康莱特对HL-60/ADR细胞周期蛋白A表达的影响

目的 探索康莱特对HL-60/ADR细胞周期蛋白CyclinA表达的影响.方法 (1)康莱特作用HL-60/ADR细胞后,MTT法检查阿霉素对该细胞的抑制效应;(2)收集康莱特作用后的HL-60/ADR细胞,一定浓度阿霉素作用一定时间,流式细胞仪检查细胞内阿霉素的浓度;(3)康莱特作用对数生长期HL-60/ADR细胞,流式细胞仪分析细胞周期的变化及细胞周期蛋白CyclinA的表达.结果 (1)1mg/ml康莱特作用HL-60/ADR细胞96h,阿霉素对该细胞的抑制效应较对康莱特未作用的HL-60/ADR细胞抑制效应强,P＜0.05;(2)不同浓度的康莱特作用HL-60/ADR细胞96h后,1.5ug/ml的阿霉素作用6h,HL-60/ADR细胞内的阿霉素荧光强度均较对照组高,P＜0.05,且具有剂量依赖关系;(3)1mg/ml康莱特作用HL-60/ADR细胞48h,HL-60/ADR细胞的细胞周期蛋白A的mean值(1207.9±109.6)较对照组(798.04±93.3)高,P＜0.05.但康莱特对HL-60/ADR细胞周期的影响与对照组比较无显著性差异.结论 康莱特具有上调HL-60/ADR细胞周期蛋白A的表达,此可能是康莱特增强HL-60/ADR对阿霉素敏感性的机理之一.     

蟾酥灵对HL-60/ADR作用的研究

目的 :探讨中药蟾酥灵对HL -60 /ADR耐药细胞在抑制生长、诱导凋亡方面的作用和影响。方法 :①MTT比色法观察对细胞的抑制 ;②流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 :①蟾酥灵抑制HL -60 /ADR耐药细胞的生长 ,药物浓度与HL -60 /ADR细胞生长抑制率之间呈指数关系 ;②随着药物浓度的增加 ,HL -60 /ADR细胞凋亡率也增加。结论 :蟾酥灵可抑制HL -60 /ADR细胞生长 ,促进细胞凋亡呈剂量依赖性     

^32P照射对HL-60细胞增殖周期的影响

目的 观察^32P照射对HL-60细胞周期的影响。方法 不同剂量^32P体外照射HL-60细胞24、48和72h，流式细胞法检测细胞周期。结果 不同剂量^32P照射HL-60细胞对细胞周期有明显影响，首先发生G2/M期阻滞；随剂量增大，G2/M期和S期均发生阻滞，以G2/M期阻滞为主。结论 ^32P体外照射HL-60细胞对细胞周期有明显的干扰作用。     

岩大戟内酯B对耐阿霉素白血病细胞株HL-60/ADR细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨死亡受体通路在岩大戟内酯B诱导的耐阿霉素白血病细胞株HL-60/ADR细胞凋亡中的作用。方法采用Annexin V异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(FITC/PI)双染流式细胞术检测HL-60/ADR细胞凋亡;利用Western blot检测Fas/Fas L蛋白的表达;采用荧光比色法测定细胞内caspase-8和caspase-3蛋白酶活性。结果 HL-60/ADR细胞的凋亡率随着岩大戟内酯B浓度的增加及作用时间的延长而逐渐增加。当岩大戟内酯B浓度为40 mg·L-1时,作用24、48及72 h后早期凋亡率和总凋亡率与0 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.001);当浓度为20、40、80 mg·L-1时,作用48 h后早期凋亡率和总凋亡率与0 mg·L-1比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。Fas/Fas L蛋白的表达随着岩大戟内酯B作用时间的延长逐渐增加;caspase-8和caspase-3蛋白酶的活性亦逐渐增加。作用24、48及72 h后caspase-3和caspase-8蛋白酶活性与0 h比较,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.001)。结论岩大戟内酯B能够诱导耐阿霉素白血病细胞株HL-60/ADR细胞凋亡,Fas/Fas L通路参与了岩大戟内酯B诱导的HL-60/ADR细胞凋亡过程。     

康莱特对阿霉素抑制HL-60细胞增效作用的研究

目的探索康莱特对阿霉素抑制HL-60细胞增效作用机理.方法①应用不同浓度康莱特作用对数生长期HL-60细胞,采用细胞计数法测HL-60细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞周期的变化.②康莱特作用HL-60细胞96h后,MTT法检查一定浓度阿霉素对HL-60细胞的抑制效应,流式细胞仪检查细胞内阿霉素的浓度.结果①1mg/ml康莱特作用HL-60细胞培养第6天,细胞计数(10.3±1.1)×105个/ml,较未加药组细胞计数(20.5±3.5)×105个/ml低,P＜0.05.②1.0mg/ml康莱特作用HL-60细胞96h,S期细胞明显增多(64.76±1.2)%,与对照组(56.67±0.6)%比较有显著性差异,P＜0.05.③0.1mg/ml康莱特作用96h后的HL-60细胞,0.001μg/ml的阿霉素对其作用24h抑制率为(24.2±5.3)%,与对照组(16.7±3.9)%比较有显著性差异,P＜0.05.0.2μg/ml的阿霉素作用6h,HL-60细胞内的阿霉素荧光强度(12.8±1.7)较对照组(8.8±1.2)高,P＜0.05.结论康莱特具有增强阿霉素抑制HL-60细胞作用,机理可能与康莱特使HL-60细胞堆积于S期,增加HL-60细胞内的阿霉素浓度有关.     

32P照射对HL-60细胞增殖周期的影响

目的 观察³²P照射对HL-60细胞周期的影响。方法 不同剂量³²P体外照射HL-60细胞24、48和72h,流式细胞法检测细胞周期。结果 不同剂量³²P照射HL-60细胞对细胞周期有明显影响,首先发生G₂/M期阻滞;随剂量增大,G₂/M期和S期均发生阻滞,以G₂/M期阻滞为主。结论 ³²P体外照射HL-60细胞对细胞周期有明显的干扰作用。     

槲皮素逆转HL-60/ADR多药耐药机制的研究

目的探讨槲皮素在体外逆转耐药细胞株HL-60/ADR的多药耐药.方法以HL-60/ADR细胞为研究对象,用RT-PCR法检测耐药基因MRP1的表达及槲皮素对其表达的影响;采用共聚焦激光扫描显微镜观察槲皮素作用前后柔红霉素(DNR)在耐药细胞HL-60/ADR内亚细胞结构分布的改变.结果 HL-60/ADR中有MRP1的过量表达,且槲皮素能下调该基因的表达;槲皮素能恢复DNR在HL-60/ADR细胞中的异常分布,回归其作用靶点,逆转耐药.结论 DNR在耐药细胞中的异常分布与肿瘤细胞耐药基因形成有关,槲皮素在体外直接抑制MRP1功能,恢复DNR在细胞内的分布.     

槲皮素逆转HL-60/ADR多药耐药机制的研究

目的探讨槲皮素在体外逆转耐药细胞株HL-60/ADR的多药耐药.方法以HL-60/ADR细胞为研究对象,用RT-PCR法检测耐药基因MRP1的表达及槲皮素对其表达的影响;采用共聚焦激光扫描显微镜观察槲皮素作用前后柔红霉素(DNR)在耐药细胞HL-60/ADR内亚细胞结构分布的改变.结果 HL-60/ADR中有MRP1的过量表达,且槲皮素能下调该基因的表达;槲皮素能恢复DNR在HL-60/ADR细胞中的异常分布,回归其作用靶点,逆转耐药.结论 DNR在耐药细胞中的异常分布与肿瘤细胞耐药基因形成有关,槲皮素在体外直接抑制MRP1功能,恢复DNR在细胞内的分布.     

冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响

目的探讨冬凌草甲素对HL-60细胞p53表达及细胞周期的影响。方法通过PI染色,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡峰,并以RT-PCR检测p53基因的表达。结果流式细胞仪分析显示,冬凌草甲素处理后使细胞周期发生变化:G1期、S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增加,凋亡的细胞数比例增多,且随着药物浓度的增加而逐渐增加。RT-PCR检测结果显示,20μmol/L冬凌草甲素作用后,与对照组相比,HL-60细胞p53 mRNA水平显著升高,且随时间延长表现得更为明显。结论冬凌草甲素能使细胞周期发生变化和p53基因的上调,从而诱导细胞发生凋亡。     

丙戊酸对HL-60/HT细胞P27Kip1 、P170表达水平及耐药性的影响

目的 观察丙戊酸对白血病细胞P27Kip1、P170表达水平和耐药性的影响,探讨其可能的作用机制. 方法 递增压力选择培养法建立白血病耐药细胞株HL-60/HT,MTT法检测丙戊酸作用前后细胞的增殖情况及对Ara-C耐药性的改变,流式细胞术测定HL-60细胞、HL-60/HT细胞中P27Kip1、P170的表达和细胞周期. 结果 成功诱导培养建立耐药HL-60/HT细胞,其对HT、VCR、DNR、Ara-C的耐药倍数分别为9.30、5.20、4.91、3.65倍,耐药性能稳定.HL-60/HT细胞P27Kip1表达水平明显低于正常人单个核细胞及HL-60细胞(P<0.05),P170表达水平则明显高于正常人单个核细胞及HL-60细胞(P<0.05). 丙戊酸+Ara-C联合用药对HL-60、HL-60/HT细胞的生长抑制率明显高于单独用药的丙戊酸组和Ara-C组,q值分别为1.37和1.51,说明合用具有协同作用.丙戊酸作用于HL-60、HL-60/HT细胞后,细胞中P27Kip1表达水平、G1期细胞比加药前增加(P<0.05);P170表达水平在加药前后无明显变化(P>0.05). 结论 耐药白血病HL-60/HT细胞中P27Kip1的表达低于敏感细胞HL-60,丙戊酸能抑制HL-60/HT细胞增殖,并降低其对Ara-C的耐药性.作用机制可能与改变P27Kip1的表达、增加G1期细胞含量有关,与P170作用无关.     

姜黄素对白血病耐药细胞HL-60/ADR 的抑制及抗肿瘤作用的研究

目的 研究姜黄素对白血病耐药细胞HL60／ADR的抑制作用。并且与抗癌药物阿霉素对HL-60／ADR细胞的体外杀伤作用进行了比较。方法 应用MTT法检测姜黄素对细胞的毒作用及杀伤作用，用荧光分光光度法进行细胞内阿霉素蓄积测定。结果 姜黄素明显抑制白血病耐药细胞HL-60／ADR细胞的生长，24、48和72h的IC50分别为8.94、5．21和3．82μg／mL。姜黄素与阿霉素合用，在HL60／ADR细胞中均有增敏作用。结论 姜黄素可抑制白血病耐药细胞HL-60／ADR细胞的生长，与阿霉素之间无交叉耐药。     

钩吻提取液对HL-60细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的 :探讨钩吻提取液对HL 6 0细胞生长和增殖以及细胞周期的影响。方法 :采用XTT法分析细胞殖 ,Timelapse倒置显微镜摄取细胞影像形态学分析 ,流式细胞仪检测凋亡和细胞周期状态 ,综合评价钩吻提取液抗HL 6 0细胞生长和增殖的作用。结果 :钩吻醇提水沉组分具有明显的抑制HL 6 0细胞增殖的作用 ,且存在明显的剂量和时间 -反应关系 ;经钩吻醇提水沉组分处理的HL 6 0细胞周期状态发生明显变化 ,表现为G0 G1期细胞比例降低 ,S期细胞比例增加 ,并出现较明显的亚二倍体细胞峰型。结论 :钩吻醇提水沉组分对HL 6 0肿瘤细胞具有明显的细胞毒作用 :引起细胞死亡和抑制细胞增殖 ;诱导细胞周期阻滞 ,干扰细胞G1期向S期转化 ,并在此阶段诱发凋亡     

维甲酸对人胃癌细胞HGC-27增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白(P16、P21、P27)表达的影响

目的　观察维甲酸 (RA)作用人胃癌细胞系GHC - 2 7后 ,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白 (CKIs) (P16、P2 1、P2 7)表达的变化 ,探讨RA抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化的作用机制。方法　不同浓度RA作用HGC 2 7细胞后 ,MTT法检测细胞增殖情况 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,Westermblot、Northernblot分别检测CKIs(P16、P2 1、P2 7)蛋白、mRNA水平。结果　在一定浓度范围之内 ,RA能抑制HGC 2 7细胞增殖 ,细胞周期发生G1→S期阻滞 ,并上调P2 1、P2 7的蛋白、mRNA水平 ,但对P16的蛋白、mRNA水平没有影响。结论　RA能通过上调CKIs尤其是P2 1、P2 7的表达而抑制HGC 2 7增殖 ,促进其分化。     

流式细胞术分析不同剂量X射线对HL-60细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡

比较不同剂量X射线对HL-60细胞的影响,建立X射线诱导HL-60细胞凋亡的生物研究模型,探索细胞周期检测点对放射剂量的耐受性.采用对数生长期的HL-60细胞经2,5,10,15,20Gy的X射线照射后培养4h,用流式细胞仪分析HL-60细胞周期的改变.结果发现,不同剂量X射线照射均可诱导HL-60细胞凋亡,凋亡率有随照射剂量增大而增高的趋势.经2,5Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞的比例减少,G2/M期细胞的比例增多,经15,20Gy剂量照射的HL-60细胞主要表现为S期细胞和G2/M期细胞的比例均减少.结果显示,以X射线照射HL-60细胞可建立理想的射线诱导的细胞凋亡模型,小剂量照射和大剂量照射可能引起不同时相的细胞发生凋亡,提示细胞对放射剂量的反应性与细胞周期检测点之间存在一定的关系.     

重组腺病毒介导的反义c-myc基因对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察重组反义c-myc腺病毒(Ad-Asc-myc)对急性早幼粒白血病HL-60细胞周期及增殖的影响,探讨其作用的分子机制.方法:将Ad-Asc-myc与鱼精蛋白硫酸盐(Protamine sulfate)混合后转染HL-60细胞,MTF法观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞增殖周期,RT-PCR检测c-myc转录变化,免疫细胞化学检测c-myc及增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化.结果:Ad-Asc-myc转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,细胞周期呈现G1期延长、S期缩短,增殖指数逐渐下降,出现大量凋亡细胞.c-myc基因转录及表达下降,PCNA表达降低.结论:Ad-Asc-myc可使HL-60细胞的生长减缓,增殖能力降低,凋亡细胞增加.其生物学活性与HL-60细胞c-myc和PCNA表达受抑有关.     

c-myc特异性小分子干扰RNA对体外培养HL-60细胞增殖、细胞周期及C-myc蛋白表达的作用

目的:研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA(siRNA)对HL-60细胞增殖及内源性c-myc基因表达的影响,探讨应用siRNA进行白血病基凶治疗的可能性.方法:取倍增期HL-60细胞分空白对照组、阴性对照组、转染组3组,培养24～96 h后收获细胞进行检测.采用MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞仪进行细胞周期分析,逆转录PCR方法检测c-myc mRNA表达的变化,免疫细胞化学染色法检测C-myc蛋白表达的改变.结果:分组培养后,转染组细胞增殖较2个对照组受到抑制(P均<0.05),其抑制作用于转染后48、72 h最明显(P均<0.05).转染组S期细胞比值由空白对照组的(56.1±4.7)%降至(29.2±3.5)%,G./G1 期细胞由(36.8±3.3)%升高至(53.6±4.3)%,差异有统计学意义(P均<0.05).c-myc siRNA对目的基因mRNA表达的抑制作用于24 h最明显(P<0.05),96 h抑制作用基本消失(P>0.05).转染组细胞中C-myc蛋白表达与2个对照组相比降低(P均<0.05).结论:针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增殖及内源性c-myc基因表达有抑制作用,有望为白血病提供新的治疗靶位点.     

异搏定逆转HL-60/ADR细胞株耐药机理的初步探讨

目的 :深入了解异搏定 (VER)对鬼臼乙叉甙 (VP16)耐药逆转作用的机制。方法 :以多药耐药相关蛋白 (MRP)高表达的耐阿霉素人急性髓性白血病细胞株HL 60 /ADR为研究对象 ,应用DNA电泳、流式细胞仪观测细胞凋亡现象 ,用Westernblotting方法测定凋亡相关蛋白BCL 2表达水平。结果 :在作用 2 0h后 ,5mg·L-1VER可使VP16对HL 60 /ADR诱导凋亡作用增强 2 .8倍 ,并可下调BCL 2蛋白表达水平。结论 :VER对VP16的耐药逆转作用可能与其具有增强VP16诱导HL 60细胞凋亡作用有关 ;BCL 2蛋白可能是这一作用的靶点     

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的：观察c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用．探讨ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性、方法：应用c-myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因、RTPCR方法检测该基因表达抑制情况．流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化．绘制细胞生长曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果：c-myc基因反义寡核苷酸转染HL-60细胞后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞比值由55.6％降至16．7％;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结论c-myc基因反义寡核苷酸对HKL-60细胞增殖及c-myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细胞增殖的核酸药物。     

人细胞周期蛋白D1及细胞周期蛋白激酶CDK4的原核表达及鉴定

【目的】构建表达人细胞周期蛋白Dl及细胞周期蛋白激酶CDK4融合蛋白的重组体。【方法】用RT-PCR从HL-60细胞中扩增细胞周期蛋白D1及CDK4基因片段，克隆到pGEM-T easy载体上。测序鉴定后切下相应的片段，连接到表达载体pET-22b( )上，重组质粒转化大肠杆菌BL21(DL3)，使之高效表达融合蛋白细胞周期蛋白D1及CDK4。SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定表达蛋白。【结果】 用PCR扩增得到了正确的目的基因片段并构建成pET-cyclinD1和pET-CDK4两个原核表达载体。将其转化大肠杆菌，Western blot检测证实了转化的大肠杆菌能表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白。【结论】 本研究成功构建了细胞周期蛋白D1及CDK4原核表达载体，后两在细胞内能正确表达细胞周期蛋白D1及CDK4融合蛋白．     

二甲基亚砜对HL-60细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

探讨二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）对ＨＬ－６０细胞端粒酶活性和细胞周期的影响。采用ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ方法检测二甲基亚砜处理前后的ＨＬ－６０细胞端粒酶活性的改变,以流式细胞仪分析细胞周期的改变。二甲基亚砜作用于ＨＬ－６０细胞后,其端粒酶活性明显受到抑制,且细胞周期明显改变,Ｓ期细胞数显著减少。二甲基亚砜可抑制ＨＬ－６０细胞的端粒酶活性,阻止细胞周期的进程。