基于iTRAQ的定量蛋白质组学技术探索 淡色库蚊越冬机制

目的　比较淡色库蚊越冬后与滞育准备阶段蛋白表达差异,探索淡色库蚊越冬休眠（滞育）的机制。方法　采用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术,对越冬滞育及准备阶段淡色库蚊进行定量蛋白质组学分析。结果　淡色库蚊越冬滞育前后共鉴定出244种差异表达蛋白,其中上调蛋白126种、下调蛋白118种。生物信息学分析表明,这些差异表达蛋白与能量产生及转化、脂代谢、细胞骨架重塑、糖代谢、蛋白质转运、分子伴侣、应激耐受以及各种代谢酶等有关。结论　本研究首次采用现代蛋白质组学工具鉴定淡色库蚊越冬滞育相关蛋白,初步揭示了与淡色库蚊越冬滞育相关的KEGG通路及蛋白,进一步扩展了对蚊媒越冬滞育机制的理解。     

对溴氰菊酯抗性和敏感淡色库蚊不同发育阶段的抗生水平

对室内选育的淡色库蚊用浸渍法测定了Ⅱ龄，Ⅲ龄和Ⅳ龄和幼虫，用接触筒法了早期，中期和晚期成虫。并观察了增效醚，磷酸三苯酯和杀虫脒与溴氰菊酯混用后的增效效果。结果表明：１．淡色库蚊各发育阶段对溴氰菊酯的抗性水平，在敏感品系由高至低依次为中期，晚期，早期成虫，Ⅳ龄，Ⅲ龄和Ⅱ龄幼龄，在抗性品系为早期，中期，晚期成虫，Ⅳ龄，Ⅲ龄和Ⅱ龄幼。２．ＰＢ和杀虫脒均有明显增效作用，提示抗性可能与氧化代谢增强和靶标部位     

顺式氯氰菊酯处理蚊帐对淡色库蚊作用的研究

在实验室利用模拟箱,以豚鼠为诱饵,用顺式氯氰菊酯(20mg/m~2)浸泡蚊帐对淡色库蚊北京株实验种群进行了毒效试验,同时用浸泡帐布法覆盖小白鼠观察对吸血的影响。结果表明顺式氯氰菊酯浸帐毒杀作用较强,持效在半年以上,并可提高外逃率,降低夜间帐面停栖率,对吸血活动也有明显抑制作用,提示顺式氯氰菊酯浸泡蚊帐对淡色库蚊具有明显的接触拒避作用。     

淡色库蚊抗敌敌畏和抗氯氰菊酯品系的抗性演变

本研究采用敌敌畏和氯氰菊酯对淡色库蚊敏感品系进行选育,至第42代,抗敌敌畏和抗氯氰菊酯品系的抗性指数分别为亲代的12.2倍和534.3倍。选育停止后经20代常规饲养,抗敌敌畏和抗氯氰菊酯品系的抗性指数分别降至6.1倍和83.3倍。表明淡色库蚊对敌敌畏和氯氰菊酯抗性形成和下降速度均不相同。     

淡色库蚊对残杀威抗性机制的研究--酯酶与抗性的关系

为探讨酯酶与抗性的关系，采用生物测定法和微滴定板法，检测淡色库蚊抗残杀威品系各世代的抗性指数及蚊体现人酯酶的活性。淡色库蚊经过43代的汰选，抗性指数达到11.26倍；蚊体内的乙酰胆碱酯酶（AchE)活性的平均抑制率随世代的增加而变低，低于30%的个体频率随世代的增加而增加，呈正相关关系；非特异性酯酶（NSE）的活力随世代的增加而增强，而高于或等于0.9的个体频率逐渐增高，与生物测试法基本一致。抗残杀威品系AchE的不敏感性与抗性呈正相关关系，NSE的活力与抗性亦呈相关关系。     

淡色库蚊敌敌畏抗性和氯氰菊酯抗性品系对常用化学杀虫剂的交互抗性

目的了解淡色库蚊对6种常用化学杀虫剂的交互抗性,为科学使用化学杀虫剂提供依据。方法采用WHO生物测定方法检测淡色库蚊敏感品系、敌敌畏抗性品系和氯氰菊酯抗性品系Ⅳ龄幼虫对三氯杀虫酯、敌敌畏、马拉硫磷、残杀威、氯氰菊酯和溴氰菊酯等6种常用化学杀虫剂的敏感性,每次测定设置7个浓度,每个浓度设2组,每组25个幼虫,24h后统计幼虫死亡数据,计算致死中浓度(median lethal concentration,LC_(50))、回归方程和抗性指数。结果淡色库蚊敌敌畏抗性品系对三氯杀虫酯、敌敌畏、马拉硫磷、残杀威、氯氰菊酯和溴氰菊醑的LC_(50)分别为1.9623mg/L、1.1607mg/L、0.7359mmg/L、0.9002mg/L、0.0220mg/L和0.000 1 mg/L,回归方程分别为Y=3.5287+5.0254X、Y=4.6962+4.693 7X、Y=5.5051+3.853 6X、Y=5.2350+5.1476X、Y=10.4995+3.3184X和Y=13.2977+2.1683X,抗性指数分别为9.25、12.17、9.14、7.93、183.47和0.71;淡色库蚊氯氰菊酯抗性品系对三氯杀虫酯、敌敌畏、马拉硫磷、残杀威、氯氰菊酯和溴氰菊酯的LC_(50)分别为5.572 8mg/L、0.2464mg/L、0.0892mg/L、0.202 7mg/L、0.064 1 mg/L和0.008 5mg/L,回归方程分别为Y=2.7728+2.9852X、Y=7.2054+3.6260X、Y=9.475 1+4.2635X、Y=6.8106+2.6125X、Y=8.7404+3.1352X和Y=14.6951+4.6853X,抗性指数分别为26.27、2.58、1.10、1.79、534.31和40.60。结论长期使用一种化学杀虫剂会导致蚊虫产生抗药性,并对其他化学杀虫剂产生不同的交互抗性,应采取合理选择杀虫剂品种和确定使用剂量等有效措施以避免蚊虫抗药性的产生。     

山东省部分地区淡色库蚊对常用杀虫剂混用的敏感性检测

目的 为了延缓和克服蚊虫抗性的发生和发展，更好地选用卫生杀虫剂控制蚊虫，测定山东省部分地区现场淡色库蚊对常用杀虫剂混用的敏感性。方法 采用WHO生物测试法，计算LC50、回归方程、增效系数。结果 DDVP 三氯杀虫酯、残杀威 三氯杀虫酯复配共毒系数分别在123．24～212．40和171．80～335．80之间，显示出较好的增效作用。DDVP 残杀威复配效果较差。结论 当淡色库蚊产生抗药性后，采用有机磷或氨基甲酸酯类杀虫剂与有机氯类杀虫剂混用的方法，能取得较好效果。     

温度对抗氯氰菊酯和敏感品系淡色库蚊生物学特性的影响

目的比较实验室内不同温度下淡色库蚊氯氰菊酯抗性品系和敏感品系的生物学特性变化。方法在17、25和28℃3个不同温度条件下饲养两品系蚊幼虫,观察蚊虫的繁殖、发育及平均寿命等生物学特性。结果淡色库蚊在17℃条件下发育慢,历期长;在28℃条件下发育快,历期短。同一温度下抗性品系蚊卵、幼虫和蛹的发育历期及成虫寿命均低于敏感品系,卵期死亡率高于敏感品系。结论淡色库蚊抗氯氰菊酯品系在不同温度下与敏感品系比较均表现出环境适应能力下降。     

淡色库蚊对3种化学杀虫剂交互抗性的实验研究

目的 目的 了解淡色库蚊对常用化学杀虫剂的交互抗性, 为合理使用化学杀虫剂提供依据。方法 方法 采用WHO生物 测定方法, 检测淡色库蚊敏感品系和抗敌敌畏、 抗残杀威、 抗氯氰菊酯3种抗性品系IV龄幼虫分别对敌敌畏、 残杀威和氯 氰菊酯3种化学杀虫剂的抗性。 结果 结果 淡色库蚊抗敌敌畏品系对敌敌畏、 残杀威和氯氰菊酯3种化学杀虫剂的抗性系 数分别为14.47、 8.96和207.27, 抗残杀威品系对上述3种杀虫剂的抗性系数分别为3.27、 6.93和8.65, 抗氯氰菊酯品系对 3种杀虫剂的抗性系数分别为2.93、 1.61和501.11。 结论 结论 长期使用一种化学杀虫剂易产生抗性, 并对其他化学杀虫剂 产生不同程度的交互抗性。使用杀虫剂时应注意选择药物品种和剂量, 以避免和延缓蚊虫抗药性的产生。     

鲁西南地区淡色库蚊抗药性评价

目的　掌握鲁西南地区现场淡色库蚊对常用化学杀虫剂的抗药性,为制定合理有效的蚊虫防治措施提供参考。方法　采用WHO生物测试法与药物复配法,2018年6-9月测试山东省西南地区济宁市、菏泽市、枣庄市淡色库蚊幼虫对氯氰菊酯、溴氰菊酯、敌敌畏（DDVP）、残杀威、三氯杀虫酯5种化学杀虫剂的抗性,以及杀虫剂混合后的共毒系数。结果　3个地区淡色库蚊对氯氰菊酯、溴氰菊酯、DDVP、残杀威、三氯杀虫酯的抗性倍数分别为144.43～557.54、118.17～445.33、6.44～19.00、2.37～8.10、0.88～2.98,除济宁与菏泽地区淡色库蚊对DDVP的抗性差异无统计学意义（P > 0.05）外, 其他差异均有统计学意义（P均 < 0.05）。氯氰菊酯 + DDVP、氯氰菊酯 + 残杀威、DDVP + 三氯杀虫酯、残杀威 + 三氯杀虫酯复配后共毒系数分别为199.58～456.95、190.56～292.37、123.32～319.24、192.31～367.32,DDVP + 残杀威复配效果不佳（共毒系数：99.87～108.36）。结论　经过几十年的化学防治,鲁西南地区淡色库蚊对常用化学杀虫剂均表现出不同程度的抗性;应采取综合防治措施控制蚊虫孳生,以延缓抗药性的发展。     

沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性关系初步研究

目的 目的 探讨沃尔巴克氏体与淡色库蚊溴氰菊酯抗性间的相关性。 方法 方法 以PCR鉴定本实验室饲养的淡色库 蚊体内的沃尔巴克氏体, 采用实时定量PCR技术 （qRT?PCR） 测定并比较淡色库蚊溴氰菊酯抗性和敏感品系中沃尔巴克 氏体表达差异。 结果 结果 本实验室饲养的淡色库蚊体内含有沃尔巴克氏体。淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系卵、 一龄蚊、 二 龄蚊、 三龄蚊、 四龄蚊、 雌蚊、 雄蚊体内沃尔巴克氏体表达水平分别是敏感品系的18.42、 3.69、 4.43、 3.96、 6.31、 1.55、 3.76 倍, 差异均有统计学意义 （P均< 0.05）, 而抗性品系和敏感品系蛹中沃尔巴克氏体表达水平差异无统计学意义 （P > 0.05）。南京江心洲溴氰菊酯抗性雌蚊体内沃尔巴克氏体表达水平是敏感雌蚊的2.64倍。 结论 结论 沃尔巴克氏体可能与 淡色库蚊对溴氰菊酯产生抗性有关。     

淡色库蚊氯菊酯抗性品系和敏感品系的生物学特性

目的　比较淡色库蚊氯菊酯抗性品系和敏感品系生物学特性的差异。　方法　在实验室观察淡色库蚊氯菊酯抗性品系及敏感品系的吸血、繁殖和发育等生物学特性 ,构建实验种群生命表。　结果　淡色库蚊氯菊酯抗性品系吸血率低于敏感品系 ,卵、幼虫和蛹的发育历期及成虫寿命均长于敏感品系 ,卵期死亡率高于敏感品系。以上各项 ,两种品系间差异均具有显著性意义 (P <0.01)。抗性品系相对于敏感品系的适合度为 0.58。　结论　淡色库蚊氯菊酯抗性品系表现出对生长发育和繁殖的不利性。     

微山湖区韩庄镇淡色库蚊抗药性现状监测报告

采用WHO生物测试法,测定了微山湖区韩庄镇淡色库蚊幼虫对常用杀虫剂的抗性水平。结果显示韩庄镇淡色库蚊幼虫对残杀威、DDVP、三氯杀虫酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯等5种常用杀虫剂的LC50分别为0.4741、1.4012、0.2420、0.0034和0.0041mg·L-1,以菊酯类杀虫剂抗性最高。     

冰冻储存对淡色库蚊成虫乙酰胆碱酯酶活性的影响

-20℃冰冻0、7、14、21和28d的残杀威抗性品系和敏感品系淡色库蚊3d龄雌成虫AChE活性均无显著变化。表明-20℃冰冻不影响淡色库蚊AChE活性。因此可将现场采集的蚊虫带回实验室冻存后集中测定AChE。     

淡色库蚊抗DDVP品系抗性发展及交互抗性

目的探讨淡色库蚊DDVP抗性品系对4种化学杀虫剂的抗性发展及交互抗性，为合理使用杀虫剂提供依据。方法采用WHO标准生物测试法。结果经过43代的选育，抗DDVP品系的抗性达12．17倍，在21代时，对DDVP、残杀威、氯氰菊酯、溴氰菊酯的抗性倍数分别是6．55、4．16、43．27、0．70倍；到第30代时，分别是8．17、4．74、52．48、0．75倍；到39代时，对DDVP的抗性为10．37倍，对残杀威、氯氰菊酯的抗性分别为6．96倍、160．43倍。结论长期使用一种杀虫剂易产生抗性，亦对其他杀虫剂产生交互抗性，用药时应注意种类的选择。     

山东省淄博市淄川区淡色库蚊kdr等位基因突变研究

目的　了解山东省淄博市淄川区淡色库蚊（Culex pipiens pallens）季节消长趋势及蚊虫击倒抗性（Knockdown resistance, kdr）相关钠通道基因多态性分布特征。方法　于2017–2018年蚊媒活动高峰期,使用诱蚊灯法对山东省淄博市淄川区进行蚊虫种群和密度调查,提取淡色库蚊DNA,通过PCR检测kdr等位基因突变类型和频率。结果　在山东省淄博市淄川区共捕获830只蚊虫,包括淡色库蚊、骚扰阿蚊、白纹伊蚊、刺扰伊蚊、中华按蚊和三带喙库蚊6种,其中淡色库蚊占83.13%,密度为12.32只/（台·夜）;淡色库蚊全年密度监测曲线呈双峰趋势,高峰出现在6月和9月。在kdr基因1 014位点共检测发现5种kdr等位基因类型,包括TTA（75.71%）、TTT（10.00%）、CTA（5.71%）、TCA（4.29%）、TTC（4.29%）,同时发现2种核苷酸非同义突变,即亮氨酸（L1014）突变为苯丙氨酸（L1014F）、丝氨酸（L1014S）。罗村镇、太河镇两地淡色库蚊kdr基因突变频率分别为10.53%、40.63%,差异具有统计学意义（[χ2] = 8.559,P = 0.003）。结论　淡色库蚊为山东省淄博市淄川区优势蚊种。本研究首次在淡色库蚊中检测发现CTA、TTC两种kdr等位基因突变,kdr基因型呈多态性。     

不同品系淡色库蚊各发育阶段的非特异性酯酶和乙酰胆碱酯酶活力变化

研究并探讨非特异性酯酶（NSE）和乙酰胆碱酯酶（AChE）活力在不同品系淡色库蚊（Cules pipiens pallens）各发育阶段的变化，为应用生物化学方法检测蚊虫抗药性及科学合理地进行蚊虫化学防治提供依据。用微量滴定板法测定单个蚊虫NSE和AChE活力，结果显示，敏感品系、DDVP抗性品系和残杀威抗性品系淡色库蚊NSE活力水平在不同发育阶段有变化，I－Ⅲ龄幼虫较低，Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊较高，在各发育阶段均是DDVP抗性品系NSE活力最高，残杀威抗性品系次之，敏感品系最低，其中Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄雌成蚊阶段三个品系间NSE活力差别更明显；三个品系淡色库蚊AChE活力在I－Ⅳ龄幼虫和蛹期较低，3日龄雌成蚊较高，三个品系间AChE活力稍有差异，从高到低依次为残杀威抗性品系、DDVP抗性品系和敏感品系。测定蚊虫NSE活力判断抗药性可选择Ⅳ龄幼虫、蛹和3日龄未吸血雌成蚊；测定蚊虫AChE不敏感性判断抗药性可选择3日龄未吸血雌成蚊；蚊虫化学防治中应选择低龄幼虫阶段施药。