安徽省北部疟疾流行区中华按蚊溴氰菊酯抗性现状

目的探明安徽省北部疟疾流行区中华按蚊的溴氰菊酯抗性现状。方法选择涡阳县临湖镇、蒙城县坛城镇、太和县大新镇、利辛县纪五场乡,每乡镇各选取1个自然村,于2011年7～8月采用牛诱和猪诱法捕获饱血中华按蚊,采用WHO推荐的成蚊接触筒法进行按蚊敏感性测试。结果涡阳县临湖镇,蒙城县坛城镇、太和县大新镇、利辛县纪五场乡捕获的中华按蚊0.05%溴氰菊酯击倒率分别为2.73%、4.9%、4.72%和6.42%,校正死亡率分别为6.54%、7.78%、9.27%和11.18%,均为抗性群体。结论安徽省北部疟疾流行区中华按蚊已经对溴氰菊酯产生明显抗性。     

安徽省沿淮地区中华按蚊溴氰菊酯抗性及代谢解毒酶活性kdr突变频率调查

目的 了解安徽省沿淮地区疟疾媒介中华按蚊对溴氰菊酯杀虫剂的抗性状况及谷胱甘肽S转移酶 （GSTs）、 细胞色素氧化酶 （P450s） 等代谢解毒酶活性和钠离子通道击倒抗性基因 （Knockdown resistance, kdr） 的突变情况。方法 2011 年8-9月采集安徽省蚌埠市李楼乡、 沫河口镇和沱湖乡中华按蚊成蚊样本, 采用WHO成蚊接触筒药膜滤纸接触法, 调查3 个地区中华按蚊对溴氰菊酯抗性状况。随机挑选样本采用生化法检测代谢解毒酶活性并用PCR扩增产物直接测序法检测分析钠离子通道kdr基因IIS6片段L1014位点基因型。结果 李楼乡、 沫河口镇和沱湖乡3个检测点的中华按蚊对溴氰菊酯60 min内击倒率分别为4.1%、 7.0%和8.2%, 恢复24 h后校正死亡率分别为8.2%、 12.0%、 12.8%, 均为抗性种群。3个检测点的中华按蚊GSTs和P450s活性均显著高于实验室敏感种群 （P < 0.001）。3个检测点的中华按蚊kdr基因均发生突变, 存在 L1014C和L1014F两种突变类型, 无野生纯合型 （TTG/TTG）, 实验室敏感种群kdr基因均为无突变的野生纯合型。结论 安徽省沿淮地区的中华按蚊已对溴氰菊酯产生较强的抗性, 代谢解毒酶活性比实验室敏感种群显著升高, 钠离子通道kdr基因L1014位点出现高频率的突变。     

不同剂型溴氰菊酯和氟氯氰菊酯对中华按蚊击倒力的试验

目的 比较不同剂型溴氰菊酯和氟氯氰菊酯浸泡蚊帐后的灭蚊效果。方法 采用击倒试验法和药帐接触法,观察中华按蚊的击倒和死亡情况。以Ｆｉｎｎｅｙ机率分析法进行统计分析,并进行显著性检验。结果 中华按蚊对不同剂型的溴氰菊酯和氟氯氰菊酯的ＫＴ５０在７．１７－１５．４５ｍｉｎ之间;被击倒蚊虫２４ｈ后的死亡率均为１００％;接触浸药帐ｍｉｎ的校正死亡均大于９０％;１年后中华按蚊的ＫＴ５０仍在１０．８２－１６．１７     

3种基因工程藻对中华按蚊幼虫杀灭作用的实验研究

本实验观察了３种基因工程杀蚊幼蓝藻对中华按蚊Ⅲ龄幼虫的杀灭作用。结果表明，当喷施工程藻浓度高于３．０×１０５ｃｅｌｓ／ｍｌ时，作用２４ｈ后，中华按蚊幼虫死亡数较低，而在４８ｈ、７２ｈ后蚊幼虫大部分（６７％以上）死亡；在喷施工程藻浓度低于３．０×１０４ｃｅｌｓ／ｍｌ时，２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ的杀蚊幼效果均较差，此结果明显低于工程藻对淡色库蚊幼虫的作用效果。因此在应用基因工程藻进行现场控制蚊幼虫时，特别是在有较多按蚊幼虫的孳生地，应该考虑联合应用其它防治方法。     

中华按蚊感染马来丝虫幼虫后生殖,生殖营养周期...

Under the experimental conditions of 26 +/- 10 degrees C, relative humidity 70-80%, 100 +/- 20 Lux and photoperiod 16 hours/day and using a membrane feeding method, the development of filarial larvae and the variations in reproductive capacity, gonotrophic cycle and longevity of An. sinensis infected with microfilariae of Brugia malayi were observed. The infection rate and infection intensity of filarial larvae in An. sinensis increased with the microfilarial density in the blood meal from 50 to 150 mf/20 microliters. The mature rate and IEI decreased when the density rose to 200 mg/20 microliters. The concentration ratio of mf in blood by An. sinensis was 1.2-1.4. In the 3rd gonotrophic cycle, the feeding ratio of infected mosquitoes became lower when the mf density rose to 150 mf/20 microliters, but the infection of filarial did not affect the number of oviposition, the regularity of egg-production activity and the hatching rate of eggs, while the quantity of egg-production increased when the mf density was 150 mf/20 microliters. The egg-production rate, and gonotrophic cycle were not basically influenced by filarial larvae infection. The multifeeding ratio was 16.7-48.4% in An. sinensis. The longevity of An. sinensis was extended by infection with mf density of 100 mf/20 microliters and shortened in infection with mf density of 200 mf/20 microliters. The authors conclude that "Brugia malayi-Anopheles sinensis" is a highly adapted "pathogen-vector" system.     

中华按蚊幼虫肠细胞膜级分的制备及其鼠抗血清对幼虫的效应

已和在芽孢杆菌杀虫蛋白的毒效依赖于它们与幼虫肠细胞膜的亲合力，对于其机理的研究和应用蛋白质工程手段改造杀蚊蛋白来说，蚊幼虫肠细胞膜的制备是必不可少的。本研究收集了万余只中华按蚊幼虫肠道，用于分离其细胞膜级分，进行蛋白组分分析，鼠抗血清的制备以及该抗血清对幼虫的作用的观察，仅在一龄幼虫观察到致死效应。     

中华按蚊对杀虫剂敏感性调查

目的分析河南省疟疾媒介中华按蚊对DDT、氟氯氰菊酯、马拉硫磷和溴氰菊酯的敏感性,为制定疟疾媒介防制对策提供依据。方法2009年6月在河南省桐柏县、淮滨县和永城市3个县(市)现场分别捕获吸血后中华按蚊成蚊417、421和433只,采用WHO推荐的成蚊滤纸接触法进行检测,计算中华按蚊分别接触4%DDT(1.428g/m2),0.15%氟氯氰菊酯(0.0 534 g/m2),5%马拉硫磷(1.78 g/m2)和0.05%溴氰菊酯(0.0 178 g/m2)的半数击倒时间(KT50)和24 h后死亡率。根据死亡率判定抗性级别,死亡率98%～100%为敏感群体(S级),80%～97%为初步抗性群体(M级),80%以下为抗性群体(R级)。结果桐柏县、淮滨县和永城市3个县(市)中华按蚊接触DDT的KT50分别为206.13、877.04和826.81 min;接触氟氯氢菊酯的KT50分别为206.43、85.39和427.60 min;接触马拉硫磷的KT50分别为19.98、48.05和97.79 min;接触溴氰菊酯的KT50分别为1122.50、89.65和960 min。接触4%DDT 24 h死亡率分别为82.52%、57.41%和65.69%,抗性级别分别为M、R和R级;接触0.15%氟氯氰菊酯24 h死亡率分别为91.89%、85.00%和72.73%,抗性级别分别为M、M和R级;接触5%马拉硫磷24h死亡率分别为95.10%、95.37%和93.16%,抗性级别均为M级;接触0.05%溴氰菊酯24h死亡率分别为92.08%、77.14%和63.46%,抗性级别分别为M、R和R级。结论河南省中华按蚊对DDT、氟氯氰菊酯和溴氰菊酯已产生较强抗性,对马拉硫磷产生初步抗性。     

中华按蚊细胞色素P450基因表达特征分析

目的 探讨6种溴氰菊酯抗性候选细胞色素P450（CYP）基因（CYP6M3、CYP6Y1、CYP6P5、CYP4H14、CYP4G17、CYP12F16）在中华按蚊体内的表达特征。方法 收集中华按蚊不同发育时期（卵、幼虫、蛹、雌性成蚊和雄性成蚊）和组织（唾液腺、马氏管、中肠、卵巢以及脂肪体）样本,以及雌性成蚊在暴露于不同溴氰菊酯剂量（0、1.25、3.75、6.25、12.5 μg/瓶）和时间（0,5、15、30、60 min）后的样本.提取总RNA,利用反转录实时定量PCR（qPCR）技术分析CYP6M3、CYP6Y1、CYP6P5、CYP4H14、CYP4G17、CYP12F16基因在中华按蚊不同发育时期、组织以及不同溴氰菊酯接触剂量和时间下的相对表达量。结果 CYP6M3与CYP6Y1基因在雄性中华按蚊成蚊体内的表达量最高,CYP6M3基因在雄性成蚊体内的表达量是雌性成蚊的35.1倍,CYP6Y1基因在雄性成蚊体内的表达量是雌性成蚊的61.4倍;CYP4H14基因在幼虫期表达量最低,且在雌性成蚊体内表达量是四龄幼虫体内表达量的22.5倍。候选CYP基因在中华按蚊不同组织内的表达量差异具有统计学意义,CYP6M3基因在马氏管内的表达量是在卵巢中的38.9倍,CYP6Y1基因在脂肪体内的表达量是在卵巢中的9.1倍,CYP6P5基因在中肠内的表达量是在卵巢中的30.3倍,CYP4G17基因在脂肪体内的表达量是在卵巢中的4.6倍,CYP12F16基因在马氏管内的表达量是在卵巢中的4.4倍。接触不同溴氰菊酯剂量和时间对候选CYP基因的表达水平表现出一定的诱导效应,影响候选CYP基因在中华按蚊体内的表达。结论 候选CYP基因在不同发育期中华按蚊体内和不同组织中差异表达,暴露于不同溴氰菊酯剂量和时间影响CYP基因在中华按蚊体内表达。     

江苏省疟疾媒介中华按蚊对杀虫剂的敏感性

目的了解江苏省疟疾媒介中华按蚊对溴氰菊酯、DDT和马拉硫磷的敏感性。方法从泗洪、扬中、宜兴3县（市）现场捕获野外中华按蚊成蚊并培养子1代成蚊,采用WHO推荐的接触筒强迫接触法,观察计算中华按蚊接触杀虫剂10、15、20、30、40、50、60min的击倒率和24h后死亡率。结果泗洪、扬中、宜兴3县（市）野外中华按蚊子1代接触0.05%溴氰菊酯60min的击倒率分别为28.57%、57.14%和52.38%,24h后死亡率分别为35.71%、57.14%和61.90%,对溴氰菊酯抗性均达到R级;接触4%DDT60min的击倒率分别为9.52%、2.38%和4.76%,24h后死亡率分别为47.62%、50%和40.48%,对DDT的抗性均达到R级;接触5%马拉硫磷60min后击倒率分别为11.90%、28.57%和28.13%,24h后死亡率分别为80.95%、85.71%和93.75%,对马拉硫磷的抗性为M级。宜兴市野外中华按蚊捕获后1、7、15d及其子1代成蚊,接触0.05%溴氰菊酯60min的击倒率分别为54.76%、76.19%、92.86%和52.38%,24h后死亡率分别为54.76%、76.19%、95.23%和61.90%,捕获后1d与子1代成蚊24h后的死亡率差异无统计学意义（χ2=0.44,P〉0.05）。泗洪县中华按蚊子1代雌、雄成蚊接触0.05%溴氰菊酯60min的击倒率分别为28.57%和40.48%,24h后的死亡率为35.71%和42.86%,2种按蚊24h后的死亡率差异无统计学意义（χ2=0.45,P〉0.05）。结论江苏省野外中华按蚊已对溴氰菊酯、DDT产生高度抗性,对马拉硫磷已产生初步抗性。在媒介防制时应采取综合治理措施,以防止抗性进一步升高。     

中华按蚊实验室驯化研究

目的建立亲野外自然种群的中华按蚊实验室品系,为同类研究提供实验用蚊。方法采用40 W蓝光开、关干扰法(每次开2 min+关2 min),引诱成蚊在小笼内自然交配,并在实验繁殖驯养。结果驯化至第7代时,中华按蚊孵化率、化蛹率和羽化率分别为69.0%、81.2%和94.6%。结论经驯化的中华按蚊能够在实验室进行自然交配并繁殖传代。     

河南省濮阳市中华按蚊对杀虫剂敏感性调查

目的 了解河南省濮阳市中华按蚊对马拉硫磷、溴氰菊酯、高效氯氟氰菊酯的敏感性,为当地传疟媒介控制提供科学依据.方法 选择河南省濮阳市濮阳县为调查点,于2018年9月和2020年7月捕捉中华按蚊,采用滤纸接触筒法测定中华按蚊对马拉硫磷、溴氰菊酯、高效氯氟氰菊酯的敏感性,应用WHO抗药性评价标准确定抗性级别.结果 2018年...     

拜虫杀对中华按蚊和嗜人按蚊毒杀效果的实验观察

目的观察拜虫杀对中华按蚊和嗜人按蚊的毒杀效果。方法采用拜虫杀10、15、20mg/m2(有效成分)浸泡棉纱布和尼龙纱布,以实验室饲养的中华按蚊和嗜人按蚊为试虫,进行击倒力、致死力和持效观察。结果采用拜虫杀10、15、20mg/m2浸泡两种材料蚊帐,中华按蚊和嗜人按蚊接触药帐后的半数击倒时间(KT50)在3.98~7.30min之间,被击倒的蚊虫恢复饲养24h,死亡率均为100%;接触药帐3min,恢复饲养24h,蚊虫死亡率均>90%;杀虫剂浸泡过的蚊帐悬挂180d后,对媒介按蚊的击倒力仍在8.57~16.31min之间,且恢复饲养24h,死亡率仍为100%。结论拜虫杀对中华按蚊和嗜人按蚊有很强的杀灭效果,持效可达180d以上。     

不同温度条件对中华按蚊发育的影响

目的观察不同温度下中华按蚊的发育与繁殖情况,为疟疾的流行病学及适时灭蚊提供科学依据。方法在温度为16、19、22、25、28、31℃的条件下,观察实验室饲养中华按蚊的卵期、幼虫、蛹期和生殖营养周期,计算不同温度下的全代发育时间。结果中华按蚊在16℃时不能完成全发育周期,在温度为19、22、25、28、31℃时,全代发育时间分别为30.7、23.3、15.5、13.5d和12.5d。结论在温度范围为16～31℃时,中华按蚊的发育期随温度升高而缩短。     

嗜人按蚊溴氰菊酯抗性分子机理研究Ⅲ嗜人按蚊P450基因mRNA荧光半定量RT-PCR分析

目的探讨嗜人按蚊CYP6、CYP4基因与溴氰菊酯抗性的关系。方法采用荧光定量 RT-PCR方法,对嗜人按蚊体内CYP6和CYP4基因的mRNA进行半定量检测分析。结果嗜人按蚊抗性品系中CYP6基因mRNA的含量约为敏感品系的1．39倍。抗性品系中CYP4基因mRNA 的含量约为敏感品系的3．63倍。结论嗜人按蚊抗性品系体内的CYP6和CYP4的mRNA量高于其敏感品系,提示嗜人按蚊溴氰菊酯产生抗性机理可能与其细胞色素P450表达量增高有关。     

嗜人按蚊溴氰菊酯抗性分子机理研究Ⅱ嗜人按蚊CYP4基因cDNA片段的克隆与序列分析

目的　获得嗜人按蚊CYP4基因家族成员的c DNA片段。方法　采用简并引物对嗜人按蚊溴氰菊酯敏感和抗性品系总RNA进行RT- PCR扩增,得到的特异性片段采用T/ A克隆法克隆并进行序列测定和分析。结果　敏感品系和抗性品系嗜人按蚊均能扩增得到4 5 0 bp和5 30 bp左右的2个片段。经克隆测序后,得到6个基因序列,其中4个来自敏感品系,2个来自抗性品系。其中1个来自敏感品系的序列和1个来自抗性品系的序列完全相同。所得的5个不同基因序列已被Gen Bank收录(登录号:AY2 0 814 1～AY2 0 814 5 ) ,并递交国际细胞色素P4 5 0命名委员会,经鉴定确认均为细胞色素P4 5 0超家族中的CYP4家族成员,其中4个为新基因,另1个为等位基因,分别属于CYP4家族的CYP4 C、CYP4 H和CYP4 J3个亚家族。结论　得到的5个c DNA新序列为CYP4家族新成员的基因片段。