用逆转录聚合酶链反应法检测人巨细胞病毒晚期mRNA

人类ＨＣＭＶ感染非常普遍，在成人可达８０％～９６７４％［１］，而只有活动性感染才可导致病理性损害。因此建立一个快速、准确、敏感的ＨＣＭＶ活动性感染的检测方法，对ＨＣＭＶ感染的诊断和治疗具有重要意义。我们采用逆转录ＰＣＲ（ＲＴＰＣＲ）方法，通过检测...     

巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立

目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）即刻早期（ＩＥ）基因ｍＲＮＡ。方法设计合成跨越ＨＣＭＶＩＥ基因内含子区的一对引物，分别用ＲＴＰＣＲ和ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｍＲＮＡ和ＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交鉴定阳性产物。结果ＨＣＭＶＩＥ基因ｍＲＮＡ表达在感染后６小时即可出现，并持续到感染后至少９６小时，ＲＴＰＣＲ检测的最低敏感性为１００ｆｇ总ＲＮＡ，其他病毒和细胞ＲＮＡ不能被扩增。结论ＲＴＰＣＲ技术检测ＨＣＭＶｍＲＮＡ敏感、特异，有望应用于临床作为ＨＣＭＶ活动性感染的早期诊断方法     

荧光定量PCR诊断HCMV病毒感染的阈值建立

人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）在我国１０岁以下儿童的感染率（抗ＨＣＭＶ－－ＩｇＧ阳性率）超过９５％。当机体抵抗力低下时，ＨＣＭＶ可引起多种组织的感染甚至危及生命。多聚酶链反应可作为ＨＣＭＶ感染早期快速的检测手段，但由于该病毒潜伏感染的特点（多为肾脏），正常健康人的尿液内亦有少量的ＨＣＭＶ，一般定性ＰＣＲ可能存在一定的假阳性。因此我们采用荧光标记探针，以Ｔａｐｍａｎ技术对尿液中ＨＣＭＶ基因进行定量检测，观     

献血员中巨细胞病毒感染的PCR检测

采用快速、敏感和特异性的聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１０８名献血员进行了人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）检测。结果表明，有８４例表现为ＨＣＭＶ阳性，占被检测对象的７７．８％。说明人群中ＨＣＭＶ的感染率是较高的。同时，从本文的ＨＣＭＶ的ＰＣＲ敏感性和待异性试验表明，ＰＣＲ技术可以检测样品中少到２０个拷贝的ＨＣＭＶ模板ＤＮＡ。因此，ＰＣＲ技术是可以替代或弥补目前繁琐的细胞培养技术及血清学方法而用于临床检测的。     

逆转录套式ＰＣＲ检测丙型肝炎病毒感染者ＨＣＶ ＲＮＡ

目的　探讨人血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ与血清ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体联合检测对丙型肝炎的诊断价值。方法对以ＥＬＩＳＡ方法检测所得的４６例ＨＣＶ—ＩｇＧ阳性的标本用逆转录套式聚合酶锭反应（ＲＴ—ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ）检测血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ，同时用ＥＬＩＳＡ方法检测血清中ＨＣＶ—ＩｇＭ。结果血清中有１７例ＨＣＶ　ＲＮＡ阳性和６例ＨＣＶ—ＩｇＭ阳性，而ＰＢＭＣ中有１９例ＨＣＶＲＮＡ阳性。结论血清中ＨＣＶ—ＩｇＭ可作为丙型肝炎的初筛诊断，ＨＣＶ—ＩｇＭ可作为ＨＣＶ近期感染的指标，但二者均不能准确反映病毒在体内的存在情况，而套式ＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ可直接反映ＨＣＶ在体内的活动情况，其中ＰＢＭＣ中检测ＨＣＶＲＮＡ的阳性率高于血清，提示ＨＣＶ可能在ＰＢＭＣ中潜伏乃至复制。     

烧伤病人HCMV感染的检测分析

烧伤病人ＨＣＭＶ感染的检测分析张建萍，许素菊，徐清华，李希发（石家庄白求恩国际和平医院优生优育技术指导中心，０５００８２）孙志刚，刘建春，于清新，王玉舟，齐晓清，林洪武（石家庄白求恩国际和平医院烧伤科，０５００８２）人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的广泛...     

巨细胞病毒对人骨髓粒-巨噬系祖细胞生长的影响

目的探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对人骨髓粒巨噬系祖细胞集落（ＣＦＵＧＭ）是否有直接抑制作用。方法采用造血祖细胞体外培养技术,研究病毒株ＨＣＭＶＡＤ１６９对ＣＦＵＧＭ生长的影响,用原位聚合酶链反应（ＩＳＰＣＲ）技术检测ＣＦＵＧＭ的细胞内ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结果高浓度ＨＣＭＶＡＤ１６９（２×１０６ｐｆｕ／ｍｌ和２×１０５ｐｆｕ／ｍｌ）在体外能明显抑制ＣＦＵＧＭ的生长（Ｐ＜０．０１）,而低浓度（２×１０４ｐｆｕ／ｍｌ）ＨＣＭＶＡＤ１６９则无此作用,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ的抑制作用因其浓度的不同而有差异;经ＩＳＰＣＲ检测发现在ＣＦＵＧＭ的细胞核中存在ＨＣＭＶＡＤ１６９ＤＮＡ。结论ＣＦＵＧＭ是ＨＣＭＶＡＤ１６９的宿主细胞之一,ＨＣＭＶＡＤ１６９对骨髓ＣＦＵＧＭ生长的抑制作用与其对ＣＦＵＧＭ的直接感染有关。     

巨细胞病毒即刻早期及晚期基因片段的检测

自巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＡＤ１６９株感染细胞中提取的ＤＮＡ，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，在自行设计及合成的两对特异性引物引导下，成功地扩增出口ＣＭＶ即刻早期（ＩＥ）及晚期（Ｌ）基因片段，摸索了最佳Ｔａｑ酶、Ｍｇ￣（２＋）浓度及退火温度的反应条件，并建立了同一体系中同时检测ＨＣＭＶＩＥ及Ｌ基因片段的方法。初步应用该方法检测了１２例肾移植患者尿标本及１０例动脉粥样硬化标本中ＨＣＭＶＩＥ及Ｌ基因，结果ＩＥ阳性率分别为８％及２０％，Ｌ基因阳性率为３３％及５０％，未见有假阳性及假阴性结果的出现，表明该方法具有较好的特异性及灵敏度，可广泛地应用于临床ＨＣＭＶ的诊断。     

45例肝硬化、40例原发性肝瘤患者HBV、HCV感染的血清学调查

４５例肝硬化、４０例原发性肝瘤患者ＨＢＶ、ＨＣＶ感染的血清学调查陈国芳王嵩（宜兴市张渚人民医院，江苏宜兴２１４２３１）对苏南丘陵山区４５例肝硬化、４０例肝癌患者进行乙肝二对半（ＨＢＶＭ）和抗－ＨＣＶ测定，结果该８５例肝病患者血清检测ＨＢＶＭ阳性者７２...     

人巨细胞病毒糖蛋白gp52的原核表达及初步应用

目的探讨以表达人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）中抗原性较强的蛋白片断代替全病毒抗原建立ＨＣＭＶＩｇＭ检测试剂盒的可行性。方法以聚合酶链反应扩增ＨＣＭＶ聚合酶辅助糖蛋白（ｇｐ５２）的有效抗原基因序列，导入带有高效转录启动子ｐＴｒｃ和６个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ，在大肠杆菌中表达，经金属鏊和亲和层析（ＩＭＡＣ）法纯化后，用酶联免疫吸附法检测新生儿血清，并与全病毒抗原检测进行比较。结果重组ｇｐ５２占大肠杆菌总蛋白的４０％，ＩＭＡＣ纯化后纯度达９４．５％。在４３份疑似ＨＣＭＶ感染的新生儿血清中阳性检出率为５１．２％，而用全病毒抗原检测阳性率只有２５．９％。结论ＨＣＭＶｇｐ５２蛋白具有良好的抗原性，可用于建立新一代的检测试剂盒。     

人巨细胞病毒体内外先天性感染胎鼠脑神经元的研究

目的：研究确定人巨细胞病毒（ Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ） 体内外先天性感染胎鼠大脑皮质神经元及其感染特征。方法：分别建立体内外模拟 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 先天性感染小鼠脑神经元模型。采用病毒分离、病理学检测及核酸原位杂交技术等观察研究病毒的增殖,受染细胞的形态特征以及病毒核酸在细胞内的定位和分布。结果：体内模型显示： 脑组织上清液中分离出 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ; 大脑皮质发生侵袭性脑膜脑炎性病理改变; 神经元核内出现病毒特征性大的嗜碱性包涵体;病毒特异性核酸存在于受染神经元核内及胞浆内。体外模型亦证实：受染神经元胞体明显肿胀并可见核内嗜酸性包涵体; 原位杂交法检出 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ特异性核酸。结论： Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 可在体内外致胎鼠大脑皮质神经元发生类似于人类先天性中枢神经系统感染的病理改变; 建立的体内外感染模型可用于 Ｈ Ｃ Ｍ Ｖ 中枢神经系统先天性感染的发生机制研究。     

应用半巢式核酸荧光定量技术检测肾移植术后人巨细胞病毒感染

目的：建立一种新的用于肾移植术后人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的快速定量诊断方法,方法：采用半巢式酸荧光寂量技术（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）检测已知含量的ＨＣＭＶ－Ａ在６９标准病毒株,无关病毒,无关细菌及临床血标本的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ和质粒标准品,以确定该方法的敏感性,特异性和定量的准确性。结果：对已知含量的标准病毒株的定量检测结果与其已知含量基本一致;无关病毒包括单纯疱疹病毒１型（ＨＳＶ－１）     

丙型肝炎的检测方法及其评价

丙型肝炎的检测方法及其评价高利综述成都市第一人民医院检验科（６１００１６）丙型肝炎（ＨＣ）是一种对人类健康危害甚大的疾病，丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）已被确认为引起非甲非乙型肝炎（ＮＡＮＢＨ）的主要病原。ＨＣＶ感染后很容易由急性转为慢性，且与肝硬化（ＬＣ）...     

应用增强化学发光法检测人巨细胞病毒DNA

用增强化学发光法（ＥＣＬ）检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。该检测系统用戊二醛将辣根过氧化酶与ＨＣＭＶ特异片段结合制备酶标基因探针。探针与靶ＤＮＡ杂交后，酶催化检测系统中发光底物，再经增强剂作用将光信号放大，杂交信号通过Ｘ光自显影。经狭缝杂交证明ＥＣＬ的敏感性达到０．２ｐｇ同源ＤＮＡ，且仅与ＨＣＭＶＤＮＡ杂交。用ＥＣＬ检测４２例巨细胞包涵体病（ＣＩＤ）患儿和２０例正常同龄儿童尿中ＨＣＭＶＤＮＡ，结果阳性率分别为５４．８％和３５．０％。与病毒分离相比较，ＥＣＬ的敏感性为９２．３％，符合率为８７．１％，表明用ＥＣＬ检测ＨＣＭＶ是安全、快速、敏感和特异的方法，适用于临床诊断和研究。     

肝癌与HBV感染标志

乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染与原发性肝癌（ＰＨＣ）的关系受到重视。随着ＨＢＶ标志检测技术的提高和标准化，对ＰＨＣ与ＨＢＶ感染的关系有关的报导也逐渐增多，为了解ＨＢＶ感染的各种标志与ＰＨＣ的联系，我们对４６例ＰＨＣ患者血清ＨＢＶ标志进行分析，报导如下。     

巢式聚合酶链反应和pp65抗原检测早期诊断巨细胞病毒感染

目的 比较人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）巢式聚合酶链反应（ｎＰＣＲ）与抗原ｐｐ６５血症检测技术在活动性ＨＣＭＶ感染中的早期诊断价值。方法 以１８例器官移植病人为研究对象,收集术后２～１２周抗凝血标本,分别采用ｎＰＣＲ和血ｐｐ６５抗原检测技术,观察两者的敏感性、相符率以及在早期诊断活动性ＨＣＭＶ感染中的作用。结果 １８例移植病人的１１４份系列血标本,ｎＰＣＲ检测阳性９７份,ｐｐ６５抗原检测阳性８７份,两者均阳性７６份,ｎＰＣＲ比血ｐｐ６５抗原检测更敏感,两者相符率为６６％。结论 ｎＰＣＲ和血ｐｐ６５抗原检测技术均能作为器官移植病人活动性ＨＣＭＶ感染早期诊断的有效手段,两者同时使用能更有效地提高诊断水平,监控疾病的发生发展。     

间接EIA检测抗丙型肝炎病毒核心抗原IgM抗体

以基因重组的ＨＣＶ核心抗原包固相载体,建立了ＥＩＡ检测抗ＨＣＶｃＩｇＭ抗体的方法。为去除特异性抗ＨＣＶ ＩｇＧ及类风湿因子的干扰,用关抗人ＩｇＧ作血清标本稀释液,用抗入ＩｇＭ μ Ｆ（ａｂ‘）２片段制备酶结合物。该ＥＩＡ法对部分ＨＣＶ感染者的检测结果显示,在急性丙型肝炎中抗ＨＣＶｃ ＩｇＭ有较高的检出率,并与ＨＣＶ ＲＮＡ的检出率密切相关,揭示此 ＨＣＶ早期感染的血清学标志,与ＨＣＶ的复制有关。     

应用增强化学发光法检测人巨细胞病毒DNA

用增强化学发光法（ＥＣＬ）检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ。该检测系统用戊二醛将辣根过氧化酶与ＨＣＭＶ特异片段结合制备酸标基因探针。探针与靶ＤＮＡ杂交后，酶催化检测系统中发光底物，再经增强剂作用将光信号放大，杂交信号通过Ｘ光自显影。经狭缝杂交证明ＥＣＬ的敏感性达到０．２ｐｇ同源ＤＮＡ，且仅与ＨＣＭＶ ＤＮＡ杂交。用ＥＣＬ检测４２例巨细胞包涵体病（ＣＩＤ）患儿和２０例正常同龄儿童尿中ＨＣＭＶ ＤＮ     

血液病患者输血与庚型肝炎病毒感染的研究

目的：了解血液病患者输血后的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染情况。方法：对６３例血液病患者采用ＲＴＰＣＲ方法检测ＨＧＶＲＮＡ、丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ，应用ＥＬＩＳＡ方法检测抗ＨＧＶ、ＨＢｓＡｇ。结果：ＨＧＶＲＮＡ阳性率为７．９％，抗ＨＧＶ阳性率６．３％；ＨＣＶＲＮＡ阳性率为４６．０％。ＨＧＶ感染通常伴有ＨＣＶ感染及丙氨酸转氨酶升高。ＨＧＶ感染与输血量有关，与血液病种类无关。结论：血液病输血可引起ＨＣＶ、ＨＧＶ的传播     

白细胞中巨细胞病毒抗原检测及在肾移植的临床应用

目的建立一种新的快速诊断巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染的方法并初步用于肾移植受者。方法采用抗ＣＭＶ抗原的单克隆抗体，运用免疫组化链菌素－生物素标记法对外周血白细胞核中ＣＭＶ抗原（即刻早期抗原和早期抗原）进行染色，诊断ＣＭＶ感染。结果共检测肾移植受者７２例，ＣＭＶ活动性感染率为４７％（３４／７２），ＣＭＶ病发病为１８％（１３／７２）。ＣＭＶ抗原阳性细胞数在ＣＭＶ活动性感染者中平均为１１．５／５万ＷＢＣ，在ＣＭＶ病者为２０．５±１７．８／５万ＷＢＣ。同时检测１０名健康人，结果均为阴性。结论该法具有快速、简便、成本低等优点，且能达到定量检测的目的，可用于临床对ＣＭＶ感染的早期快速诊断。