miR-638对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制

目的探讨miR-638是否可通过直接调控靶向性别决定区Y框蛋白(SOX)2抑制上皮-间质转化(EMT)相关通路从而抑制胃癌细胞的侵袭迁移。方法 qRT-PCR检测miR-638在100对胃癌组织及癌旁组织中的表达、检测miR-638在7株胃癌细胞系及1株正常胃黏膜细胞中的表达。Transwell和Wound Healing实验验证分别转染miR-638模拟物(miR-638 mimics)及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)到胃癌细胞AGS中时对细胞的侵袭和迁移能力的影响。Target Scan软件预测miR-638的靶基因、将野生型或突变型SOX2的3'-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(SOX2-wt或SOX2-mut)并分别与miR-638 mimics或scramble共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因为SOX2,qRT-PCR和Western印迹分别检测转染miR-638 mimics和scramble后SOX2的mRNA和蛋白表达的及EMT相关蛋白表达。结果 miR-638在胃癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,同时miR-638在胃癌细胞系中的表达水平也显著低于正常胃黏膜细胞系。转染miR-638后,胃癌细胞AGS的侵袭和迁移能力显著低于scramble组(P<0.05)。在共转染miR-638或scramble和SOX2-wt的两组中,共转染miR-638和SOX2-wt组的荧光素酶活性强度降低了约43.1%(P<0.05)。转染miR-638后,SOX2的mRNA和蛋白表达水平均显著下调;EMT相关的上皮标志物钙黏附蛋白E(E-cadherin)的表达显著增加,而EMT相关的间质标志物神经钙联素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达则显著降低(P<0.05)。结论 miR-638可通过靶向调控SOX2而影响EMT,抑制胃癌细胞AGS的侵袭和迁移。     

miR-93通过调节Bax/Bcl-2的表达活性对胃癌细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨miR-93是否通过调节Bax/Bcl-2的表达活性对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡产生影响及其作用机制.方法 qPCR法检测人正常胃细胞和胃癌细胞中miR-93的表达情况;克隆形成实验检测miR-93对胃癌细胞增殖能力的影响;细胞划痕实验检测miR-93对胃癌细胞迁移能力的影响;流式细胞术检测miR-93对胃癌细...     

HOXC9在肝细胞癌组织中的表达以及对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

[目的]探讨HOXC9在肝细胞癌(HCC)组织中的表达以及对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.[方法]收集2015～2019年于我院接受手术治疗的65例HCC患者的癌组织及相应癌旁组织,通过免疫组化检测HOXC9在癌组织及癌旁组织中的表达情况,通过RT-qPCR检测HOXC9在肝上皮细胞THLE-3、HCC细胞系HepG2...     

二氢青蒿素体外抑制胃癌细胞的黏附、迁移和侵袭

目的 探讨二氢青蒿素(DHA)对人胃癌SGC7901细胞体外黏附、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法 1.25、2.5、5、10、20 μmoL/LDHA作用体外培养的人胃癌SGC7901细胞24 h后,MTT法检测细胞活力;1.25、2.5、5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h后,细胞黏附分析检测细胞黏附率;细胞划痕实验观察其对细胞迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验观察其对细胞侵袭能力的影响;RT-PCR和Western印迹分别检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,1.25、2.5、5μmoL/L DHA对SGC7901细胞增殖没有影响,但显著抑制SGC7901细胞黏附、迁移和侵袭能力,且抑制作用具有剂量依赖性.RT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组相比,5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h,细胞内ICAM-1、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),TIMP-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 DHA可体外抑制胃癌SGC7901细胞的黏附、迁移和侵袭能力,其机制可能与上调TIMP-2的表达,下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达有关.     

FOXC2对肺腺癌细胞恶性增殖及侵袭迁移能力的影响

目的探究叉头框C2蛋白(FOXC2)对肺腺癌细胞恶性增殖及侵袭迁移能力的影响。方法利用慢病毒转染的方法在人肺腺癌细胞系A549中构建过表达FOXC2细胞(实验组)及相应对照细胞系(对照组),Western印迹检测两组细胞FOXC2及干性相关分子Oct4、Sox2及Nanog的表达水平,MTT法检测两组细胞0、24、48、72、96 h的恶性增殖能力,Transwell侵袭及迁移实验检测两组细胞侵袭迁移能力。结果与对照组细胞比较,实验组细胞FOXC2、Oct4、Sox2及Nanog表达水平均显著上调(P<0.05),细胞恶性增殖能力在48、72及96 h出现显著升高(P<0.05),细胞侵袭及迁移能力均显著上调(P<0.05),差异均有统计学意义。结论 FOXC2可促进肺腺癌细胞恶性增殖及侵袭迁移能力,其机制与介导肿瘤细胞干细胞特性形成有关。     

沉默TSPAN13对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨TSPAN13对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 将PC3细胞、22Rv1细胞、LNCAP细胞、DU145细胞用含10%胎牛血清和1%青链霉素双抗的RPMI1640培养基培养,BPH-1细胞用含10%胎牛血清和1%青链霉素双抗的DMEM培养基培养,培养环境均为37℃、5%CO2、饱和湿度。采用RT-PCR和Western blotting实验检测TSPAN13表达;通过si-RNA沉默TSPAN13检测TSPAN13功能;通过CCK-8实验和集落形成实验检测细胞的增殖和克隆形成能力;通过划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果 TSPAN13蛋白在前列腺癌中高表达(P<0.01);TSPAN13 mRNA和蛋白在PC3和DU145细胞中的表达高于BPH-1细胞(P均<0.01);沉默TSPAN13,PC3和DU145细胞中TSPAN13 mRNA和蛋白表达降低;CCK-8和集落形成实验显示,PC3和DU145细胞增殖能力和克隆生成能力下降(P均<0.01);划痕实验和Transwell实验显示,PC3和DU145细胞的迁移和侵袭...     

lncRNA GHET1表达水平对人胃癌细胞MGC-803增殖迁移和侵袭的影响及其机制研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌高表达转录本1(GHET1)对人胃癌细胞MGC-803增殖、迁移和侵袭的影响及其机制。方法 以MGC-803细胞作为实验对象,通过慢病毒转染的方法构建lncRNA GHET1过表达和lncRNA GHET1沉默的MGC-803细胞模型,分别为过表达组和沉默组,并设置其对应的阴性对照组。通过荧光显微镜观察慢病毒转染效率。通过实时荧光定量PCR检测各组lncRNA GHET1、miR-105表达水平。通过CCK-8实验检测各组细胞增殖能力。通过Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果 荧光显微镜下观察见各组细胞病毒转染率均高于90%。实时荧光定量PCR结果显示,过表达组lncRNA GHET1的相对表达量显著高于过表达对照组（P<0.05）,沉默组lncRNA GHET1相对表达量显著低于沉默对照组（P<0.05）,提示成功建立过表达和沉默lncRNA GHET1的MGC-803细胞模型。CCK-8实验结果显示,过表达组细胞增殖速度较过表达对照组快,而沉默组细胞增殖速度较沉默对照组慢。Transwell实验结果显示,过表达...     

LINC01615表达下调对膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响

目的 探讨下调LINC01615表达对膀胱癌细胞（T24细胞）增殖、侵袭、迁移的影响。方法 常规培养T24细胞,取对数生长期细胞随机分为si-LINC01615组、si-NC组,分别转染si-LINC01615、si-NC,继续培养48 h。用实时荧光定量PCR法检测细胞中LINC01615表达,用MTT实验检测细胞增殖能力（OD值）,用Transwell实验检测细胞侵袭能力,用划痕实验检测细胞迁移能力（24 h愈合度）。结果 转染后si-LINC01615组、si-NC组T24细胞LINC01615相对表达量分别为0.60±0.03、1.08±0.02,比较差异有统计学意义（P<0.05）,表明转染成功。培养0、24 h,两组细胞活力差异均无统计学意义（P均>0.05）;培养48、72 h,si-LINC01615组细胞活力均低于si-NC组（P均<0.05）。si-NC组侵袭细胞数为（148.30±1.76）个,si-LINC01615组为（74.33±3.18）个,比较差异有统计学意义（P<0.05）。si-NC组24 h愈合度为（98.33±0.88）%...     

miR-645靶向EDN3调控肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探究微小RNA-645(miR-645)是否通过靶向调控内皮素(EDN)3影响肝癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 qRT-PCR法与Western印迹法分别检测miR-645及EDN3 mRNA在不同肝癌细胞及正常肝细胞中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-645对EDN3转录活性的影响;噻唑蓝(MTT)实验检...     

全反式维甲酸对肝癌细胞HepG2的分化、侵袭迁移的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对肝癌细胞HepG2的诱导分化作用及侵袭迁移的影响.方法:MTT法测定ATRA对肝癌细胞HepG2的抑制作用;平皿集落形成法检测ATRA对HepG2细胞锚定依赖性生长作用;ELISA法检测ATRA作用前后HepG2 AFP分泌量的变化;RT-PCR检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog的mRNA表达的影响;Western blot检测ATRA对HepG2细胞MMP-9及Nanog蛋白表达的影响;Transwell及划痕实验检测其对侵袭及迁移能力的影响.结果:MTT法显示ATRA抑制体外培养人肝癌细胞HepG2细胞生长,呈剂量和时间依赖性;ELISA显示ATRA诱导HepG2细胞分化和凋亡,使代表肝细胞恶变的AFP分泌量明显下降(P<0.05);平皿克隆形成实验结果表明未经ATRA处理的HepG2可形成克隆,但经ATRA刺激后,其形成克隆变小且数目明显减少;ATRA呈时间及浓度依赖性下调Nanog mRNA及蛋白的表达,并在24h呈浓度依赖性下调MMP-9 mRNA及蛋白表达;Transwell实验和划痕实验结果显示ATRA能抑制HepG2细胞的侵袭和迁移能力.结论...     

藏红花素通过调控微管蛋白进而影响胃癌细胞MGC-803的增殖、侵袭和凋亡

目的 探讨藏红花素(Crocin)是否通过调控微管蛋白进而影响人胃癌细胞MGC-803的增殖、侵袭和凋亡,以期为胃癌的治疗提供新的思路。方法 使用藏红花素处理MGC-803细胞,并用顺铂作为阳性对照药,观察藏红花素对MGC-803细胞生物学的影响。采用MTT分析细胞活性,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力。最后通过蛋白免疫印迹分析藏红花素作用的潜在机制。结果 藏红花素使MGC-803细胞活力、迁移和侵袭能力明显下降,凋亡增加。进一步研究发现,藏红花素对MGC-803细胞的抑制能力与微管蛋白作用密切相关,藏红花素通过降低MGC-803细胞中的微管蛋白表达进而影响其增殖、侵袭和凋亡。结论 藏红花素能够显著抑制MGC-803细胞生长、迁移、侵袭能力,并能促进MGC-803胃癌细胞的凋亡反应。     

外泌体介导miR-199a-3p靶向ARPC2基因对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨外泌体介导miR-199a-3p对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法 提取HK-2、786-O细胞培养液中的外泌体,电镜下观察外泌体形态;将miR-NC、miR-199a-3p转染至786-O细胞后用去除外泌体的DMEM培养液培养48 h,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测外泌体中miR-199a-3p表达水平,Western印迹检测外泌体表面标志物CD63、CD81。将miR-NC、miR-199a-3p转染至786-O细胞中后加入外泌体进行培养,记为EXO-miR-NC组、EXO-miR-199a-3p组;将miR-199a-3p分别与pcDNA-NC、pcDNA-ARPC2共转染至786-O细胞中后加入外泌体进行培养,记为EXO-miR-199a-3p+pcDNA-NC组、EXO-miR-199a-3p+pcDNA-ARPC2组;将miR-NC、anti-miR-NC、miR-199a-3p、anti-miR-199a-3p、si-ARPC2、si-NC、分别转染至786-O细胞中,分别记为miR-NC组、anti-miR-NC组、miR-19...     

miR-409-3p通过调控SLBP影响肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-409-3p对茎环结合蛋白(SLBP)表达的调控作用及其对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 采用qRT-PCR、Western blotting分别检测肝癌组织、癌旁组织及细胞系中miR-409-3p、SLBP的表达水平;以表达量最低的肝癌细胞Hep3B为研究对象,分别将miR-NC、miR-40...     

MiR-122通过靶向SIRT1抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的?探讨微小RNA-122（microRNA-122, miR-122）通过靶向沉默信息调节因子1（silent information regulator 1, SIRT1）对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法?用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR, RT-qPCR）法检测肝癌组织和细胞中miR-122和SIRT1 mRNA表达水平;用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析并验证miR-122和SIRT1靶向关系。培养肝癌细胞HepG2,将其分为空白对照组（control组）、miR-122过表达阴性对照组（miR-NC mimic组）、miR-122过表达组（miR-122 mimic组）、miR-122过表达和SIRT1过表达阴性对照组（miR-122 mimic+pcDNA组）、miR-122过表达和SIRT1过表达组（miR-122 mimic+pcDNA-SIRT1组）。用细胞计数试剂（cell counting kit-8, CCK-8）和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷分析各组细胞增殖情况;划痕愈合实验和Transwell实验分析各组细胞迁移和侵袭能力;用Western blot法分析各组细胞中增殖、迁移和侵袭相关蛋白p53、细胞周期蛋白D1、E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白和波形蛋白及SIRT1蛋白表达水平。结果?MiR-122表达水平在肝癌组织和细胞中下调,SIRT1 mRNA表达水平在肝癌组织和细胞中上调（P＜0.05）。MiR-122负靶向调控SIRT1表达（P＜0.05）。过表达miR-122抑制HepG2细胞增殖、迁移和侵袭,降低SIRT1、细胞周期蛋白D1、N-钙粘蛋白和波形蛋白蛋白水平,升高p53和E-钙粘蛋白蛋白水平（P＜0.05）。然而,SIRT1过表达可部分逆转过表达miR-122对HepG2细胞的作用（P＜0.05）。结论?MiR-122通过负靶向调控SIRT1抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖 、凋亡 、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨抑制3型β微管蛋白(TUBB3)基因的表达对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法将TUBB3 siRNA和阴性对照分别转染人胃癌SGC-7901细胞,记为TUBB3 siRNA组和阴性对照组(NC组),将未行转染的细胞记为Control组,转染48 h后,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达水平。结果与NC组相比,TUBB3 siRNA组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,PNCA和MMP-2蛋白表达明显下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组与NC组细胞的上述各指标的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论抑制TUBB3基因表达能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制与调控细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、MMP-2蛋白表达水平有关。     

槲皮素对人胃癌细胞侵袭和MMP-2表达的影响

目的:观察槲皮素(Quercetin,Que)对人胃癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法:采用不同浓度的槲皮素处理胃癌BGC-823细胞后,以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力,采用荧光实时定量PCR检测癌细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)基因mRNA水平,以Western blot方法检测癌细胞MMP-2基因蛋白水平变化.结果:不同浓度的胃癌BGC-823细胞经槲皮素处理后,恶性增殖和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.005,P<0.005).槲皮素处理组MMP-2基因mRNA和蛋白水平均明显下调,且呈时间和浓度依赖性,即随着作用时间的延长和槲皮素作用浓度的增加,MMP-2的mRNA和蛋白水平逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001).结论:槲皮素可明显抑制胃癌BGC-823细胞侵袭能力,其机制可能与下调MMP-2基因表达有关.     

CTHRC1对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的观察胶原三股螺旋重复蛋白(CTHRC)1对结直肠癌HT29细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采用RT-PCR和免疫组织化学方法检测结直肠癌组织中CTHRC1的表达情况。采用电穿孔转染法,将pc DNA3.1-CTHRC1和CTHRC1 si RNA转染HT29细胞中,通过克隆形成实验检测CTHRC1对HT29细胞增殖的影响;通过伤口愈合实验和Boyden小室检测CTHRC1对HT29细胞迁移和侵袭能力的影响。结果 RT-PCR和免疫组织化学检测显示,CTHRC1在结直肠癌组织中的表达显著高于正常对照组织。增殖、迁移和侵袭实验结果显示,对照组、转染CTHRC1和转染CTHRC1 si RNA的结直肠癌HT29细胞克隆形成数分别为(147.34±15.86)、(234.17±27.86)和(66.03±8.95);伤口宽度百分比分别为(1.00±0.00)、(0.37±0.12)和(1.48±0.35);发生侵袭的细胞数分别为(201.24±33.54)、(415.36±45.63)和(96.13±15.46);转染CTHRC1可显著促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力;而转染si-CTHRC1可显著抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结论 CTHRC1可明显增加HT29细胞增殖、迁移和侵袭能力,这可能是CTHRC1参与结直肠癌发生发展的机制。     

胡椒碱对人结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用

背景 最近许多报道显示胡椒碱(piperine,PIP)具有抗癌活性,而其在结肠癌中的具体作用及生物学机制的研究并不完善.目的 探究PIP对人结肠癌SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及潜在机制.方法 分别用0(空白对照)、5、10和20 μg/mL的PIP处理SW480细胞24 h,采用细胞计数试剂盒8(cell...     

谷丙转氨酶2在食管鳞癌组织中表达变化及对癌细胞增殖迁移侵袭能力影响

目的 观察谷丙转氨酶2(GPT2)在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达变化,分析GPT2与患者临床病理特征、预后的关系以及对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响,以探讨其与ESCC进展的关系。方法 选取80例ESCC患者癌组织及癌旁正常组织,将其中3例份样本通过转录组测序筛选出差异表达基因GPT2,并在TCGA数据库中进行验证。采用Western blotting及免疫组化法检测ESCC组织中GPT2蛋白,分析癌组织中GPT2表达与患者临床病理特征的关系。采用多因素Cox比例风险分析影响ESCC患者生存的风险因素,Kaplan-Meier法对GPT2高、低表达的ESCC患者进行生存分析。构建p IRES2/GPT2(GPT2过表达)质粒,然后将空载质粒（p IRES2）及p IRES2/GPT2转染至人食管鳞癌细胞系KYSE150、KYSE30（转染的细胞分别命名为p IRES2、p IRES2/GPT2组）,培养48 h后,采用CCK-8及Transwell实验观察ESCC细胞增殖、迁移和侵袭能力。结果 转录组测序结果及基于TCGA数据库数据分析结果显示,与癌旁正常组织相比,ESC...