幽门螺杆菌外排泵的研究进展

随着抗生素的广泛应用及滥用,幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)耐药现象日益严重,并已出现了同时对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林耐药的多重耐药(multidrug resistance,MDR)株,导致H.pylori根除率下降,给临床治疗带来了极大的困难.细菌外排泵的存在是细菌对大多数抗生素耐药的重要机制,尤其在多重耐药中起重要作用.因此为解决H.pylori日益增高的耐药性问题,近年来,外排泵的作用机制及其抑制剂的研究备受关注,并有重要的研究发现,对耐药性的防治具有重要的意义.本文就H.pylori外排泵及其外排泵抑制剂的研究进展作一综述.     

幽门螺杆菌多重耐药性与其外排泵抑制剂研究进展

随着抗生素的广泛大量的使用,细菌的耐药性及耐药水平越来越高,给临床抗菌治疗带来了困难,必须引起足够重视。幽门螺杆菌耐药率不断上升,而且已经出现同时对甲硝唑、克拉霉素、阿莫西林耐药的多重耐药株,近年发现的能引起多重药物耐受(multidrug resistance,MDR)的外排泵系统在临床耐药中扮演越来越重要的角色。因此,对幽门螺杆菌多重耐药机制及其外排泵抑制剂进行研究,以解决幽门螺杆菌日益增高的耐药性问题,具有重要的临床意义。     

主动外排泵外膜蛋白编码基因hefA在幽门螺杆菌多重耐药中的重要作用

目的: 研究幽门螺杆菌(H pylori)分离株的多重耐药机制.方法:用氯霉素对临床分离株H pylori和标准株H pylori进行体外诱导,琼脂稀释法测定诱导后菌株对甲硝唑、四环素、琥乙红霉素、环丙沙星和青霉素G的耐药性,从而筛选出多重耐药株;实时定量PCR检测多重耐药株和敏感株中编码主动外排泵外膜蛋白的结构基因hefA的mRNA水平.通过构建hefA基因敲除株,测定敲除前后菌株对10种抗生素的敏感性.PCR扩增20株H pylori临床分离株主动外排泵结构基因hefA和hefC.结果:经氯霉素诱导后,筛选出的耐药菌株均表现出相似的多重耐药性,6株多重耐药株hefA基因mRNA水平显著高于敏感株(5.8466±2.9370 vs 2.6356±1.7245,P=0.033);成功构建了HefA基因敲除株(△HpLZ1026),△HpLZ1026对4种抗生素的敏感性明显增加;所有20株临床分离株中均检测出hefA和hefC基因,未发现hefABC基因缺失株.结论:主动外排系统hefA基因高表达导致体外人工诱导H pylori多重耐药的产生;hefABC基因在H pylori中普遍存在,且在H pylori多药耐药机制中起重要作用.     

外排泵抑制剂对幽门螺杆菌多重耐药性的影响

目的:探索多种外排泵抑制剂对H.pylori多重耐药性的影响.方法:临床分离培养H.pylori,对分离敏感株进行氯霉素耐药性诱导,筛选出多重耐药(MDR)株;琼脂二倍稀释法对敏感菌株和MDR株进行9种抗生素的药敏试验,分别加入外排泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)、利血平、泮托拉唑后再次进行药敏试验,比较分析外排泵抑制剂对H.pylori耐药性的影响;同样方法检测泮托拉唑、雷贝拉唑、奥美拉唑、兰索拉唑和埃索美拉唑对MDR-H.pylori株抗生素最小抑菌浓度(MIcs)值的影响.结果:诱导出4株MDR-H.pylori;CCCP及泮托拉唑能够部分恢复MDR-H.pylon株对抗生素的敏感性,而利血平对MDR-H.pylori耐药性无明显影响;这三种外排泵抑制剂对敏感株的MICs值影响不大;5种质子泵抑制剂中,雷贝拉唑能使甲硝唑和阿莫西林的MIC值分别降低至1/4和1/3,泮托拉唑能使其均降低至1/2左右.结论:外排泵抑制剂能够在体外提高多重耐药H.pylori株的药物敏感性;在所有质子泵抑制荆中雷贝拉唑对降低MDR-H.pylori对抗生素的耐药性作用最强,其次为泮托拉唑.     

全基因组测序在细菌耐药性分析中的应用

细菌耐药性特别是多重耐药性已经成为全球共同关注的问题,其严重威胁疾病的治疗,并造成巨大的经济损失。传统的耐药性分析方法耗时耗力,全基因组测序作为一种新型技术,可能会成为一种简单、快速和高效的耐药性分析方法,且具有较好的敏感性和特异性。除了在已知耐药基因型确定和耐药表型预测外,该方法还可发现新的潜在的耐药基因。现对全基因组测序在细菌耐药性中的应用作一综述。     

外排泵ABC转运蛋白基因msbA和spab在幽门螺杆菌多重耐药中的重要作用

目的:探讨外排泵ABC转运蛋白基因msbA和spab在幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)多重耐药中的作用.方法:从临床上胃炎和消化性溃疡患者的胃黏膜标本分离H.pylori.采用琼脂二倍稀释法测定氨苄西林、头孢曲松、四环素、克拉霉素、氧氟沙星和呋喃唑酮对H.pylori的最小抑菌浓度(MIC).应用氯霉素对敏感株和标准菌株进行体外诱导多重耐药.采用RT-PCR的方法分别测定敏感株和多重耐药株中msbA和spab基因的相对表达量.分别构建msbA和spab的基因敲除株,分别测定敲除前后菌株对9种抗生素的敏感性.结果:诱导出包括标准菌株NCTC11637在内的5株多重耐药株.多重耐药株中msbA和spab基因的相对表达量明显高于敏感株(1.8200±0.5310,1.8340±0.2726vs0.8420±0.0789,P=0.018,0.015).成功构建了msbA和spab基因敲除株(H.pyloriMZ1006△msbA和H.pylori MZ1006△spab),两株基因敲除株对4种抗生素的敏感性相对于野生株分别有明显的增加.在临床分离的20株H.pylori中均检测出...     

上海地区幽门螺杆菌对抗生素耐药率的变迁

甲硝唑和克拉霉素是根除幽门螺杆菌 (Ｈｐ)感染的主要抗生素 ,Ｈｐ对这些抗生素耐药是治疗失败的主要原因。我们调查了上海地区 1995～ 1999年间Ｈｐ对甲硝唑和克拉霉素耐药率的变化情况 ,现报道如下。1.Ｈｐ菌株 :Ｈｐ菌株分离自我们在上海地区几家工厂职工胃镜普查所取的胃黏膜活检标本。随机选取 1995、1997和1999年分离、保存的Ｈｐ菌株各 5 0株 ,均接种于含 7%马血的Ｓｋｉｒｒｏｗ培养基中 ,微氧条件培养 3～ 5ｄ ,经生化、涂片鉴定为典型的Ｈｐ。2 .药敏试验 :应用Ｅ ｔｅｓｔ(ＡＢＢｉｏｄｉｓｋ ,Ｓｏｌｗａ,Ｓｗｅｄｅｎ)测定Ｈｐ…     

幽门螺杆菌的研究结束了吗?

本文分析了幽门螺杆菌(Hp)相关疾病临床诊治现状与存在的问题,从Hp全基因组与宿主遗传多态性等方面作了深入剖析,并认为:Hp研究远未结束,刚刚进入新的起点。     

幽门螺杆菌耐药基因检测的研究现状

抗生素的广泛应用使幽门螺杆菌(H pylor1)对抗生素的耐药性和耐药率逐渐增加,目前对幽门螺杆菌耐药的检测方法重点在对克拉霉素和甲硝唑两种抗生素耐药的检测.其检测方法主要是基于聚合酶链式反应为基础的分子生物学技术,其对克拉霉素发展前景广阔的是聚合酶链式反应.限制性片段长度多态性分析技术和实时定量聚合酶链式反应结合解链曲线分析技术,可对活检组织和粪便两种样本进行检测,同时可以对多种抗生素进行耐药检测:其对甲硝唑耐药的检测主要是免疫印迹法和聚合酶链式反应.限制性片段长度多态性分析技术,有望发展成检测H pylori耐药的常规项目.     

幽门螺杆菌对抗生素耐药研究进展

幽门螺杆菌(H pylori)是一种存在于人类胃黏膜的G-的螺旋形细菌,是胃十二指肠溃疡、慢性活动性胃炎的主要病因,并与黏膜相关性淋巴组织(MALT)淋巴瘤及胃癌的关系密切.因此,H pylori的根治成为大家关注的问题.但是临床上H pylori根除率却不高,其原因主要是日益突出的抗生素耐药问题.本文就有关H pylori对抗生素耐药性的研究近况作一阐述.     

rdxA基因在幽门螺杆菌对甲硝唑耐药机制中的作用

目的 探讨rdxA基因变异与幽门螺杆菌(Hp)对甲硝唑耐药之间的关系。方法 随机收集快速尿素酶试验(RUT)阳性的病人(5l例)，取胃窦部黏膜l块，在体外微需氧培养。甲硝唑耐药率检测分别用E试验和临界点药敏法。PCR扩增HA的rdxA基因片断(886bp)并测序。对耐药株和敏感株的rdxA基因序列与标准菌株HA26695相应序列进行同源性分析。结果共分离出Hp临床分离菌47株。甲硝唑用E试验法检测耐药率为34％(16／47)，临界点药敏法为31．9％(15／47)，其中15株两种方法均耐药。测序15株Hp耐药株和8株敏感株的rdxA基因片断，与标准菌株HA26695相应序列对比，15株耐药株(MtzR)的rdxA基因核酸序列相似性范围在90％-95％之间，平均为92．5％，而8株敏感株(Mtzs)相似性范围在94％—95％之间，平均为94．5％。大多数耐药株rdxA基因的变异为点变异、单个碱基插入或缺失，未发现大片段序列的插入和缺失，且突变位点是不固定的。结论 在耐甲硝唑的大多数Hp临床分离株中，rdxA基因发生多处点变异，单个碱基插入或缺失，但未发现大片段序列的插入和缺失，且变异位点是不固定的。     

多耐药大肠埃希菌NB8株全基因组耐药基因检测

目的检测1株多耐药大肠埃希菌NB8株的遗传学背景。方法病原分离自2012年4月宁波市第一医院住院患者尿液,作16S rDNA和gyrA基因测序、BLASTn比对确认为大肠埃希菌,采用Illumina HiSeq与Ion Torrent PGM两种大规模并行测序仪进行全基因组分析,再行人工测序。最后NB8株和9株已完成全基因组测序的大肠埃希菌耐药基因的比较基因组学研究。结果多耐药大肠埃希菌NB8株全基因组测序得到一条推定的染色体序列,长4 550 369 bp (内含14个缺口),得到一条推定的质粒序列,长635 377 bp(内含33个缺口)。从NB8株全基因组数据中挖掘出了β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类、磺胺类、四环素类、多粘菌素的耐药基因,并挖掘出接合性质粒、转座子、插入序列、整合子的遗传标记,以及5大类外排泵基因。结论多耐药大肠埃希菌NB8株遗传学背景明确,主动外排机制增强也会导致或者增强NB8株的耐药性。质粒、转座子和整合子等可移动遗传元件可以使细菌的耐药性得以快速传播,使受体菌表现为多重耐药。     

中国幽门螺杆菌耐药研究现状

中国是一个幽门螺杆菌（H．pylori）感染率较高的国家，H．pylori的感染率42％～90％，所以H．pylori感染的治疗是H．pylori研究领域中的重点，而H．pylori感染治疗失败主要原因是H．pylori对抗生素的耐药性，所以H．pylori感染治疗中核心问题是日．pylori对抗生素的耐药性，其耐药性也是H．pylori感染研究中的重点课题。近年我国对H．pylori耐药研究已有新j生展，本文重点介绍如下5个方面：①H．pylori对常用抗生素耐药情况及地区差异性；②H．pylori对常用抗生素耐药性随时间变迁而逐渐上升；⑧H．pylori对四环素和左氧氟沙星耐药情况；④H．pylori耐药对H．pylori根除效果的影响；⑤如何克服H．pylori对抗生素耐药性。     

对甲硝唑耐药幽门螺杆菌中rdxA基因的表达

目的 探讨对甲硝唑耐药幽门螺杆菌(Hp)株中rdxA基因表达的差异。方法 随机收集51例快速尿素酶试验阳性患者的胃窦部黏膜,体外微需氧培养。甲硝唑耐药率检测分别用E试验和临界点药敏法。选取对甲硝唑高度耐药菌株(MIC值>256 mg/L),在含16 mr/L甲硝唑及不含甲硝唑培养基中分组培养,半定量RT-PCR法检测rdxA基因的表达,用galE基因作外参照。结果 共分离出Hp临床分离菌47株。E试验法甲硝唑耐药率为34％(16/47),临界点药敏法为32％(15/47),其中15株(包括5株高度耐药菌株)2种方法均耐药。5株高度耐药菌中rdxA基因在甲硝唑存在的情况下表达量减少,而参照galE基因表达均不变。结论rdxA基因的表达减少在Hp对甲硝唑高度耐药形成中起了一定的作用。     

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药机制的探讨

目的 探讨幽门螺杆菌（Ｈｐ）对甲硝唑的耐药机制。方法 （１）甲硝唑选择压力试验;（２）ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳;（３）硝酸盐还原试验;（４）革兰阴性菌９５种底物相关酶类检测。结果 Ｈｐ由敏感株突变为耐药株后,１－甲基琥碧酸、琥碧酸、Ｄ－丙酸相关酶类活性降低;Ｌ－岩藻糖、６－磷酸葡萄糖相关酶类活性增高。结论 Ｈｐ耐药性与细菌的代谢状态及酶系统的变化具有一定的相关性。     

肝螺杆菌与幽门螺杆菌的功能基因组比较分析

肝螺杆菌(Hh)是迄今为止发现与肝脏疾病相关的5种螺杆菌之一.Hh株ATCC51449的全基因组测序已经完成.研究发现Hh有和幽门螺杆菌(Hp)一样的尿素酶、鞭毛蛋白和黏附素同源基因,而编码趋化蛋白及细胞致死性肿胀毒素(CDT)的特性则与空肠弯曲菌类似.Hh缺乏大多数与Hp同源的定植和毒力因子如cag致病岛.此外Hh还有一个与霍乱弧菌相似的致病岛HHGI1.上述基因特点导致该菌肠道定植的适应性与致病潜能.     

幽门螺杆菌对甲硝唑耐药机制的研究进展

幽门螺杆菌（Hp)对甲硝唑耐药的主要机制是rdxA基因的突变失活；同时，frxA基因和fdxB基因的突变失活可增加Hp的甲硝唑耐药性。此外，还存在其它耐药机制，本就目前Hp对甲硝唑耐药机制作一综述。     

幽门螺杆菌耐药的分子机制研究现状

近年抗生素耐药率普遍升高,耐药成为根除幽门螺杆菌治疗失败的主要原因.克拉霉素耐药的主要原因为23S rRNA基因点突变.甲硝唑低水平耐药主要与硝基还原酶基因rdxA和frxA基因的失活有关,高水平耐药是多基因突变的累积效果所致.阿莫西林耐药与pbp1A基因多位点突变相关.porD和oorD两基因的突变可能与幽门螺杆菌对呋喃唑酮产生低水平耐药相关.     

幽门螺杆菌耐药机制的研究现状

幽门螺杆菌（Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ）感染治疗的研究一直是Ｈ．ｐｙ－ｌｏｒｉ研究领域中的热点,随着研究的深入,发现根除的难度逐渐增加,其原因是Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ耐药菌株发生率的增加。最近报道Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ耐药是全球性的,其对甲硝唑和克拉霉素的耐药是根除Ｈ． Ｐｙｌｏｒｉ治疗失败的主要原因［１］。克拉霉素和甲硝唑及其一些相关抗生素为什么耐药？本文就最近国内外对Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ耐药机制的研究作一综述。 一、Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ对克拉霉素的耐药性 克拉霉素为新一代大环内酯类药物,该药具耐酸和能溶解于酸性ｐＨ胃液中…