别为56.8 μmol/L和87.4 μmol/L。蛋白免疫印迹实验表明,DEVD-CHO能抑制由长春碱所诱导的IκΒ-α蛋白磷酸化降解。结论: 在长春碱诱导肿瘤细胞凋亡过程中,NF-κΒ/IκΒ信号转导途径起着重要作用,caspase-3途径参与调节。阻断该途径将减弱长春碱所诱导的肿瘤细胞凋亡和IκΒ-α磷酸化降解。     

miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响

 目的: 研究微小RNA-141(miR-141)在人肝癌细胞和正常胎肝细胞中的表达,同时分析miR-141表达异常对人肝癌细胞恶性生物学表型的影响。方法: 分别提取人肝癌细胞SMMC-7721和正常肝细胞HL-7702的总RNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-141的表达。采用脂质体介导的转染方法分别将miR-141 mimic转染SMMC-7721细胞,将miR-141 inhibitor转染HL-7702细胞;MTS试剂盒和BrdU-ELISA检测细胞增殖能力,流式细胞术检测转染前后细胞周期和凋亡率的变化。Transwell实验检测miR-141表达变化对细胞体外迁移能力的影响。结果: miR-141在SMMC-7721细胞中的表达较HL-7702细胞明显下降。与空白组、脂质体组和阴性对照组相比,转染25 nmol/L miR-141 mimic的SMMC-7721细胞中,细胞增殖速度减慢,S期细胞比例降低,凋亡细胞比例上升,细胞体外迁移能力下降;转染50 nmol/L miR-141 inhibitor的HL-7702细胞中,细胞增殖速度加快,S期细胞比例上升,凋亡细胞比例下降,细胞体外迁移能力增强。结论: miR-141在人肝癌细胞中表达下降,上调miR-141表达可抑制肝癌细胞体外增殖活性和迁移能力,影响细胞周期和凋亡。在肝癌发病进程中,miR-141可能扮演抑癌基因的角色。     

基于p38-MAPK信号通路探讨和厚朴酚对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的基于p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-mitogen activated protein kinases,p38-MAPK)探讨和厚朴酚(honokiol,HNK)对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响.方法将体外培养HCT116细胞分为对照组(0 μmol/L)、HNK低剂量(20 μmol/L)、中剂量(40 μmol/L)和高剂量组(80μmol/L)。采用CCK-8法和克隆形成试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western印迹检测p38、p-P38、细胞增殖指数67(cell proliferation index 67,Ki67)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、BCL2相关X蛋内(B-cell lymphoma-2 associated X protein,Bax)和裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋内酶3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。将HCT116细胞分为空内对照组(0μmol/L)、HNK组(80μmol/L)、SB203580组(10 μmoL/L)和SB203580+HNK组(SB203580 10μmol/L+HNK 80 μmol/L),检测SB203580对各组细胞增殖、凋亡以及Ki67、cleaved Caspase3蛋白表达的影响。结果与对照组比较,HNK中高剂量组HCT116细胞的相对增殖率和克隆形成率明显降低,细胞凋亡率明显升高,Ki-67、Bcl-2蛋白表达明显下降,p-p38/p38、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05),且随着HNK剂量增加,其作用明显增加(P<0.05)。与空白对照组比较,SB203580组细胞相对增殖率明显升高,细胞凋亡率明显下降,Ki67蛋内表达明显升高,cleaved Caspase-3蛋白表达明显下降(P<0.05);与SB203580组比较,SB203580+HNK组细胞相对增殖率明显下降,细胞凋亡率明显升高,Ki67蛋白表达明显下降,cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论HNK可以激活p38-MAPK信号通路,抑制HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

乌司他丁预处理对HepG2细胞氧化损伤保护作用的研究

目的 探讨乌司他丁（UTI）预处理对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法 将HepG2细胞常规培养传代,随机分为H2O2组,UTI100+H2O2组、UTI500+H2O2组、UTI1000+H2O2组及对照组,其中对照组不作任何处理,H2O2组,UTI100+H2O2组、UTI500+H2O2组、UTI1000+H2O2组分别加入浓度为0 μmol/L、100 μmol/L、500 μmol/L、1000 μmol/L UTI预处理,24 h后加入300 μmol/L H2O2处理4 h,体外模拟肝细胞损伤。CCK-8试剂盒和LDH试剂盒检测LDH变化评价细胞损伤;TUNEL检测细胞凋亡率;Western blot检测HepG2细胞中LC3-Ⅱ、Cleaved caspase-3的表达变化情况。结果 与H2O2组相比较,CCK-8和LDH检测结果提示,各TUI预处理组能改善细胞生存环境,减轻H2O2对HepG2细胞的应激损伤,提高细胞活力（P＜0.05）;TUNEL检测提示预处理可降低氧化应激导致的凋亡率（P＜0.05）; Western blot结果提示,与H2O2组比较,UTI可上调LC3-Ⅱ的表达（P＜0.05）,促进细胞自噬的发生,降低Cleaved caspase-3表达,抑制细胞凋亡 (P＜0.05)。结论 UTI可以通过激活LC3-Ⅱ表达,促进细胞自噬,发挥保护作用,拮抗氧化应激导致的细胞凋亡。     

姜黄素对前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响

目的:姜黄素对前列腺癌细胞株LNCap增殖和凋亡的影响。 方法:用不同剂量的姜黄素分别处理LNCap细胞，显微镜下观察细胞形态；MTT法检测细胞生长情况；流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡率；然后检测姜黄素处理LNCap细胞后培养液中总前列腺特异抗原（PSA）的变化，并用免疫印迹Western blotting技术检测雄激素受体（AR）的表达。 结果:姜黄素能够抑制前列腺癌细胞LNCap的增殖和生长，40 μmol/L作用24 h最强，细胞存活率为对照的40%；姜黄素诱导LNCap细胞凋亡，细胞形态呈凋亡特征，且40 μmol/L作用最强，凋亡率为9.23%；姜黄素抑制LNCap细胞PSA表达，且40 μmol/L姜黄素处理细胞24 h对PSA表达的抑制作用最强，PSA含量仅为对照的20%；Western blotting检测结果显示姜黄素抑制AR的表达，并且对AR表达的抑制程度依赖于姜黄素的浓度。 结论:姜黄素抑制LNCap细胞增殖，诱导细胞凋亡，且表现出时间和剂量依赖性。姜黄素抑制LNCap细胞PSA与AR 受体的表达。     

乙酰肝素酶反义硫代寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞系侵袭力的抑制作用

目的探讨乙酰肝素酶反义硫代寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞系侵袭力的抑制作用。方法设计合成互补于HPAmRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS-ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS-ODN,以阳离子脂质体OligofectamineTMReagent包埋后转染SMMC-7721、BEL-7402细胞。采用RT-PCR和Western-blot检测转染前后细胞HPAmRNA及蛋白表达的变化,以基底膜重建实验检测SMMC-7721、BEL-7402细胞侵袭力的变化。结果与正常对照组相比,AS-ODN转染组SMMC-7721、BEL-7402细胞HPAmRNA和蛋白的表达均显著下降(P<0.01,P<0.05),转染后两细胞系的侵袭力抑制率分别为55.8%和61.8%。结论HPA硫代反义寡脱氧核苷酸可通过下调HPAmRNA和蛋白的表达抑制肝癌的侵袭力。     

三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨

目的:观察三氧化二砷对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法: 应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402细胞生长的抑制作用,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果: 三氧化二砷浓度为0.50 μmol/L、作用时间为24 h可显著抑制肝癌细胞系BEL-7402的生长,抑制作用呈时间、剂量依赖性;对SMMC-7721细胞,三氧化二砷浓度为2.00 μmol/L、作用时间为24 h才出现抑制细胞生长作用,二者的生长抑制率存在显著差异,0.25-2.00 μmol/L As₂O₃作用72 h后,BEL-7402细胞的生长抑制率均高于SMMC-7721细胞(P＜0.05)。检测SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH含量分别为(50.8±5.2)μmol/g protein和(18.7±1.4)μmol/g protein,存在明显差异。 结论:三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402的生长存在显著的差异;BEL-7402细胞对三氧化二砷非常敏感性,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低,细胞的氧化还原解毒系统不足有关。     

陡脉冲电场对体外人肝癌细胞SMMC-7721的诱导凋亡作用

为研究陡脉冲电场的诱导凋亡作用,以体外人肝癌细胞SMMC-7721为实验对象,采用Annexin V-FITC/PI双染色并利用流式细胞术检测磷脂酰丝氨酸(PS)外翻,采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解片段化.实验发现,陡脉冲电场能有效(P<0.05)地使PS外翻,并且微秒级陡脉冲(μsSPEF)比纳秒级陡脉冲(nsSPEF)更有效(P<0.05);陡脉冲电场能使DNA降解片段化,且nsSPEF比μsSPEF更有效.实验结果表明,陡脉冲电场能有效诱导体外人肝癌细胞凋亡,其机理与陡脉冲电场非热效应及其频谱特性有关.μsSPEF主要作用于细胞膜,而可能通过外源性通路诱导细胞凋亡;nsSPEF主要作用于细胞核和线粒体等胞内细胞器,可能通过内源性通路诱导细胞凋亡.实验结果为陡脉冲电场杀伤肿瘤细胞的机制和参数选择提供了依据.