转人白细胞介素-12基因膀胱癌瘤苗的抗肿瘤作用

目的 制备人白细胞介素—12(hIL-l2)转基因膀胱癌瘤苗，观察其特异性抗肿瘤免疫作用。方法 经逆转录病毒载体将hIL—12编码基因导入膀胱癌细胞株MBT—2中，用聚合酶链反应(PCR)技术检测目的基因是否整合入MBT—2基因组中，用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测hIL—12活性，将转基因细胞接种到36只荷瘤小鼠，检测细胞毒T细胞杀伤活性。结果 hIL—12 cDNA经逆转录病毒载体导入MTT—2细胞中后，hIL—12基因已完整、稳定地整合到MBT—2基因组中，使MBT—2细胞具有分泌hIL—12活性，每24h达32．8mol/L以上。转基因细胞接种荷瘤小鼠后，可见瘤体变小(P＜0．01)，细胞毒T细胞杀伤活性增强。结论 转hIL—12基因瘤苗，能够诱导小鼠的特异性抗肿瘤免疫反应。     

白细胞介素2基因工程人大肠癌细胞瘤苗的建立及鉴定

目的 建立高表达白细胞介素2的基因工程人大肠癌细胞瘤苗，并完成相关的实验室鉴定。方法 采用重组逆转录病毒将人白细胞介素2基因转导至三株人大肠癌细胞，G418筛选并挑选单克隆，ELISA检测各单克隆24h白细胞介素2表达量，用Student Newman Keuls检验三株细胞白细胞介素2的表达差异，PCR、Southern blot检测白细胞介素2基因整合，RT-PCR、Northern blot检测白细胞介素2基因转录水平。结果 获得72株G418抗性单克隆，其中表达量最高者为COL0205达138.01ng/L×10^7/24h，统计显示COLO205与SW1116、HT-29组间相比差异有统计学意义（P〈0.05），白细胞介素2基因整合至细胞基因组中，未发生重组或部分缺失，且获得成功表达。结论 本研究成功建立了高表达白细胞介素2的基因工程人大肠癌细胞瘤苗。     

白细胞介素12融合基因联合白细胞介素2对肝癌的基因治疗

我们在肝癌基因治疗目的基因筛选的实验中发现,在大鼠肝癌模型中,IL-12的基因治疗作用最为显著[1,2],若同时联合IL-2,有望进一步提高对肝癌的治疗效果. 1.材料与方法:大鼠肝癌细胞株CBRH3由中科院细胞所谢弘教授惠赠.以质粒GCp35Ep40PN为模板,PCR分别扩增p35和p40亚基基因.以PCR产物为模板,用p40上游引物和p35下游引物再次进行PCR反应,构建mIL-12融合基因.mIL-12和hIL-2基因分别插入逆转录病毒载体GCXEXPN,命名为GCIL12EXPN和GCXEIL2PN、GCIL12E-IL2PN.按常规方法筛选逆转录病毒载体GCIL12EXPN、GCXEIL2PN、GCIL12E-IL2PN的PA317包装细胞株,测病毒滴度.用CBRH3建立大鼠接种肝癌模型,分为生理盐水、LacZ载体对照组和IL-2、IL-12、IL-12+IL-2治疗组,每组10只大鼠,将包装细胞株脾内注射进行治疗.方差分析结果.     

白细胞介素2基因修饰瘤苗治疗胃癌复发转移的初步临床研究

目的观察白细胞介素2(IL-2)基因修饰人胃癌细胞瘤苗(HG-1/IL-2)治疗胃癌术后复发和/或转移患者的临床安全性,并初步评价其对患者免疫指标的影响和疗效。方法应用基因工程技术,以逆转录病毒载体将人IL-2cDNA转导入HLA-A2阳性的人胃癌细胞株MKN-45,经60Co照射灭活后,制备成HG-1/IL-2。15例胃癌术后复发/转移患者入组。以5次接种为1疗程,接种时间分别在第1、8、15、29和58天,每次于一侧腹股沟和对侧腋部皮下注射。每次接种后严格观察不良反应,并在治疗开始前1周和治疗结束后进行免疫学指标和临床受益评价。结果除1例因疾病快速进展,在接种3次后死于多脏器功能衰竭外,余14例均完成5次接种。接种后发热和注射局部红肿、酸胀感是最常见的反应。治疗后未观察到患者血液、肝肾功能等指标的明显异常。部分患者治疗后血清转铁蛋白、免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM、IL-2等体液免疫和CD3、CD4、CD8等细胞免疫指标有一定程度提高。4例获部分缓解,6例稳定,4例病情进展。结论IL-2基因修饰胃癌细胞瘤苗治疗耐受性好,部分患者体液和细胞免疫指标改善明显。该药物可作为辅助治疗手段,应用于胃癌术后复发转移的综合治疗。     

原发性肝癌患者可溶性白细胞介素-2受体的变化及其临床意义

对３４例原发性肝癌（ＰＬＣ）患者外周血可溶性白细胞介素－２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）、ＮＫ活性、Ｔ淋巴细胞亚群进行测定。结果：ＰＬＣ患者ｓＩＬ－２Ｒ水平明显高于健康对照组（Ｐ＜０．０１），ＮＫ活性、Ｔ淋巴细胞亚群ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ４／ＣＤ比值均低于正常人（Ｐ＜０．０１），而ＣＤ８高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。Ⅱ、Ⅲ期ＰＬＣ患者ｓＩＬ－２Ｒ水平显著高于Ⅰ期患者（Ｐ＜０．０１）。ｓＩＬ－２Ｒ水平≥１０００ｕ／ｍｌ、５００～１０００ｕ／ｍｌ、＜５００ｕ／ｍｌ者６个月内的死亡率分别为８０．０％、２９．４％、０％。肝癌切除术后２周ｓＩＬ－２Ｒ水平较术前低（Ｐ＜０．０５），免疫治疗后４周ｓＩＬ－２Ｒ水平亦较治疗前低（Ｐ＜０．０５）。细胞免疫水平都有所改善。提示测定外周血ｓＩＬ－２Ｒ水平可作为ＰＬＣ的免疫状态、病情严重程度、疗效观察及预后估计的生物学指标。     

转染IL-2基因的膀胱癌瘤苗诱导的抗肿瘤作用

为了探讨以白细胞介素2(IL-2)基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗治疗膀胱癌的应用价值,采用脂质体介导法将携带IL-2基因的逆转录病毒载体转染入膀胱癌细胞系BTT_(739)中,流式细胞仪行细胞DNA周期分析,动物实验观察放射线灭活后基因瘤苗(BTT_(739)/IL-2细胞)的抗肿瘤免疫作用。建立能分泌IL-2的膀胱癌瘤苗BTT_(739)/IL-2细胞、DNA周期分析表明IL-2基因的导入及表达对BTT_(739)细胞的增殖无影响。放射线灭活后BTT_(739)/IL-2细胞丧失增殖能力,但仍能维持一定水平的IL-2分泌活性达2周左右。先用灭活的瘤苗免疫小鼠,可诱导免疫保护,3周后接种BTT_(739)时不形成肿瘤;用灭活的瘤苗治疗荷瘤小鼠,可使50％小鼠肿瘤消退并长期存活;对治愈后长期存活的小鼠再次接种高剂量BTT_(739)细胞,仍无肿瘤形成。结果提示转染IL-2基因的膀胱癌瘤苗诱导的抗肿瘤作用对预防肿瘤的发生、抑制和清除微小瘤灶,防止膀胱癌复发具有重要的应用价值。     

人γ-干扰素基因修饰的结肠癌细胞瘤苗的抗肿瘤作用

目的研究人γ-干扰素(human interferon-γ,huIFN-γ)基因修饰的结肠癌细胞瘤苗的成瘤性及抗肿瘤作用。方法用逆转录病毒质粒pL(IFN-γ)SN将人IFN-γ基因转导入鼠结肠癌细胞株CT26中,用G418进行筛选,得到抗性克隆CT26／IFN-γ,比较CT26／IFN-γ与野生型CT26的成瘤性,评价CT26／IFN-γ对野生型CT26细胞肝转移模型的治疗作用。结果CT26／IFN-γ能在含0．6 g·L-1 G418的培养液中稳定生长;RT-PCR证实IFN-γ基因在CT26／IFN-γ中表达;CT26／IFN-γ细胞能分泌人IFN-γ,体外培养体系中产量为3．5 fg·cell-1·d-1;CT26／IFN-γ的成瘤性比野生型CT26差[Balb／c小鼠肿瘤体积分别为(480±138)mm3与(991±176)mm3,F=31．29,P=0．000]; CT26／IFN-γ对野生型CT26的肝转移亦有明显抑制作用,荷瘤小鼠存活期明显延长(P=0．000)。结论人IFN-γ基因修饰的结肠癌细胞瘤苗有一定的抗肿瘤作用,值得进行深入研究。     

表达白细胞介素-18的结肠癌瘤苗抗肿瘤作用及其机制

目的 观察表达人白细胞介素(hIL)-18的结肠癌移植瘤新生血管生成及肿瘤生长.方法 0.1 ml单克隆化的人结肠癌sw480细胞、携有绿色荧光蛋白表达质粒的pEGFP-sw480细胞、携有hIL-18基因表达质粒的hIL-18.pEGFP-sw480细胞(1×108个/ml)分别注射裸鼠,每组5只.ELASA法检测裸鼠血清IL-18含量;记录成瘤时间及瘤体大小;免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF、MMP-9及微血管密度(CD34表达);TUNEL法检测移植瘤组织凋亡.结果 hIL-18-pEGFP-sw480组成瘤时间为(26.2±1.8)d,而pEGFP-sw480、sw480组分别为(14.8±2.8)d和(14.6±1.9)d.注射42 d后,hIL-18-pEGFP-sw48组裸鼠血中IL-18含量为(63.58±13.75)ng/L.hIL-18-pEGFP-sw480、pEGFP-sw480、sw480组肿瘤平均体积(mm3)分别为:336.39±28.50、1029.08±114.84、957.96±91.55.ML-18-pEGFP-sw480组肿瘤明显小于sw480组和pEGFP-sw480组(P<0.01).微血管密度(CD34)分别为(9.08±4.01)、(32.48±8.84)、(33.32±3.39),MMP-9灰度值分别为143.2±6.8、114.6±5.4、110.2±5.9;VEGF灰度值分别为140.8±9.2、108.5±8.7、107.3±4.9,hIL-18.pEGFP-sw480组血管生成及促血管生成因子表达明显减少;hIL-18-pEGFP-sw480组凋亡细胞阳性率(30.32±7.23)%明显高于pEGFP-sw480组(6.32±1.18)%和sw480组(5.80±2.28)%(P<0.01).结论 IL-18可明显减少裸鼠结肠癌sw480细胞移植瘤的血管生成,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长.     

慢性肾小球肾炎患者中医证型与血、尿白细胞介素-2、可溶性白细胞介素-2受体关系

慢性肾小球肾炎 (ＣＧＮ)免疫功能紊乱已得到公认 ,但这种免疫功能紊乱与中医证型的相关性尚未得到统一认识。为了探讨ＣＧＮ不同证型的细胞免疫改变以及与各证型间的相关性 ,笔者选择了 49例ＣＧＮ患者 ,观察血、尿白细胞介素 - 2 (ＩＬ - 2 )、可溶性白细胞介素 - 2受体 (ｓＩＬ -2Ｒ)的变化 ,报道如下。资料与方法1　研究对象　本文 49例慢性肾小球肾炎病人均符合1992年《中华内科杂志》编委会肾病小组“原发性肾小球疾病分型与治疗及诊断标准” ,[1] 中医辨证参照全国第 2次中医肾病学术会议“慢性肾炎中医辨证分型标准”。[2 ] 其中肺…     

转人白细胞介素—2基因瘤苗诱导大鼠的抗肿瘤作用

经逆转录病毒载体将ｈＩＬ２基因导入大鼠Ｗａｌｋｅｒ瘤细胞ＷＴ２５６中，ＰＣＲ－ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ检测证实ｈＩＬ２基因已整合到ＷＴ２５６细胞基因组中，检测细胞培养上清证实转基因细胞具有分泌ｈＩＬ２活性。     

白细胞介素-2及其受体与胰岛移植排斥反应发生的相关性及其意义

目的：探讨检测血清中白细胞介素－2（IL－2）及其受体（SIL－2R）的含量对异种胰岛移植排斥反应中的意义。方法：昆明小鼠为供体，Wistar大鼠为受体。分4组：A组为糖尿病对照组，B组为单纯胰岛移植组，C组为胰岛和胸腺联合移植组，D组为胸腺细胞胸腺内预注射后，胰岛和胸腺联合移植组。移植后用酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测IL－2、SIL－2R含量。结果：血清中IL－2在胰岛排斥前4d开始有显著升高（P＜0．001），而SIL－2R在排斥前3d开始显著升高（P＜0．001）。两者含量一直升高至排斥当日。结论：检测IL－2、SIL－2R含量在异种胰岛移植是否发生排斥反应具有重要意义。     

HG-1/IL-2基因修饰瘤苗治疗晚期胃癌的初步临床研究(附8例报告)

目的 :评估同种异型 (HLA A2 +)IL 2基因工程化人胃癌细胞瘤苗 (HG 1/IL 2 )治疗晚期胃癌的毒副作用及临床安全性。方法 :应用基因工程技术 ,以逆转录病毒载体介导将人IL 2cDNA转导入人胃癌细胞株MKN 45 ,经10 0Gy60Co照射灭活后 ,制备成基因工程化胃癌细胞瘤苗 (HG 1/IL 2 )。 2 0 0 1年 4月～ 2 0 0 1年 7月 ,对 8例晚期胃癌病人施行HG 1/IL 2瘤苗治疗。以 5次接种为一疗程 ,接种时间分别在第 1、8、15、2 9和第 5 8天 ,每次于一侧腹股沟和对侧腋部皮下多点注射 1× 10 7个细胞。每次接种后严格观察毒副反应 ,并在治疗开始前一周和治疗结束后进行临床评估 ,同时进行凝血功能、血液生化学、肿瘤标记物及相关免疫指标检测。结果 :除 1例在第 3次接种后 ,因高热和全身性荨麻疹而终止试验外 ,余均顺利完成治疗。接种后低热和注射局部红肿、酸胀感是最常见的反应。治疗前后未观察到病人血液学、凝血功能、肝肾功能、血清标志物等指标的明显异常。部分病人治疗后血清转铁蛋白、IgG、IgA、IgM、IL 2等体液免疫指标和CD3 、CD4 、CD8等细胞免疫指标有一定程度升高。结论 :在密切观察的前提下 ,HG 1/IL 2基因工程化胃癌细胞瘤苗应用于晚期胃癌的辅助治疗是安全可行的     

抗原致敏白细胞介素-2基因修饰的树突状细胞对肿瘤术后自发性肺转移的抑制作用

目的探讨主要组织相容性复合物(MHC I)类肿瘤抗原多肽体外致敏、白细胞介素(IL)-2基因修饰的树突状细胞(DC)对小鼠恶性肿瘤切除术后自发性肺转移的体内抑制效果及相关免疫机制.方法用小鼠Lewis肺癌3LL细胞株MHC Ⅰ类肿瘤抗原八肽Mut1致敏IL-2基因修饰的DC(DC-IL-2-Mut1)2×106/ml免疫小鼠,用3LL细胞每只5×106/ml皮下荷瘤,观察免疫保护情况;并用抗CD4+、CD8+和NK1.1+单克隆抗体体内阻断免疫细胞亚群,探讨DC-IL-2-Mut1在小鼠体内诱导的特异性抗肿瘤机理.用DC-IL-2-Mut1给小鼠肿瘤自发性肺转移模型尾静脉注射,观察对肺转移的抑制效果.结果免疫小鼠荷瘤后第20天,磷酸盐缓冲液(PBS)对照组肿瘤直径为(20.0±2.0)mm,DC-IL-2-Mut1免疫组未见肿瘤生长.抗CD8+单克隆抗体能部分阻断其免疫保护作用,而抗CD4+和CD8+单抗联合应用,能完全阻断DC-IL-2-Mut1在小鼠体内诱导的特异性免疫效应,抗CD4+和抗NK+细胞单抗有一定的阻断效果.荷瘤截肢术后20 d,对照组小鼠肺重量为(1 105.0±113.0)mg,肺表面转移结节为(48.8±4.5)个;DC-IL-2-Mut1组肺重为(213.0±28.5)mg,肺表面肉眼未能看到转移结节,生存期较其他各组明显延长.结论IL-2基因修饰能显著增强MHC I类肿瘤抗原多肽致敏的DC体内免疫后诱导小鼠特异性抗肿瘤免疫应答,抑制恶性肿瘤术后的肺转移,CD8+T细胞在诱导过程中起重要作用.     

白细胞介素-12基因修饰对树突状细胞表面分子表达及细胞因子分泌的影响

目的 观察白细胞介素(IL)-12基因修饰对树突状细胞(DC)表面分子及细胞因子分泌的影响.方法 采用重组逆转录病毒介导IL-12基因修饰人外周血单个核细胞(PBMC)来源的Dc;ELISA法检测各组DCs和各组T细胞上清中IL-12、IL-10、IFN-γ因子的分泌水平;流式细胞仪(FACS)分析各组DC表面CD83、CD86的表达;MTT法检测DC刺激同源T淋巴细胞增殖的能力;统计学分析比较各组间的差异.结果 IL-12基因修饰使得DC高表达CD83和CD86分子,分泌高水平IL-12及IFN-γ,但对IL-10因子的分泌无明显影响,刺激同源T淋巴细胞增殖明显,诱导激活的T细胞上清中IFN-γ水平显著增高、IL-10分泌水平显著降低.结论 经IL-12基因修饰后的DC表型成熟,分泌IL-12及IFN-γ的能力增强,对IL-10因子的分泌无影响,能抑制T细胞分泌IL-10因子,优化抗原提呈的微环境.     

hIL-2基因修饰人肝细胞的腹腔移植抗肿瘤作用

目的　探讨hIL 2基因修饰人肝细胞腹腔移植的抗肿瘤作用。方法　采用鼠尾胶原包裹转hIL 2基因人肝细胞并移植入癌性腹水型小鼠模型腹腔,观察移植 1、4、7、10 d后小鼠脾淋巴细胞的增殖反应、脾淋巴细胞杀伤活性、血清hIL 2浓度及移植小鼠生存期。结果　移植4 d后,小鼠血清hIL 2浓度达到(76 2±2 2) pg/ml,脾淋巴细胞的增殖反应 OD值和脾淋巴细胞杀伤活性达到峰值,分别为(0 674±0 046)%和(35 6±1 9)%,与对照组和 L 02 细胞移植组相比,差别均有非常显著意义(P<0 05);移植 L 02/IL 2 肝细胞的小鼠生存率显著高于对照组和 L 02 细胞移植组(P=0 0003)。结论　IL 2基因修饰肝细胞移植于腹腔,可上调淋巴细胞的增殖和杀伤功能,达到抗肿瘤的目的,对肝细胞结合转基因的应用研究有积极意义。     

重组人白细胞介素－2对恶性肿瘤疗效的观察

对２５例恶性肿瘤患者单独或配合化疗使用重组人白细胞介素－２（ｒＩＬ－２）的疗效进行临床观察。２５例中男性１５例，女性１０例。平均年龄５３．１岁。肺癌７例，乳腺癌５例，结肠癌４例，直肠癌３例，肝癌、胃癌各２例，肾癌、神经纤维肉瘤各１例，分别采用全身静脉、瘤内注射、体腔内注射、介入动脉灌注等途径给药。观察结果：完全缓解２例，部分缓解６例，稳定２０例，总有效率为２８．６％。表明ｒＩＬ－２对改善恶性肿瘤患者的生活质量有一定帮助与化疗配合能提高疗效，且毒副反应轻。     

白细胞介素-18基因修饰大肠癌细胞肿瘤疫苗的制备及抗肿瘤作用研究

目的：制备人白细胞介素-18（hIL-18）基因的修饰的大肠癌基因工程肿瘤疫苗,观察其抗肿瘤作用。方法：应用MTT法观察X线照射后对SW480细胞生长的影响,治疗15d后,采用ELISA法检测实验鼠血清IFN—γ、IL-2、IL-12、IL-4、IL-10;将SW480细胞和SW480-IL-18细胞应用放射线灭活后接种于裸鼠左侧背部皮下,再接种SW480细胞于裸鼠右侧背部皮下,观察灭活后SW480-IL-18细胞的抗瘤效应。结果：经过高能X线照射后,SW480-IL-18细胞生长停滞,96h细胞全部死亡。未照射的106个SW48-1L-18细胞在24h内分泌IL-18的含量是182．7PG;照射组可是60．39pg。空载体转染的SW480细胞和未转染的SW480细胞上清液中未检测到IL-18。SW480-IL-18组较SW480组和pcDNA3．1／SW480组,能明显刺激T细胞增殖（P=0．01）;而SW480组和pcDNA3．1／SW480组,对T细胞的刺激作用微（P=-0．27）。灭活SW480-IL-18细胞能有效地激活裸小鼠体内NK细胞活性。SW480-IL-18细胞治疗后,治疗组较其他对照组肿瘤生长明显受到抑制（P〈0．05）。治疗组小鼠存活期显著延长,有33．4％小鼠长期存活,高于对照组。结论：IL-18基因修饰的SW480细胞具有明显的抗肿瘤作用,为大肠癌基因工程肿瘤疫苗的研制提供了实验基础。     

肝癌血清SIL—2R检测的临床意义

本实验用双抗体夹心ELISA法检测29例肝癌患者血清SIL—2R，并与30例健康人对照。结果显示：①肝癌病人血清SIL—2R464．75士45．9lu／ml，肝癌病人血清SIL—2R水平明显高于健康对照组（P＜0．05）。②对经手术、化疗、免疫等综合治疗有反应者Sll一2R降低，病情恶化SIL—2R升高。结论：肝癌病人机体免疫功能低下，出现免疫抑制物SIL一2R水平增高的现象，提示检测SIL—2R对临床治疗具有重要意义。     

白细胞介素12及其抗肿瘤作用

ＩＬ 12是新近发现的一种细胞因子 ,具有多种生物学活性 ,尤其是在抗肿瘤免疫和抗病毒免疫中有重要的作用。一、ＩＬ 12概况ＩＬ 12主要来源于单核 /巨噬细胞、抗原递呈细胞和Ｂ细胞 ,是由相对分子质量为 40× 10 3 和 35× 10 3 两个亚单位经二硫键连接形成的异二聚体糖蛋白。相对分子质量 70× 10 3 ,等电点介于ｐＨ4 5～ｐＨ 5 5。人ｐ40和ｐ35分别由两个基因编码 ,ｐ40基因定位于染色体 5ｑ3 1～ｑ3 3 ,ｐ35基因定位于染色体 3ｐ12 ～ 3ｑ13 2 。ｐ35基因大于 6× 10 3 ,而ｐ40基因跨及2 0ｋｂ、至少有 5个外显子。ｐ40亚单位与造血细…     

直肠粘膜下注射重组白细胞介素-2治疗直肠癌的临床研究

目的 观察不同用途应用重组白细胞介素－２（ｒＩＬ－２）对患者全身及肿瘤局部免疫的影响。方法 对４５直肠癌患者给予肌肉或直肠粘膜下注射ｒＩＬ－２。结果 直肠粘膜下应用ｒＩＬ－２不仅提高患者全身免疫功能，而且能激活肿瘤区域淋巴结天然杀伤细胞（ｎａｔｕｒａｌ ｋｉｌｌｅｒ，ＮＫ）和淋巴因子激活杀伤细胞（ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｋｉｌｌｅｒ，ＬＡＫ）活性，促进淋巴结生发中心增生、浆细胞反