姜黄素减轻脓毒症大鼠肺损伤的作用机制

目的分析姜黄素减轻脓毒症大鼠肺损伤的作用机制。方法2018年8月至2019年4月,采用随机数字表法,将75只雄性SD大鼠分为五组,分别为假手术组,脓毒症组,姜黄素低、中、高剂量组,每组15只。通过盲肠结扎穿孔术构建脓毒症大鼠模型,假手术组仅开腹取出盲肠再原位放回,姜黄素低、中、高剂量组分别于术后腹腔注射剂量为50、100、200 mg/kg的姜黄素,假手术组和脓毒症组大鼠以等量生理盐水替代。采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠肺组织学形态变化,以肺湿干比、支气管灌洗液中总蛋白含量、肺组织中髓过氧化物酶(MPO)活性等指标评价各组大鼠肺组织损伤情况,原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测肺组织中白细胞介素(IL)-6、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,蛋白质印迹法检测肺组织中活化胱天蛋白酶(cleaved-caspase)-3、cleaved-caspase-9、丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)、胞外信号调节激酶(ERK)的表达。结果HE染色显示,姜黄素低、中、高剂量组较假手术组仍有明显的病理改变,但较脓毒症组,肺组织损伤明显减轻,炎症细胞浸润现象明显较少;与脓毒症组相比,姜黄素低、中、高剂量组肺组织湿干比［(8.14±1.25)%、(6.82±1.19)%、(5.95±1.05)%比(9.73±1.36)%］、MPO 含量、细胞凋亡率［(16.27±2.14)%、(12.36±1.62)%、(8.59±1.26)%比(19.41±2.58)%］、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、IL-6、IL-10、TNF- α、磷酸化(p)-MEK/MEK(1.08±0.13、0.81±0.15、0.62±0.12比1.25±0.14)、p-ERK/ERK(1.16±0.14、0.97±0.13、0.75±0.11比1.34±0.15)及肺泡灌洗液中总蛋白量显著降低(P<0.05),具有浓度依赖性。结论姜黄素可以保护脓毒症大鼠肺损伤,减少肺组织细胞的凋亡,减轻肺组织炎性水平,可能与下调MEK/ERK信号通路有关。     

氯胺酮诱导大鼠海马神经元凋亡及机制

目的 研究氯胺酮对SD大鼠海马神经元的凋亡诱导作用,并探究其作用机制.方法 培养SD大鼠海马神经元细胞,将对数生长期的大鼠海马神经元分为对照组(不加氯胺酮)和实验组(加氯胺酮且其终浓度分别为10、20 μmol/L).24h后,缩胆囊素8肽(CCK-8)法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测蛋白phospho-细胞外信号调节蛋白激酶(P-ERK)、Bax、Bcl-2的表达.结果 10、20 μmol/L实验组神经元的存活率分别为(73.7±1.5)％和(58.2±2.4)％,明显低于对照组的(97.2±1.8)％(P＜0.05);凋亡率分别为(24.5±7.4)％和(34.7±4.9)％,明显高于对照组的(4.7±2.3)％(P＜0.05);P-ERK、Bax表达量增加,Bcl-2表达量减少.结论 氯胺酮能够诱导大鼠海马神经元凋亡,可能是通过激活P-ERK、改变Bax/Bcl-2比值实现的.     

褪黑素对大鼠失血性休克心肌的保护作用及对MEK/ERK通路的影响

目的探讨褪黑素（MT）对大鼠失血性休克心肌的保护作用及其机制。方法将40 只健康成年大鼠随机分为4组，MT干预组采用股动脉放血法制作放血休克模型，并经颈外静脉注射MT（2 mg·kg 1）；溶剂对照组制作放血休克模型并注射含0.5%乙醇的0.9%氯化钠溶液(10 mg·kg 1)；休克模型组制作放血休克模型但不注射任何试剂；假手术对照组进行单纯血管分离。采用ELISA法检测各组大鼠血清TNF α、 ICAM 1含量，免疫沉淀法纯化蛋白并测定ERK活性；Western blot法测定p ERK1/2和p MEK1/2表达。结果MT干预组大鼠休克后TNF α、ICAM 1含量均明显低于溶剂对照组和模型组(均P＜0.01)，ERK活性及p ERK1/2、p MEK1/2表达亦均明显低于溶剂对照组和模型组(均P＜0.01)。结论MT对失血性休克心肌有保护作用，作用机制与下调MEK/ERK通路活性有关。     

桔皮素对卵巢癌SKOV3细胞的体外作用及作用机制

目的 探讨桔皮素对卵巢癌SKOV3细胞的体外作用,以及对Ras/丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的影响.方法 将卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组(A组,0μmol/L),阳性对照组(B组,75 nmol/L阿霉素),桔皮素低、中、高剂量组(分别为C1组、C2组、C3组,桔...     

厄贝沙坦对心肌肥厚大鼠的心肌保护作用

目的 探讨厄贝沙坦对心肌肥厚大鼠的心肌保护作用.方法 用腹主动脉狭窄法构建心肌肥厚大鼠模型,将成功建立的心肌肥厚大鼠随机分为模型组(n=18)与实验组(n=18),另选18只大鼠仅游离腹主动脉,不丝线结扎作为假手术组.实验组大鼠以200 mg·kg-1厄贝沙坦灌胃,假手术组与模型组以等量生理盐水灌胃,每天1次,各组均连...     

针刺对脑出血大鼠细胞外信号调节蛋白激酶通路影响的研究

目的：探讨针刺百会透曲鬓穴对脑出血大鼠细胞外信号调节蛋白激酶（ ERK）信号转导通路的影响。方法选取健康雄性Wistar大鼠192只,随机分为空白组、模型组、模型＋针刺组（简称针刺组）、激动剂组四组。空白组12只大鼠,模型组、针刺组、激动剂组各60只大鼠,制备脑出血模型。针刺组针刺患侧百会透曲鬓穴,运用Western blot的检测方法,观察不同时相点针刺百会透曲鬓穴对脑出血大鼠血肿周围脑组织p-ERK蛋白表达的影响。结果各造模组大鼠血肿周围脑组织的p-ERK阳性细胞表达至7 d时达高峰。在1d、2d、3d、7d,针刺组大鼠p-ERK表达[（0．19±0．04）、（0．23±0．07）、（0．24±0．05）、（0．25±0．06）]均明显高于模型组[（0．10±0．04）、（0．17±0．02）、（0．09±0．05）、（0．10±0．06）,q＝11．45,均P＜0．01];激动剂组p-ERK表达[（0.20±0．05）、（0．24±0．06）、（0．25±0．09）、（0．26±0．09）]也均明显高于模型组[（0．10±0．04）、（0．17±0．02）、（0.09±0．05）、（0．10±0．06）,q＝10．07,均P＜0．01];针刺组与激动剂组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论针刺百会透曲鬓穴能够激活ERK通路,增加p-ERK蛋白的表达,起到保护神经元细胞的作用。     

乌司他丁对脑出血大鼠局部黏着斑激酶 /细胞外信号调节激酶信号通路及神经元凋亡的影响

目的探讨乌司他丁( UTI)对脑出血( ICH)大鼠局部黏着斑激酶( FAK)/细胞外信号调节激酶( ERK)信号通路及神经元凋亡的影响。方法建立 ICH大鼠模型,使用随机数字表法将造模成功的大鼠随机分为模型组(尾静脉注射 0.9%氯化钠溶液)、抑制剂组( FAK抑制剂 PF562271,50 mg/kg灌胃)、 UTI组(尾静脉注射 10万 U/kg UTI)、 UTI+抑制剂组( FAK抑制剂 PF562271,50 mg/kg灌胃同时尾静脉注射 10万 U/kg UTI)每组 20只,另设 20只为假手术组(尾静脉注射 0.9%氯化钠溶液)作为对照,所有处理均每天 1次,连续 7d。干湿比重法测定各,组大鼠脑组织含水率;酶联免疫吸附(ELISA)法各组大鼠血清中炎性因子含量;原位末端标记( TUNEL)法检测各组大鼠海马组织神经元凋亡;免疫组织化学分析法检测大鼠海马组织抗凋亡因子 B细胞淋巴瘤 -2(Bcl-2)和促凋亡因子 Bcl相关 X(Bax)、胱天蛋白酶 3(caspase-3)表达;尼氏染色法检测各组大鼠海马组织中神经元存活情况;蛋白质印迹法( Western blotting)法检测大鼠海马组织中 FAK蛋白表达和 ERK1/2磷酸化水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠脑组织含水率( 84.51±7.42)%、炎性因子含量、神经元凋亡指数( 44.51±3.77)%以及促凋亡因子 Bax(3.05±0.41)、 caspase-3(3.27±0.46)表达和 ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子 Bcl-2(1.23±0.21)表达以及 FAK(0.29±0.07)蛋白表达水平降低( P<0.05)。与模型组相比, UTI组大鼠脑组织含水率(71.43±6.11)%、炎性因子含量、神经元凋亡指数( 15.34±0.76)%以及促凋亡因子 Bax(2.03±0.15)、 caspcase-3(2.27±0.61)表达和 ERK1/2磷酸化水平降低,神经元存活数目、抑凋亡因子 Bcl-2(2.67±0.27)表达以及 FAK(0.58±0.09)蛋白表达升高( P<0.05);抑制剂组大鼠脑组织含水率( 92.83±7.56)%、炎性因子含量、神经元凋亡指数( 51.99±5.65)%以及促凋亡因子 Bax(3.73±0.37)、 caspcase-3(3.99±0.26)表达和 ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子 Bcl-2(0.73±0.06)表达以及 FAK(0.12±0.02)蛋白表达水平降低( P<0.05)。与 UTI组相比, UTI+抑制剂组大鼠脑组织含水率( 84.16±6.76)%、炎性因子含量、神经元凋亡指数( 43.22±4.07)%以及促凋亡因子 Bax(2.98±0.35)、 caspcase-3(3.26±0.31)表达和 ERK1/2磷酸化水平升高,神经元存活数目、抑凋亡因子 Bcl-2(1.27±0.12)表达以 及 FAK(0.28±0.03)蛋白表达水平降低( P<0.05)。结论 UTI可通过促进 FAK蛋白表达,抑制 ERK磷酸化,进而抑制 ICH大鼠神经元凋亡。     

尼莫地平抑制缺血再灌注后成年大鼠脑内神经发生

目的：观察尼莫地平（Nimodipine）对大鼠脑缺血再灌注后海马齿状回神经发生的影响并探讨其相关机制。方法：采用四动脉阻断法诱导大鼠全脑缺血,缺血20min前腹腔内注射尼莫地平或脑室内注射细胞外信号调节激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）的抑制剂U0126;免疫组化Brdu标记法检测脑内海马神经发生;Western Blot法检测海马组织ERK、磷酸化ERK（p-ERK）蛋白的表达。结果：尼莫地平抑制脑缺血再灌注后海马部位的神经发生的同时也抑制了脑缺血再灌注后海马齿状回p-ERK的表达;海马部位神经发生在U0126组与U0126＋尼莫地平联合给药组差异无统计学意义。结论：尼莫地平显著抑制脑缺血再灌注后海马齿状回的神经发生,其机制与下调p—ERK表达密切相关。     

大豆皂苷Bb对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡及MEK/ERK通路的影响

目的 探讨大豆皂苷Bb经丝裂原细胞外信号调节激酶/细胞外信号调节激酶（MEK/ERK）信号通路对牙槽骨成骨细胞增殖、凋亡的影响。方法 培养人牙槽骨成骨细胞，Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM）培养的细胞作为对照组（A组），以含400μg/mL雌二醇、400μg/mL和800μg/mL大豆皂苷Bb的DMEM培养的细胞分别作为雌二醇组（B组），大豆皂苷Bb低、高剂量组（C1组和C2组）。采用MTT法测定细胞活力和计数细胞菌落数，采用流式细胞术测定细胞凋亡水平，采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）法及蛋白印迹法测定细胞中MEK,ERK mRNA和蛋白表达水平。结果 与A组比较，B组、C1组、C2组光密度（OD）、细胞存活率、菌落数、MEK及ERK mRNA和蛋白表达水平均明显升高（P <0.05），且呈剂量依赖性；与B组比较，C1组上述指标均明显降低（P <0.05），而C2组无明显差异（P> 0.05）。与A组比较，B组、C1组、C2组细胞凋亡率均明显降低（P <0.05），且呈剂量依赖性；与B组比较，C1组细胞凋亡率明显升高（P &l...     

熊果酸对脑胶质瘤U251细胞株增殖的影响

目的 观察熊果酸(ursolic acid, UA)对脑胶质瘤U251细胞株增殖及细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK)、细胞周期蛋白(cyclin)D1/p21waf/cip1信号通路的影响.方法 培养脑胶质瘤细胞株(U251),四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、克隆形成实验及流式细胞术测定不同浓度UA对细胞增殖的影响;Western-blot测定p-ERK1/2及下游的cyclin D1、p21waf/cip1表达.结果 MTT、克隆形成实验及流式细胞术均显示UA可明显抑制U251细胞增殖,免疫印记法显示UA可明显抑制p-ERK1/2、cyclin D1表达及增强p21waf/cip1表达.结论 UA可抑制脑胶质瘤U251细胞株增殖,其途径与下调p-ERK1/2表达、增强p21waf/cip1表达进而抑制cyclin D1表达有关.     

HPLC法测定牡丹皮及脑震宁冲剂中丹皮酚的含量

高效液相色谱法测定了牡丹皮及脑震宁冲剂中丹皮酚的含量。固定相为 Spherisorb 18,流动相为甲醇∶水 ( 65∶ 35) ,紫外检测波长为 2 73nm。样品用甲醇超声提取 10 min,结果平均回收率为 98.9% ,RSD =1.5% ( n =5)。     

异丙酚预处理对大鼠创伤脑组织的保护作用

目的探讨异丙酚预处理对大鼠创伤脑组织神经元特异性烯醇化酶(NSE)含量的影响,评价异丙酚的脑保护作用。方法 25只SD大鼠,随机分为假手术组(A组5只)、单纯脑创伤组(B组10只)和创伤前2h异丙酚预处理组(C组10只),C组动物在创伤前腹腔注射异丙酚100mg/kg,采用SD大鼠局灶性创伤性脑损伤模型,于脑创伤后24h评估并记录动物的神经行为学评分,取大鼠脑组织行NSE测定。结果异丙酚预处理组神经行为学评分较单纯脑创伤组高(P<0.05),异丙酚预处理组脑组织中NSE含量明显低于单纯脑创伤组(P<0.05)。结论异丙酚可以降低脑创伤大鼠脑组织神经元特异性烯醇化酶的含量,减轻神经损害,创伤前2h异丙酚预处理可以改善大鼠脑创伤后的神经行为学评分,有明显的脑保护作用。     

哮喘大鼠ERKmRNA及磷酸化蛋白水平的动态变化

目的：探讨哮喘大鼠ERKmRNA及磷酸化蛋白水平的动态变化。方法：分离培养正常对照组、哮喘组（分成哮喘0．5、1、3、12h组）大鼠的外周血单个核细胞（PBMCs）。分别采用RTPCR、Western blotting技术检测各组PBMCs ERKmRNA、ERK磷酸化蛋白的表达。结果：哮喘（0．5、1、3h）组PBMCs ERKmRNA、ERK磷酸化蛋白表达水平较正常对照组显著升高（均P〈0．01）,哮喘（12h）组和正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。哮喘（1h）组ERKmRNA、ERK磷酸化蛋白表达水平较正常对照组和哮喘（0．5、3、12h）组均显著升高（均P〈0．01）。结论：磷酸化ERK可能在哮喘气道炎症和重塑中发挥重要作用,深入研究ERK在哮喘发病机制中的具体调控作用,对临床支气管哮喘的防治可能有重要意义。     

一氧化氮合酶抑制剂抑制吗啡依赖及戒断大鼠脊髓神经元ERK的表达

目的探讨鞘内分别注射非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NAME、选择性神经元型一氧化氮合酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲哚(7-NI)对吗啡戒断大鼠戒断症状和痛敏行为以及脊髓神经元p-ERK表达的影响。方法采用吗啡依赖及戒断模型,分为正常对照组、依赖组、戒断组、L-NAME组(L-NAME)、7-NI组(7-NI),分别作行为学评分(n=8)、免疫组织化学(n=6)和免疫印迹检测(n=4)。结果实验结果表明,①鞘内注射L-NAME、7-NI可明显减轻吗啡依赖大鼠戒断症状,戒断组戒断症状评分为28.6±4.89,L-NAME组、7-NI组分别为22.1±4.52(P<0.05)、16.2±3.99(P<0.01);戒断组促诱发痛评分(touch evoked agitationscores,TEA score)为13.5±2.55,L-NAME组、7-NI组分别为9.8±3.11(P<0.05)、7.5±2.56(P<0.01)。②鞘内注射L-NAME、7-NI可明显减少胸腰段脊髓背角Fos阳性神经元的数目,L-NAME组、7-NI组分别为293±47、267±52,均低于戒断组(380±71,P<0.05,P<0.01)。③L-NAME、7-NI组p-ERK阳性神经元的数目分别为46.8±11.58、40.5±8.55,均低于戒断组(66.6±11.6,P<0.05,P<0.01),两给药组脊髓p-ERK蛋白的表达也减少。④W estern b lot显示:鞘内注射NOS明显抑制吗啡戒断大鼠脊髓p-ERK蛋白表达增加。结论脊髓水平NO参与吗啡依赖和戒断反应,ERK信号通路可能介导NO的上述作用。     

细胞外信号调节激酶及其抑制剂的研究进展

细胞外信号调节激酶(ERK)是一个多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是MAPK家族的重要成员,在MAPK信号通路中起着重要的作用。ERK通过磷酸化多种底物蛋白来调节细胞多种生理过程,如细胞生长、分裂、增殖、凋亡等,已成为抗癌药物研发的重要靶点。近年来,基于结构的药物设计策略在ERK抑制剂的研究中已得到广泛的应用。本文对ERK的分子结构、作用机制及直接作用于ERK蛋白的ATP竞争性和非竞争性抑制剂的设计思路、化学结构及构效关系做一综述。     

燃煤污染型氟中毒大鼠脑组织ERK/p-90RSK信号转导通路研究

目的复制燃煤污染型氟中毒大鼠模型,检测其细胞外信号调节激酶/90ku核小体S6激酶(ERK/p-90RSK)信号通路的变化,探讨燃煤污染型氟中毒中枢神经系统损害的发病机制。方法以贵州省地方性燃煤污染型氟中毒重病区燃煤烘烤的玉米为主要饲料,复制不同摄氟剂量的慢性氟中毒大鼠模型,实验期为6个月。Western-blotting法检测ERK/p-90RSK信号通路相关磷酸化蛋白的表达水平。结果成功建造燃煤污染型氟中毒大鼠模型。检测结果显示,染氟组中大鼠脑组织中p-ERK1/2和p-90RSK蛋白的表达均高于对照组,且高剂量染氟组高于低剂量染氟组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论燃煤污染型氟中毒可引起大鼠脑组织中ERK信号转导通路的过度激活,而p-90RSK的激活可能是氟中毒大鼠的反馈性保护机制。     

周期性压力对大鼠软骨细胞ERK1、ERK2的影响

目的 探讨周期性压力对大鼠软骨细胞细胞外信号调节激酶(ERK)1和ERK2的影响.方法 将软骨细胞置于压力为150 kPa,频率为0.1 Hz的周期性应力系统中.分为四组:A组不加压作为对照;B、C和D组分别加压0.5、1和2 h.用细胞免疫荧光法观察磷酸化ERK1和ERK2(pERK1和pERK2)在软骨细胞内的定位表达,同时用Western blot法检测ERK1和ERK2在软骨细胞内的磷酸化.结果 加压组的软骨细胞内pERK1和pERK2的荧光强度较A组明显增强;C组的荧光强度最大.pERK1和pERK2在B、C、D组内的表达较A组增高(P<0.01).结论 适当的压力刺激可导致软骨细胞内pERK1和pERK2表达增高,ERK1和ERK2可能在软骨细胞将压力信号转导为生物化学信号过程中起重要作用.     

ERK1/2通路在哮喘大鼠的表达和作用

目的：探讨哮喘大鼠肺组织中磷酸化的ERK1/2（p-ERK1/2）的表达情况，以及其与肺组织炎性评分之间的相关性。方法清洁级雄性SD大鼠20只，随机分为正常对照组和哮喘组，每组10只。 HE染色，半定量评定大鼠肺组织炎症程度；用免疫组织化学染色法观察p-ERK1/2在哮喘大鼠肺组织的表达。结果哮喘组大鼠肺组织炎性评分及p-ERK1/2表达显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01），p-ERK1/2主要表达于气道周围，两者呈显著正相关（r=0.779，P＜0.01）。结论哮喘大鼠的肺组织 p-ERK1/2表达水平显著增加，提示p-ERK1/2可能参与了哮喘的发病过程，且与肺部炎症有一定关系。     

细胞外信号调节激酶在紫杉醇诱发神经痛中的作用机制

细胞外信号调节激酶（ extracellular signal-regulate kinase ，ERK）是一类丝／苏氨酸蛋白激酶，介导多种信号的胞内转导。糖尿病、神经损伤、化疗药物等引发的神经痛及炎性痛的发生发展都与ERK的磷酸化增加有关，继而认为紫杉醇诱发神经痛的发生发展也与ERK活化密切相关。这一新的发现为临床治疗紫杉醇诱发神经痛提供了新的思路和研究方向。本文主要从ERK的基本特性、紫杉醇诱发神经痛的可能机制及ERK参与其形成的可能机制以及影响ERK发挥作用的因素等方面进行了综述。     

急性染铅对大鼠海马细胞外信号调节激酶2的影响

目的探讨急性染铅对大鼠海马总量及磷酸化的细胞外信号调节激酶2(ERK2)含量的影响。方法正常30 d大鼠,海马脑片稳定培养2 h后,分别用含20μmol/L醋酸铅及不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,不同时间点收集,作为急性染铅样品,用Westem印迹法测定样品总量及磷酸化的ERK2含量。结果海马脑片培养中,对照组磷酸化的ERK2含量基本保持不变。染铅组在30和60 min时分别下降了59%和41%,120 min后恢复到接近正常水平。总量ERK2染铅组和对照组含量变化均无显著性。结论急性染铅可使磷酸化的ERK2含量在一定的时间内降低,经过一段时间后显示向正常恢复的趋势。急性染铅对总量ERK2含量无显著影响。铅通过降低ERK2的磷酸化水平影响其活力。