人鼻咽癌细胞裸鼠体内演进中bcl—2、p53及c—erbB—2表达与EB病毒LMP1的关系

目的研究EB病毒LMP1在人高分化鼻咽癌细胞裸鼠体内演进中的作用及与bcl-2、p53及c-erbB-2蛋白表达的关系.方法将表达EB病毒LMP1的人高分化鼻咽癌细胞及对照阴性细胞移植于裸鼠体内,然后将移植瘤细胞再移入裸鼠建立第二代移植瘤,如此传至第三代,分别观察移植瘤的成瘤和生长的变化,以免疫组化和图像分析技术检测移植瘤细胞bcl-2、p53及c-erbB-2蛋白表达.结果表达LMP1的鼻咽癌细胞原代移植成瘤率达75.0%,比对照组显著增高(P＜0.01).平均潜伏期及体内倍增时间分别为29.6±7.7天和2.81±0.13天,比对照组明显缩短(P＜0.01).表达LMP1的鼻咽癌细胞(C1L)各代移植瘤的bcl-2蛋白表达阳性率显著低于对照组对应的各代细胞的表达(P＜0.01);bcl-2蛋白表达阳性率有显著下降趋势,对照组细胞bcl-2蛋白表达则呈峰值变化;各细胞系体内移植瘤细胞的p53及c-erbB-2蛋白表达的变化趋势较为相似,即各细胞系不同代间p53表达的阳性率有显著下降趋势,c-erbB-2蛋白表达阳性率有显著上升趋势.表达LMP1的鼻咽癌各代移植瘤细胞的p53及c-erbB-2蛋白表达阳性率显著高于对照组对应的各代(P＜0.01).结论LMP1使鼻咽癌细胞的生长能力增强,在癌细胞的演进中使其向去分化方向发展,这种作用可能通过bcl-2表达的替代通路,并使p53的积聚、活性受抑制和c-erbB-2蛋白表达增高来实现促进细胞增殖,在鼻咽癌细胞演进过程中可能起重要协同作用.     

缺氧对骨肉瘤细胞系MG-63 HIF-1α、p53 、bcl-2 及细胞凋亡的影响

 目的 了解缺氧环境对骨肉瘤MG-63细胞缺氧诱导因子HIF-1α、p53、bcl-2的表达及细胞凋亡的影响。方法 建立骨肉瘤细胞体外缺氧模型,观察不同缺氧时间段（8、16、24h）HIF-1α、p53、bcl-2的表达和细胞凋亡的情况。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α、p53、bcl-2的表达水平;免疫组化（SP法）和免疫印迹（WesternBlot）检测HIF-1α、p53、bcl-2蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 缺氧处理后,HIF-1α转录水平未见明显改变,蛋白表达水平随缺氧时间延长明显增强;而p53、bcl-2mR-NA及蛋白表达水平均显著增强,两者间存在一定的相关性;细胞凋亡率却未见明显增加。结论 在缺氧条件下,不能通过以HIF-1α为中介的p53依赖途径来诱导骨肉瘤MG-63细胞的凋亡,其机制可能与缺氧诱导野生型p53的突变或缺失使HIF-1α和bcl-2的过表达有关。     

鼻咽癌EB病毒感染与p53、bcl-2蛋白异常表达

（目的）探讨EB病毒在鼻咽癌发病中的作用。（方法）应用免疫组化技术分别检测46例鼻咽癌中EB病毒潜在膜蛋白（LMP－1）、p53及bcl－2蛋白表达。（结果）LMP－1的阳性率为52．2％（24/46）；24例LMP－1阳性病例中p53阳性16例、bcl－2阳性20例，22例LMP－1阴性病例中P53和bcl－2阳性分别有15例和18例，两组间无明显差异（P＞0．05）。〔结论〕LMP一1对p53和bcl-2表达无明显影响。     

bcl-2、bax和p53在鼻咽鳞癌中的表达及其与瘤细胞凋亡的关系

目的探讨bcl-2、bax和p53在鼻咽鳞癌中的表达及其与瘤细胞凋亡指数的关系。方法用免疫组织化学SP法检测48例鼻咽鳞癌中bcl-2、bax和p53的表达,用TUNEL法检测鼻咽鳞癌细胞的凋亡指数。结果48例鼻咽鳞癌中bcl-2、bax和p53阳性率分别为85.00%(41/48)、68.00%(33/48)和77.00%(37/48)。48例鼻咽鳞癌细胞的平均凋亡指数为25.62±25.78/HPF,凋亡指数与bcl-2、bax和p53的表达无相关性。结论鼻咽鳞癌中bcl-2和bax均呈高表达且已达到相对平衡,推测它们可能并不起到介导瘤细胞凋亡的主导作用。鼻咽鳞癌中p53的过表达可能已经失去了对bcl-2和bax表达的调节进而影响细胞凋亡的功能。     

抗肿瘤药物诱导细胞凋亡机制研究进展

抗肿瘤药物通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥其抗肿瘤活性，其作用机制的研究主要有：①激活Fas／FasL(CD95／Apo-1)信号系统，抗Fas／Apo-1抗体则能降低药物诱导凋产的敏感性。通过DR4、DR5／TRAIL途径诱导细胞凋产。②众多基因参与了细胞凋产。野生型p53抑制细胞增殖．突变型p53抑制细胞凋亡。bcl-2基因过表达与肿瘤多药耐药有关，bcl-2发挥其抑制凋亡的效应需要与其家族的其它成员如bax相互协调。⑧Caspase-3的活化诱导凋产：有些细胞毒药物可直接活化Caspase促使细胞凋亡。     

顺铂对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性和凋亡及p53和bcl-2 表达的影响

目的观察顺铂对 HeLa 细胞端粒酶活性、凋亡及其 p53、bcl-2 表达的影响,以揭示顺铂抗宫颈癌的机理.方法运用体外细胞培养技术,以不同浓度的顺铂作用于培养的 HeLa 细胞 72 h,通过端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,以及流式细胞术观察细胞凋亡及 p53、bcl-2 的表达.结果顺铂能以浓度依赖方式下调端粒酶活性并诱导细胞凋亡,使其 bcl-2 基因的表达显著降低,而 p53 基因的表达则增强.端粒酶活性下调与细胞凋亡及其 p53、bcl-2 基因表达紧密相关,P＜0.01.结论顺铂能下调端粒酶活性,诱导细胞凋亡,使 bcl-2 表达降低和 p53 表达增强,这可能是顺铂抗癌作用的重要机制之一.     

三氧化二砷诱导胃癌细胞凋亡及对相关基因表达的影响

目的 研究三氧化二砷（As2O3)诱导胃癌细胞的凋亡作用及对凋亡相关基因p53、c-myc、bcl-2、bcl-xl和bcl-xs表达的影响,探讨其诱导胃 癌凋亡的作用机制。方法 研究As2O3对胃癌细胞SGC－07901和MKN－45的诱导凋亡作用和对凋亡相关基因表达的影响。结果 As2O3作用于细胞可见典型的细胞凋亡。出现典型的亚二倍体“凋亡峰”。10μmol／LAs2O3的诱导胃癌细胞SGC－7901和MKN－45的凋亡率为13．8％和22．5％。细胞凋亡指数在1．42％－9．5％之间。As2O3作用后能明显下调SGC－7901细胞的bcl-2蛋白和mRNA的表达;对SGC－7901细胞的p53、c-myc、bcl-xl和bcl-xs蛋白的表达无影响。As2O3能促进MKN－45细胞的p53蛋白和mRNA的表达,对MKN－45细胞的bcl-2、c-myc、bcl-xl和bcl-xs基因表达无影响。结论 As2O3可通过不同途径诱导胃癌细胞凋亡,通过下调SGC－7901细胞的bcl-2的蛋白表达诱导其凋亡,通过上调p53表达诱导胃癌MKN－45细胞凋亡。     

STAT3在鼻咽癌中的表达特征及其与bcl—2和LMP1表达的关系

目的：探讨鼻咽癌中信号传导和转录激活子3(sTAT3)的表达特征及其与bcl-2和EB病毒潜在膜蛋白1(LMP1)表达的关系。方法：采用原位杂交和免疫组化法分别检测62例鼻咽癌组织中EB病毒EBER1的表达和STAT3、bcl-2和LMP1蛋白的表达。结果：鼻咽癌中EBER1阳性率为100．0％(62／62)；LMP1阳性率为61．3％(38／62)；STAT3和bcl-2阳性癌细胞占癌细胞总数的百分率跨度分别为5．0％～95．0％和0～100．0％。STAT3与bcl-2表达呈正相关，rs=0．444，P=0．000。STAT3与LMP1表达无显著相关性。结论：鼻咽癌细胞中STAT3呈持续表达状态(即异常激活状态)。STAT3的异常激活可能通过上调bcl-2这一抗凋亡基因的表达，从而延长了鼻咽癌细胞的生存时间。     

脑膜瘤细胞凋亡及凋亡相关基因bcl—2、p53蛋白的表达

目的 探讨脑膜瘤自发性细胞凋亡相关基因bcl-2、p53蛋白在脑膜瘤中的表达及其意义。方法 采用TUNEL法和免疫组化S－P法检测40例脑膜瘤中细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2,p53蛋白的表达。结果 恶性和非典型脑膜瘤中的细胞凋亡指数（AI）明显高于良性脑膜瘤（P＜0．05）,良性脑膜瘤不同亚型之间bcl-2,p53表达无显著性差异（P＞0．05）;p53蛋白表达随脑膜瘤恶性程度增高而增强,具有显著性差异（P＜0．05）,p53阳性与阴性的脑膜瘤中的细胞凋亡指数无显著性差异;bcl-2蛋白表达与脑膜瘤细胞凋亡呈负相关。结论 恶性及非典型脑膜瘤中自发性细胞凋亡增多;凋亡是脑膜瘤恶性或不典型的1个重要的生物学行为;p53基因在脑膜瘤的恶变过程中发生重要作用,与脑膜瘤的恶性进展密切相关;bcl-2基因在脑膜瘤中可抑制细胞凋亡。     

应用组织芯片探讨凋亡及EB病毒与经典型Hodgkin淋巴瘤的关系

目的探讨凋亡及EB病毒与经典型Hodgkin淋巴瘤的关系.方法应用组织芯片、免疫组化双标记和原位杂交技术检测bcl-2、LMP1、EBER、TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end-1abeling)显示的凋亡在62例经典型Hodgkin淋巴瘤H/RS细胞的表达.结果62例经典型Hodgkin淋巴瘤中35例表达bcl-2,37例表达LMP1/EBER,62例的背景细胞均可见TUNEL显示的凋亡,但仅有10例CD+30的H/RS细胞出现凋亡.经X2检验,bcl-2、LMP1/EBER、TUNEL显示的凋亡与分期、分型均无相关性(P>0.05);EBV与bcl-2、凋亡也无相关性(P>0.05);bcl-2与凋亡之间呈负相关(P<0.05).结论凋亡是CHL的一个发病因素.bcl-2的过表达可阻断细胞的凋亡,促进肿瘤的生长.但凋亡与临床分期及分型均无相关性;一半以上的经典型Hodgkin淋巴瘤是EBV相关性的,但EBV与临床分期、分型及凋亡均无相关性,其发病机制尚不清楚.     

鼻咽癌中p^53积聚和bcl—2过表达的关系

目的：观察鼻咽癌组织中是否同时存在p53积聚和bcl-2过表达，二者之间有无关系，以及它们与病人性别，年龄和临床分期的关系。材料和方法：用免疫组化方法检测83例鼻咽癌组织中的P53和bcl-2蛋白。结果：鼻咽癌组织中P53积聚和bcl-2过表达率分别为77.1％和90.4％，其在不同性别，不同年龄和不同临床分期中无显著差异。部分癌旁上皮中也可见P53或bcl-2阳性细胞。两种抗原在多数病例中共同表达（58／83），存在等级相关关系。结论：不同年龄，性别和临床分期病人的鼻咽癌组织中均存在p53积聚和bcl-2过表达现象。该现象出现于临床早期，持续至晚期。两种抗原常"伴随"表达提示bcl-2过表达可能与P53失活有关。其机制值得进一步研究。     

酪氨酸激酶Etk/BMX对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的：研究酪氨酸激酶Etk/BMX对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响并探讨其可能机制。 方法：利用脂质体2000将野生型酪氨酸激酶Etk/BMX表达质粒pcDNA3.0-Etk导入Etk/BMX低表达水平的鼻咽癌细胞株Sune-1中,建立Etk/BMX稳定高表达细胞株Sune-wt,空质粒pcDNA3.0转染细胞作为对照（Sune-vector）。X射线（0、2、4、10、15Gy）照射后,MTT法测定细胞的生存分数（survival fraction,SF）;流式细胞术检测细胞的凋亡率、细胞周期、增殖指数以及凋亡相关蛋白p53和bcl-2的变化情况。结果：不同剂量X线照射后Sune-wt较Sune-1和Sune-vector生存分数（SF）均显著增高而凋亡均显著减少(P＜0.05),累计剂量15Gy后出现明显S、G2期阻滞,增殖指数增高。Sune-wt照射前后p53和bcl-2的表达水平出现显著改变(P＜0.05)。结论：Etk/BMX有增强鼻咽癌细胞对放射线的抵抗作用,其可能是通过调控p53和bcl-2的表达以及引起S、G2期阻滞两种途径实现的。     

重组腺病毒p53影响口腔黏膜异常增生细胞生长的分子机制

[目的]探讨重组腺病毒p53(rAd-p53)影响口腔黏膜异常增生细胞(POE-9n)生长、诱导凋亡的分子机制。[方法]利用RT-PCR及Westernblot技术检测rAd-p53转染POE-9n细胞后p53、p21CIP/WAF及bcl-2mRNA和蛋白的表达变化。[结果]POE-9n细胞经rAd-p53转染后,p53、p21CIP/WAF和bcl-2mRNA和蛋白水平的表达均出现明显变化。转染24h后,p53、p21CIP/WAFmRNA及蛋白表达显著增高(P<0.01),而bcl-2则在转染72h后表达明显降低(P<0.01)。[结论]rAd-p53转染POE-9n细胞后,外源性p53的导入使p21CIP/WAF激活,并抑制bcl-2的表达,从而诱导细胞凋亡。     

鼻咽癌中凋亡与p53和bcl—2基因表达的关系

目的 目前，凋亡已成为肿瘤研究的热点之一，尤其基因对凋亡的调节作用已成为基因治疗和评价疗效的方向。其中以p53与bcl-2基因尤为引人注目，因而，我们研究了鼻咽癌中凋亡与p53和bcl-2基因表达的关系。材料与方法 对近年我院治疗的99例鼻咽癌病人的标本，通过免疫组化染色的方法测定突变型p53和bcl-2基因的表达情况，并于光镜下根据形态学特征确定肿瘤凋亡细胞并计算其凋亡比例。结果 我们发现p53表达-、 、 、 的病理标本分别为30、60、4和5例，其凋亡指数为0.83%、0.55%、0.37%及0.14%，各组间统计有显著差异；84例bcl-2表达-、 、 、 4组的病理标本为57、17、10和0例，其凋亡指数分别为0.61%、0.40%和0.31%，各组间差异无显著性意义，但如将bcl-2表达阳性两组“ ”、“ ”合并为阳性组后分析，则bcl-2表达阴性与阳性之间差异有显著性意义（P<0.05)。同时将p53和bcl-2基因表达分为3组；二者皆阴性，其中一者为阳性二者皆为阳性组，其凋亡指数分别为0.88%、0.52%和0.49%，双阳性与双阴组间差异有显著性意义（P<0.01)。结论 鼻咽癌中p53和bcl-2基因的表达可以降低肿瘤本底凋良心比例。尤以p53基因为明显，但二者没有协同作用。     

重组质粒pLMP1-p53mt在人鼻咽癌HNE1和人宫颈癌HeLa细胞中的表达分析

目的:研究重组质粒pLMP1-p53mt中EB病毒LMP1基因和突变型p53(p53mt)基因在HNE1和HeLa细胞中的体外表达。方法:体外培养人鼻咽癌细胞株HNE1和人宫颈癌细胞株HeLa,采用脂质体lipofectAMINETM2000介导将重组质粒pLMP1-p53mtDNA转染细胞,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Sourthernblot法分析p53mt基因和LMP1基因的表达情况。结果:经重组质粒pLMP1-p53mt转染的HNE1和HeLa细胞中检测到了p53mt基因和LMP1基因的表达。结论:重组质粒pLMP1-p53mt的LMP1基因和p53mt基因能分别在EDL-2启动子和CMV启动子控制下表达。该质粒可进一步用于转基因动物的制备和基因功能研究。     

小分子RNA干扰 MTA1基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物活性及相关蛋白表达的影响

目的:采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默乳腺癌细胞MDA-MB-231中转移相关基因(metastasis-associated gene 1,MTA1)的表达,并观察其对15-脂氧合酶-2(15-lipoxygenase-2,15-LOX-2)、p53及bcl-2表达的影响.方法:将shRNA-MTA1载体质粒稳定转染MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制情况,FCM法检测细胞周期及凋亡情况,RT-PCR和Western印迹法检测MTAl、15-LOX-2、p53及bcl-2 mRNA和蛋白表达情况.结果:shRNA-MTA1能明显降低MTA1基因在MDA-MB-231细胞中的表达量;抑制MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,并使细胞被阻滞在G1期,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).转染shRNA-MTA1可使MDA-MB-231细胞中15-LOX-2和p53 mRNA及蛋白的表达明显增强(P<0.01),而 MTA1和bcl-2 mRNA表达明显减弱(P <0.01).结论:MTA1基因可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,该作用可能与上调细胞中15-LOX-2和p53的表达,下调bcl-2的表达有关.     

膀胱移行细胞癌P—gp表达与凋亡相关蛋白p53、bcl—2的关系

目的探讨膀胱移行细胞癌组织中MDR1基因产物P-gp表达与凋亡相关蛋白p53、bcl-2的相互关系及其临床意义.方法采用免疫组化S-P法检测107例原发性膀胱移行细胞癌组织中P-gp、p53、bcl-2蛋白的表达情况.结果P-gp、p53、bcl-2蛋白的阳性表达率分别为63.6%、72.9%、54.2%,三者的过度表达均与膀胱癌的病理分级、临床分期和术后腔内化疗后复发有关;P-gp表达与p53、bcl-2蛋白的表达密切相关(P＜0.01或P＜0.05).结论P-gp、p53、bcl-2蛋白的过度表达不仅是判定原发性膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的重要指标,而且凋亡相关蛋白p53、bcl-2可能参与膀胱移行细胞癌多药耐药的形成.     

放疗前后宫颈癌细胞凋亡及Fas、p53及bcl-2的表达

目的:探讨Fas、p53及bcl-2放疗前后的变化及与细胞凋亡的关系。方法:采用免疫组织化学SP法和脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术,分别检测40例宫颈鳞癌患者放疗前后同一位点凋亡阳性率及Fas、p53和bcl-2的表达。结果:放疗前后凋亡阳性率有显著性差异(P<0.01);放疗后Fas与p53表达明显升高(P<0.01),而bcl-2表达明显降低(P<0.01);放疗后p53与Fas及bcl-2表达有相关性(P<0.05)。结论:Fas、p53及bcl-2对放射线诱导的宫颈癌细胞凋亡均具有重要调控作用。p53可能通过上调Fas在宫颈癌中的表达参与了放疗诱导的细胞凋亡过程。     

lncRNA MEG3通过下调miR-7-5p表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨lncRNA MEG3对鼻咽癌细胞的放射敏感性影响及潜在作用机制。方法 实验设置过表达对照组、过表达MEG3组、抑制miR-NC组、抑制miR-7-5p组、过表达对照+4 Gy组、过表达MEG3+4 Gy组、抑制miR-NC+4 Gy组、抑制miR-7-5p+4 Gy组、过表达MEG3+过表达miR-NC组、过表达MEG3+过表达miR-7-5p组。采用qRT-PCR检测miR-7-5p和MEG3表达;细胞克隆形成实验检测鼻咽癌细胞放射敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果 MEG3在鼻咽癌组织和细胞系中低表达;过表达MEG3和抑制miR-7-5p表达可增加鼻咽癌细胞放射敏感性且促进细胞凋亡。MEG3可靶向调节miR-7-5p表达;过表达miR-7-5p逆转了过表达MEG3对鼻咽癌细胞放射增敏和促进细胞凋亡的作用。结论 过表达MEG3增加鼻咽癌细胞放射敏感性,并促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-7-5p有关。     

lncRNA MEG3通过下调miR-7-5p表达对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨lncRNA MEG3对鼻咽癌细胞的放射敏感性影响及潜在作用机制。方法 实验设置过表达对照组、过表达MEG3组、抑制miR-NC组、抑制miR-7-5p组、过表达对照+4 Gy组、过表达MEG3+4 Gy组、抑制miR-NC+4 Gy组、抑制miR-7-5p+4 Gy组、过表达MEG3+过表达miR-NC组、过表达MEG3+过表达miR-7-5p组。采用qRT-PCR检测miR-7-5p和MEG3表达;细胞克隆形成实验检测鼻咽癌细胞放射敏感性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果 MEG3在鼻咽癌组织和细胞系中低表达;过表达MEG3和抑制miR-7-5p表达可增加鼻咽癌细胞放射敏感性且促进细胞凋亡。MEG3可靶向调节miR-7-5p表达;过表达miR-7-5p逆转了过表达MEG3对鼻咽癌细胞放射增敏和促进细胞凋亡的作用。结论 过表达MEG3增加鼻咽癌细胞放射敏感性,并促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-7-5p有关。