基质金属蛋白酶与损伤后血管再狭窄

支架植入与经皮球囊血管成形术可以迅速扩张血管、改善缺血症状,但术后再狭窄的发生严重影响了手术效果。再狭窄是血管损伤后内膜增生和血管重塑的过程,其中血管平滑肌细胞的迁移、增殖和细胞外基质的重塑是血管损伤后再狭窄的主要原因。金属基质蛋白（MMPs）,作为重要的细胞外基质水解酶,广泛参与调节血管重塑和细胞迁移过程,抑制MMPs活性可以显著抑制再狭窄的发生。     

恒磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶的影响

目的:观察不同磁感应强度恒磁场对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶2活性的影响,以探讨磁场是否能用于经皮冠状动脉支架介入治疗术后再狭窄的防治。方法:实验于2005-12/2006-08在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室完成。取纯种雄性SD大鼠,体质量200～250g,用含体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验随机分为对照组,1Gs恒磁场组、5Gs恒磁场组、10Gs恒磁场组、50Gs恒磁场组,其中对照组不予磁场干预,其他各组分别给予磁场干预继续培养48h。运用基质金属蛋白酶2活性酶图分析法结合吸光度扫描分析,观察恒磁场对血管平滑肌细胞的基质金属蛋白酶2表达的影响。结果:与对照组相比,各组基质金属蛋白酶2的活性均明显被抑制,差异有显著性意义[(831.25±2.38)×102,(690.57±2.57)×102,(574.35±1.98)×102,(401.05±1.96)×102,(316.23±3.24)×102,P<0.05],不同磁场强度组组间分析显示具有剂量依赖性,随磁场强度加大,抑制作用也增强。结论:适当强度的恒磁场抑制血管平滑肌细胞的基质金属蛋白酶2活性的表达,磁场对经皮冠状动脉支架介入治疗术后的再狭窄可能具有防治作用。     

脉冲磁场对颈动脉内膜切除术后血管内膜血小板衍生生长因子表达的影响

目的 观察不同强度脉冲磁场对颈动脉粥样硬化家兔模型颈动脉内膜切除术(carotid endarterectomy,CEA)后血管内膜血小板衍生生长因子-A(platelet-derived growth factor,PDGF-A)表达的影响.方法 家兔50只,制作家兔颈动脉粥样硬化模型.高脂饲料喂养2月后行CEA手术.术后将实验动物随机分为对照组、0.6 T治疗组和1.0 T治疗组.在CEA术后1个月、2个月及3个月使用免疫组化方法观察病变血管内膜PDGF-A表达.结果 CEA术后2个月,治疗组PDGF-A水平低于对照组(P<0.05);术后3个月,1.0 T治疗组PDGF-A表达水平低于对照组(P<0.01)和0.6 T治疗组(P<0.05),0.6 T治疗组低于对照组(P<0.05).结论 适当剂量脉冲磁场能抑制CEA术后颈动脉内膜PDGF-A的表达,对CEA术后再狭窄的发生有一定的防治作用.     

颈动脉内膜切除后基质金属蛋白酶9动态表达对早期血管再狭窄形成的意义

背景:颈动脉内膜切除后发生血管再狭窄是影响治疗效果的重要因素.目的:观察颈动脉内膜切除后基因基质金属蛋白酶9 mRNA动态表达在早期血管再狭窄发生中的意义.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,实验于2006-02/2007-12在解放军北京军区总医院完成.材料:健康雄性新西兰兔41只,体质量3.0 kg左右,其中36只用于制备颈动脉粥样硬化性狭窄模型.方法:将41只新西兰兔分为2组,对照组(n=5):不做任何干预.实验组(仃=36):于造模后4 h,1,3,7,30,90 d 6个时间点各取6只,以40 g/L多聚甲醛灌注固定取材,行常规病_理切片苏木精一伊红染色观察形态变化.主要观察指标:采用实时定量一聚合酶链反应技术观察术前即刻、术后1,3,7 d颈动脉内膜切除后基因基质金属蛋白酶9mRNA在早期血管再狭窄过程巾的表达变化.结果:颈动脉内膜切除后内膜修复过程大体上可以分为血栓形成阶段,炎症反应阶段,内皮修复阶段,血管平滑肌增殖阶段,基质形成、堆积阶段.基质金属蛋白酶9mRNA水平在术后1 d开始表达,术后3d达峰值,术后7d显著回落.结论:基质金属蛋白酶9对早期血管平滑肌细胞的增殖、迁移,介导的局部血管重建和再塑,对血管再狭窄的形成有重要作用.     

基质金属蛋白酶在血管成形术后再狭窄中的研究

自1977年Gruentzig等首次应用经皮冠状动脉成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty，PTCA)治疗冠心病以来，PTCA术在临床应用日益增多，已成为治疗冠心病的重要手段。然而PTCA术后3～6个月高达30％～50％的再狭窄率严重影响其远期效果，预防血管成形术后再狭窄是目前有待解决的重要问题。     

MMP-1、TIMP-1和U-PA在血管成形术后再狭窄中表达的实验研究

目的：本实验以兔髂动脉为模型，探讨基质金属蛋白酶－1（MMP－1），基质金属蛋白酶－1组织抑制剂（TIMP－1）和尿激酶纤溶酶原激活剂（U－PA）在血管成形术后再狭窄中的作用。方法：对48只家兔髂动脉粥样硬化模型血管进行球囊扩张术，分别于术后不同时间行血管造影后处死动物，取扩张血管段用病理方法观察血管形态，用原位杂交法测定MMP－1，TIMP－1和U－PA的mRNA表达，结果：球囊扩张术后各时间点MMP－1和TIMP－1 mRNA始终处于弱表达，没有明显升高；球囊扩张术后1d,U-PA mRNA在内膜和中膜表达增加（＋＋），4d时达高峰（＋＋＋），7d后开始下降并保持弱表达（＋），结论：MMP－1，TIMP－1和U－PA在血管成形术后异常表达，为新生内膜形成的重要原因，可能在成形术后再狭窄中起重要作用。     

血管成形术后再狭窄形成机制的实验研究

通过实验观察药物（阿斯匹林，开博通，阿斯匹林加开博通）对兔腹主动脉粥样硬化狭窄球囊成形术后再狭窄病变处平滑肌细胞超微结构的影响．从成形术前二周开始分别口服药物直至术后四周。结果表明：血管成形术后再狭窄病变处平滑肌细胞明显增生，阿斯匹林不能抑制血管成形术后平滑肌细胞增生，而开博通或阿斯匹林加开博通则有抑制成形术部位平滑肌细胞增生的作用．本研究为临床应用药物防治经应经腔冠状动脉成形术后再狭窄提供了参考。     

脂多糖对血管平滑肌细胞表达MMP-9的影响及可能机制

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth musch cell,VSMC)表达基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响及可能的分子机制。方法贴块法进行血管平滑肌细胞培养,细胞免疫化学检测MMP-9的蛋白表达及核因子NF-κB激活情况,原位分子杂交分析MMP-9mRNA表达。结果LPS是MMP-9的强诱导物,可在蛋白及mRNA水平诱导MMP-9的表达,LPS对其诱导作用强度与LPS的浓度呈正相关。与正常组比较LPS刺激15min即有NF-κB p65核转移,30min达高峰,1h后减弱。结论LPS诱导平滑肌细胞MMP-9表达,其作用呈浓度时间依赖性,MMP-9表达升高可能与LPS激活NF-κB有关。MMP-9表达升高和NF-κB激活提示LPS在动脉粥样硬化发病过程中可能起一定作用。     

血清MMP-9，TIMP-1及 VEGF水平检测对冠状动脉支架内再狭窄诊断的研究进展

目前冠心病患者数量逐年递增,冠心病已成为全球第 1位死亡原因,其治疗方式多样,介入治疗是临床普遍使用的方法,它使得冠心病患者预后良好,极大程度提高了患者生活质量。但是支架内再狭窄也随之成为一个不可忽略的问题,然而现阶段没有特异度、灵敏度高的指标可用于预测支架内再狭窄;大量研究表明,金属基质蛋白酶 -9（MMP-9）及金属基质蛋白酶抑制剂 -1（TIMP-1）、血管内皮生长因子（ VEGF）与冠状动脉支架植入术后支架内再狭窄有密切联系,该文主要阐述这三种指标的检测在支架内再狭窄诊断中的应用。     

恒磁场对血管紧张素Ⅱ作用下人血管平滑肌细胞分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1的影响

目的：观察不同强度恒磁场对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)作用下人血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)分泌与表达单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)的影响。方法：采用体外培养第4-6代的人脐动脉VSMC，实验分为6组，即对照组、AngⅡ(1&;#215;10^-6mol／L)组及AngⅡ+不同磁感应强度(1，5，10，50Gs)的恒磁场组。各组细胞于培养及恒磁场作用24h后收集标本，用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunoadsordent assay，ELISA)检测MCP-1的分泌量，免疫细胞化学检测MCP-1的蛋白表达。结果：AngII1&;#215;10^-6mol／L刺激VSMC24h，MCP-1的分泌量显著增高(P&;lt;0．05)；而1，5，10，50Gs恒磁场组细胞MCP-1的分泌量显著低于AngⅡ组(F=752．89，P&;lt;0．05)。AngⅡ1&;#215;10^-6mol／L与VSMC孵育24h后，MCP-1的表达显著增加(P&;lt;0．05和对照组)；而1，5，10，50Gs恒磁场组MCP-1的表达显著低于AngⅡ组(F=238．26，P&;lt;0．05)。结论：1～50Gs的恒磁场可拮抗AngⅡ的作用，抑制VSMC分泌与表达MCP-1.     

大鼠血管平滑肌细胞迁移与西洛他唑的干预效应

目的：探讨西洛他唑对原代培养大鼠血管平滑肌细胞迁移能力的影响及其可能的调控作用。方法：实验于2003—03／12在解放军沈阳军区总医院全军心血管病研究所完成。使用胶原酶消化法处理健康雄性SD大鼠，获得原代培养的鼠血管平滑肌细胞，加入终浓度为0．5μmol／L西洛他唑培养72h为西洛他唑组，对照组为加入等量的Dulbecco改良的Eagle培养液培养的血管平滑肌细胞。应用细胞刮伤实验和基质金属蛋白酶活性测定分析西洛他唑对原代培养血管平滑肌细胞迁移能力的影响。应用蛋白质印记杂交方法分析给药前后血管平滑肌细胞内基质金属蛋白酶2，9和细胞外信号调节激酶蛋白的表达情况。结果：①细胞刮伤实验显示，与对照组比较，西洛他唑组血管平滑肌细胞迁移能力明显受抑，迁移距离明显缩短。明胶酶活性分析发现，西洛他唑组细胞基质金属蛋白酶活性明显低于对照组。②蛋白质印迹杂交分析发现，西洛他唑可引起原代培养血管平滑肌细胞迁移能力下降。西洛他唑组细胞内基质金属蛋白酶2，9蛋白表达明显低于对照组(14，34&;#177;0．70，12．65&;#177;0，98；93，67&;#177;1．90，83．67&;#177;1．05．1=67．86，85，65，P&;lt;0．05)。③蛋白质印迹杂交分析检测显示，西洛他唑组与对照组血管平滑肌细胞内信号调节激酶1，2蛋白表达无明显差异(P&;gt;0．05)；细胞内磷酸化信号调节激酶蛋白表达明显低于对照组(20．44&;#177;0．76，83．67&;#177;1．28，t=73，67，P&;lt;0．05)。结论：西洛他唑可以有效抑制血管平滑肌细胞迁移，这种抑制作用可能与其对细胞内信号调节激酶活性的影响有关。     

颈动脉内膜切除术后早期再狭窄影像与病理对比实验研究

目的 探讨超声和血管造影监测颈动脉粥样硬化动脉内膜切除术后早期再狭窄的价值。方法 采用血管内膜气体损伤结合高脂饲料喂养的方法建立颈动脉粥样硬化性狭窄动物模型，在此动物模型上行颈动脉内膜切除术，应用超声和血管造影与病理同步对照的方法动态观察术后早期动脉再狭窄的过程。结果 超声和血管造影在术后早期再狭窄的每个阶段表现出各自不同的特点。从病理学角度颈动脉内膜切除术后早期再狭窄过程可分为数个阶段，包括血栓形成、炎症反应、内皮修复、血管平滑肌增殖、基质形成等阶段。结论 颈动脉内膜切除术后超声和血管造影联合应用可动态监测早期再狭窄过程，对临床评估有重要意义。     

大剂量阿托伐他汀对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2的影响

目的研究不同剂量阿托伐他汀对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性的影响。方法用含10%小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉VSMC,随机分为对照组,不同剂量阿托伐他汀干预组,运用MMP-2活性酶图分析法结合光密度扫描分析,观察不同剂量阿托伐他汀对VSMC的MMP-2表达的影响。结果不同剂量阿托伐他汀组均明显抑制MMP-2的活性,且具有剂量依赖性。结论阿托伐他汀可以显著降低VSMC的MMP-2的表达,大剂量抑制作用更强。     

血管损伤修复与基质金属蛋白酶

背景:基质金属蛋白酶是一组能特异降解细胞外基质成分依赖锌的酶家族,近年来研究发现其参与了血管损伤后早期应激反应,与血管损伤后再狭窄发生相关.目的:就基质金属蛋白酶在血管损伤中的一些生理病理过程做一综述.方法:应用计算机检索Medline数据库、Ovid数据库、Springerlink数据库、维普数据库及中国知网数据库,纳入1990/2010发表的29篇基质金属蛋白酶与血管损伤以及药物等干预有关的文献进行总结分析.结果与结论:心血管动脉系统在损伤后,包括经皮腔内血管成形后血管狭窄的发生率较高.基质金属蛋白酶在受损动脉的局部表达增加,通过促进内膜增厚和改变血管重构而促进血管损伤后再狭窄的发生.因此,降低血管受损局部基质金属蛋白酶表达将成为防治血管内再狭窄的一个方向.     

同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶1及金属蛋白酶组织抑制剂1的影响

背景:同型半胱氨酸已被证实是动脉粥样硬化发生的一个独立危险因素。目的:观察同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞基质金属蛋白酶1及金属蛋白酶组织抑制剂1的分泌量和活性的影响。设计:自身对照观察。单位:吉林大学再生医学科学研究所病理室。材料:体外培养的鼠龄4～6周,体质量150g左右雄性Wistar大鼠的血管平滑肌细胞。大鼠由吉林大学白求恩医学部实验动物室提供。方法:实验于2001-05/2003-05在吉林大学再生医学科学研究所病理室完成。采用体外培养大鼠血管平滑肌细胞,分成5组,分别加入浓度为0(对照组),0.10,0.25,0.50和1.00mmol/L同型半胱氨酸作用48h,通过酶谱分析同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞细胞基质金属蛋白酶1活性的影响,Western blot技术和半定量RT-PCR方法观察细胞基质金属蛋白酶1和金属蛋白酶组织抑制剂1分泌量及其mRNA的表达。主要观察指标:细胞基质金属蛋白酶1的活性,金属蛋白酶1和金属蛋白酶组织抑制剂1分泌量及其mRNA的表达。结果:①金属蛋白酶1和金属蛋白酶组织抑制剂1分泌量:半胱氨酸0.25,0.50和1.00mmol/L组金属蛋白酶1显著低于对照组(P<0.05～0.01);半胱氨酸0.10,0.25,0.50和1.00mmol/L组金属蛋白酶组织抑制剂1均高于对照组(P<0.05～0.01);②基质金属蛋白酶1活性随着半胱氨酸剂量增加而降低,0.50和1.00mmol/L组降低显著(P<0.01);③加入同型半胱氨酸4组金属蛋白酶1mRNA表达显著低于对照组(P<0.01)],半胱氨酸0.25mmol/L组金属蛋白酶组织抑制剂1mRNA高于对照组(P<0.05),0.50和1.00mmol/L组显著高于对照组(P<0.01))。结论:同型半胱氨酸通过抑制细胞基质金属蛋白酶1的分泌,抑制其酶活性,减少胶原降解而使胶原蓄积。提示同型半胱氨酸减少胶原降解可能是动脉粥样硬化的发病机制之一。     

恒磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响

背景:适当强度的恒磁场可抑制血管平滑肌细胞增殖,可能用于抑制经皮冠状动脉介入治疗术后再狭窄。目的:观察不同磁感应强度恒磁场对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞骨桥蛋白基因表达的影响,以探讨磁场是否能用于经皮冠状动脉介入治疗术后再狭窄的防治。设计:随机分组,对照观察。单位:解放军第四军医大学西京医院心内科。材料:实验于2006-02/12在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室(全军心血管病研究所)完成。纯种雄性SD大鼠,体质量200～250g。方法:用含体积分数为0.1小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉血管平滑肌细胞,实验随机分为对照组,1Gs恒磁场组、5Gs恒磁场组、10Gs恒磁场组、50Gs恒磁场组,其中对照组不予磁场干预,其他各组分别给予磁场干预继续培养48h。应用反转录-聚合酶链反应及蛋白免疫印迹技术结合吸光度扫描分析,观察恒磁场对血管平滑肌细胞骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA表达的影响。主要观察指标:各组血管平滑肌细胞骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA的表达。结果:对照组细胞表达一定量的骨桥蛋白及骨桥蛋白基因,各恒磁场组均较对照组降低,差异显著(P<0.05)。不同磁场强度组间分析显示,恒磁场的刺激作用具有磁场强度依赖性,随磁场强度加大,抑制骨桥蛋白及骨桥蛋白mRNA表达作用增强。结论:适当强度的恒磁场能在基因水平上抑制血管平滑肌细胞骨桥蛋白的表达,磁场对经皮冠状动脉介入治疗术后的再狭窄可能具有防治作用。     

超声评价颈动脉内膜剥脱术和支架置入术后颈动脉再狭窄的价值

目的:探讨彩色多普勒超声评价颈动脉支架置入术(carotid artery stenting,CAS)和内膜剥脱术(carotid endarterectomy,CEA)后颈动脉再狭窄的价值。方法:经数字减影血管造影确诊53例患者共62支血管颈动脉狭窄,回顾分析患者CAS或CEA术前和术后的彩色多普勒超声结果,超声指标包括颈内动脉(internal carotid artery,ICA)狭窄处血管内径、ICA和颈总动脉(common carotid artery,CCA)狭窄处收缩期峰值流速(peak systolic velocity,PSV)以及ICA舒张末期流速(end diastolic velocity,EDV)。结果:经治疗后,52支血管无明显再狭窄(狭窄率50%),病变血管内径较术前明显增宽(P0.01),PSVICA明显降低(P0.01);10支血管出现≥50%的再狭窄,术后血管内径和PSVICA较术前无明显变化(P0.05);出现≥50%再狭窄血管的PSVICA、EDVICA及PSVICA/PSVCCA较无明显狭窄血管明显增高(P0.01)。以PSVICA/PSVCCA≥2作为诊断标准,其预测术后再狭窄≥50%的敏感性和特异性分别为80.0%和98.1%。结论:彩色多普勒超声能够有效地评价CAS和CEA术后颈动脉再狭窄。     

低频电磁场对大鼠主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶的影响

目的 观察不同磁场强度及作用时间的低频电磁场（LFEMF）对培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）表达基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的影响。方法 用含10％小牛血清的DMEM培养液体外培养大鼠主动脉VSMC，随机分为对照组、LFEMF不同磁场强度（20，40，60mT）及时间（10，20，30min）干预组，运用MMP-2活性酶图分析法结合光密度扫描分析，观察LFEMF对VSMC的MMP-2表达的影响。结果 不同磁场强度组均明显抑制MMP-2的活性，且具有剂量依赖性，但抑制作用不随时间延长而变化，不具有时间依赖性。结论 适当强度和作用时间的LFEMF抑制VSMC的MMP-2活性的表达，磁场对经皮腔内冠状动脉成形术（PTCA）及支架植入术后的再狭窄（RS）可能具有防治作用。     

三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞及基质作用的实验研究

目的 研究三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCASMC)转录因子E2F-1及基质内皮单核细胞激动肽Ⅱ(EMAP-Ⅱ)的作用,从而揭示该药物促HCASMC凋亡及其抑制HCASMC增殖和迁移的机制.方法 将4.0μmol/L三氧化二砷与HCASMC共育12,24,48 h,设空白对照组,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测三氧化二砷对E2F-1的作用,Western blot检测该药物对EMAP-Ⅱ的作用.结果 HCASMC与4.0μmol/L三氧化二砷共育12,24,48 h后细胞凋亡率于48 h最高(P<0.05).RT-PCR可见E2F-1 mRNA表达于48 h最少(P<0.05).Western blot可见48 h组EMAP-Ⅱ表达最少,细胞黏附率最低(P<0.05).结论 三氧化二砷能够促进HCASMC的凋亡,降低HCASMC转录因子E2F-1 nnqNA表达,减少基质EMAP-Ⅱ的表达,从而抑制HCASMC的过度增殖、迁移和黏附.