盾叶薯蓣四倍体的鉴定和薯蓣皂苷元的定量分析

目的 提高盾叶薯蓣药材的品质。方法 采用高效液相色谱法,对组织培养条件下诱导获得的盾叶薯蓣四倍体株系试管苗薯蓣皂苷元的量和部分株系一年生田间苗薯蓣皂苷元的量进行了分析,并对部分株系一年生田间苗农艺性状进行了鉴定。结果 经诱导获得的四倍体株系试管苗与对照相比薯蓣皂苷元的量有较大差异;而且四倍体株系试管苗与一年生苗薯蓣皂苷元的量有较强的相关性,大部分四倍体株系表现出典型的多倍体性状。结论 在组织培养的基础上,利用多倍体育种来改善盾叶薯蓣的品质是可行的。     

不同倍性盾叶薯蓣的生理指标和薯蓣皂苷元量的比较研究

目的通过比较盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis人工四倍体植株和普通二倍体植株在抗性相关指标及薯蓣皂苷元量方面的差异,探索药用盾叶薯蓣倍性育种的应用前景。方法以秋水仙素诱导加倍的、经鉴定确认的3个不同株系四倍体盾叶薯蓣为材料,以二倍体原种为对照,采用分光光度法测定叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(PPO)活性以及可溶性糖的量;高锰酸钾滴定法测定过氧化氢酶(CAT)活性;采用HPLC法测定根状茎薯蓣皂苷元的量。结果四倍体植株SOD、PPO、CAT的活性以及可溶性糖的量明显高于二倍体;四倍体植株薯蓣皂苷元的量显著高于二倍体,增加幅度最大为二倍体原种的27%。结论人工四倍体植株薯蓣皂苷元量高,其生理指标也显示较强的抗性基础,可望直接利用或作为进一步培育高产、高薯蓣皂苷元量薯蓣新品种的良好育种材料。     

盾叶薯蓣三倍体自然变异类型的发现及其主要经济性状评价

目的对盾叶薯蓣三倍体自然变异类型主要经济性状进行评价,为盾叶薯蓣三倍体新品系选育奠定基础。方法对云南各地区收集盾叶薯蓣进行倍性鉴定。对鉴定获得的三倍体株系的单株产量、增殖率、薯蓣皂苷元的量等经济性状进行评价。结果在收集的盾叶薯蓣资源中发现5个三倍体;盾叶薯蓣三倍体株系间性状均表现较大差异,单株产量1090.00～628.57g,增殖率(倍)72.43～29.43,干物质质量分数36.95%～24.06%,薯蓣皂苷元质量分数4.40%～1.50%,株系1和株系3产量超过1000g,株系2薯蓣皂苷元质量分数达到4.40%,株系3在单株产量、增殖率、薯蓣皂苷元的量等性状均表现优异,综合指标数值最高。结论通过盾叶薯蓣三倍体自然变异类型发现和株系性状评价,获得表现优良的三倍体株系,通过后代进一步评价有望选育出盾叶薯蓣三倍体新品系。     

不同产地来源的盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量分析

目的:探讨盾叶薯蓣种质资源的遗传稳定性.方法:在优化盾叶薯蓣薯蓣皂苷元提取条件和测定方法的基础上,采用HPLC法对生长在相同环境下,不同产地来源的盾叶薯蓣引种驯化前后薯蓣皂苷元的含量变化进行分析.结果:盾叶薯蓣引种驯化前后薯蓣皂苷元的含量变化与盾叶薯蓣种质有关,不同种质之间差异明显.结论:盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的含量具有较好的遗传稳定性,因此选择优良的种质是提高薯蓣皂苷元含量,实现盾叶薯蓣GAP基地建设的关键.     

铁、锰、锌肥对盾叶薯蓣根茎产量及薯蓣皂苷元的影响

目的 大田条件下,研究铁、锰、锌肥对盾叶薯蓣根茎中薯蓣皂苷元量及根茎产量的影响。方法 采用单因素施肥法,HPLC法测定薯蓣皂苷元的量,数据采用SPSS13.0软件包分析。结果 3种微肥使盾叶薯蓣根茎产量与薯蓣皂苷元量均有不同程度的增加,对薯蓣皂苷元量的影响为锰肥＞锌肥＞铁肥,对根茎产量的影响为铁肥＞锰肥＞锌肥。结论 施用适当浓度的锰肥,对盾叶薯蓣的优质、高产栽培,具有重要的实践意义。     

盾叶薯蓣组织与细胞培养研究进展

盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis CH.W.right)俗称黄姜,系薯蓣科薯蓣属多年生草质藤本,其野生资源根茎内薯蓣皂苷元(俗称皂素)含量在同属植物中较高,一般为1%～2%,据报道单株含量最高有16.5%[1]。解放后,因生态环境不断遭到破坏,加上人们对盾叶薯蓣掠夺性采挖,造成盾叶薯蓣野     

盾叶薯蓣四倍体诱导的研究

目的 选育盾叶薯蓣Dioscoreazingiberensis新种质资源,以期为高产、高皂苷元含量薯蓣育种打下基础。方法 以刚露出绿色芽点的盾叶薯蓣愈伤组织块为材料,采用两种方法处理:①愈伤组织块浸泡到秋水仙素水溶液中。②培养基中添加秋水仙素。结果 成功获得了染色体数加倍的薯蓣新材料,其中以1×103mg/L秋水仙素水溶液浸泡24 h效果最好,诱导率达到35.2%,四倍体植株与二倍体亲本相比,二者在外观形态、生理指标、显微结构上有明显区别。结论 四倍体植株体型大、具生长优势,离体条件下利用愈伤组织块诱导多倍体是盾叶薯蓣倍性育种的一条有效途径。     

不同薯蓣皂苷元的盾叶薯蓣遗传关系的RAPD分析

目的从DNA水平分析鉴定不同薯蓣皂苷元盾叶薯蓣的遗传关系。方法从40个10 bp随机引物中筛选出12个引物,进行RAPD分析,应用POPGENE 1.31软件对扩增结果进行聚类分析。结果共扩增出73条DNA片段,其中多态性片段64条,占87.67%,盾叶薯蓣类型间具有明显的多态性差异。结论DNA分子多样性差异与薯蓣皂苷元量差异具有相关性,说明盾叶薯蓣的遗传基础可能对薯蓣皂苷元的形成和积累有显著的影响。     

近红外漫反射光谱(NIRS)结合TQ软件建立盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元定量模型

 目的  利用近红外漫反射光谱(near infraed spectroscopy,NIRS)结合TQ软件快速测定盾叶薯蓣药材中薯蓣皂苷元含量。方法  采集盾叶薯蓣样品的近红外光谱图,采用高效液相色谱法(HPLC)测定盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的含量,利用TQ软件建立薯蓣皂苷元的定量分析模型,利用模型对未知样品进行预测。结果  建立的薯蓣皂苷元校正模型的相关系数(R2)、校正均方差(RMSEC),内部交叉验证均方差(RMSECV)分别为0.96459,0.0999,0.30041;经外部验证,模型的预测相关系数(R2)和预测均方差(RMSEP)分别为0.9634,0.128。结论  所建模型预测能力较好,可以用于盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量的快速检测。     

盾叶薯蓣根状茎不同部位和不同生长期薯蓣皂苷元含量的差异性研究

目的 揭示盾叶薯蓣根状茎不同部位和不同生长期中皂苷的积累与分布以及薯蓣皂苷元含量的差异。方法组织化学和高效液相色谱法(HPLC)。结果 皂苷主要分布在基本组织内，有小维管束分布的区域皂苷积累最丰富，薯蓣皂苷元的含量也最高；其次是无维管束分布的区域：有大维管束分布的区域皂苷积累最少，薯蓣皂苷元的含量最低。结论 雄株3个区域的皂苷元含量均明显的高于雌株，雌雄同株其含量界于雄株和雌株之间。     

不同光强对弱光型盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元和生物量的影响

目的 在生长光强为1.5、10、30、55、100、270 μmol/(m²?s)下对弱光生态型盾叶薯蓣的薯蓣皂苷元和生物量分别进行测定,以探讨不同光强与盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元和生物量的关系,并找出弱光生态型盾叶薯蓣的最适生长光强。方法 采用TLC法和RP-HPLC法测定其根状茎中薯蓣皂苷元的量。结果 不同光强对盾叶薯蓣的薯蓣皂苷元的量有显著影响。在100、55 μmol/(m²?s)的光强下,根状茎中薯蓣皂苷元的量最高,分别占其干质量的0.45%和0.55%。光照强度对盾叶薯蓣的生长有显著的影响,在30、55、100 μmol/(m²?s)下长势良好,其中在100 μmol/(m²?s)下生长最好。光照强度影响叶片的形状,随着光照强度的增加,叶片长与宽的比率也随之增加。在270 μmol/(m²?s)的强光照射下,叶片长与宽的比率最大。光照强度能显著地影响植株的总叶面积,在100 μmol/(m²?s)光强下植株总的叶面积最大,总的生物量最高,根状茎的生物量与整个植株生物量的比值最大。结论 弱光型盾叶薯蓣是一种薯蓣皂苷元量较高的薯蓣变种,这将为该药源植物的选择育种以及栽培提供理论指导。     

聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶催化酸水解盾叶薯蓣薯蓣皂苷元的研究

目的提高纤维素酶在催化过程中的稳定性，并考察聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶在盾叶薯蓣薯蓣皂苷转化为薯蓣皂苷元过程中的可行性。方法采用聚氧乙烯-马来酸酐共聚物对纤维素酶进行化学改性，并以相对酶活考察改性酶的稳定性。以薯蓣皂苷元的提取率和熔点为指标，比较了纤维素酶和改性酶的辅助催化作用。对改性酶催化所得薯蓣皂苷元产品进行元素分析和HPLC分析。结果改性酶在高温下的活力衰减速率减小，在50℃pH4．8的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中放置100min，保持了初始酶活的69．4％。改性酶辅助催化盾叶薯蓣中薯蓣皂苷的转化时，较未改性酶的效果好，所得薯蓣皂苷元产品提取率为97．6％以上，为白色或乳白色，熔点为200-203℃，元素分析结果为H：77．96％，O：10．11％，HPLC法测定的质量分数高达96．03％。结论聚氧乙烯-马来酸酐聚合物改性纤维素酶在较高温度下能够保持较高的催化活性，可以更有效地促进盾叶薯蓣薯蓣皂苷向薯蓣皂苷元的转化．     

人工种子在盾叶薯蓣快速繁殖技术中的初步应用

目的：提高盾叶薯蓣试管苗的移栽成活率。方法：在组织培养的基础上,对盾叶薯蓣人工种子中人工种皮、人工胚乳制作、人工种子一次性成苗及移栽成活率等问题进行了初步研究。结果：人工种子快速繁殖的最适条件为：从盾叶薯蓣愈伤组织表面切取2～3mm小块茎,包埋在2．5％海藻酸钠中,滴入2％CaCl2中反应8～10min,人工胚乳MS／2＋IAA0．4mg／L直接播种在MS／2培养基上,一次性成苗率可达100％左右,移栽成活率高达85％。结论：以组织培养为基础的盾叶薯蓣人工种子快速繁殖技术具有一定的优越性。     

阶梯生物催化协同提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的研究

目的利用阶梯生物催化协同提高提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的收率和质量。方法通过正交试验对阶梯生物催化协同提取薯蓣皂苷元工艺进行研究,确定该工艺最佳条件;用红外光谱和HPLC谱对皂苷元产品进行定性和定量测定;以产品的收率和熔点为考察标准,比较阶梯生物催化法与直接酸水解法、自然发酵法以及酶解法的优劣。结果利用阶梯生物催化法,当纤维素酶和果胶酶复合酶制剂、淀粉酶以及糖化酶按顺序依次加入时,能够将植物中98%的薯蓣皂苷元提取出来,其产品的红外谱图与对照品谱图相吻合,经HPLC谱测定薯蓣皂苷元质量分数95%以上。结论利用阶梯生物催化协同提取薯蓣皂苷元与其他3种工艺相比,能耗降低,皂苷元收率和质量均提高。     

运用组织培养技术筛选盾叶薯蓣新品种

目的 繁育优质高产薯蓣新品种。方法 在筛选最佳的培养条件和外植体类型的基础上，以高皂素含量和农艺性状表现突出的种质为材料，开展快速繁育技术研究。结果 盾叶薯蓣的不同种质间产皂素含量有较大差异；以叶柄为外植体在添加有4mg/L 2,4-D和1.5mg/L 6-BA的LS培养基上诱导愈伤组织，其出愈率可达75．2％，经不添加2，4－D的LS培养基培养可产生再生植株；共获得源于高皂素含量种质的试管苗8136株，田间成苗6830株，皂素含量达2．48％。结论 运用组织培养诜神通 优质高产薯蓣新品种是可行的。     

HPLC-DAD法测定鄂西北地区黄姜中薯蓣皂苷的含量

黄姜为我国特有的薯蓣品种薯蓣科薯蓣属盾叶薯蓣(Dioscorea Zingiberensis C.H.Wright)的根状茎.其性味甘、苦凉,具有清肺止咳、利湿通淋、通络止痛、解毒消肿的功能.黄姜的主要成分为甾体皂苷,根茎内薯蓣皂苷的成分对心肌缺血、胸痹、高脂血症等具有明显治疗作用[1].我国人工栽培黄姜面积几万公顷,其中湖北鄂西北地区2万公顷,是国内栽植黄姜较早和比较集中的地区.目前多采用重量法、薄层扫描法、HPLC-ELSD法考察该类药材或制剂中总皂苷或皂苷元的含量,本文采用HPLC-DAD法对黄姜药材中的薯蓣皂苷含量进行了测定,结果表明该方法准确可靠,重复性好,为更好的控制黄姜药材的内在质量提供了可靠的分析方法.     

不同产地及品种薯蓣属植物中薯蓣皂素含量的初步研究

薯蓣皂素为重要医药工业原料,主要存生于薯蓣属植物中。我国薯蓣植物有80多种,其中含有薯蓣皂素的根茎有17种、1亚种、3变种。由于资源复杂,所含的薯蓣皂素及其它皂甙元的含量和种类不一,给工业生产及引种栽培带来一定影响。为了顺利进行野生资源的开发及优良品种的引种栽培,本文选择了湖南怀化、湖南慈利、湖北十堰盾叶薯蓣、江西武宁的纤细薯蓣及黄独进行定性和定量研究。     

盾叶薯蓣总皂苷及苷元衍生物的抗炎镇痛活性研究

目的 研究盾叶薯蓣总皂苷及合成的薯蓣皂苷元衍生物对小鼠抗炎镇痛的作用.方法 先将阿司匹林酰氯化,再与薯蓣皂苷元反应,制得具有孪药性质的薯蓣皂苷元衍生物3β-2-乙酰氧基苯甲酰薯蓣皂苷元酯(ABDE),并采用核磁共振氢谱(1H-NMR)和质谱(ESI-MS)进行结构分析确证.在二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和醋酸所致小鼠扭体反应...     

盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元含量测定方法的研究

目的 建立盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的含量测定方法,为制订药材标准提供参考.方法 采用Dikma4.6×250mmC18 柱,甲醇-水(95∶5)为流动相,流速为1.0ml·min-1,PDA-100检测器,检测波长203nm,以外标法测定.结果 薯蓣皂苷元分离度好,在浓度为0.101～2.011mg·ml-1 范围内呈良好的线性关系,样品溶液在12小时内稳定,平均回收率为97.9%,RSD=2.0%.结论 本法操作方便、准确,重复性好,可作为其质量控制指标.     

盾叶薯蓣水溶性成分的研究

目的研究盾叶薯蓣的水溶性化学成分，寻找活性物质。方法用系统溶剂提取，色谱法分离，光谱法鉴定结构，如：^1H—NMR、^13C—NMR135DEPT、HMQC、HMBC、TOCSY。结果从盾叶薯蓣的水溶液中分离到-个薯蓣皂苷、一个苯苷类化合物、一个生物碱类化合物。薯蓣皂苷经测定分析，鉴定为26-O-（β-D-葡萄糖）-（25R）-furost-5-en-3β，26-diol-22-OMe-3-O-{α-L-鼠李糖-（1→4）-[β-D-葡萄糖-（1→3）-β-D-葡萄糖-（1→2）]-β-D-葡萄糖}。结论经文献检索为一新化合物，命名为盾叶薯蓣皂苷E（zingierenin E），另两个化合物在盾叶薯蓣中为首次报道。